Extracción casera de ADN

Muñoz-Flores, A.A*…(295185) *Universidad Autónoma de Chihuahua,

Facultad De Ciencias Químicas, Bioquímica, 4°C (30/10/17)
Resumen

Se extrajo el ADN de una ciruela, utilizando métodos soncillos como fue, el rompimiento de
membranas utilizando una solución de lisis, calentamiento y enfriamiento de la muestra y alcohol,
con lo cual se logra la separación del ADN volviéndose visible este.

Palabras clave: ADN, extracción, lisis.

Fundamento.

El DNA y el RNA son químicamente muy similares. La estructura primaria de ambos son polímeros
lineales compuestos de monómeros llamados nucleótidos. El RNA celular posee una longitud que
va desde menos de cien hasta varios miles de nucleótidos. Las moléculas de DNA celular pueden
ser tan largas como varios cientos de millones de nucleótidos. Estas grandes unidades de DNA, en
asociación con las proteínas, se pueden teñir con colorantes y visualizar en el microscopio óptico
como cromosomas, denominados así debido a su aptitud de colorearse. El DNA y el RNA constan,
cada uno, de sólo cuatro nucleótidos distintos. En el RNA, el azúcar es ribosa; en el DNA,
desoxirribosa. Los nucleótidos que se utilizan en la síntesis de DNA y RNA contienen cinco bases
diferentes. La bases adenina (A) y guanina (G) son purinas, que contienen un par de anillos
fusionados; las bases citosina (C), timina (T) y uracilo (U) son pirimidinas, que contienen un único
anillo. Tanto el DNA como el RNA contienen tres de estas bases: A, G y C; sin embargo, T sólo se
encuentra en el DNA y U sólo en el RNA. Durante la replicación y transcripción del DNA, las hebras
de la doble hélice deben separarse de manera tal para permitir que los bordes internos de las
bases puedan formar pares con las bases de los nucleótidos a ser polimerizados en nuevas cadenas
de polinuclecótidos. (Lodish et al, 2005 )

A lo largo del tiempo se han diseñado distintos protocolos con la finalidad de obtener una cantidad
y calidad de ADN adecuados, así como garantizar la eliminación de inhibidores potenciales que
dificulten el tratamiento posterior de la molécula. Los métodos tradicionales, desarrollados en los
años 50, utilizan solventes orgánicos para separar a las proteínas del ADN y, una vez suspendido en
la fase acuosa, aislarlo por precipitación con etanol. Estos métodos requieren preparar soluciones y
la extracción puede tomar desde unas horas hasta varios días por los numerosos pasos que deben
realizarse. En general, los protocolos tradicionales consisten de cinco etapas principales:
homogeneización del tejido, lisis celular, separación de proteínas y lípidos, precipitación y
redisolución del ADN.

A partir de los años 90 se introdujeron al mercado combos o kits de extracción que utilizan
matrices inorgánicas compactas cargadas positivamente capaces de retener varios microgramos de
ADN y separarlos del resto de las biomoléculas, permitiendo obtener un extracto libre de
inhibidores. Los combos se venden en presentación de membranas de sílice o perlas magnéticas,
las primeras están formadas por una resina y las segundas consisten de un centro de hierro
recubierto por resina. (Alejos-Velázquez, L. P., et al., 2003)

Objetivo.

Observar y extraer sin ayuda de ningún instrumento óptico, el ADN, utilizando materiales caseros
cuyo gasto no es alto.

Hipótesis.

Todo el ADN de la fruta será extraído y observable a simple vista

Materiales y reactivos.

Materiales Reactivos
Piseta Agua destilada
2 Vaso de precipitado 100 ml Ciruela
Termómetro de mercurio Alcohol
Tubo de ensaye Jabón liquido
Baño maría Sal
Parrilla
Pipeta Pasteur
Probeta 100 ml
Embudo
Asa de nicromio

Metodología.

Se elaboró la solución de lisis, disolviendo 2 gramos de sal en 90 ml de agua, a esta solución se le

agrego 10 ml de jabón líquido y se revolvió la mezcla procurando que no se formara nada de
espuma, una vez hecho se molió aproximadamente 30 gramos de la fruta hasta quedar en estado
parecido al puré, se pasó el puré a un vaso de precipitado y se le agrego la solución de lisis hasta
que esta cubrió por completo la fruta, una vez hecho esto se revolvió la mezcla hasta que se
homogenizo la mezcla procurando que no se formara espuma, al lograrse esto se introdujo el vaso
dentro del baño maría con agua previamente calentada a 60°C, durante 15 minutos, al pasar el
tiempo se pasó inmediatamente a otro baño maría con hielo donde se dejó por 6 minuto, pasado
el tiempo se filtró la muestra hasta obtener aproximada mente 5 ml los cuales se pasaron al tubo
de ensaye, al cual se le añadió lentamente y por las paredes el alcohol frio, para así lograr observar
las hebras de ADN.
Resultados y discusiones.

Figura no. 1: se pelo y trituro la fruta

Figura no. 2: la mezcla con lisis se puso a baño maría a 60°C

Figura no. 3: después de filtrar se agrega alcohol al filtrado.

Figura no. 4: se observa la separación del ADN del resto de la mezcla

 Figura no. 5 en una muestra más grande se aprecia mejor el ADN

Logramos obtener correctamente el ADN de la ciruela el cual se logró observar como un

sobrenadante en el tubo el cual podía ser fácilmente manipulado con el asa de nicromio.

Al intentar observar las soluciones, se utilizó primero un tubo de ensaye pequeño, en el cual a
pesar de que la separación del ADN era muy evidente era un poco complicado observarlo por el
tamaño del tubo, al hacerse el cambio a un tubo más grande y utilizarse más solución muestra y
más alcohol se logró observar una separación mucho más marcada

Concusión.

Al realizar el procedimiento adecuadamente, resulta que las fibrillas de ADN comenzaron a salir, de
un color blanco sobrenadando el alcohol, el cual puede ser manipulado a nuestro gusto con el asa
de nicromio, logrando así alcanzar nuestro objetivo.

Referencias.

*Biología celular y molecular / Lodish-H, et.al.- 5a ed-.Buenos Aires: Médica Panamericana. 2005.
*Alejos-Velázquez, L. P., et al. (2003). Extracción y purificación de ADN. 05/11/17, de Instituto
Nacional de Ecología y Cambio Climático Sitio web:
http://www.publicaciones.inecc.gob.mx/libros/710/extraccion.pdf