CUESTIONARIO:

1. ¿Que son células Primarias?

Las células que se cultivan directamente desde un sujeto se conocen como
células primarias. A excepción de algunos derivados de tumores, la
mayoría de los cultivos celulares primarios tienen un periodo de vida
limitado. Después de un cierto número de divisiones las células entran en
el proceso de senescencia y dejan de dividirse, generalmente manteniendo
la viabilidad.

2. Caracterice la composición y preparación de los medios RPMI

1640 y DMEM
Medio RPMI 1640

CARACTERÍSTICAS FÍSICOQUÍMICAS:
-Aspecto: Polvo rosáceo y homogéneo
-Tamaño de las Partículas : aproximadamente 20 micrones
-Solubilidad : solución límpida en la concentración de uso 1X
-pH a 25oC (Sin NaHCO3) : 8,0 + 0,5
-pH a 25oC (Con NaHCO3) : 8,1 + 0,5
-Osmolaridad (sin NaHCO3) : 246 + 5%
-Osmolaridad (con NaHCO3) : 290 + 5

PREPARACIÓN: el MEDIO MEIO RPMI 1640 en polvo es extremadamente

higroscópico y debe ser protegido del medio ambiente. No se recomiendan
preparaciones de concentraciones mayores a las especificadas, debido a la
gran posibilidad de formación de precipitados.

1. Medir aproximadamente 90% del volumen a ser preparado de agua

tridestilada (15 - 20oC).
2. Adicionar lentamente el polvo agitando constantemente. NO CALIENTE
EL AGUA.
3. Después que el polvo este disuelto, agregue 2,0g de bicarbonato de sodio
al 5,6% por litro.
4. Agregue antibióticos u otras sustancias que crea que sean necesarias.
5. Pode obtenerse el pH de acuerdo a lo deseado, utilizando HCl 1N o NaOH
0,1N o gasificando con CO2.
6. Completar el volumen con agua tridestilada y esterilizar por filtración en
membranas de 0,22m, utilizando presión positiva.

Medio DMEM
CARACTERISTICAS
El DMEM es una modificación del medio basal medium
Eagle(BME),contiene una mayor concentración de aminoácidos y
vitaminas, así como la adición de antibióticos y la suplementación con
suero fetal bovino.

PREPARACION
 Para preparar un litro de medio, verter aproximadamente 300 ml de
agua de ionizada en un vaso de precipitados de 1L,posteriormente llevar
a cabo las mediciones que se enlistan a continuación:

 los reactivos se agregan al vaso de precipitados con agua al momento de

medir los excepto los que se señalan en la tabla con itálicas, pues estos
deben de añadirse en la campana una vez que el resto de los reactivos
se encuentren disueltos en un volumen final de 1L.
 Posteriormente se prepara el sistema de filtración conteniendo una
membrana de 0.45μm y se conecta a un matraz Kitazato de una salida,
en la cual se coloca la manguera del sistema de vacío.
 Una vez que se filtra todo el medio se deposita en un frasco estéril de 1L
y se etiqueta debidamente (Indicando el contenido, nombre de quien lo
elaboro y la fecha).
 Se realiza una prueba de esterilidad colocando aproximadamente 5 mL
del medio de cultivo en un tubo falcón estéril, el cual se incuba por 48
horas bajo condiciones similares a las de los cultivos celulares. Se
revisa que el tiempo señalado no se presente evidencia de
contaminación. Mantener el medio de cultivo bajo refrigeración a 4°C
hasta su uso. Suplementación del medio DMEM con 5% de suero fetal
bovino (D5F).
  Depositar 95 mL del medio de cultivo en un frasco estéril de vidrio y
agregar 5 mL de suero fetal bovino previamente de complementado
mediante calentamiento a 56°C durante 45 minutos en un baño de
agua
.