UNIVERSIDADE FEDERAL DO AMAZONAS

INSTITUTO DE EDUCAÇÃO AGRICULTURA E AMBIENTE

ROTEIRO AULAS PRÁTICAS DE MICROBIOLOGIA GERAL

Curso: Agronomia
Disciplina: MICROBIOLOGIA GERAL
Professor responsável: Moisés Santos de Souza
Técnico responsável: Alessandro Machado da Silva

ROTEIRO DE AULA PRÁTICA

ASSUNTO: Meios para isolamento e repicagem de fungos

Data para ministrar: 07/11/2017
Horário: 11-13hs.

Objetivo:

Conhecer os métodos de preparo dos meios de culturas para o cultivo

de microrganismos. Meios para isolamento e repicagem

Objetivos específicos:

 Conhecer equipamentos e vidrarias necessárias para preparação de

meios de cultura de microrganismo;
 Conhecer as funções das substâncias do meio;
 Preparo de meio de cultura pobre em nutrientes;
 Preparo de meio de cultura rico em nutrientes;
 Métodos de conservação dos meios.

Material e Métodos

PRINCÍPIO

Justifica-se esses procedimentos práticos para demonstrar para os discentes

os métodos envolvidos no preparo dos meios de cultura para fungos para como
pré-requisito imprescindível para as práticas de Fitopatologia Geral. Também
como proceder para evitar contaminação no momento do preparo das placas.
Além disso, através do isolamento de culturas obtidas em meios de cultura
podemos desenvolver vários tipos de estudos e aplicabilidade dos
microrganismos: fisiologia, bioquímica, genética, controle biológico, influência
de vários fatores (pH, temperatura, nutrientes, etc.) sobre o crescimento e
reprodução, efeito de substâncias como fungicidas e muitos outros. As
características apresentadas pelas colônias fúngicas puras em meios de
cultura, tais como: cor, diâmetro, aspecto, bem como por suas estruturas
(esporos, hifas, conidióforos, etc.), constituem elementos vitais no
reconhecimento e identificação dos fungos. Meios de cultura constituídos de
compostos quimicamente definidos são denominados meios sintéticos. Como
conseqüência da definição, as substâncias químicas presentes possuem
funções específicas que deverão ser entendidas pelos discentes.

Materiais

 BDA sintético;
 Ágar;
 Bastão de vidro;
 Becker
 Erlenmayer
 Auto-clave
 Balança analítica
 Caneta de identificação
 Antibiótico (clorofenicol)

Métodos

Seguindo o protocolo do laboratório, realizar a pesagem do material para

preparo do meio sintético, pois os meios de cultura mais utilizados em
laboratórios de microbiologia estão disponíveis comercialmente, já na forma
desidratada. Nestes casos, pesar a quantidade da mistura e adicionar
separadamente à água destilada, tomando-se o cuidado de homogeneizar a
cada componente adicionado.

Meio de cultura pobre em nutrientes:

Ágar Sabouraud Dextrose (ASD)

Meio básico em laboratório de micologia, também denominado simplesmente
de ágar Sabouraud. Trata-se de meio com nutrientes que, devido às altas
concentrações de carboidratos, favorece o crescimento de diversos fungos
leveduriformes e filamentosos.

Preparação do meio
-Dextrose: 40 g
-Peptona: 10 g
-Ágar: 15 g
-Água destilada: 1000 ml
1.Dissolver os componentes na água destilada
2. Acertar o ph em 5,6
3.Aquecer até a completa dissolução
4.Distribuir cerca de 10 ml por tubo
5.Esterilizar em autoclave a 120ºC por 15 minutos

O meio não dispõe de inibidores de microflora acompanhante, mas

agentes inibidores podem ser adicionados, como cloranfenicol.

Preparação do meio com cloranfenicol

1.Dissolver 100 mg de cloranfenicol em 10 ml de álcool 95ºC
2.Adicionar em 1 litro de ASD antes da esterilização
Já a variantedo meio com cloranfenicol e cicloheximida (meios comerciais
Mycosel, Micobiotic agar ou Meio Seletivo para fungos) é comumente
utilizado para isolamento de fungos patogênicos.

LITERATURA RECOMENDADA

BLACK, J.G. Microbiologia – Fundamentos e Perspectivas. Rio de Janeiro,

Guanabara Koogan. 2002.
BROCK, T.D., MADIGAN, M.T., MARTINGO, J.M. & PARKER, J. Biology of
Microorganisms. NewJersey, Prentice Hall. 1994.
FUNDER, S. Practical Mycology. Manual for Identification of Fungi. Oslo,
Broggers Boktr. Forlag.1953..
PELCZAR, Jr., M.J., CHAN, E.C.S. & KRIEG, N.R. Microbiologia. Vol. 1.
Conceitos e Aplicações. SãoPaulo, Makron Books do Brasil Editora Ltda. 1996.
TUITE, J. Plant Pathological Methods. Fungi and Bacteria. Minnesotta, Burgess
Publishing Co. 1969