INFORME DE LABORATORIO N°08

MICROBIOLOGÍA DEL SUELO

1. Técnica de Diluciones (Agua de charco o tierra)

0,5ml 0,5ml 0,5ml
Tierra (0,5gr)
o agua (0,5gr)

Suero fisiológico
(4,5ml)
Diluciones

Sembraremos por diseminación 0.1ml de cada dilución en una placa de APD e incubar a
temperatura ambiente. Luego, bservaremos el desarrollo de colonias a partir de 2-3 días y
realizar el conteo de colonias.
2. Técnicas de exposición de la placa al medio ambiente
Destapar las placas de APD o ASG y exponer a medio ambiente durante 15 minutos luego
taparlas e incubar al medio ambiente.
Observar el desarrollo de colonias a los 2-3 días.

RESULTADOS, DISCUSIÓN, CONCLUSIONES, REFERENCIAS

Bacterias Mesofilas Aerobias
AGAR NUTRITIVO PCA (Dilución 1ml)
CONCENTRACION #COLONIAS
10−1 >300 300 ∗ 101 > 3 ∗ 𝑈𝐹𝐶/𝑚𝑙
10−2 215 215 ∗ 102 2.15 ∗ 𝑈𝐹𝐶/𝑚𝑙
10−3 140 140 ∗ 103 1.40 ∗ 𝑈𝐹𝐶/𝑚𝑙
10−4 100 100 ∗ 104 1.00 ∗ 𝑈𝐹𝐶/𝑚𝑙
10−5 90 90 ∗ 105 9.00 ∗ 𝑈𝐹𝐶/𝑚𝑙

∑ 𝑈𝐹𝐶 = 2.5404 ∗ 106 𝑈𝐹𝐶/𝑚𝑙

No tomaremos en cuenta la primera fila puesto que sobrepasa las 300 colonias

𝑈𝐹𝐶⁄ = 𝑁° 𝑑𝑒 𝑐𝑜𝑙𝑜𝑛𝑖𝑎𝑠
𝑚𝑙 𝑑𝑖𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖𝑜𝑛()

HONGOS
Filamentosos
Agar Saburao
CONCENTRACION
10−1 52
-Alternaria sp
10−2 9
-Penicillum Notatum
10−3 1 -Penicillum sp
10−4 1 -Penicillum sp
10−5 No hay

Las siguientes placas Petri portan los hongos

que serán teñidos con el azul de Lactofenol
para hongos filamentosos y colocados en el
portaobjetos para verse en microscopio
PENICILIUM NOTATUM EN 10−2 ALTERNARIA SP EN 10−2

PENICILIUM NOTATUM EN 10−2 PENICILIUM NOTATUM EN 10−2

 TRABAJO ENCARGADO
Fundamento teórico para cada medio de cultivo para hongos
Medios para hongos
Agar glucosado de Sabouraud
el Agar glucosado de Sabouraud es usado para cultivar hongos y tiene un pH bajo que inhibe
el crecimiento de la mayoría de bacterias, además tiene un antibiótico (gentamicina) que inhibe
específicamente el crecimiento de bacterias gramnegativas .
Agar Infusión Cerebro Corazón
Es un medio muy rico en nutrientes, que proporciona un adecuado desarrollo microbiano. La
infusión de cerebro de ternera, la infusión de corazón vacuno y la peptona, son la fuente de
carbono, nitrógeno, y vitaminas. La glucosa es el hidrato de carbono fermentable, el cloruro
de sodio mantiene el balance osmótico y el fosfato disódico otorga capacidad buffer.
Agar papa dextrosa
Es un medio utilizado para el cultivo de hongos y levaduras a partir de muestras de alimentos,
derivados de leche y productos cosméticos.
Agar extracto de malta
Tiene un alto contenido de peptona.
¿Cuáles son los medios más usados para hongos ambientales?
FITOLEVADURA
Este medio se usa para aislar hongos del aire. Los hongos aislados de insectos crecen
exuberantemente con micelio bien algodonoso y buena producción de esporas.
Dextrosa 20 g - Extracto de levadura 5 g - Peptona 5 g - Agar 18 g - Agua destilada 1 litro

MIEL PEPTONA AGAR

Este medio se recomienda porque tiene un pH que inhibe el desarrollo de algunas bacterias
Miel de caña 60 g - Peptona 10 g - Agar 18 g - Agua destilada 1000 ml
Se pueden utilizar antibióticos como Penicilina + Estreptomicina (30 – 50 ppm) que deben
agregarse a los medios de cultivo después de ser esterilizados en autoclave y enfriarlos a una
temperatura menor a 60 o C.
Existen, además, los llamados medios completos, los cuales varían de acuerdo a los
requerimientos del trabajo.
Los medios líquidos son aquellos a los que no se incorpora la sustancia solidificante, pudiendo
tener la misma composición que los medios sólidos. Son utilizados para obtener una producción
masiva con fines de inoculación en sustratos de propagación. Los medios líquidos
generalmente se colocan en un agitador continuo durante tres o más días de acuerdo a la
especie que se está propagando. Cuando se trata de Beauveria en medio líquido las estructuras
propagativas toman la forma de las levaduras.
Para evitar la contaminación con bacterias, es recomendable acidificar el medio contenido en
la placa con unas gotas de ácido láctico distribuidas uniformemente en la superficie del medio
de cultivo.
¿Qué importancia tiene la temperatura y ph en el crecimiento de hongos?
TEMPERATURA
La temperatura de incubación es un factor primordial para el crecimiento y metabolismo de las
células. A medida que la temperatura aumenta. Las reacciones bioquímicas al interior de la
célula. Se aceleran. Sin embargo, por arriba de una cierta temperatura, proteínas y ácidos
nucleicos. Principalmente. Pueden ser desnaturalizados. En el caso de los hongos, algunos
pueden, excepcionalmente, desarrollarse a temperaturas superiores a 5OoC y son llamados
termófilos o termo tolerantes
El objetivo del presente trabajo consiste en estudiar el efecto que la temperatura de incubación
tiene sobre el crecimiento de hongos termófilos utilizando el modelo de Esener
PH
Cada tipo de hongo puede tener diferentes reacciones en cada valor de pH,
pero la información concerniente al pH óptimo necesario para el establecimiento de una
simbiosis entre un hongo específico y las raíces de su hospedero es todavía limitada (Hung y
Trappe, 1983). El pH del medio de cultivo afecta el crecimiento de los hongos
ectomicorrizógenos (Zak, 1973) y aunque se han registrado datos experimentales que indican
un buen crecimiento a pH desde 3.2 hasta 6.5, el óptimo oscila entre 4.5 y 5.5 para la mayoría
de los aislamientos probados. También existen algunas especies con buen crecimiento a un pH
de 6.8 y 8.3 (Hung y Trappe, 1983). No obstante, los experimentos in vitro que miden el efecto
del pH sobre el crecimiento fúngico deben ser interpretados con precaución, ya que los
resultados pueden ser afectados por la duración del ensayo, la fuente de nitrógeno o la adición
de sales de hierro antes o después de la esterilización del medio (Hung y Trappe, 1983).
Describir tipos de siembra de hongos y metodología.
SIEMBRA POR PUNCIÓN CENTRAL.
Este es un procedimiento para aislar fácilmente hongos miceliales. Seleccione un tipo de hongo
con las características de tipo micelial, evite escoger una colonia que este sobrelapada con otra
para así lograr un cultivo puro usando un asa recta gruesa, previamente calentada en la llama
del mechero y enfriada posteriormente en el borde de la caja o en el tubo del cultivo de hongo
suministrado, tome una muestra del hongo cortando con el asa un trozo (3 x 3 mm) con todo y
agar. Coloque el trozo del hongo en el centro de la parte plana del tubo inclinado.
SIEMBRA EN PLACAS PETRI POR LA TECNICA DE AGOTAMIENTO
Es un buen método ara el aislamiento de colonias; mediante esta técnica buscamos obtener
colonias separadas a partir de un inoculo.
SIEMBRA EN PLACAS PETRI POR LA TECNICA DE SIEMNBRA EN CUADRANTES
El objetivo de esta técnica es el de diluir a medida que se realizan estrías en la superficie del
agar. Para realizar la siembra, la cada de divide en cuatro cuadrantes.
TECNICAS DE SIEMBRA EN MEDIOS CONTENIDOS EN TUBOS
La siembra de medios contenidos en tubos requiere mayor cuidado, puesto que un solo
organismo contaminante del aire puede superar en crecimiento al microorganismo de interés,
por lo tanto se deben tomar precauciones extras
¿Cuáles son los hongos ambientales más comunes?
Rhizopus
Colonia de rápido crecimiento, de aspecto típicamente algodonoso, de color blanco o blanco
ceniza o negruzco dado por los órganos reproductores (hifas).
Micelio vegetativo formado por hifas sin septos (cenocíticas) hialinas o ligeramente coloreadas
a partir de las cuales se diferencian los conidióforos (esporangioforos) sobre un rizoide típico
que le da una apariencia al hongo de los tallos estoloníferos de la “fresa”. Estos esporangioforos
terminan en vesículas (esporangiosporas) variadas en forma; coloreadas o hialinas.
Especies de amplia distribución, en todos los ambientes; saprófitas en su mayoría.
Aspergillus
Colonias de crecimiento rápido y aspecto variable, afelpado, pulverulento o algodonoso, de
colores diversos que van del blanco al amarillo pálido, del rojo al rojo vinoso o marrón oscuro,
de olor característico a “moho”.
Los conidióforos son fácilmente distinguibles del micelio vegetativo, de longitud variable
terminando en una vesícula globosa o clavada, rodeada parcial o totalmente, con sus conidias
globosas o elipsoidales, hialinas o coloreadas. Género con especies saprófitas y algunas
parásitas.
Fusarium
Colonias de crecimiento rápido y abundante, generalmente de aspecto algodonoso, de diversos
colores que van del blanco, rosado, salmón o violeta cubriendo toda la superficie del medio.
Conidióforos simples o ramificados; solitarios o agrupados formando esporodoquios; conidas
apicales simples (microconidias) o septadas (macroconidias) típicas de bordes curvados
(falcado o apariencia de media luna), con ápices obtusos o agudos, solitarios o en cadenas;
produciendo algunas especies, esporas de resistencia denominadas clamidosporas,
generalmente globosas, intercalares o terminales. Se les encuentra en todos los ambientes en
forma saprófita o parásita.
Describir la estructura macroscópica y microscópica de los siguientes hongos;
Aspergillus, Penisillum, Fusarium, Rhizopus, Mucor.
Aspergillus
La estructura microscópica de Aspergillus es única. Tienen hifas tabiculares y conidioforas cuya
cabeza está localizada en el extremo de una hifa, compuesta por una vesícula rodeada por una
corona de fiálides en forma de botella directamente insertadas sobre la vesícula.8 De las fiálides
se desprenden las esporas (conidios). Otras estructuras se encuentran en ciertas especies y
no en otras, por ejemplo, las células de Hüle.
Penisillum
Macroscopia
Las colonias de Penicillium (diferentes de Penicillium marneffei) son de crecimiento rápido,
filamentosas y vellosas, lanosas o de textura algodonosa. Son inicialmente blancas y luego se
convierten en verde azuladas, gris verdosas, gris oliva, amarillentas o rosadas con el tiempo.
El reverso de la colonia es pálido o amarillento. Penicillium marneffei es termodimórfico y
produce colonias filamentosas, lisas, con surcos radiales at 25°C. Estas colonias son azuladas
- gris - verdosas en el centro y blancas en la periferia. Un pigmento soluble rojo, rápidamente
difusible al medio, observado desde el reverso es muy típico. A 37°C, las colonias de Penicillium
marneffei son cremosas a levemente rosadas y con textura glabra y plegada.
Microscopia
Las especies de Penicillium (excepto P. marneffei), hifas septadas hialinas (1.5-5 µ de
diámetero), con conidióforos simples o ramificadas, métulas, fialides y conidias. Las métulas
son ramificaciones secundarias que se forman sobre los conidióforos. Las métulas acarrean
fialides en forma de frasco. La organización de las fialides en la punta de los conidioforos es
típica (llamadas "penicilli" o pincel). Las conidias (2.5-5µ de diámetro) son redondas,
unicelulares y observadas como cadenas no ramificadas en el extremo de las fialides.
Fusarium
La clasificación morfológica en el género Fusarium se basa en las características macro y
microscópicas del cultivo. El tipo de micelio aéreo, pigmentación y tasa de crecimiento de la
colonia, así como la ausencia o presencia de esporodoquios, esclerocios o estroma en
diferentes medios son características básicas de identificación. El color que desarrollan
depende de la especie, y puede ser blanco, crema, rojo, purpura, etc. El micelio aéreo suele
ser abundante. El medio de cultivo agar papa glucosado (APG) es el más utilizado en la
observación de estas características.
Rhizopus
Rhizopus, también conocido como moho, es el llamado hongo negro del pan. Es un género de
cigomicetos, hongos filamentosos que por lo general viven en el suelo y se alimentan de materia
vegetal o animal en descomposición. Existen Rhizopus parientes de este hongo que afectan a
plantas y frutos causando una pudrición blanda y acuosa.
Rhizopus sp. Forma colonias de crecimiento rápido que cubren prácticamente toda la superficie
del sustrato afectado en aproximadamente tres días, a una temperatura promedio de 25 °C
Los esporangios son esféricos, negros y están contenidos en una estructura llamada
columela, que mide hasta 275 micrómetros (milésimas de milímetro) de diámetro.
Mucor.
Es un Zygomiceto, caracterizado por un crecimiento rápido, que se encuentra ubicuo en la
naturaleza, por lo que es muy común que contamine medios de cultivo en el laboratorio, y que
puede llegar a producir infecciones en seres humanos inmunocomprometidos o
inmunosuprimidos. Las cepas de Mucor spp. No crecen por lo regular a 37°C, lo que nos habla
de que las cepas que atacan al ser humano son termotolerantes.
Morfología Macroscópica:
Son colonias de tamaño ilimitado (es decir, cubren el total del medio de cultivo), En un inicio
son blancas, pero conforme nacen los esporangios, el color de la caja comienza a volverse más
oscura; de aspecto velloso-algodonoso.
Morfología Microscópica:
Mucor spp. Presenta un micelio macrosifonado (entre 4 y 8µm de diámetro), cenocítico, hialino,
en ocasiones puede llegar a presentar clamidoconidios, que se llegan a confundir con septos;
Al ser un Zygomiceto presenta esporangiosporas de entre 3 y 5µm de diámetro, dentro de
esporangios de entre 20 y 80µm, con una columela pequeña pero muy ovoide.