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TEMA:
BIOLOGÍA MOLECULAR
INTEGRANTES:
Viviana Allauca
PERIODO ACADEMICO
OCTUBRE 2018 -FEBRERO 2019
RIOBAMBA – ECUADOR
LABORATORIO DE BIOLOGÍA MOLECULAR
Laboratorio de biología molecular, cuenta con diferentes zonas de trabajo para extracción
de ADN y ARN, diseño de ARN interferente y síntesis in vitro de ARN, análisis de
expresión génica mediante PCR convencional y en tiempo real (Real Time), clonación de
genes y construcción de plásmidos. Para ello dispone del equipamiento básico necesario
como son termocicladores, Nanodrop, equipos de electroforesis, transiluminador, horno
de hibridación, estufas de cultivo, incubadores, centrífugas refrigeradas y
microcentrífugas, concentrador mediante vacío (Speed Vac) y equipamiento general
(pHmetro, balanzas, vórtex, microondas, etc). Además, dispone de un equipo de
quimioluminiscencia que permite, entre otras aplicaciones, la cuantificación de moléculas
implicadas en procesos de apoptosis durante el envejecimiento.
ESTRUCTURA DEL LABORATORIO DE BIOLOGÍA MOLECULAR
Se considera el área limpia, es decir, sin ADN. Además, en ella se preparan todos los
reactivos que se van a utilizar en el laboratorio incluyendo la mezcla de reacción de PCR.
Es fundamental que no se contaminen y para ello es imprescindible que se disponga de
una cabina de bioseguridad.
Esta es un área sucia, es decir, con ADN, por ello debe tener una presión negativa para
evitar una contaminación. Debe contar con una cabina de bioseguridad y un
espectrofotómetro.
3. Sala de PCR.
Esta es un área sucia, en la cual tiene una importante fuente de contaminación. Dispone
de equipos de electroforesis.
4. Sala de Post-PCR.
Esta sala dispone de termocicladores para realizar la PCR y otro espacio para añadir
muestras de ADN. [1]
NORMATIVA ECUATORIANA RELACIONADA CON LOS LABORATORIOS
CLÍNICOS
La ISO 15189:2012, norma de referencia para la acreditación de laboratorios clínicos,
cuenta con lineamientos técnicos que se han convertido en el pilar fundamental para el
funcionamiento de estos laboratorios, los cuales siguen pautas de calidad establecidas en
la norma y les permite alcanzar la competencia técnica para emitir diagnósticos médicos,
rigurosos y confiables.
Roberto Carboni (Chile), bioquímico y experto en esta área, dictó en el SAE un curso de
capacitación, relativo a los requisitos, documentos, criterios y procedimientos de la
norma, para formar a profesionales del área clínica y personal técnico del SAE, en
acreditación de laboratorios clínicos.
Uno de los puntos de partida para conocer la aplicación de la norma ISO 15189, es saber
que se elaboró tomando como referencia las normas ISO/IEC 17025 e ISO 9001. Por
tanto, se puede asegurar que los laboratorios, que han obtenido la acreditación según ISO
15189, cuentan con un sistema de gestión de calidad reconocido, que reduce la necesidad
de repetir evaluaciones y ofrecen resultados confiables y de calidad a sus clientes.
La normativa se divide en dos partes, la de gestión que corresponde a los requisitos para
la certificación del sistema de calidad y la parte técnica que describe los requisitos para
el personal, instalaciones, equipos, procedimientos, garantía de calidad, informes y toma
de decisiones. La norma además tiene dos anexos, uno referente a las recomendaciones
para la protección de los sistemas de información del laboratorio y otro sobre la ética en
el laboratorio clínico.
Los participantes coinciden en que el punto, de mayor interés, abordado en el curso fue
la gestión de riesgos en los laboratorios clínicos. En la última actualización de la norma
ISO 15189, se enfatiza en la prevención y control de riesgos, nuevas técnicas y
herramientas para atender este aspecto crítico, que debería aplicarse, de manera
obligatoria, para la seguridad del paciente.
Solo la acreditación aporta confianza, tanto en la competencia del laboratorio para emitir
resultados confiables, al disponer de los recursos humanos, equipos y materiales y de la
experiencia necesaria, como en su capacidad de proporcionar un servicio calificado
adecuado a las necesidades de médicos y pacientes. [2]
EQUIPAMIENTO GENERAL DEL LABORATORIO DE BIOLOGÍA
MOLECULAR.
DESCRIPCIÓN
Combinando una extraordinaria precisión con la más alta velocidad en PCR en tiempo
real, el LightCycler 480 II es la más novedosa plataforma de RAS para análisis de
expresión génica y detección de mutaciones mediante curvas de fusión.
Basado en una innovadora combinación de hardware y software, el LightCycler 480 es
un equipo modular capaz de analizar 96 ó 384 muestras simultáneamente, destinado a la
detección cuantitativa o cualitativa de ácidos nucleicos, genotipado, "gene scanning"y
análisis de mutaciones.
El equipo cuenta con un innovador sistema de control de temperatura, que conduce a una
extraordinaria homogeneidad pocillo a pocillo y maximiza la reproducibilidad intra-
ensayo e inter-ensayo.
COMPOSICIÓN
El nuevo sistema óptico de alto rendimiento proporciona la máxima sensibilidad para
todos los formatos en los 6 canales de detección (500 nm, 533 nm, 568 nm, 610 nm, 640
nm, 670 nm), asegurando la recogida uniforme de la señal fluorescente con independencia
de la posición o del volumen de la muestra.
Roche Applied Science ha desarrollado un avanzado módulo de Softwares para adaptarse
a las necesidades del usuario LightCycler 480 y obtener la información más completa de
cada experimento de PCR en tiempo real: Detección cualitativa, Cuantificación absoluta,
Cuantificación relativa, Tm calling, Genotipado, Gene Scanning, LIMS.
El instrumento se completa con reactivos específicamente desarrollados y dirigidos a
aplicaciones específicas. Estos reactivos, basados en la tecnología Fast Start, aseguran
una óptima reproducibilidad y el máximo rango dinámico.
APLICACIONES
Cuantificación o genotipado, detección mediante SYBRGreen, R27 o sondas, análisis de
curvas de fusión de alta resolución: HRM
DESCRIPCIÓN
Sistema modular para PCR Cuantitativa a tiempo real, Eppendorf Realplex con dos filtros
de emisión y termociclador PCR Eppendorf modelo Mastercycler ep Gradient S. Incluye
PC Dell Optiplex con pantalla plana de 17’.
COMPOSICIÓN
Sistema óptico: Excitación por 96LEDs, longitud de onda de 470 nm, detección por
fotomultiplicadores CPM con 2 (Realplex2) o 4 filtros de emisión para Multiplex.
Software sencillo e intuitivo con posibilidad de monitorización de los datos de la PCR a
tiempo real y 5 módulos de análisis de los resultados: Cuantificación (absoluta y relativa
basada en método ΔΔCt), Análisis de Curva de disociación. Además el software permite
definir subensayos para poder correr dos ensayos de PCR diferentes e independientes a
la vez, que comparten el mismo programa de PCR. Posibilidad de trabajar con 4
fluorocromos y 96 muestras simultáneamente. Posibilidad de trabajar en gradientes de
temperatura.
UTILIDAD
PCR cuantitativa usando sondas específicas o mediante curvas de disociación para la
detección y análisis de expresión de dianas.
APLICACIONES
Aplicaciones en genética, bioquímica, biología celular, biomedicina, microbiología, etc.
Estudios de la expresión génica midiendo cantidad de mensajeros mediante rtPCR
cuantitativa. Cuantificación de dosis génica y amplificación de genes. Detección de
mutaciones.
DESCRIPCIÓN
Lector de microplacas, modelo Synergy HT, marca BioTek. con capacidad de multi-
detección (espectrofotómetro, fluorímetro y luminómetro).
El equipo utiliza un diseño único de doble-óptica. Cuando existe la necesidad de realizar
medidas de fluorescencia o luminiscencia, el equipo emplea una lámpara halógena de
tungsteno con filtros interferenciales en conjunción con un detector fotomultiplicador.
Cuando requerimos medidas de absorbancia, se cambia a una lámpara flash de xenon y a
un monocromador para seleccionar la longitud de onda deseada. El uso de una lámpara
flash de xenon permite realizar medidas de absorbancia tanto en el UV como en el visible.
COMPOSICIÓN
El lector admite todo tipo de placas, desde 6 a 386 pocillos. También existe la posibilidad
de emplear tubos de PCR y placas Terasaki.
UTILIDAD
Realizar medidas de luz emitida por la muestra analizada. Al poseer inyector, pude
introducirse el sustrato una vez la muestra se encuentra dentro, mejorando la medición.
APLICACIONES
Fundamentalmente en las áreas de genética y biología celular. Medidas de actividad
luciferasa sobre cultivos celulares.
Ultracentrífuga de sobremesa Óptima MAX
DESCRIPCIÓN
Ultracentrifuga de sobremesa, modelo OPTIMA MAX, marca Beckman Coulter, puede
generar hasta 130.000 rpm. con un valor máximo de 1.019.000 g, puede albergar
volúmenes de muestra por tubo desde 0,2 a 8 ml. Equipada con los rotores:
- Rotor de ángulo fijo de titanio tipo MLA-80. Velocidad máxima 80.000 rpm. Fuerza
máxima 444.000 g. Capacidad máxima 64 ml. en 8 tubos de 8 ml. Factor K de 29.
Completo, con todos los accesorios necesarios para su uso.
- Rotor basculante de Aluminio/Titanio tipo TLS-55. Velocidad máxima 55.000 rpm.
Fuerza máxima 259.000 g. Capacidad máxima 8,8 ml. en 4 tubos de 2,2 ml. Factor K de
50. Completo, con todos los accesorios necesarios para su uso.
- Rotor de ángulo fijo de titanio tipo TLA-110. Velocidad máxima 110.000 rpm. Fuerza
máxima 657.000 g. Capacidad máxima 40,8 ml. en 8 tubos de 5,1 ml. Completo, con
todos los accesorios necesarios para su uso.
- Kit Selladora de Tubos (comprobar los accesorios y ver si coincide la referencia).
ADAPTADORES Y TUBOS
- Ver tabla.
UTILIDAD
Separación gravimétrica de muestras en general. Fraccionamiento celular, separación de
fases.
APLICACIONES
Biología molecular y celular, fisiología animal y vegetal, ciencias químicas, ecología,
genética y microbiología. [1]
NORMAS DE BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE BIOLOGÍA
MOLECULAR
Normas básicas de bioseguridad en el laboratorio
1. Leer la guía de laboratorio para comprender los objetivos, los conceptos básicos y el
procedimiento a seguir durante la actividad.
2. Preparar y reservar los materiales, equipos y reactivos o soluciones necesarias para el
desarrollo de la práctica. Leer las Fichas Técnicas y de Seguridad (MSDS, por sus siglas
en inglés) de los reactivos que van a ser usados durante la experimentación.
3. Utilizar elementos de protección (bata de laboratorio, guantes, gafas de seguridad,
máscaras para gases y zapatos con suela antideslizante). La bata y los zapatos deben
mantenerse bien cerrados para evitar accidentes.
4. No consumir alimentos ni bebidas en el laboratorio.
5. Trabajar en un área con buena ventilación.
6. No pipetear con la boca.
7. En caso de presentarse algún derrame o salpicadura, se debe limpiar inmediatamente,
empleando el equipo de seguridad adecuado. Si hay contacto con la piel o los ojos debe
lavar inmediatamente durante al menos 10 minutos con abundante agua. Todo accidente
o incidente debe ser informado al coordinador de la práctica.
8. Lavarse las manos con agua y jabón antes y después de la práctica.
9. Limpiar y organizar el área de trabajo al finalizar.
Bibliografía