Preparación de medio de cultivo (informe #3)

Profesor: Luis González

Nombre: Roderick miranda, 4-796-171
Microbiología , Licenciatura en Tecnología Médica, Escuela de Tecnología médica,
Facultad de Ciencias Naturales y Exactas, Universidad Autónoma de Chiriquí,
David, Chiriquí, República de Panamá. E-mail: Roderickanthony96@hotmail.com.

Introducción: En los laboratorios de microbiología se utilizan diferentes tipos de

medios de cultivo que pueden ser preparados en forma líquida o en forma sólida.
Usualmente para preparar un medio sólido, se parte de un medio líquido al que se
le añade un agente solidificante como el agar, la gelatina o la sílicagel. El agar
preparado para determinar el crecimiento de bacterias fue el de Mueller hinton, la
cual es un medio de cultivo microbiológico utilizado comúnmente para realizar la
prueba de susceptibilidad a antibióticos. También es usado para aislar y mantener
especies de Neisseria y Moraxella.
Objetivo:
 Preparar adecuadamente medios de cultivo a partir de sus ingredientes y de
medios de cultivos deshidratados.
 Indicar el método de esterilización.
Materiales
- Erlenmeyer 250 mL
- estufa eléctrica
- balanza, gasa
- papel quirúrgico
- cinta adhesiva indicadora de esterilidad.
- varilla de vidrio
- medios de cultivo.

Preparación y resultado de Agar Mueller-Hinton

1. Leer cuidadosamente las instrucciones de preparación de medio de cultivo
asignado
2. Pesar adecuadamente la cantidad necesaria del medio deshidratado o de las
porciones.
3. Calentar en agua hirviente y agitar con frecuencia
4. Autoclavar 15 minutos a 121°C
5. Si es necesario dejar enfriar o introducir por mezcla 50-100 mL.

Cálculos: 34 g --------1000 mL
? --------200 mL
X= 6,8 g
 1. Pesar la cantidad exacta del medio deshidratado.

2. disolver en 200 mL de agua,

agitar y calentamos en la plancha
por 15 Minutos a 121 °C

Fig.1 deshidratado bioxon (6,8

g a pesar)

3. deje enfriar hasta los 45 °C y

solidifique en el plato Petri.

Conclusión
 El agar Mueller- hinton, es el medio universalmente aceptado para la
realización de los antibiogramas o pruebas de sensibilidad a los
antimicrobianos.
 Es de mucha importancia, realizar un buen cálculo al momento de agregar
los componentes representativos al agar preparado.
 Los caldos de enriquecimiento no deben utilizarse como único medio de
aislamiento. Deben utilizarse en conjunto con medios en placa selectivos y
no selectivos para aumentar la probabilidad de aislar patógenos, en especial
si pueden estar presentes en pequeñas cantidades.
Bibliografía
 Clavel, L.; Predique de Aulacio, M. 1992. Microbiología. Manual de Métodos
Generales
(2da edición). Facultad de Farmacia. Universidad Central de Venezuela.
 Control de microorganismo por agentes físicos y químicos
Nombre: Roderick miranda, 4-796-171
Microbiología , Licenciatura en Tecnología Médica, Escuela de Tecnología médica,
Facultad de Ciencias Naturales y Exactas, Universidad Autónoma de Chiriquí,
David, Chiriquí, República de Panamá. E-mail: Roderickanthony96@hotmail.com.

Introducción: Muchas prácticas de la vida cotidiana como la potabilización del

agua, la pasteurización de la leche o la refrigeración de los alimentos, tienen por
objeto controlar a las poblaciones microbianas. Este control tiene varias razones
como prevenir la transmisión de enfermedades, evitar la contaminación de algunos
productos y evitar la contaminación (alimentaria, ambiental, etc.) Una variedad de
agentes físicos y químicos son útiles para provocar la muerte bacteriana o para
prevenir su multiplicación. Entre estos encontramos las radiaciones ultravioleta, la
temperatura, los agentes desinfectantes y otros.
Procedimientos:
Actividad bacteriostática o bactericida de algunos compuestos químicos
1. Siembre en la superficie de una placa totalmente, por medio de hisopo estéril
impregnado de una suspensión bacteriana. Cuide que no quede un espacio sin
sembrar.
2. Distribuya varios círculos de papel impregnados de antisépticos, limpiadores
comerciales y domésticos, colorantes, desinfectantes, jabones, antibióticos, etc.
Aproximadamente 4 círculos cerca de las orilla de la placa y uno en el centro. En el
caso de antibióticos, los círculos impregnados se obtienen comercialmente.
3. Incube a 37ºC por 24 horas, mida el radio de inhibición alrededor de cada círculo.
Resultados
Cuadro #1 Prueba con detergentes. Bacterias Gram +
Detergente Grado de inhibición
1. SIP No inhibe el crecimiento.
2. Cloro Inhibe el crecimiento
3. Fabuloso Inhibe el crecimiento
4. 409 Inhibe el crecimiento
5. Mistolin Inhibe el crecimiento
6. Lysol Inhibe el crecimiento

Fig. 1 muestras de detergentes,

crecimiento de bacterias.
Pruebas con antibióticos
Gram + Gram -
Antibiótico Resistencia Antibiótico Resistencia
1. TE 30 30 1. OFX 7
Tetraciclina ofloxacina
2. CC 10 2. CXM 20
Clindamicina cefuroxima
3. FOX 30 13 3. GM 21
Cefoxitina Gentamicina
4. CF 38 4. CAZ 25
cefalotina Ceftazidima
5. E15 7 5. ETP 20
Eritromicina Ertapenem
6. P10 17 6. AN 20
Penicilina Amikacina
7. OX 7 7. PIP 18
Oxalina Piperacina

Fig. 2 crecimientos de bacterias en

presencia de antibióticos.

Conclusión: Se concluye que el método de difusión con disco, en agar Mueller

hinton, es mejor para la prueba de sensibilidad antimicrobiana, es rápido, fácil y
sencillo, no se ocupa material caro, ni instrumentos costosos. La forma de
interpretación de los resultados ante los antibióticos son: susceptibles, resistentes y
susceptibles intermedio.
Además se logra diferenciar las membranas de las bacterias gram- y gram +, la
primera contando con una capa o membrana más gruesa, lo cual lo convierte en la
más resistente y de mayor peligro. No así las gram + que cuentan con una
membrana más delgada, por lo tanto su sistema de resistencia es menor.
Bibliografía
 https://www.uprm.edu/biology/profs/massol/controlmicrob.pdf

 http://bioinfo.hpcf.upr.edu/biol3705/4-%20Nutricion/2-
%20Agentes%20fisicos%20de%20control%20microbiano.pdf
 Medios de cultivos
Nombre: Roderick miranda, 4-796-171
Microbiología , Licenciatura en Tecnología Médica, Escuela de Tecnología médica,
Facultad de Ciencias Naturales y Exactas, Universidad Autónoma de Chiriquí,
David, Chiriquí, República de Panamá. E-mail: Roderickanthony96@hotmail.com.

Introducción: Podemos decir que la microbiología empieza su verdadero desarrollo

como ciencia en el momento en que se descubre el microscopio y comienza la
observación de los primeros microorganismos, pero es indudable que la puesta a
punto de los medios de cultivo y la utilización del agar como solidificante, marcan
dos importantes puntos de inflexión en su evolución. En este laboratorio se identificó
diversos tipos de medios de cultivos, básicamente a través de su color, olor y así
poder cultivar microorganismos específicos para cada tipo de medio.
Objetivos
 Identificar cada medio de cultivo, entregado por el profesor.

Resultados
Medio de cultivo Características
Es un medio rico que aporta muchos factores
de crecimiento. Se considera un medio
Agar sangre diferencial. Observando los halos hemolíticos
alrededor de las colonias se determina el tipo
de hemólisis que poseen: alfa, beta o gamma.
Es un medio de cultivo utilizado
Agar muller - hinton comúnmente para realizar la prueba de
susceptibilidad a antibióticos.

Es un medio selectivo y diferencial. En el

Agar Mac Conckey crece las bacterias Gram – Presenta
lactosa + (rosada) y lactosa –
(transparente).
 Es un medio nutritivo, diferencial y no
Agar kimming selectivo. Permite el desarrollo hongos
micelios. También se puede utilizar para el
cultivo de levaduras

Es un medio selectivo y diferencial para el

Agar TCBS aislamiento y cultivo de Vibrio cholerae y
otras especies.

Agar chocolate Agar Chocolate es un medio de cultivo

enriquecido y no selectivo. Es una variante
del agar sangre. Contiene glóbulos rojos,
que han sido lisados por el suave

Conclusión
Al finalizar este laboratorio podemos tener una clara idea, sobre los medios de
cultivos observados. Ya que existen, los enriquecidos, selectivos y diferencial.
Para el medio selectivo se añaden sustancias que inhiban el crecimiento de ciertos
grupos de bacterias, permitiendo a la vez el crecimiento de otras. Variando la
sustancia añadida, se varía el tipo y grado de selectividad (Mac Conckey).
Para los medios diferenciales, se estudian las peculiaridades fisiológicas (nutrición
y respiración sobre todo) específicas de las bacterias. Seleccionando los medios
adecuados se puede llegar a la identificación de casi cualquier bacteria.

Bibliografía
 Méndez. (2011). Medios Cultivos. 2018, de Microbiología Sitio web:
http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioMedios.htm

 Salazar. (2010). MicroEst. 2018, de Microbiología Sitio web:

www.sartorius.com. /controlcalidad/microbiología.
 Determinación de bacterias coliforme
Nombre: Roderick miranda, 4-796-171
Microbiología , Licenciatura en Tecnología Médica, Escuela de Tecnología médica,
Facultad de Ciencias Naturales y Exactas, Universidad Autónoma de Chiriquí,
David, Chiriquí, República de Panamá. E-mail: Roderickanthony96@hotmail.com.

Introducción: El grupo de organismos coliforme son bacterias en forma de bacilos

facultativamente aerobios Gram negativos que no forman esporas y fermentan la
lactosa. El término bacterias coliforme se utiliza para designar a las enterobacterias
más frecuentes encontradas en los productos lácteos. El recuento de estas
bacterias es uno de los medios más significativos para la apreciación de la calidad
higiénica de la leche. En este caso las muestras a realizarle un conteo de bacterias
fueron a través del bienmesabe y el queso. Siendo el queso el de mayor cantidad
de bacterias, de forma natural ya que contiene lactosa.
Objetivos:
- Evaluar la calidad sanitaria de muestras o alimentos mediantes la búsqueda de
microorganismos coliforme totales, Escherichia coli.
Procedimiento
- Para la preparación de medio de cultivo utilizado en la prueba presuntiva de
muestras de alimentos. El agar nutritivo se calienta en la plancha una vez
diluido.
- Colocamos 5 tubos de ensayos donde previamente se añadido el agua
peptonada
- Se extrae con una pipeta 1 mL de la solución madre de alimento en este caso
maceramos un pedacito de cada muestra. Y se adiciona al primer tubos de
ensayos se agita y se extrae al siguiente tubo de ensayo uno seguido del
otro. Cambiar la pipeta en cada dilución.
- Con una pipeta estéril se extrae la concentración 10-5, 10-4, 10-3, 10-2,10-1
para evitar aumentar la concentración.
Resultados
Cuadro. Muestra la cantidad de bacterias presentes en las muestras analizadas.
Recuento de bacterias en Conteo de bacterias Concentración
queso (cantidad) en bienmesabe
5 UFC 0 UFC 10-5
10 UFC 0 UFC 10-4
Más de 100 UFC 1 UFC 10-3
Más de 300 UFC 3 UFC 10-2
Más de 500 UFC 5 UFC 10-1

Conclusión
Los recuentos por coliforme totales en el queso exceden los valores permisibles,
comparando ambas muestras, al observar en el contador de Quebec, el cual nos
facilita el conteo de bacterias. El queso presentaba un alto grado de bacterias, por
la presencia de bacterias del ácido láctico que constituyen un amplio conjunto de
microorganismos benignos que, a partir de azúcares (lactosa en el caso de la leche),
crean ácido láctico como producto final del proceso de la fermentación. Las
bacterias ácido lácticas se han empleado para fermentar alimentos desde tiempos
remotos. Su uso más corriente son los productos lácteos fermentados, como el
yogur, el queso o la mantequilla, pero también otros menos conocidos como el kéfir
o el exótico kumis. El hecho de que cuando fermentan creen un ácido, hace que el
producto resultante no sea adecuado para el desarrollo de la mayoría de otros
microorganismos. Por este motivo el queso presento mayor cantidad de bacterias a
diferencia del bienmesabe, el cual si hubiese tenido muchas Unidades formadoras
de colonia, el producto estaría contaminado y no apto para la ingestión.

Bibliografía
 Madigan M, Martinko JM. Biología de los microorganismos. Madrid: Prentice
Hall. 2003 p. 980.
 Alais Ch. Ciencia de la leche. México: Compañía Editorial Continental.
2001. p. 230-231