INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA
PRÁCTICA: REACCIÓN DE TRANSAMINACIÓN Y SU RECONOCIMEINTO POR MEDIO
DE CROMATOGRAFÍA EN PAPEL
ALUMNOS: RODEA CORREA DANIEL, VALENCIA CORTÉS LAURA MARIANA
GRUPO: 2OM1 SECCIÓN: 2

Introducción Figura 1. Gráfica de curva tipo de Ácido

Una reacción de transaminación es la Glutámico
primera etapa de la desasimilación de los Absorbancia
aminoácidos, y sirve para encauzar los 0.25
grupos amino hacia el α-cetoglutarato, y = 0.418x + 0.0176
para transformarlo en glutamato que 0.2
posteriormente será sometido a una
reacción de desaminación oxidativa, 0.15
Series1
catalizada por la glutamato 0.1
deshidrogenasa, formándose un ión Linear (Series1)
amonio que será utilizado para generar 0.05
urea (Vejar Irma, 2005).
0 μmoles
Objetivo 0 0.2 0.4 0.6
 Realizar un método cuantitativo
para medir la actividad de la Tabla 2. Resultados del método por
transaminasa ALAT/TGP cromatografía en papel.
presente en un extracto crudo de Distancia Distancia
hígado, empleando el método de Muestra recorrida por la recorrida por el RFC
muestra disolvente
cromatografía en papel y un
Ác. Glutámico: 5 23.1 cm 34.4 cm 0.67
espectrofotómetro.
Ác. Glutámico: 10 23.3 cm 34.5 cm 0.67

Resultados Ác. Glutámico: 15 23.4 cm 34.2 0.68

Tabla 1. Resultados de la curva tipo de Ác. Glutámico: 20 23.4 cm 33.6 0.69

Ácido Glutámico Ác. Glutámico: 25 25.4 cm 33.4 0.76
Solución Problema: 60 29.5 cm 32.3 0.91
De Ác. 5 10 15 20 25 Testigo: 60 25.7 cm 32.1 0.80
Glutámico
(𝝁𝑳) *Se anexan cálculos
Absorbancia 0.044 0.106 0.174 0.17 0.221
a 540 nm Discusión
Ác. 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 La práctica llevada a cabo en el
Glutámico laboratorio se basó en la cuantificación
(𝝁𝒎𝒐𝒍𝒆𝒔)
de la actividad enzimática de TGP
Se anexa ejemplificación del cálculo (Transaminasa Glutámico Pirúvica), ya
de Ac. Glutámico en (μmoles) que el aminoácido (Alanina), reacciono
cediendo su grupo amino al cetoácido
empleando: ácido 𝛼 − 𝑐𝑒𝑡𝑜𝑔𝑙𝑢𝑡á𝑟𝑖𝑐𝑜,
dando como productos: Ácido Glutámico
y Piruvato, esto se demostró gracias a
que al adicionar a todos los tubos
regulador de fosfatos con un pH = 7.4,
este sirvió para que se mantuviera un pH
constante, así como se usaron Alanina y
ácido α-cetoglutárico como reactivos, y
extracto crudo de hígado de rata que
contenia TGP como cofactor y fosfato de
piridoxal, incubandolo a 37°C, todo esto
para imitar las condiciones biológicas, y
se detuvo la reacción con Alcohol 96°; de
acuerdo con la bibliografía consultada la
eliminación de los grupos α-amino son
catalizadas por las enzimas
transaminasas (Mckee T, 2006).
Posteriormente, en la cromatografía se
adicionaron muestras de 5, 10, 15, 20 y
25 μmoles de una preparación de
100μmol/mL de ácido glutámico, que al
ser nuestro producto esperado se utilizó
para hacer la curva tipo y calcular la
cantidad de glutamato producida por la
enzima, así como 20 μL de agua para el
blanco empleado en las lecturas de
absorbancia, 60 μL del tubo testigo al
que no adicionamos α-cetoglutárico, esta
muestra sirve para demostrar que son
necesarios ambos productos para llevar
a cabo la reacción, ya que sin el
cetoacido, la transaminasa no dispone de
un grupo amino que traspasar, esto se
comparar con la muestra de 5 μL de
Alanina y de 60 μL del tubo problema. La
cromatografía nos mostró el
comportamiento de corrimiento de cada
muestra dependiendo de la cantidad de
Glutamato, que el diluyente es capaz de
desplazar, así como de utilizar las
posteriores manchas de azul de
Ruhemann, producto del revelado del
cromatograma con ninhidrina en etanol
(de nuevo este reactivo por su fácil
volatilización) y la lectura en el
espectrofotómetro de cada muestra para
la curva tipo y la determinación molar de
Glutamato en el tubo testigo y problema.
Como era de esperarse el Rf aumentaba
a medida que aumentaba la
concentración de glutamato en las
muestras de concentración conocida, y el
Rf del problema era mayor que el del
testigo, se esperaba que en la
producción de glutamato en el testigo
fuera nula debido a la falta del otro
reactivo, se sabe que en el extracto
crudo de hígado están contenidas
muchas más enzimas, compuestos
orgánicos y materia biológica, lo cual
pudo favorecer la reacción, es gracias a
esto que para la obtención de μmoles
reales producidos por la actividad de
transaminasa se restan los μmoles del
tubo testigo con los μmoles del tubo
problema (Koolman Jan, 2005).
Conclusión
 La transferasa, transfiere un
grupo amino de un aminoácido a
un α-cetoglutárico aceptor, dando
como resultado la formación de
un nuevo aminoácido y un
cetoácido.
 El hígado de rata empleado
posee una gran actividad
enzimática que se refleja gracias
a las Unidades Arbitrarias de
Transaminasa.
 El cálculo de unidades arbitrarias
de transaminasa, nos indicó que
es necesaria la cantidad de 1365
UAT para producir un micromol
de glutamato por gramo de
hígado por hora de incubación.
Bibliografía
 I. Viejar. 2005. Prácticas de
Bioquímica Descriptiva. 2da
Edición. Editorial UNISON,
Méxicol. 152-153 pp.
 Mckee T. Mckee J. 2006.
“Bioquímica: las bases
moleculares de la vida.
Editorial. McGrawHill, 5ta
edición. 259-260 pp.
 Jan Koolman, Klaus-Heinrich
Röhm. 2005. Bioquímica:
texto y atlas, Editorial Médica
Panamericana, 488 pp.