LABORATORIO DE FISIOLOGÍA MICROBIANA UNMSM

PROBLEMA 1

Inhibición de la Glutamato Deshidrogenasa por el

Ácido Isoftálmico
50

45
y = 2.9414x + 0.7627
R² = 0.9996
40

35

30

25

E+S
1/V

20 E+S+I
Linear (E+S)
15 Linear (E+S+I)
y = 0.2563x + 1.5887
R² = 0.9992
10

0
-15 -10 -5 0 5 10 15 20 25 30

-5

-10
1/[S]

CINÉTICA E INHIBICIÓN ENZIMÁTICA

LABORATORIO DE FISIOLOGÍA MICROBIANA UNMSM

El problema pide calcular Km, Ki y Vm. La concentración del inhibidor es de 6x10 -4

M.

Para calcular Vm se compara la ecuación de la recta E+S con la fórmula 1 y se

tiene:

1
= 1,5887 → 𝑉𝑚 = 0,6294 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠/𝑚𝑖𝑛
𝑉𝑚
Para calcular Km se compara la ecuación de la recta E+S con la fórmula 1 y se
tiene:

𝐾𝑚
= 0,2563 → 𝐾𝑚 = 0,1613 𝑀
𝑉𝑚
Para calcular Ki se compara la ecuación de la recta E+S+I con la fórmula 2,
reemplazando Y por cero se tiene:

0 = 2,9414𝑋 + 0,7627 → 𝑋 = −0,2593

Como Y es cero entonces X será igual a -1/Km

1
− = −0,2593 → 𝐾𝑚 = 3,8565 𝑀
𝐾𝑚
Comparando y reemplazando los datos en A se tiene:

𝐾𝑚 1 + [𝐼] 3,8565 1 + 6 × 10−4

×( ) = 2,9414 → ×( ) = 2,9414 → 𝐾𝑖 = 2,0843 𝑀
𝑉𝑚 𝐾𝑖 0,6294 𝐾𝑖

CINÉTICA E INHIBICIÓN ENZIMÁTICA

LABORATORIO DE FISIOLOGÍA MICROBIANA UNMSM

PROBLEMA 2

Gráfica de cinética enzimática de tres inhibidores

distintos
0.09

y = 7x10-6x + 0.0203
R² = 0.9999
0.08

0.07

0.06

y = 4x10-6x + 0.0204
R² = 0.9995
0.05 E+S+I4
E+S+I5
1/V

E+S+I6
0.04 Linear (E+S+I4)
Linear (E+S+I5)
Linear (E+S+I6)
0.03

y = 4x10-6x + 0.0104
R² = 0.9995
0.02

0.01

0
-10000 -8000 -6000 -4000 -2000 0 2000 4000 6000 8000 10000
1/S

CINÉTICA E INHIBICIÓN ENZIMÁTICA

LABORATORIO DE FISIOLOGÍA MICROBIANA UNMSM

El problema pide calcular los valores de Km y Vmáx en cada caso, para lo cual
utilizaremos la ecuación de la recta según sea el caso.

 Para E+S+I4
Vmáx: X  0 ; Y  1/Vmáx

1
= 0 + 0,0104 → 𝑉𝑚á𝑥 = 96,1538 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠/𝑚𝑖𝑛
𝑉𝑚á𝑥

Km: Y  0 ; X  -1/Km

−1
0 = 4 × 10−6 × ( ) + 0,0104 → 𝐾𝑚 = 3,8461 × 10−4 𝑀
𝐾𝑚

 Para E+S+I5
Vmáx: X  0 ; Y  1/Vmáx

1
= 0 + 0,0204 → 𝑉𝑚á𝑥 = 49,0196 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠/𝑚𝑖𝑛
𝑉𝑚á𝑥

Km: Y  0 ; X  -1/Km

−1
0 = 4 × 10−6 × ( ) + 0,0204 → 𝐾𝑚 = 1,9609 × 10−4 𝑀
𝐾𝑚

 Para E+S+I6
Vmáx: X  0 ; Y  1/Vmáx

1
= 0 + 0,0203 → 𝑉𝑚á𝑥 = 49,2611 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠/𝑚𝑖𝑛
𝑉𝑚á𝑥

Km: Y  0 ; X  -1/Km

−1
0 = 7 × 10−6 × ( ) + 0,0203 → 𝐾𝑚 = 3,4483 × 10−4 𝑀
𝐾𝑚

CINÉTICA E INHIBICIÓN ENZIMÁTICA

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PROBLEMA 3

Inhibición de la UDP-glucosa pirofoforilasa por

el PPi
0.1800

0.1600
y = 3x10-6x + 0.0433
R² = 0.9959
0.1400

0.1200

Sin inhibidor

0.1000
1/V

Con inhibidor
Ppi 4mM
0.0800
Linear (Sin
inhibidor)
0.0600
y = 9x10-7x + 0.0156 Linear (Con
R² = 0.9994 inhibidor Ppi
4mM)
0.0400

0.0200

0.0000
-25000 -15000 -5000 5000 15000 25000 35000 45000
1/[S]

CINÉTICA E INHIBICIÓN ENZIMÁTICA

LABORATORIO DE FISIOLOGÍA MICROBIANA UNMSM

El tipo de inhibición que presenta este problema es una inhibición no competitiva.

Para hallar el Km comparamos la ecuación de la recta E+S (sin inhibidor) con la

fórmula 1:

1
= 0,0156 → 𝑉𝑚á𝑥 = 64,1026 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠/𝑚𝑖𝑛
𝑉𝑚á𝑥
𝐾𝑚
= 9 × 10−7 → 𝐾𝑚 = 576,9234 × 10−7 𝑀
𝑉𝑚á𝑥
Para hallar Vmáx hacemos que X = 0 en la ecuación de la recta E+S+I (con
inhibidor PPi 4mM) para que Y sea 1/Vmáx.

1
𝑌= = 0,0433 → 𝑉𝑚á𝑥 = 23,0947 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠/𝑚𝑖𝑛
𝑉𝑚á𝑥

CINÉTICA E INHIBICIÓN ENZIMÁTICA

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PROBLEMA 4

Inhibición de la Ribulosa 1,5-difosfato por el

KCN 0,00005 M
0.6000

0.5000

y = 1.509x10-4x + 0.1567
R² = 0.9983

0.4000

Sin KCN
1/V

0.3000 Con KCN 0.00005

M
Linear (Sin KCN)
y = 1.471x10-4x + 0.1072
R² = 0.9961 Linear (Con KCN
0.2000 0.00005 M)

0.1000

0.0000
-1500 -500 500 1500 2500
1/[S]

CINÉTICA E INHIBICIÓN ENZIMÁTICA

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El problema pide calcular Km, Vmáx y Ki. Como se trata de una inhibición
acompetitiva, habrá 2 valores de Km y Vmáx.

Para la ecuación de la recta E+S (sin KCN):

1
= 0,1072 → 𝑉𝑚á𝑥 = 9,3284 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠/𝑚𝑖𝑛
𝑉𝑚á𝑥
𝐾𝑚
= 0,1471 × 10−4 → 𝐾𝑚 = 1,3722 × 10−4 𝑀
𝑉𝑚á𝑥
Para la ecuación de la recta E+S+I (con KCN 0,00005 M), en el caso de V máx se
hace que X = 0 para qué Y = 1/Vmáx; y en el caso de Km se hace qué Y = 0 para
que X = -1/Km.

X = 0  Y = 1/Vmáx

1
= 0,1567 → 𝑉𝑚á𝑥 = 6,3816 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠/𝑚𝑖𝑛
𝑉𝑚á𝑥
Y = 0  X = -1/Km

1 0,1567
− =− −4
→ 𝐾𝑚 = 9,6299 × 10−4 𝑀
𝐾𝑚 1,509 × 10

Para el Ki simplemente comparamos el valor de B con la ecuación de la recta

E+S+I (con KCN 0,00005 M).

1 1 + [𝐼]
×( ) = 0,1567 → 𝐾𝑖 = 1,00005 𝑀
𝑉𝑚á𝑥 𝐾𝑖

CINÉTICA E INHIBICIÓN ENZIMÁTICA

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PROBLEMA 5

Actividad enzimática del NAD+

0.045
0.04
0.035
0.03
y = 0.0051x + 0.0191
0.025
1/V

R² = 0.9993
0.02 E+S
0.015 Linear (E+S)
0.01
0.005
0
-5 -3 -1 1 3 5
1/[S]

Actividad enzimática de la
Dihidroxiacetona-P
0.025
y = 0.0024x + 0.007
R² = 0.9891
0.02

0.015
1/V

0.01 E+S
Linear (E+S)
0.005

0
-8 -3 2 7
1/[S]

CINÉTICA E INHIBICIÓN ENZIMÁTICA

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El problema pide calcular el Km para cada caso.

Para NAD+

1
= 0,0191 → 𝑉𝑚á𝑥 = 52,3560 𝑚𝑀/𝑚𝑖𝑛
𝑉𝑚á𝑥
𝐾𝑚
= 0,0051 → 𝐾𝑚 = 0,2670 𝑚𝑀
𝑉𝑚á𝑥
Para Dihidroxiacetona-P

1
= 0,007 → 𝑉𝑚á𝑥 = 142,8571 𝑚𝑀/𝑚𝑖𝑛
𝑉𝑚á𝑥
𝐾𝑚
= 0,0024 → 𝐾𝑚 = 0,3429 𝑚𝑀
𝑉𝑚á𝑥

CINÉTICA E INHIBICIÓN ENZIMÁTICA

LABORATORIO DE FISIOLOGÍA MICROBIANA UNMSM

PROBLEMA 6

Gráfica de T°C vs Actividad enzimática de un

compuesto
6

5
Actividad enzimática

Actividad Enzimática
2

0
0 10 20 30 40 50
T°C

El punto donde la curva alcanza su pico corresponde a su máxima actividad

enzimática a la temperatura de 32,38°C que es la que se indica con la recta que
se ha extrapolado de la gráfica.

CINÉTICA E INHIBICIÓN ENZIMÁTICA

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PROBLEMA 7

Gráfica de cinética enzimática del L-isocitrato

con la enzima Isocitrato liasa
300.0000

250.0000

200.0000
y = 2205.6x + 122.88
R² = 0.9999
1/V

150.0000
E+S
Linear (E+S)
100.0000

50.0000

0.0000
-0.06 -0.04 -0.02 0 0.02 0.04 0.06 0.08
1/[S]

El problema pide calcular el valor de Km, como solo es una recta se compararán
los valores de su ecuación con la fórmula 1.

1
= 122,88 → 𝑉𝑚á𝑥 = 0,0081 𝑢𝑚𝑜𝑙/𝑚𝑖𝑛
𝑉𝑚á𝑥
𝐾𝑚
= 2205,6 → 𝐾𝑚 = 17,8654 𝑢𝑚𝑜𝑙/𝑑𝑚3
𝑉𝑚á𝑥

CINÉTICA E INHIBICIÓN ENZIMÁTICA

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PROBLEMA 8

Inhibición de la Aspartatp L-descarboxilasa

por el treo-beta-hidroaspartato
0.2000

0.1800
y = 5.4178x + 0.0137
R² = 0.9997
0.1600

0.1400
Sin inhibidor

0.1200

Con 0.02 mol dm-3

de inhibidor
1/V

0.1000

Linear (Sin
0.0800 inhibidor)

Linear (Con 0.02

0.0600 mol dm-3 de
inhibidor)

0.0400
y = 1.1287x + 0.0131
R² = 0.9993
0.0200

0.0000
-0.02 -0.01 0.00 0.01 0.02 0.03 0.04
1/S

CINÉTICA E INHIBICIÓN ENZIMÁTICA

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La treo-beta-hidroxiaspartato actúa como un inhibidor de tipo competitivo.

El problema pide calcular el valor de Km. Se calcularan 2 valores de Km dado que

se trata de una inhibición competitiva y solo las Vmáx son iguales.

Para la ecuación de la recta que no posee inhibidor:

1
= 0,0131 → 𝑉𝑚á𝑥 = 76,3359 𝑢𝑚𝑜𝑙/𝑚𝑖𝑛
𝑉𝑚á𝑥
𝐾𝑚
= 1,1287 → 𝐾𝑚 = 86,1603 𝑢𝑚𝑜𝑙/𝑑𝑚3
𝑉𝑚á𝑥
Para la ecuación de la recta que posee el inhibidor hacemos que Y = 0 para que
X = -1/Km.

−1
0 = 5,4178 × ( ) + 0,0137
𝐾𝑚

𝐾𝑚 = 395,4599 𝑢𝑚𝑜𝑙/𝑑𝑚3

CINÉTICA E INHIBICIÓN ENZIMÁTICA

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PROBLEMA 9

Inhibición de la Propionamida por la Úrea a

una concentración de 2 y 3 mmol dm-3
0.014000

y = 53.049x + 0.0026
R² = 0.9996
0.012000

0.010000

Sin inhibidor

0.008000
Úrea 1 mmol
y = 36.202x + 0.0018 dm-3
1/V

R² = 0.9999
Úrea 2 mmol
dm-3
0.006000
Linear (Sin
inhibidor)
Linear (Úrea 1
mmol dm-3)
0.004000
Linear (Úrea 2
y = 25.489x + 0.0012 mmol dm-3)
R² = 0.9978

0.002000

0.000000
-0.000050 0.000000 0.000050 0.000100 0.000150 0.000200 0.000250
1/[S]

CINÉTICA E INHIBICIÓN ENZIMÁTICA

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El problema pide calcular el valor de Km, pero solo se hallara un valor de Km

puesto que se trata de una inhibición de tipo no competitivo y los valores de K m
son iguales mas no los de Vmáx.

Para el cálculo compararemos la ecuación de la recta que no posee inhibidor con

la fórmula 1:

1
= 0,0012 → 𝑉𝑚á𝑥 = 833,3333 𝑢𝑚𝑜𝑙/𝑚𝑖𝑛
𝑉𝑚á𝑥
𝐾𝑚
= 25,489 → 𝐾𝑚 = 2,1241 × 104 𝑢𝑚𝑜𝑙/𝑑𝑚3
𝑉𝑚á𝑥

CINÉTICA E INHIBICIÓN ENZIMÁTICA

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PROBLEMA 10

Inhibición de una enzima con requerimientos

de Mg++ por Ca++ a concentraciones de
0.00002 y 0.00004 mol dm-3
0.18000

0.16000

0.14000
y = 48.118x + 0.0214
R² = 0.9999
Sin Ca++
0.12000

Ca++ 0.00002
mol dm-3
0.10000
Ca++ 0.00004
1/V

mol dm-3

0.08000
Linear (Sin
y = 28.82x + 0.0209 Ca++)
R² = 0.9999
0.06000 Linear (Ca++
0.00002 mol
dm-3)
Linear (Ca++
0.04000 0.00004 mol
dm-3)
y = 9.4206x + 0.0204
R² = 0.9996
0.02000

0.00000
-0.0025 -0.0015 -0.0005 0.0005 0.0015 0.0025 0.0035
1/[S]

CINÉTICA E INHIBICIÓN ENZIMÁTICA

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Los iones Ca++ llevan a cabo una inhibición de tipo competitivo.

El problema pide calcular el valor de Ki. Como se tienen 2 valores distintos de

concentración del inhibidor se hallarán 2 valores de Ki.

Primero se debe hallar el valor de Vmáx que en este caso es el mismo dado que se
trata de una inhibición competitiva por lo que Vmáx será constante.

1
= 0,0204 → 𝑉𝑚á𝑥 = 49,0196 𝑢𝑚𝑜𝑙/𝑚𝑖𝑛
𝑉𝑚á𝑥
Ahora el valor de Ki para la [Ca++] 2x10-5 mol dm-3 es:

1 1 + [𝐼]
×( ) = 0,0209
𝑉𝑚á𝑥 𝐾𝑖

1 1 + [2 × 10−5 ]
×( ) = 0,0209 → 𝐾𝑖 = 0,97610 𝑢𝑚𝑜𝑙/𝑑𝑚3
49,0196 𝐾𝑖

Para el valor de Ki para la [Ca++] 4x10-5 mol dm-3 es:

1 1 + [𝐼]
×( ) = 0,0214
𝑉𝑚á𝑥 𝐾𝑖

1 1 + [4 × 10−5 ]
×( ) = 0,0214 → 𝐾𝑖 = 0,95315 𝑢𝑚𝑜𝑙/𝑑𝑚3
49,0196 𝐾𝑖

CINÉTICA E INHIBICIÓN ENZIMÁTICA

LABORATORIO DE FISIOLOGÍA MICROBIANA UNMSM

FÓRMULAS

1 𝐾𝑚 1 1
1. 𝑉𝑜 = 𝑉𝑚á𝑥 × ([𝑆]) + 𝑉𝑚á𝑥

1 𝐾𝑚 1+[𝐼] 1 1 1+[𝐼]
2. 𝑉𝑜 = 𝑉𝑚á𝑥 × ( ) × ([𝑆]) + 𝑉𝑚á𝑥 × ( )
𝐾𝑖 𝐾𝑖

1 𝐾𝑚 1+[𝐼] 1 1+[𝐼]
3. = ×( )×( )+
𝑉𝑜 𝑉𝑚á𝑥 𝐾𝑖 [𝑆] 𝑉𝑚á𝑥×𝐾𝑖

1 𝐾𝑚 1 1 1+[𝐼]
4. 𝑉𝑜 = 𝑉𝑚á𝑥 × ([𝑆]) + 𝑉𝑚á𝑥 × ( )
𝐾𝑖

CINÉTICA E INHIBICIÓN ENZIMÁTICA