Definición de headspace

El proceso descrito en este estudio es conocido más exactamente como headspace estático.
Sin embargo, como no se discutirán otras técnicas de headspace, sólo se utilizará el término
headspace. La metodología para el headspace es muy simple. Una muestra se diluye y se pone
en un contenedor cerrado y sellado que es lo suficientemente grande para permitir algo de
espacio vacío el vial en donde los vapores pueden colectarse. La muestra se calienta a
temperatura controlada durante un período de tiempo para permitir que los solventes de la
matriz se volatilicen, entren en fase gaseosa, y alcancen el equilibrio con el o los solventes
restantes en el vial. Esta fase gaseosa es el headspace, el cual se muestrea y se inyecta en la
columna utilizando presión como el modo de inyección. La precisión de la inyección de un
inyector de headspace puede dar consistentemente < 10.0% de desviación estándar relativa
(DER) y frecuentemente da = 2.0% DER, similar a la precisión encontrada con la inyección en
cromatografía de líquidos.
Los autores estudiaron aminas orgánicas básicas, pequeñas, las cuales son comúnmente
utilizadas en procesos farmacéuticos en lugar de bases más tradicionales como el hidróxido de
sodio o el etóxido de sodio. El uso de estas aminas presenta varios retos analíticos. Las guías
de la Conferencia Internacional de Armonización (ICH) no incluyen límites para muchas de
dichas aminas; siendo la piridina la principal excepción (2). El valor blanco para la
especificación de tales aminas puede ser asignado por el químico o por el departamento de
aseguramiento de la calidad, lo cual puede llevar a que la misma amina tenga muy diferentes
límites establecidos. Como las especificaciones con frecuencia se establecen en el nivel más
bajo que tolerará el proceso, es importante tener un método eficiente que pueda detectar
bajos niveles de estas pequeñas aminas orgánicas. Los problemas analíticos adicionales con
estos compuestos incluyen forma de picos no Gaussianos debido a las interacciones con la
columna de CG, y a la baja detección con ionización de flama (FID) basada en el tamaño del
compuesto y bajas cantidades de grupos de carbono oxidables (vía el quemado).

Consideraciones experimentales
Esta investigación se centró en algunos parámetros del headspace que deberían ser
considerados cuando se desarrolla un método con headspace, con el objetivo de maximizar la
señal y la sensibilidad mientras se usa eficientemente el tiempo y los materiales. Todos estos
parámetros son importantes en las primeras etapas del desarrollo de fármacos; no obstante,
un método sensible, rápido y eficiente también es benéfico para los laboratorios de control de
calidad que liberan fármacos aprobados. Los autores evaluaron parámetros experimentales
que incluyeron la muestra de volumen en el vial del headspace, el tiempo de incubación en el
horno del headspace y la composición del diluyente. Las tres aminas seleccionadas
(trietilamina, nbutilamina y alilamina) representan una sección transversal de las aminas
orgánicas que han sido analizadas por los autores durante los procesos de escalamiento.
Volumen de la muestra. Los viales de muestra para headspace típicamente vienen en tamaños
de 10 mL y 20 mL. Con frecuencia, el químico analista necesita analizar una cantidad muy
pequeña de un solvente residual en una matriz, lo que genera el problema de la sensibilidad.
Tradicionalmente, el químico analítico incrementaría la concentración de una muestra o
inyectan más muestra en una columna para obtener una mejor señal, incrementando así la
potencia de la señal. Con el headspace, más volumen de muestra no siempre proporciona el
incremento esperado en las cuentas de área porque a más grande el volumen de muestra,
menor es el volumen del headspace real (ver Figura 1). El artículo describe el efecto que el
volumen de la muestra tiene en respuesta para trietilamina, nbutilamina y alilamina en
diferentes diluyentes.
Tiempo de incubación. El equilibrio solventevapor juega un papel en el análisis del headspace.
Mientras más rápidamente pueda evaporarse un solvente dentro del headspace, más de ese
solvente particular será inyectado en la columna. La incubación del vial de headspace es una
consideración importante en el desarrollo de métodos por CG con headspace. Si la muestra se
incuba durante un período de tiempo demasiado corto, menos del analito estará en el
headspace, lo cual puede afectar las cuentas de área generales. Después de un cierto punto,
sin embargo, el analito y la solución de la cual proviene se asentará en equilibrio; más
incubación no resultará en más muestra que entre a la fase de vapor y puede resultar en la
degradación de la muestra o causar reacciones secundarias. Los autores variaron el tiempo de
incubación de las muestras de trietilamina, nbutilamina y alilamina y reportaron el cambio en
la respuesta del solvente con el tiempo.
Composición del diluyente. La sal genera el punto de ebullición del agua afectando el
equilibrio de un solvente con su vapor. Como el headspace también depende de los equilibrios
solventevapor, dichas técnicas también pueden ser usadas para incrementar la concentración
de vapor en una muestra de CG con headspace. Las sales han sido usadas en el análisis de
headspace (35); sin embargo, esta técnica trabaja mejor para solventes con base acuosa, los
cuales no son los mejores solventes para el análisis de CG. Los autores, por lo tanto, utilizaron
solventes de alto punto de ebullición como el dimetilsulfóxido (DMSO) y dimetilformamida
(DMF) como diluyentes de la muestra. Los autores variaron el porciento de agua (acuoso) en el
diluyente para ver si el mezclado en un solvente con una alta presión de vapor afectaría la
concentración de los solventes volátiles en el headspace.

Extracción en fase sólida (SPE) para tratamiento de muestras de alimentos para

análisis por cromatografía.
De entre todas las técnicas ya mencionadas, es la extracción en fase sólida
(SPE), una de las más atractivas e interesantes para el aislamiento y la
concentración de analitos en alimentos, ya que según Majors, (2002ab) es la más
empleada para el tratamiento de muestras especialmente para cromatografía de
gases (CG) y cromatografía líquida de alta resolución (HPLC). Básicamente la SPE
consiste en pasar una muestra diluida a través de un cartucho, que contiene un
relleno de un material que extrae selectivamente el analito de interés, desechando
así los compuestos que pueden producir interferencias en el análisis. Este
procedimiento, puede adicionalmente provocar una concentración, o enriquecimiento
del compuesto que se desea evaluar, introduciendo volúmenes continuos de la
muestra diluida. Se emplea principalmente en tres modalidades o dispositivos:
cartuchos, filtros y con fibra o mejor conocida esta última como la SPME (Micro
extracción en fase sólida). La SPE, puede ser utilizada para disminuir los tiempos de
trabajo, al sustituir técnicas tradicionales, con la ventaja adicional que se obtiene un
ahorro sustancial de solventes.
Una variante de la SPE, que ha tenido un gran desarrollo y aplicabilidad, que
prácticamente se ha convertido en un técnica independiente, es la micro extracción
en fase sólida (SPME). Según Ulrich, (2000) una de sus grandes ventajas, es que
agrupa los pasos de extracción, concentración e inyección, en un solo dispositivo, lo
cual reduce significativamente la manipulación y el tiempo de trabajo. Fritz y Macka,
(2000) señalan que entre las ventajas de la SPME, además de su simplicidad,
destaca que puede emplearse con poco volumen de muestra (inclusive solo varios
µL), disminuye considerablemente el tiempo y pasos de procesamiento, se pueden
alcanzar límites de detección de hasta partes por trillón y no se produce un consumo
significativo de solventes ya que prácticamente no requiere de estos.
Según Fritz y Macka, (2000) señalan que la forma de realizar la SPE, permite
acoplar está técnica a equipos automáticos, que incluyen estaciones de trabajo,
periféricos y módulos, que realizan múltiples funciones, controlados todos por un
sistema central de procesamiento de funciones y datos. Se acoplan en línea
módulos de SPE con cromatógrafos de HPLC, CG, los cuales a su vez pueden tener
uno o más detectores como: masas, ultravioleta, diodos etc. El gran potencial de la
SPE y sus variantes, consiste en que pueden ser automatizados. Estos pueden ser
en serie o en paralelo; en los primeros se tiene una línea, en la cual una muestra, no
es tratada, hasta que la anterior es procesada, lo cual da una velocidad de
procesamiento entre 25-50 muestras/h. Por otra parte en paralelo, se tienen varias
líneas o módulos (en algunos casos hasta 10) de SPE, que permiten la extracción
simultánea de hasta 400 muestras/h. Ambos sistemas tienen la ventajas que pueden
procesar durante largos períodos, como la noche, fines de semana etc.
Es la tendencia actual, en el inicio de este nuevo milenio, el desarrollo de
procedimientos, técnicas y métodos, que sean más sensibles, rápidos y que
especialmente involucren un menor consumo de solventes. La extracción en fase
sólida con todas sus variantes, es hoy por hoy una de la técnicas que presenta
mayor potencialidad, para el tratamiento de muestras en diferentes áreas, (farmacia,
ambiente, forense, toxicología, química analítica etc) pero especialmente en
alimentos. Las aplicaciones reportadas por investigadores, muestran la gran
versatilidad y aplicabilidad de está técnica que existe actualmente y que pueden ser
desarrollada. La forma e insumos que utiliza la SPE, la hacen idónea para el diseño
de equipos automatizados, en miniatura e inclusive robotizados.

El índice de retención de Kovats es un método de cuantificación de los tiempos de elución

relativa de los diferentes compuestos en cromatografía de gases, de forma que ayuda a
identificar positivamente los componentes de una mezcla.

El método aprovecha la relación lineal entre los valores del logaritmo del tiempo de retención,
log(tr'), y el número de átomos de carbono en una molécula. El valor del índice de Kovats suele
representarse por I en las expresiones matemáticas. Su aplicación se limita a los compuestos
orgánicos. Para la cromatografía isotérmica, el índice de Kovats viene dada por la ecuación

donde

I = índice de retención de Kovats n = número de átomos de carbono en los alcanos más

pequeños N = número de átomos de carbono en los alcanos más grandes tr' = tiempo de
retención ajustado.

Para una cromatografía de temperatura programada, el índice de Kovats está dado por la
ecuación:
donde

I = índice de retención de Kovats n = número de átomos de carbono en los alcanos más

pequeños N = número de átomos de carbono en los alcanos más grandes z = diferencia
del número de átomos de carbono entre alcano más pequeño y el más grande, tr' =
tiempo de retención

El índice de retención de Kovats también es útil para identificar un compuesto a

partir de su tiempo de retención relativo a los de compuestos similares en una serie homóloga
(los que difieren en la cantidad de átomos de carbono en una estructura similar, como
en las cadenas de alcano). El índice I se define como sigue:

donde nc es la cantidad de átomos de carbono en el alcano de cadena más corta y nl se

refiere al alcano de cadena más larga; t_R es el tiempo de retención corregido (véase ecuación
19.6). El índice de Kovats para un compuesto problema se puede comparar con índices
catalogados en diversas columnas para ayudar a identificarlo. El logaritmo del tiempo
de retención, log t_R, es en general una función lineal de la cantidad de átomos de carbono

en una serie homóloga de compuestos.