You are on page 1of 7

Abstract

Pisang (Musa acuminata) bracts, residu dimakan pisang produksi yang berlimpah, diselidiki sebagai
sumber potensial pewarna alami. Anthocyanin diekstrak dari Musa
bracts acuminata dan isinya ditemukan 14mg / 100gm dan properti antioksidan mereka juga diselidiki.
Anthocyanin dari Musa acuminata bract dipamerkan freeradicalscavenging
aktivitas melawan DPPH radikal, anion superoksida, hidroksil radikal, logam chelating dan radikal
hidrogen peroksida dengan cara tergantung dosis Degradasi deoksiribase oleh radikal hidroksil
ditunjukkan untuk dihambat oleh anthocyanin yang bertindak terutama sebagai chelator ion besi
daripada secara langsung mengais radikal hidroksil. Anthocyanin juga ditemukan memiliki kekuatan
reduksi yang sangat baik. Daya reduksi anthocyanin, asam askorbat dan butil hidroksil toluena
semuanya pada 100mg / ml adalah 0,138, 0,577 dan 0,455, masing-masing, menunjukkan bahwa
antosianin dari Musa acuminata bract memiliki kapasitas donor elektron yang kuat. Oleh karena itu
disarankan bahwa anthocyanin dapat bermanfaat radikal bebas pemulung dan temuan kami
mengungkapkan bahwa Musa acuminata bract memiliki potensi sebagai sumber yang baik dari
senyawa antioksidan / nutraceutical alami.

INTRODUCTIONS

Pisang adalah tanaman buah penting dunia. Mereka membentuk komponen integral dari pertanian
sistem di zona agro-ekolologi lembab tropis. Pisang diproduksi untuk lokal
konsumsi dan perdagangan terutama di daerah tropis dan subtropis di dunia. pisang
milik keluarga tumbuhan Musaceae. Musa adalah genus terbesar dalam keluarga dan diklasifikasikan
menjadi lima bagian berdasarkan nomor kromosom dan karakter morfologi. Di banyak
Asia selatan lokasi laki-laki tunas pisang liar dan dibudidayakan dikonsumsi sebagai
sayuran dan warna kulit adalah sumber potensial pewarna makanan (Kasipong 2008) [1].
Kebanyakan pisang memiliki warna bract bract merah, ungu, atau ungu sementara hijau sianat atau
kuning jarang terjadi. Dalam Musa acuminata variasi warna braktat berkorelasi dengan komposisi
campuran pigmen. Hasil awal dengan kromatografi kertas dan dengan ekstraksi asam ditunjukkan
antosianin glycoconjugated adalah pigmen utama dalam warna bract. Minat
anthocyanin meningkat secara signifikan karena warnanya yang cerah dan cerah, kelarutan air
yang memfasilitasi penggabungan ke dalam sistem berair dan efek kesehatan yang menguntungkan
(Timberlake & Henry, 1988 [2]; Lauro, 1991 [3]; Henry, 1996 [4]; Cao, Sofic and Prior, 1997 [5]; Wang,
Cao dan Prior, 1997 [6]). Sumber-sumber baru anthocyanin dengan daya tingtur tinggi, stabilitas dan
rendah biaya diinginkan sebagai pewarna makanan alami (Francis, 1982 [7]; Henry, 1996) [8].
Antosianin dari buah yang dapat dimakan adalah antioksidan yang efektif secara in vitro (Einbond,
Reynertson, Luo, Basile, Kennelly, 2004) [9]. Oksidasi sangat penting bagi banyak organisme hidup
untuk produksi energi yang diperlukan untuk proses biologis. Oksigen - radikal bebas yang berpusat,
juga dikenal sebagai spesies oksigen reaktif (ROS), termasuk superoksida, hidrogen peroksida, hidroksil
(HO-), peroxyl (ROO-) dan alkoxyl (RO-), diproduksi in vivo selama oksidasi (Bloknina, Virolainen
dan Fagerstedt, 2003) [10]. ROS tidak hanya sangat terkait dengan peroksidasi lipid,
menyebabkan kerusakan makanan, tetapi juga terlibat dalam pengembangan berbagai penyakit,
termasuk penuaan seluler, mutagenesis, karsinogenesis, penyakit jantung koroner, diabetes, dan
neurodegenaration (Halliwell dan Gutteridge, 1999 [11]; Moskovitz, Yim and Choke 2002 [12]).
Meskipun hampir semua organisme memiliki pertahanan dan perbaikan sistem antioksidan untuk
melindungi terhadap kerusakan oksidatif, sistem ini tidak cukup untuk mencegah kerusakan
sepenuhnya (Simic,1988) [13].
Sifat antioksidatif anthocyanin muncul dari reaktivitasnya yang tinggi seperti hidrogen atau
donor elektron, dan dari kemampuan radikal yang diturunkan dari polifenol untuk menstabilkan dan
delocalize elektron yang tidak berpasangan, dan dari kemampuan mereka untuk chelate terminasi ion
logam transisi dari (Rice-Evans, miller, dan Panganga, 1997) [14]. Dengan demikian, anthocyanin dapat
memainkan peran untuk kemampuan antioksidan. Jadi upaya dilakukan untuk mengekstrak
anthocyanin dan menganalisisnya Potensi antioksidan dari Musa acuminata bract.

2. TUJUAN
Tujuan utama dari makalah ini adalah untuk mengekstrak dan mengevaluasi kandungan antosianin
dari Musa acuminata
bracts dan untuk mengevaluasi properti antioksidan in vitro dari ekstrak Musa acuminate bracts
menggunakan
DPPH, hydroxyl dan superoxide scavenging, mengurangi daya, pembilas hidrogen peroksida,
logam chelating, sistem hidrogen peroksida klorida anti-besi, dan degradasi deoksiribosa.

3. MATERI DAN METODE


3.1 Pengambilan sampel: Musa acuminata bract dikumpulkan dari bidang vellore di
Udmalpet.

3,2 Ekstraksi: 0,5 gram Musa acuminata bract dirawat dengan 10 ml diasamkan metanol.
Dan campuran disentrifugasi pada 10.000 rpm selama 10 menit dan supernatan diambil
analisis (Lachman et., al 2003) [15]

3.3 Prosedur analitis


3.3.1 Uji konformasi Flavanoids (Harbone-1998) [16]
A. Fecl3 : 1 ml ekstraksi sampel ditambahkan dengan sedikit FeCl3, dan hasilnya diamati.
B. Alcl3: 1 ml ekstraksi sampel ditambahkan dengan 5% larutan AlCl3, dan hasilnya diamati.
3.3.2 Uji total fenolik Senyawa fenolik total dalam sampel antosianin dikuantifikasi dengan
menggunakan Foliciocalteu's
3.3.3 Stabilitas pada pH variabel
Stabilitas antosianin diuji dengan memperlakukan 1 ml sampel dengan 1 ml pH 1,0 dan 4,5
solusi. Perubahan warna diamati. (Strack, 1989) [18].
3.3.4 Penentuan total antosianin
Jumlah total konten antosianin ditentukan dengan menggunakan metode pH diferensial. SEBUAH
spektrofotometer digunakan untuk pengukuran spektral pada 210 nm dan 750 nm. (Fuleki & Francis,
1968) [19]. Absorbansi sampel (A) dihitung sebagai berikut: A = (Absorbance l vis-maxA 250-A750)
pH1.0- (Absorbance l vis-max A250-A750) Ph 4.5 Kandungan pigmen antosianin (mg / liter) = (A X MW
X DF X 1000) / (e X 1). Dimana, Berat molekul antosianin (cyd-3-glu) = 449, Ekstraksi koefisien (e) =
29.600, DF = Faktor yang diencerkan. metode yang dijelaskan oleh Ronald et.al., (1998) [17]. 50 μl
reagen Folin-ciocalteu (50% v / v) ditambahkan ke 10μl ekstrak sampel. Itu diinkubasi selama 5 menit.
Setelah inkubasi 50μl 20% (w / v) natrium karbonat dan air ditambahkan ke volume akhir 400 µl.
Kosong disiapkan dengan mengganti reagen dengan air untuk mengoreksi senyawa yang mengganggu.
Setelah 30 menit inkubasi, absorbansi diukur menggunakan spektrofotometer pada 760 nm.
Asam askorbat dan BHT digunakan sebagai kontrol positif. Penghambatan radikal DPPH oleh sampel
dihitung menurut persamaan berikut: Aktivitas DPPH-scavenging (%) = [1- (absorbansi sampel-
absorbansi kosong) / absorbansi kontrol] × 100

3.3.5 Total konten flavonoid


Kandungan flavonoid ditentukan sesuai dengan kolorimetri aluminium klorida
metode yang dijelaskan oleh Chang, Yang dan Chern (2002) [20]. Secara singkat, aliquot dari 0,1 g
Musa
sampel bract acuminata dilarutkan dalam 1 ml air deionisasi. Solusi ini (0,5 ml) adalah
dicampur dengan 1,5 ml alkohol 95%, 0,1 ml 10% aluminium klorida heksahidrat (AlCl3),
0,1 ml 1 M potassium acetate (CH3COOK), dan 2,8 ml air deionisasi. Setelah inkubasi
pada suhu kamar selama 40 menit, penyerapan campuran reaksi diukur pada 415 nm
terhadap air deionisasi yang kosong pada spektrofotometer. Quercetin digunakan sebagai standar.
Menggunakan kurva standar tujuh titik (0-50mg / l), tingkat kandungan flavonoid total dalam Musa
bract akuminata ditentukan dalam rangkap tiga, masing-masing. Data dinyatakan sebagai miligram
quercetin equivalents (QE) / 100 g materi segar dari fresh Musa acuminata bract.

3.4 ASSAYS ANTIOKSIDAN


3.4.1. Kegiatan pemulungan radikal DPPH
Aktivitas pemulungan Anthocycanins terhadap radikal DPPH dinilai menurut
metode Larrauri, Sanchez-Moreno, dan Saura-Calixto (1998) [21] dengan beberapa modifikasi.
Secara singkat, 0,1 mM larutan DPPH-metanol dicampur dengan 1 ml 0,1mM DPPH metanol
larutan. Setelah larutan diinkubasi selama 30 menit pada 25º C dalam gelap, penurunan dalam
absorbansi pada 517nm diukur. Kontrol mengandung metanol, bukan antioksidan
solusi sementara kosong mengandung metanol bukan solusi DPPH dalam percobaan.
3.4.2. Aktivitas pembilasan radikal hidroksil
Aktivitas pembilasan radikal hidroksil ditentukan sesuai dengan metode yang dijelaskan oleh Singh,
Murthy dan Jayaprakash (2002) [22]. 0,1 ml dari Musa acuminata bract anthocyanin sampel yang
diuapkan dalam konsentrasi 1mg / ml, 10mg / ml, 50mg / ml, dan 100mg / ml adalah
diambil dalam tabung reaksi yang berbeda. 1.0 ml larutan besi-EDTA (0,1% besi amonium sulfat
dan 0,26% EDTA), 0,5 ml DMSO (0,85% v / v dalam 0,1 M buffer fosfat, pH 7,4) adalah
ditambahkan ke tabung ini, dan reaksi dimulai dengan menambahkan 0,5 ml 0f 0,22% asam askorbat.
Tabung reaksi ditutup rapat dan dipanaskan pada penangas air pada 80-90 0c selama 15 menit.
Reaksinya diakhiri dengan penambahan 1 ml es dingin TCA (17,5% b / v) .3 ml reagen Nash (75
g amonium asetat, 3 ml asam asetat glasial, dan 2 ml asetil aseton dicampur dan
diangkat ke 1 L dengan air suling) ditambahkan ke semua tabung dan dibiarkan pada suhu kamar untuk
15 menit untuk pengembangan warna. Intensitas warna kuning yang terbentuk diukur
spektrofotometri pada 412 nm terhadap reagen kosong. Persentase hidroksil
aktivitas pembilasan radikal dihitung dengan menggunakan rumus: % dari aktivitas radikalisasi
hidroksil = 1-absorbansi sampel / absorbansi kosong × 100
3.4.3 Penentuan aktivitas radikal-pembilas superoksida
Radikal superoksida dihasilkan oleh metode Ginnopolites and Ries (1977) [23],
dijelaskan oleh Siddhurajuna, Mohab dan Beckera (2000) [24], dengan beberapa modifikasi semua
solusi disiapkan dalam 0,05 M dapar fosfat (pH 7,8). Reaksi yang diinduksi foto
dilakukan dalam kotak aluminium foil dengan dua lampu fluoresen 30W. Jarak
antara larutan reaksi dan lampu disesuaikan sampai intensitas iluminasi
mencapai sekitar 4000 lux. Sebuah alikuot 30 ofL dari Musa acuminata bract anthocyanin menguap
sampel dalam konsentrasi 1mg / ml, 10mg / ml, 50mg / ml, dan 100mg / ml dicampur dengan
3ml larutan buffer reaksi (1.3 mm riboflavin, 13 mM metionin, 63 µM nitro biru
tetrazolium dan 100μM EDTA, pH 7.8). Larutan reaksi diterangi selama 15 menit pada
25 º C. Campuran reaksi, tanpa sampel, digunakan sebagai kontrol. Kegiatan mengais-ngais
dihitung sebagai berikut:
Aktivitas scavenging (%) = (1-absorbansi sampel / absorbansi) × 100
3.4.4 Aktivitas chelating logam
The chelation ion besi oleh ekstrak diperkirakan dengan metode Diniset., Al. (1994) [25]
dengan sedikit modifikasi dan dibandingkan dengan EDTA, BHT dan asam askorbat. Itu
Uji chelation awalnya meliputi penambahan fero klorida. Antioksidan hadir di
sampel chelates ion besi dari besi klorida. Besi yang tersisa bergabung
dengan ferrozine untuk membentuk kompleks ferro-ferrozine. Intensitas kompleks besi-ferrozin
formasi tergantung pada kapasitas chelating dari sampel dan formasi warna
diukur pada 562 nm (Shimadzu UV-Vis 2450).
Konsentrasi berbeda dari standar dan (100-500 µg / ml) dari Musa acuminata bract anthocyanin
sampel yang diuapkan dalam konsentrasi 1mg / ml, 10mg / ml, 50mg / ml, dan 100mg / ml
ditambahkan ke larutan 100 µl FeCl2 (1mM). Reaksi diprakarsai oleh penambahan
250 μl ferrozine (1 mM). Campuran itu akhirnya dikuantifikasi menjadi 1,3 ml dengan metanol,
dikocok kuat dan dibiarkan berdiri pada suhu kamar selama 10 menit. setelah campuran itu
mencapai kesetimbangan, absorbansi larutan diukur secara spektrofotometri. Semua
tes dan analisis dilakukan dalam rangkap dan nilai rata-rata diambil. Persentase
penghambatan pembentukan kompleks ferro-ferrozine dihitung menggunakan rumus;
% = 1-As / Ac X 100. Di mana, 'Ac' adalah absorbansi kontrol, 'As' adalah absorbansi dari
mencicipi.

3.4.5. Penentuan daya reduksi


Kekuatan pereduksi ditentukan sesuai dengan metode Oyaizu (1986) [26]. A 0,25ml
aliquot dari Musa acuminata bract anthocyanin sampel diuapkan dalam konsentrasi 1mg /
ml, 10mgml, 50mg / ml, dan 100mg / ml dicampur dengan 2,5 ml natrium fosfat 200mM
buffer (pH 6,6) dan 2,5 ml 1% potasium ferricyanide. Campuran kemudian diinkubasi pada 50
ºC selama 20 menit. Setelah 2,5 ml asam trikloroasetat 10% (b / v) ditambahkan, campuran itu
disentrifugasi pada 650g selama 10 menit. Sebuah alikuot 5ml dari lapisan atas dicampur dengan 5 ml
distilasi air dan 1 ml 0,1% besi klorida pada 700nm diukur. Absorbansi yang lebih tinggi lebih tinggi
mengurangi daya.
3.4.6. Aktivitas Pembersihan Hidrogen Peroksida
Larutan hidrogen peroksida (40mM) disiapkan dalam buffer fosfat (pH 7,4). 0,2 ml berbagai
konsentrasi Musa acuminata bract anthocycanins (1, 10, 50, 100mg / ml) di 1,6ml dapar fosfat (pH 7,4)
ditambahkan ke 0,6 ml larutan hidrogen peroksida 40mM. Nilai absorbansi campuran reaksi dicatat
pada 230 nm. (Lcin 2005) [27]. Itu persentase pencucian hidrogen peroksida dari Musa acuminata
bract anthocyanin adalah dihitung menggunakan rumus berikut:Aktivitas pembasahan hidrogen
peroksida% = [(absorbansi penyerapan sampel kontrol) / absorbansi kontrol] * 100.
3.4.7. Estimasi anti-FeCl2
Efek anti -FeCl2 -H2O2 dirangsang peroksidasi asam linoleat ditentukan olehmetode seperti yang
dijelaskan oleh Duh (1998) [28]. Singkatnya, 0,2 ml berbagai konsentrasi Musa acuminata bract
anthocycanins (1, 10, 50, 100mg / ml) ditambahkan ke larutan 0,1 M asam linoleat (0,2 ml), 2,0 mM
FeCl2. H2O (0,2 ml) dan 0,2 M dapar fosfat (pH 7,4,5 ml). Campuran reaksi diinkubasi pada 370 C
selama 24 jam. Setelah inkubasi, 0,2 ml BHA (20mg ml), 1 ml asam thiobarbituric (TBA) (1%), dan 1ml
asam trikloro asetat (TCA) (10%) adalah ditambahkan ke campuran, yang dipanaskan selama 30 menit
dalam air mendidih keduanya. Setelah pendinginan, 5ml kloroform ditambahkan, dan campuran
disentrifugasi pada 1000 x g untuk memberikan supernatan.
Absorbansi supernatan diukur menggunakan spektrofotometer pada 532 nm.

4. Analisis antioksidan molekuler


4.1 Penentuan efek penghambatan pada degradasi deoksiribosa
Efek penghambatan anthocyanin pada degradasi deoksiribosa ditentukan dengan mengukur aktivitas
reaksi antara antioksidan atau radikal hidroksil (disebut sebagai non-spesifik scavenging assay) atau
antioksidan dan ion besi (disebut sebagai pemulungan spesifik lokasi assay) dijelaskan oleh Lee et. al.,
(2002) [29]. Untuk pengujian pembilasan non-spesifik, 0,1 m aliquot dari konsentrasi antosianin yang
berbeda dicampur dengan 1 ml basil reaksi (100 µM FeCl3, 104 µM EDTA, 1,5mM H2O2 , 2,5mM
deoksiribosa, dan 100μM asam L-Askorbat, pH 7.4) dan diinkubasi selama 1 jam pada 370 C. Sebuah
alikuot 1 ml dari 0,5% asam 2-tiobarbiturat dalam 0,025 M
NaOH dan 1 ml asam trikloroasetat 2,8% ditambahkan ke dalam campuran dan dipanaskan selama
30min di 800 C. Campuran didinginkan pada es dan absorbansi diukur pada 532nm. Spesifik situs
aktivitas pemulungan, yang mewakili kemampuan anthocyanin untuk melapisi ion besi
dan mengganggu generasi radikal hidroksil, diukur menggunakan buffer reaksi yang sama
tanpa EDTA. Penghambatan persen degradasi deoksiribosa dihitung sebagai (1-absobansi
sampel / absorbansi kontrol) × 100. Kontrol tanpa sampel.

5. HASIL DAN DISKUSI


5.1 EKSTRAKSI ANTHOCYANIN
Total antosianin diekstraksi dengan menggunakan metanol diasamkan sebagai sistem pelarut.
Diasamkan metanol menghasilkan nilai anthocyanin total secara signifikan lebih tinggi (tabel 1).
Alexandra et.al, 2001 [30] mengekstraksi antosianin dari Musa paradisiaca bracts diekstraksi dengan
menggunakan diasamkan metanol sebagai sistem pelarut.

Tabel 1: Kandungan fenolik, flavonoid dan kandungan antosianin Musa


accuminata bract dalam ekstraksi pelarut metanol diasamkan:

Musa acuminata Total phenol (mg Total flavonoid Anthocyanin (mg


bract solvent gallic acid equ/g) (mg quaeracetin glucoside equ/g)
equ/g)
Acidified 286±0.30 342±0.2 14.4±0.01
Methanol

5.2 TES KONFIRMASI UNTUK ANTHOCYANIN:


Antosianin yang diekstraksi dari metanol yang diasamkan dikonfirmasi dengan uji besi klorida,
uji aluminium klorida dan juga dengan menguji ekstrak dengan asam hidroklorat 1M dan 1M
natrium hidroksida.

5.3 EVALUASI TOTAL FLAVONOID:


Total kandungan flavonoid dievaluasi menjadi 342 mg / g (tabel 1). Korelasi positif adalah
diamati antara fenol total dan flavonol menunjukkan bahwa jumlah fenol berkontribusi sebagian besar
oleh flavonol di bracts dari Musa acuminata (tabel 1). Hasil serupa dilaporkan oleh Linda
dykes et.al., 2005 [31].

5.4 PENENTUAN KONTEN PHENOLIK TOTAL:


Total konten fenolik diamati adalah 2,869 mg / g dalam ekstrak metanol diasamkan. Awika
et.al., 2005 [32] melaporkan konsentrasi tertinggi fenol dalam bran sorgum dengan menggunakan
metanol diasamkan sebagai pelarut. Dia juga melaporkan bahwa ekstrak metanol yang diasamkan
dapat dipertahankan berbagai senyawa terutama senyawa fenolik. Senyawa fenol umumnya
ditemukan di kedua tanaman yang dapat dimakan dan tidak dapat dimakan. Kandungan dan komposisi
fenolik pada tumbuhan tergantung pada faktor genetik dan lingkungan, serta proses pasca panen dan
kondisi penyimpanan (Majer et.al., 1979 [33]; Loomis et.al., 1996 [34]). Selain itu, tanaman bervariasi
dalam kandungan dan struktur senyawa fenolik seperti jumlah cincin fenolik, aromatik substitusi,
glikosilasi dan konjugasi dengan senyawa fenolik atau asam organik lainnya akan bervariasi dalam sifat
antioksidannya dan juga melaporkan keberadaan fenol dalam Musa spesies (Noradlin et.al., 2008 [35]).
5.5. STABILITAS PADA VARIABLE PH
Sampel muncul warna merah pada pH 1 dan warna menghilang pada pH 4,5, Giusti, 2003 [36]
melaporkan bahwa, anthocyanin stabil dalam pH rendah. Hasilnya ditemukan sama
ekstrak metanol dan metanol yang diasamkan.