Manejo de Micropipetas 1

Manejo y Mediciones con Micropipetas

Andrés Octavio Blanco 1611052, Guillermo Álvarez 1611097, Jorman Stifen Castro

1611029, Marien Teresa Blanco 1611187

Universidad Francisco de Paula Santander

Notas del autor

Andrés Octavio blanco, Guillermo Álvarez, Jorman Stifen Castro, Facultad de Ciencias

Agrarias y del Ambiente, Universidad Francisco de Paula Santander

La información correspondiente a este informe debe estar dirigida a la Facultad de

Ciencias Agrarias y del Ambiente, Universidad Francisco de Paula Santander, campus

Avenida Gran Colombia No. 12E-96 Cúcuta- Colombia

Email: guillermoat@ufps.edu.co
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Introducción

La micropipeta es un instrumento de laboratorio empleado para absorber y transferir

pequeños volúmenes de líquidos y permitir su manejo en las distintas técnicas científicas.

Los volúmenes captables por estos instrumentos varían según el modelo: los más

habituales, denominados p20, p200 y p1000, admiten un máximo de 20, 200 y 1000 μl,

respectivamente.

Es de destacar que el uso de micropipetas permite emplear distintos líquidos sin tener que

lavar el aparato: para ello, se emplean puntas desechables, de plástico, que habitualmente

son estériles. Existen varios tipos de puntas: por ejemplo, las amarillas para pipetear

volúmenes pequeños (por ejemplo, 10 μl), y las azules para pipetear volúmenes grandes

(por ejemplo, 800 μl).

Objetivos
 Identificar todas las partes de la micropipeta correctamente.

 Medir en forma exacta con las micropipetas (0.5-10μl, 10-100 μl y 100-1000 μl).

 Verificar la calibración de las micropipetas.

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Materiales

 Micropipeta de 100 a 1000 μl

 Micropipeta de 10 a 100 μl

 Micropipeta de 0.5 a 10 μl

 Puntas blancas, azules y amarillas.

 Microtubos o balas. (Trabajamos con uno de 1,5ml)

 Reactivo: Limpia pisos con olor de colores.

Procedimiento

Inicialmente se observaron detenidamente cada micropipeta y su volumen máximo para

saber bien el funcionamiento de las mismas. Se procedió a calibrar las micropipetas, se

tomó un microtubo al que se le transfirió una cantidad de volumen de líquido dependiendo

del volumen de la micropipeta:

Volumen de micropipetas Volumen transferido

0,5 a 10 microlitros 10 microlitros

10 a 100 microlitros 20 microlitros

100 a 1000 microlitros 200 microlitros

Luego se hicieron unos ejercicios de manejo de las micropipetas colocando unos frascos

con líquido de diferentes colores en cada uno, se iba colocando una cantidad de este en los

microtubos. Se volvió a hacer otra medición con los mismos líquidos de colores (ver tabla
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N°3 y N°4). Finalmente se comprobó que el volumen de cada uno de los tubos fuera el que

se debía obtener, devolviendo el líquido de cada tubo a la micropipeta.

Análisis de resultados

1) calibración

Tabla Nº1. Modelo de Micropipetas con las que trabajamos.

Micropipeta Código Volumen Punta (color)

Nichipet EX H3X011542 100-1000 μl Azul

Transferpette 04Z8950 10-100 μl Amarilla

Nichipet EX H63005492 0.5-10 μl Blanca

Tabla Nº2. Pesos correspondientes a las micropipetas

Formula: (peso del tubo + volumen del agua) – (peso del tubo vacío)

Peso de los tubos Peso del tubo + Agua Formula

Tubo 1 0,93 gr 0,95 gr (0,95gr) – (0,93gr)= 0,02 gr

Tubo 2 0,96 gr 1,95 gr (1,95gr) – (0,96gr)= 0.99 gr

Tubo 3 1,02 gr 1,32 gr (1,32gr) – (1,02gr)= 0,3 gr

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Teniendo en cuenta que la densidad del agua es 1g/ml, el paso del agua para un volumen

de 2μl es de 2μg. Si el valor obtenido es diferente la Micropipeta esta descalibrada (ver

tabla N° 2). La diferencia debe ser para un volumen de:

Volumen transferido Peso ideal

10μl 0,02 gr

20μl 0.99 gr

200μl 0,3 gr

Tabla Nº3. Matriz de distribución de reactivos para volúmenes pequeños (<20μl)

Reactivos (μl)

Tubos Solución A Solución B Solución C Solución D

1 4 5 1 -

2 4 5 - 1

3 4 4 1 1

Tabla Nº4. Matriz de distribución de reactivos para volúmenes 10-1000μl

Reactivos (μl)

Tubos Solución A Solución B Solución C Solución D Solución E

1 100 50 150 180 520

2 150 150 150 550

3 50 200 750
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Discusiones

En esta experiencia se pudo conocer cuidadosamente lo que respecta al manejo y medición

de las micropipetas, su fundamentación teórica y práctica, junto con los posibles errores

que más se suelen cometer a la hora de empezar a utilizar este instrumento.

Las micropipetas son instrumentos de gran ayuda, utilidad por su precisión en la genética

molecular, pero para obtener con éxito los resultados de diferentes pruebas a desarrollar en

esta área se debe tener claro los rangos volumétrico, el manejo de conversiones, pero es

indispensable reconocer las partes de la micropipeta y su forma de acción para tener un

mejor desempeño a la hora de emplearlas.

De acuerdo con los datos que se obtuvieron al determinar el peso en gramos del agua, se

pudo determinar la desviación estándar, pudiendo arrojar características de precisión o

exactitud. La exactitud muestra que tan cerca está la medición a su valor verdadero y

determina el error, la precisión describe que tan cercanos están entre si los resultados

obtenidos exactamente.

Observando los datos se puede decir que el peso obtenido del agua es directamente

proporcional al volumen tomado en microlitros de agua, es decir, a mayor volumen del

agua mayor será su peso que es lo observado, Corroborando que las micropipetas de 10-100

μl y 100-1000 μl no se encuentran descalibradas caso contrario de la micropipeta de 0.5-10

μl ratificando su leve desviación al hacerse las respectivas medidas a las diferentes

soluciones.

Otro dilema que se nos presentó fue la técnica empleada en la toma de muestras de frasco 4

(Aceite) utilizando la micropipeta de 100-1000 μl, fue deficiente o poco apta para la
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sustancia, dadas sus propiedades fisicoquímicas, ya que con distintos intentos la

micropipeta empezaba a gotear lo que obligaba a hacer el procedimiento mucho más rápido

y provocando posibles errores ya se no se cuenta con total experiencia.

Conclusiones
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 La utilización de micropipetas de volumen fijo permite tener una mayor precisión

en la toma de la muestra.

 Las micropipetas tienen un tope de volumen el cual no debe ser sobrepasado ya que

podría dañarse el sistema interno.

 Es muy sencillo que la punta se contamine así que hay que tener ciertos cuidados

como no tocar la pared del microtubo con la punta, cambiar de punta si esto sucede

o al cambiar de reactivo.

 Las micropipetas no se deben voltear así estén vacías, ni ladear cuando contengan

liquido o reactivo, de hacerlo, el líquido llegaría a la parte interna y podría el

sistema interno.

Cuestionario
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A) ¿Cómo se mide el porcentaje de exactitud y el coeficiente de variación? Escriba un

ejemplo.

La exactitud es un error sistemático. Es la diferencia entre el volumen dispensado y el

seleccionado en una pipeta. Ejemplo:

Peso del agua: [peso del tubo + volumen del agua] - [peso del tubo vacío]

Peso del agua: [0,93 – 0,92] = 0,01 (error de la micropipeta) {3}

El coeficiente de variación es una medida de dispersión que describe la cantidad de

variabilidad en relación con la media. Puesto que el coeficiente de variación no se basa en

unidades, se puede utilizar en lugar de la desviación estándar. Ejemplo:

(𝑆)(100)
CV = {3}
(𝑉)

Recipiente grande Recipiente pequeño

(𝟏𝟎𝟎)(𝟎,𝟒) (100)(0,08)
CV = = 2,5 CV = =8
(𝟏𝟔) (1)

B) ¿Cómo se clasifican las micropipetas automáticas?

Características de las micropipetas automáticas: El ajuste del volumen, la aspiración y la

dispensación se hacen de forma electrónica:

 Permiten realizar todas las técnicas de pipeteo, incluido el repetitivo de forma

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 La fuerza necesaria para el manejo es mínima

 Los errores de pipeteo disminuyen

C) ¿Qué otras aplicaciones o usos tienen las micropipetas en biotecnología?

 Extracción de ADN

 Cuantificación de ADN en gel de electroforesis

 Extracción de ARN

 Extracción de ADN plasmídico por lisis alcalina {5}

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Bibliografía

 {1} equipos y laboratorio, página de internet

http://equiposylaboratorio.com/sitio/contenidos_mo.php?it=1031

 {2} Guía de laboratorio.

 {3} Porcentaje de exactitud y coeficiente de variación,

http://www.cultek.com/aplicaciones.asp?p=Aplicacion_Manejo_Liquidos&opc=tec

nicas&idap=53

 {4} Clasificación de las micropipetas, página de internet

http://www.spinreact.com.mx/public/vcw/MICROPIPETAS.pdf

 {5} Prácticas de laboratorio, página de internet

https://www.studeersnel.nl/nl/document/instituto-politecnico-

nacional/biotecnologia-molecular/practicum/practica-manual-del-laboratorio-de-

biotecnologia-

molecular/748125/view?auth=0&auth_prem=0&prem_doc=1&new_title=0&has_fl

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