Sistema Coreliner (Triplex)

O Coreliner é um tubo de PVC transparente e semi-rígido que se encaixa dentro do tubo

interno de um barril de núcleo e permite a extração rápida de núcleos em seu estado in-
situ. Em princípio, todos os barris de tubo duplo - convencional e com fio - podem ser
rápida e facilmente convertidos em barris de tubo triplo (às vezes chamados de
"Triplex") - pela adição de um coreliner de plástico.

Os barris de núcleo que usam o sistema de coreliner exigem um núcleo especial, um

levantador de núcleo e (em alguns casos) um corpo especial para levantador de núcleo,
com um diâmetro interno um pouco menor do que o tipo padrão. Isso ocorre porque o
núcleo deve ser um pouco menor que o normal para se encaixar no coreliner de PVC.

Esta é uma técnica muito boa que melhora a qualidade do núcleo e a apresentação geral
do núcleo, especialmente vantajosa quando coroando formações pegajosas, quebradas e
moles. Tornou-se o sistema de manuseio de núcleo "padrão da indústria" nos locais
onde o coreliner está prontamente disponível.

O Coreliner é fornecido em tamanhos padrão de 10 pés (3,05 m), que são facilmente
cortados com uma serra para comprimentos de 5 pés (1,525 m) para uso em barris de 5
pés / 1,5 m. Tampas plásticas estão disponíveis para selar as extremidades dos tubos de
coreliner.

Vantagens:
 Método de baixo custo para converter barris de núcleo de tubo duplo em tubo triplo
 Núcleos preservados em seu estado in situ
 Nenhuma perturbação ou dano aos núcleos é possível durante a extração do núcleo ou
transporte
 Maior vantagem de economia de tempo na remoção do núcleo
 Reduz o desgaste e danifica os barris de núcleo
 Ótima técnica quando coring formações pegajosas, moles ou quebradas
Dados técnicos
Estojo de
Diâmetro do Diâmetro do Dimensões do
Barril Levantador de
núcleo núcleo da Coreliner OD x
Core Núcleo Especial
padrão (mm) corola (mm) ID (mm)
requerido *
T2-66 51,7 48,0 52,3 x 50,3 sim
T2-76 61,7 58,0 62,3 x 60,3 sim
T2-86 71,7 68,7 72,4 x 70,4 Não
T2-101 83,7 80,7 84,4 x 82,4 Não
T6-76 57,0 53,0 58,5 x 56,5 sim
T6-86 67,0 63,0 67,0 x 65,0 sim
T6-101
79,0 76,0 80,5 x 78,5 Não
T6H
T6-116 93,0 90,0 94,5 x 92,5 Não
T6-131 108,0 103,5 109,5 x 106,5 sim
T6-146 123,0 118,0 124,0 x 121,0 sim
NWL 47,6 45,1 49,0 x 47,0 sim
HWL 63,5 61,1 65,0 x 63,0 sim
PWL 85,0 83,1 88,0 x 86,0 sim
HWF 76,2 73,0 76,4 x 74,4 Não
PWF 92,1 87,0 92,3 x 89,8 Não
SWF 112,8 107,0 113,5 x 110,5 Não
412F 74,7 73,0 78,8 x 76,8 Não
Mazier
72,0 72,0 76,0 x 74,0 Não
101
GBS 102,0 102,0 109,5 x 106,5 Não
* O núcleo especial e o núcleo especial são necessários para todos os barris de núcleo ao usar o Sistema Coreliner.
Quantidades mínimas de pedido de coreliners podem ser aplicadas para barris de núcleo menos populares
1.

Core Barrels

 Core Barrel Selection Guide

We supply a very broad range of Core Drilling Equipment in accordance with both
Metric, DCDMA and Wireline Standards. We also offer Core Barrels designed for
special applications such as air-flush drilling and for sampling in very loose sandy,
materials.
If you do not know exactly which tools are best for your application then see our Core
Drilling Equipment Selection Guide. This gives you some helpful hints and takes you
through the decision steps necessary to make a proper product selection.
Conventional Core Barrels:
 B Series Single Tube
 TT Series Double Tube
 T2 Series Double Tube
 T6 Series Double Tube
 T6S Series Double Split Tube
 WG and WF Series Double Tube
Wireline Core Barrels:
 Wireline Double Tube
 Wireline Triple Tube
 GBS Geotechnical Large Diameter Wireline
Special Applications:
 412F Airflush Core Barrel
 Mazier Core Barrel
 Coreliner System (Triplex)

Contact us for more information

 Barris centrais

 Guia de seleção de barril principal

Fornecemos uma ampla gama de equipamentos de perfuração de núcleo de acordo com as
normas métricas, DCDMA e de rede fixa. Também oferecemos tambores nucleares projetados
para aplicações especiais, como perfuração com descarga de ar e para amostragem em
materiais muito soltos de areia.
Se você não sabe exatamente quais ferramentas são melhores para sua aplicação, consulte
nosso Guia de seleção de equipamentos de perfuração. Isso fornece algumas dicas úteis e
conduz você pelas etapas de decisão necessárias para fazer uma seleção de produto
adequada.

Tambores Principais Convencionais:

 Tubo Simples da Série B
 Tubo Duplo Série TT
 Tubo Duplo Série T2
 Tubo Duplo Série T6
 Tubo Duplo Dividido Série T6S
 Tubo Duplo Série WG e WF

Barris Core Fixo:

 Tubo duplo com fio
 Tubo triplo com fio
 Cabo Geotécnico de Grande Diâmetro GBS

Aplicações Especiais:
 Barrilete Airflush 412F
 Tambor Core Mazier
 Sistema Coreliner (Triplex)
 Tambor Core Mazier

O barrilete central Mazier foi concebido para obter amostras de núcleo não perturbadas em
solos muito moles.
Este barril de núcleo possui um conjunto de tubo interno com mola. Ao perfurar em formações
macias, o corpo do elevador se projeta até 50 mm na frente do bit e atua como uma sapata de
corte. O núcleo macio é protegido da descarga de água (veja a Figura a).
Ao perfurar materiais mais duros, o tubo interno acionado por mola fica sob pressão e o tubo
interno se
retrai, de modo que agora a caixa do levantador do núcleo assume uma posição normal
(consulte a Figura b).
Um delineador de PVC é usado dentro do tubo interno para reter o núcleo, e um coletor de
“cesta” pode ser usado para evitar que materiais macios escorreguem.
Este tipo de barril é usado amplamente em algumas partes da Europa e Australásia e é
relatado para dar 100% de recuperação em formações moles, como areias, siltes e margas.
Está disponível com diâmetro de furo de 101 mm (núcleo de 74 mm) e pode ser usado em
conjunto com os tambores de núcleo T2-101 e T6-101, que são mais adequados para rochas
duras.
O núcleo de 74 mm de diâmetro obtido com o mazier é compatível com o equipamento de teste
triaxial de laboratório comumente usado.
Vantagens:
 Amostras de núcleo não perturbadas de solo mole 0.1MPa
 Coeficiente de parede nulo
Dados técnicos
Tipo de tambor central
Especificação
Mazier 101
Diâmetro do furo (mm) 101,0
Diâmetro do núcleo (mm) 74,0
Área do furo (cm 2 ) 80,2
Área central (cm 2 ) 43,0
Conexão de rosca na cabeça NW
Carcaça Recomendada M116
* Subcorrente cruzado necessário para hastes de broca que não combinem com a conexão de rosca na cabeça
do cilindro

Chave para as principais peças do conjunto de tambor de núcleo

Mazier
O barril de núcleo completo consiste em:
1. Cabeça do Tambor Principal
2. Tubo Externo 1.0m
3. Tubo Interno 1.0m
4. PVC Coreliner
5. Levantador de Núcleo de Cesta
6. sapato de corte
7. Bit do TC

Wireline Double Tube Core Barrels

 Wireline core barrels are used when coring to greater depths, mainly because they
eliminate the need to couple and uncouple the rod string each time the core is retrieved.
An overshot device is dropped on a cable and directly couples onto the inner tube
assembly, allowing fast retrieval of the core after each core run. Available in DCDMA
sizes B, N, H. and P.
Advantages:
 Faster coring at greater depths
 Good stability due to constant diameter of the drill string
 Excellent hydraulics
 Good core recovery
Technical Data
Core Barrel Type
Specification
B W/L N W/L H W/L P W/L
Hole Diameter (mm) 59.9 75.7 96.3 122.8
Core Diameter (mm) 36.4 47.6 63.5 85.0
Kerf / Crown Thickness (mm) 11.6 13.9 16.2 18.5
Cutting Area (cm2) 18.3 27.2 41.1 61.7
Hole Area (cm2) 28.3 45.0 72.8 118.5
Cutting Area as % of Hole Area 64% 60% 56% 52%
Core Area (cm2) 10.3 17.8 31.7 56.8
Recommended Drill Rod B W/L N W/L H W/L P W/L
Recommended Casing BW NW HW PW
Conversion to triple tube possible Yes Yes Yes Yes
Key to Main Parts of W/L Core Barrel Assembly
 Complete core barrel consists of:
1. Core Barrel Head
2. Inner Tube 1.5m or 3.0m
3. Stop Ring
4.Core Lifter
5. Core Lifter Case
6. Locking Coupling
7. Adapter Coupling
8. Landing Ring
9. Outer Tube 1.5m or 3.0m
10. Inner Tube Stabilizer
11. Thread Protector

Core Bit and Reaming Shell are not supplied as part of the core barrel assembly, but
must be chosen correctly to match the particular application and rock formation. Please
refer to our Core Bits page for further details.

1.
Bits Essenciais
2. Hastes de perfuração e tubos de revestimento
3. Acessórios de Perfuração
4. Perfuração Aberta
5. Amostragem de Solo Macio
6. Teste Insitu
7. Shell e Auger / cabo de percussão
8. Equipamento de amostragem de acionamento
9. Materiais de Instalação de Poços
10. Packers infláveis

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Barris de núcleo de tubo duplo com fio
 Os barris de núcleo com fio são usados quando perfurados a maiores profundidades,
principalmente porque eliminam a necessidade de acoplar e desacoplar a haste toda vez
que o núcleo é recuperado. Um dispositivo ultrapassado é solto em um cabo e é
diretamente acoplado ao conjunto do tubo interno, permitindo a rápida recuperação do
núcleo após cada execução do núcleo. Disponível nos tamanhos DCDMA B, N, H. e P.
Vantagens:
 Coring mais rápido em profundidades maiores
 Boa estabilidade devido ao diâmetro constante da coluna de perfuração
 Hidráulica excelente
 Boa recuperação do core
Dados técnicos
Tipo de tambor central
Especificação
BW / L NW / L HW / L PW / L
Diâmetro do furo (mm) 59,9 75,7 96,3 122,8
Diâmetro do núcleo (mm) 36,4 47,6 63,5 85,0
Espessura Kerf / Coroa (mm) 11,6 13,9 16,2 18,5
Área de corte (cm ) 2 18,3 27,2 41,1 61,7
Área do furo (cm )2 28,3 45,0 72,8 118,5
Área de corte como% da área do furo 64% 60% 56% 52%
Área central (cm )
2 10,3 17,8 31,7 56,8
Haste de Broca Recomendada BW / L NW / L HW / L PW / L
Carcaça Recomendada BW NW HW PW
Conversão para tubo triplo possível sim sim sim sim
Chave para as principais peças do conjunto do tambor de núcleo W / L
O barril de núcleo completo consiste em:
1. Cabeça do Tambor Principal
2. Tubo Interno 1.5m ou 3.0m
3. Pare o Anel
Elevador 4.Core
5. Núcleo de Levantador
6. Acoplamento de Bloqueio
7. Acoplamento Adaptador
8. Anel de aterragem
9. Tubo externo de 1,5 m ou 3,0 m
10. Estabilizador de Tubo Interno
11. protetor de rosca

O Core Bit e o Reaming Shell não são fornecidos como parte do conjunto do barril
central, mas devem ser escolhidos corretamente para corresponder à aplicação
específica e à formação de rochas. Por favor, consulte a nossa página de Core Bits para
mais detalhes.

Wireline Triple Tube Core Barrels

 Wireline core barrels are used when coring to greater depths, mainly because they eliminate the
need to couple and uncouple the rod string each time the core is retrieved. An overshot device
is dropped on a cable and directly couples onto the inner tube assembly, allowing fast retrieval
of the core after each core run.
The double tube wireline core barrel is converted to triple tube by incorporating a split steel tube
inside the inner tube. In addition, a piston and pump-out adaptor is provided for pumping out
the split steel tube when it is full of rock core. The stop ring, core lifter case and core lifter also
differ from the standard double tube core barrel, being slightly smaller in diameter in order to
accept and retain the slightly smaller core.
An alternative method of converting the double tube to triple tube is by incorporating a clear,
semi-rigid PVC coreliner inside the inner tube instead of the split steel tube.
Available in DCDMA sizes B, N, H. and P.
Advantages:
 Faster coring at greater depths
 Good stability due to constant diameter of the drill string
 Excellent hydraulics
 Good core recovery even in highly broken formations.

Technical Data
Core Barrel Type
Specification
B W/L3 N W/L3 H W/L3 P W/L3
Hole Diameter (mm) 59.9 75.7 96.3 122.8
Core Diameter (mm) 33.5 45.1 61.1 83.1
Kerf / Crown Thickness (mm) 13.05 15.1 17.35 19.45
Cutting Area (cm2) 19.6 29.0 43.5 64.2
Hole Area (cm2) 28.3 45.0 72.8 118.5
Cutting Area as % of Hole
69% 64% 60% 54%
Area
Core Area (cm2) 8.7 16.0 29.3 54.3
Recommended Drill Rod BWL NWL HWL PWL
Recommended Casing BW NW HW PW
Key to Main Parts of W/L3 Core Barrel Assembly
Complete core barrel consists of:
1. Core Barrel Head
2. Pump-out Adaptor 3/4" NPT
3. Piston Plug
4. O Ring
5. Core Ejection Piston
6. Split Inner Tube 1.5m or 3.0m
7. Inner Tube 1.5m or 3.0m
8. Stop Ring
9. Core Lifter
10. Core Lifter Case
11. Locking Coupling
12. Adaptor Coupling
13. Landing Ring
14. Outer Tube 1.5m or 3.0m
15. Inner Tube Stabilizer
16. Thread Protector
Core Bit and Reaming Shell are not supplied as part of the core barrel assembly, but must be
chosen correctly to match the particular application and rock formation. Please refer to
our Core Bits page for further details.

Tamboretes de tubo triplo com fio

 Os barris de núcleo com fio são usados quando perfurados a maiores profundidades,
principalmente porque eliminam a necessidade de acoplar e desacoplar a haste toda vez
que o núcleo é recuperado. Um dispositivo ultrapassado é solto em um cabo e é
diretamente acoplado ao conjunto do tubo interno, permitindo a rápida recuperação do
núcleo após cada execução do núcleo.
O barril de núcleo de tubo duplo é convertido em tubo triplo incorporando um tubo de
aço dividido dentro do tubo interno. Além disso, é fornecido um adaptador de pistão e
bomba para bombear o tubo de aço dividido quando este está cheio de núcleo de
rocha. O anel de parada, a caixa do núcleo e o corpo do núcleo também diferem do tubo
de núcleo duplo padrão, sendo um pouco menor em diâmetro para aceitar e reter o
núcleo um pouco menor.
Um método alternativo de conversão do tubo duplo para o tubo triplo é incorporando
um coreliner de PVC transparente e semi-rígido dentro do tubo interno em vez do tubo
de aço dividido.
Disponível nos tamanhos DCDMA B, N, H. e P.
Vantagens:
 Coring mais rápido em profundidades maiores
 Boa estabilidade devido ao diâmetro constante da coluna de perfuração
 Hidráulica excelente
 Boa recuperação do núcleo mesmo em formações altamente quebradas.
Dados técnicos
Tipo de tambor central
Especificação
BW / L3 NW / L3 HW / L3 PW / L3
Diâmetro do furo (mm) 59,9 75,7 96,3 122,8
Diâmetro do núcleo (mm) 33,5 45,1 61,1 83,1
Espessura Kerf / Coroa (mm) 13,05 15,1 17,35 19,45
Área de corte (cm ) 2
19,6 29,0 43,5 64,2
Área do furo (cm )2 28,3 45,0 72,8 118,5
Área de corte como% da área do furo 69% 64% 60% 54%
Área central (cm )
2 8,7 16,0 29,3 54,3
Haste de Broca Recomendada BWL NWL HWL PWL
Carcaça Recomendada BW NW HW PW
Chave para as principais peças do conjunto do tambor de núcleo W /
L3
O barril de núcleo completo consiste em:
1. Cabeça do Tambor Principal
2. Adaptador de extração de 3/4 "NPT
3. plugue do pistão
4. O Ring
5. Pistão de Ejeção do Núcleo
6. Câmara de ar dividida 1.5m ou 3.0m
7. Tubo Interno 1.5m ou 3.0m
8. Pare o Anel
9. Núcleo Levantador
10. Núcleo de Levantador
11. Acoplamento de Bloqueio
12. Acoplamento Adaptador
13. Anel de aterragem
14. Tubo externo de 1,5 m ou 3,0 m
15. Estabilizador de Tubo Interno
16. Protetor de Linha
O Core Bit e o Reaming Shell não são fornecidos como parte do conjunto do barril
central, mas devem ser escolhidos corretamente para corresponder à aplicação
específica e à formação de rochas. Por favor, consulte a nossa página de Core Bits para
mais detalhes.
B and XB Series Single Tube Core Barrels

B type single tube core barrels are suitable for drilling when no core examination is
required (e.g. the drilling of grout holes). XB type are suitable for extended concrete
coring.
Whereas the B type core barrel is of fixed length, the XB core barrel is easily
extendable during drilling by adding additional metric casing tubes between the core
barrel head and reaming shell. In both series, the core lifter fits into the the taper on the
inside of the core bit so a core lifter case is not required.
 Available in 9 different diameters for metric (millimetre) hole sizes between 46 - 146
mm.
Advantages:
 Saves cost when no core examination is required
 Easily extendable in length when coring through thick concrete.
Technical Data
Core Barrel Type
Specification B46 B56 B66 B76 B86 B101 B116 B131 B146
XB46 XB56 XB66 XB76 XB86 XB101 XB116 XB131 XB146
Hole Diameter
46.3 56.3 66.3 76.3 86.3 101.3 116.3 131.3 146.3
(mm)
Core Diameter
31.7 41.7 51.7 61.7 71.7 86.7 101.7 116.7 131.7
(mm)
Kerf / Crown
7.15 7.15 7.15 7.15 7.15 7.15 7.15 7.15 7.15
Thickness (mm)
Cutting Area
8.9 11.2 13.5 15.8 18.1 21.6 25.0 28.4 31.9
(cm2)
Hole Area (cm2) 16.8 24.9 34.5 45.7 58.5 80.6 106.2 135.4 168.1
Cutting Area as
53% 45% 39% 35% 31% 27% 24% 21% 19%
% of Hole Area
Core Area (cm2) 7.9 13.7 21.0 29.9 40.4 59.0 81.2 107.0 136.2
Thread
Connection in CR42 CR50 CR50 CR50 CR50 NW NW NW NW
Head
Recommended
M56 M66 M76 M86 M101 M116 M131 M146 -
Casing
*Cross-over sub required for drill rods not matching the thread connection in core barrel head

Key to Main Parts of B and XB Core Barrel Assemblies

Complete core barrel consists of:
1. Core Barrel Head
2. Sample Tube 0.5m, 1.0m, 1.5m or 3.0m long
3. Reaming Shell (Blank)
4. Core Lifter
Core Bit is not supplied as part of the core barrel assembly, but must be chosen
correctly to match the particular application and rock formation. A Blank Reaming
Shell is supplied with the Core Barrel, but TC or Diamond type may be required for
reaming purposes. Please refer to our Core Bits page for further details.
Os tambores de núcleo de tubo único do tipo B são adequados para a perfuração quando
não é necessário realizar nenhum exame do núcleo (por exemplo, a perfuração de furos
de argamassa). O tipo XB é adequado para remoção prolongada de concreto.
Enquanto o barril de núcleo do tipo B é de comprimento fixo, o barril de núcleo XB é
facilmente extensível durante a perfuração, adicionando tubos de revestimento métricos
adicionais entre a cabeça do cilindro central e a casca do alargamento. Em ambas as
séries, o núcleo do elevador se encaixa na parte interna do núcleo do núcleo, de modo
que não é necessário um corpo de núcleo.
 Disponível em 9 diâmetros diferentes para tamanhos de furos métricos (milimétricos)
entre 46 - 146 mm.
Vantagens:
 Economiza custos quando nenhum exame do núcleo é necessário
 Facilmente extensível em comprimento ao perfurar concreto grosso.
Dados técnicos
Tipo de tambor central
Especificação B46 B56 B66 B76 B86 B101 B116 B131 B146
XB46 XB56 XB66 XB76 XB86 XB101 XB116 XB131 XB146
Diâmetro do
46,3 56,3 66,3 76,3 86,3 101,3 116,3 131,3 146,3
furo (mm)
Diâmetro do
31,7 41,7 51,7 61,7 71,7 86,7 101,7 116,7 131,7
núcleo (mm)
Espessura Kerf /
7,15 7,15 7,15 7,15 7,15 7,15 7,15 7,15 7,15
Coroa (mm)
Área de corte
8,9 11,2 13,5 15,8 18,1 21,6 25,0 28,4 31,9
(cm 2 )
Área do furo
16,8 24,9 34,5 45,7 58,5 80,6 106,2 135,4 168,1
(cm 2 )
Área de corte
como% da área 53% 45% 39% 35% 31% 27% 24% 21% 19%
do furo
Área central
7,9 13,7 21,0 29,9 40,4 59,0 81,2 107,0 136,2
(cm 2 )
Conexão de
CR42 CR50 CR50 CR50 CR50 NW NW NW NW
rosca na cabeça
Carcaça
M56 M66 M76 M86 M101 M116 M131 M146 -
Recomendada
* Subcorrente cruzado necessário para hastes de broca que não combinem com a conexão de rosca na cabeça do
cilindro

Chave para as principais peças dos conjuntos de tambor de núcleo B e

XB
O barril de núcleo completo consiste em:
1. Cabeça do Tambor Principal
2. Tubo de Amostra 0.5m, 1.0m, 1.5m ou 3.0m de comprimento
3. Mandril de escareamento (em branco)
4. Núcleo Levantador
O Core Bit não é fornecido como parte do conjunto do barril central, mas deve ser
escolhido corretamente para corresponder à aplicação específica e à formação de
rochas. Uma concha de escareamento em branco é fornecida com o barrilete, mas o tipo
TC ou Diamond pode ser necessário para fins de escareamento. Por favor, consulte a
nossa página de Core Bits para mais detalhes.
Heuer, VB, Inagaki, F., Morono, Y., Kubo, Y., Maeda, L. e a Expedição
370 Cientistas
Anais do International Ocean Discovery Program Volume 370
publications.iodp.org
https://doi.org/10.14379/iodp.proc.370.102.2017

Expedição 370 métodos 1

Y. Morono, F. Inagaki, VB Heuer, Y. Kubo, L. Maeda, S. Bowden, M.

Cramm, S. Henkel, T. Hirose, K. Homola, T. Hoshino, A. Ijiri, H.
Imachi. , N. Kamiya, M. Kaneko, L. Lagostina, H. Manners, H.-
L. McClelland, K. Metcalfe, N. Okutsu, D. Pan, MJ Raudsepp, J.
Sauvage, F. Schubotz, A. Spivack, S. Tonai, T. Treude, M. - Y. Tsang, B.
Viehweger, DT Wang , E. Whitaker, Y. Yamamoto e K. Yang 2
Palavras-chave: International Ocean Discovery Program,
IODP, Chikyu, Expedição 370, Sítio C0023, Muroto Transect, biosfera
profunda, limites de vida do subsolo profundo, transição biótico-
abiótica, baixa biomassa, contagem de células microbianas, atividade
microbiana, DNA, RNA, biomarcador, metanogênese, redução de
sulfato, redução de ferro, taxa metabólica medição, interações
geosfera-biosfera, tecnologia superlimpa, QA / QC, limite de
temperatura de vida, esterilização por calor, fluxo de calor, gradiente
geotérmico, fonte hidrotermal, observatório de temperatura, camadas
de cinzas, mineralização, gás biogênico, gás termogênico, -incubação
de pressão, incubação a alta temperatura, tomografia
computadorizada de raios-X, tomografia computadorizada, ferramenta
avançada de temperatura de piston corer, APCT-3, sistema de
filtração de ar KOACH, traçador de perfluorocarbono, PFC,
radiotraçador, sondagem isotópica estável, Nankai Trough, Shikoku
Basin, Japão , Kochi Core Center
MS 370-102: publicado em 23 de novembro de 2017

Introdução
Este capítulo documenta os procedimentos e métodos usados para
medições e análises a bordo e em terra durante a Expedição 370 do
International Ocean Discovery Programme (IODP). Durante a
Expedição 370, realizamos perfurações sem sondas até 1180,0 m
abaixo do fundo do mar (DSF) e coletamos 112 amostras no IODP Hole
C0023A. Para atingir os objetivos da expedição, as células e atividades
microbianas precisavam ser detectadas até os limites de detecção dos
métodos existentes. Portanto, o controle de contaminação e garantia de
qualidade (GQ) foram de importância crucial. Um extenso conjunto de
medições foi realizado a bordo do D / V Chikyue amostras selecionadas
foram transportadas para o Kochi Core Center (KCC) de helicóptero
para posterior análise. Todos os cientistas a bordo e em terra
contribuíram para a conclusão deste volume.

Profundidades de referência
As profundidades de cada medição ou amostra são relatadas em
relação ao piso da plataforma da embarcação de perfuração (mesa
rotativa) e ao fundo do mar. Essas profundidades são determinadas
pelo comprimento do tubo de perfuração e são correlacionadas entre si
pelo uso de pontos de referência distintos. Os engenheiros de
perfuração do Chikyu referem-se ao comprimento do tubo quando
relatam a profundidade e relatam isso como a profundidade de
perfuração abaixo do piso da sonda (DRF) em metros. As
profundidades básicas são baseadas na profundidade de perfuração
abaixo do piso da sonda até o topo do intervalo de núcleo e no
comprimento curado do núcleo recuperado. As profundidades
principais são convertidas em profundidade de núcleo abaixo do fundo
do mar, Método B (CSF-B), no qual as seções sobrepostas são
compactadas quando a recuperação é> 100% (ver IODP Depth Scales
Terminology em http://www.iodp.org/policies-and -
diretrizes ).
As profundidades relatadas em DRF são convertidas em profundidades
abaixo do fundo do mar (DSF ou CSF-B) subtraindo a profundidade da
água e a altura do solo da plataforma da superfície do mar, com
correções relativas a DRF quando apropriado (Figura F1 ). DSF e CSF-
B são, portanto, equivalentes. Neste relatório, a profundidade do
núcleo descrita em metros abaixo do fundo do mar (mbsf) é
equivalente ao CSF-B. Profundidades sísmicas são relatadas em
qualquer tempo (s) ou profundidade (m). Para as seções de tempo,
uma escala de via de dois sentidos é usada abaixo do nível do mar. Para
secções de profundidade, a profundidade sísmica abaixo do fundo do
mar (SSF) ou a profundidade sísmica abaixo do nível do mar (SSL) são
expressas em metros.
Figura F1 Convenções do IODP para nomear sites, buracos, núcleos e
amostras.

Site, furo, núcleo, seção e numeração de

amostra
Sites perfurados pelo Chikyu são numerados consecutivamente a partir
do primeiro site com o prefixo “C”, que indica que o buraco foi
perfurado pela Agência do Japão para a Ciência e Tecnologia da Terra
Marinha (JAMSTEC) / plataforma do Centro de Exploração da Terra
Profunda (CDEX). . Um local refere-se a um ou mais orifícios
perfurados enquanto o navio está posicionado a 300 m do primeiro
buraco. O primeiro buraco perfurado em um determinado site é
atribuído ao número do site modificado pelo sufixo “A”, o segundo furo
leva o número do site e o sufixo “B”, e assim por diante. Esses sufixos
são atribuídos independentemente da recuperação, desde que a
penetração ocorra. Durante a Expedição 370, perfuramos no Local
C0023 e ocupamos o Furo C0023A.
Os intervalos foram calculados com base em um comprimento inicial
de 1,2 a 10,0 m (isto é, os comprimentos padrão do barril do núcleo dos
vários sistemas de perfuração empregados durante a Expedição
370). Além disso, especificamos a coleta de diferentes intervalos de
amostragem em áreas de fraca recuperação ou baixa taxa de
penetração. A expansão de núcleos e lacunas relacionadas ao material
não recuperado resultou em porcentagens de recuperação maiores ou
menores que 100%, respectivamente. Os intervalos de profundidade
foram atribuídos a partir da profundidade abaixo do fundo do mar em
que o início da perfuração foi iniciado (escala de profundidade de
amostragem de IODP calculada usando o Método A [CSF-A]). Núcleos
curtos (recuperação incompleta) foram todos assumidos para começar
a partir dessa profundidade inicial por convenção. A expansão do
núcleo foi corrigida durante o processamento final das medições do
núcleo, subtraindo espaços vazios, subtraindo material exótico e
contabilizando a expansão (CSF-B).
Um núcleo recuperado é tipicamente dividido em seções de 1,4 m de
comprimento que são numeradas seqüencialmente de 1 começando no
topo. O material recuperado do coletor de núcleo é atribuído a uma
seção separada, rotulada coletor de núcleo (CC), e colocada na parte
inferior da seção mais inferior do núcleo recuperado.
Um número de identificação completo para uma amostra de uma seção
central consiste nas seguintes informações: expedição, local, furo,
número do núcleo, tipo de núcleo, número da seção e intervalo de cima
para baixo em centímetros medidos a partir do topo da seção. Por
exemplo, uma identificação de amostra de “370-C0023A-20R-1, 80–85
cm” representa uma amostra removida do intervalo entre 80 e 85 cm
abaixo do topo da Seção 1 do vigésimo núcleo, tomada pelo cilindro de
núcleo rotativo ( RCB) do Furo C0023A, durante a Expedição 370
(Figura F1 ).

Manipulação do núcleo
As seções a seguir descrevem o fluxo de núcleo do chão de perfuração
até o laboratório. O manuseio principal durante a Expedição 370
seguiu o procedimento de fluxo principal geral implementado durante
as expedições recentes do IODP no Chikyu, mas foi otimizado para
processar e armazenar as amostras adequadamente para os objetivos
científicos da expedição. O fluxo central específico para esta expedição
é ilustrado na Figura F2 .

Figura F2. Processamento central e fluxo de medição.

Área de corte do núcleo

Assim que o núcleo foi recuperado no convés, o coletor do núcleo foi
entregue na área de corte do núcleo. Uma amostra de volume pequeno
(5-10 cm 3 ) do material retirado do coletor de núcleo foi preservada
para análise micropaleontológica pós-crítica, e o restante do material
coletador de núcleo foi empacotado em um revestimento central e
inserido no fluxo principal geral. O comprimento do núcleo recuperado
e o comprimento total do espaço vazio foram então medidos e inseridos
no banco de dados J-CORES, juntamente com informações de
identificação do núcleo, avanço de perfuração e informações de
profundidade.
Após a recuperação de núcleos de sistema de pistão hidráulico rico em
gás (HPCS), imagens de infravermelho foram tomadas para identificar
anomalias de temperatura indicativas da decomposição de hidratos
gasosos. As amostras foram retiradas dos vazios de gás para várias
análises de gases.
Antes de cortar o núcleo em seções de até 1,4 m de comprimento, uma
inspeção visual foi feita para identificar características estruturalmente
importantes e evitar o corte diretamente através de contatos ou
estruturas litológicas. Quando o núcleo foi cortado em secções
sequencialmente numeradas, o fluido de perfuração deixado no
revestimento central foi amostrado. Cerca de 50 cm 3 de amostra foi
feita em extremidades recém-cortadas de secção e dividida em sub-
amostras para controlar a composição do fluido de perfuração para o
controle de contaminação em investigações geoquímico e
microbiológicas do núcleo. Além disso, a borda externa dos núcleos de
sedimentos que estiveram em contato com o fluido de perfuração foi
amostrada para fins de controle de contaminação.
Plataforma de processamento do núcleo
Cada seção do núcleo foi fotografada usando o scanner de tomografia
computadorizada (TC) de raios X. Tomografias por raios-X foram
realizadas em todas as seções, e os dados foram revisados por um Co-
Chief Scientist e um CT X-ray para litoestratigrafia e geologia
estrutural para selecionar os locais mais adequados para um conjunto
complexo de núcleo inteiro (WRC) para investigações a bordo, em terra
e pós-falsa.
As amostras WRC foram então cortadas e armazenadas sob condições
apropriadas, usadas para análises a bordo de água intersticial (IW), ou
transferidas de helicóptero para KCC para posterior processamento na
instalação super-limpa da sala. O corte foi realizado com ferramentas
estéreis e todas as tampas das WRC foram limpas com etanol, secas em
uma bancada limpa e irradiadas com luz UV por pelo menos 20
minutos antes do uso. As amostras foram acondicionadas em sacos à
prova de gás e armazenadas sob atmosfera de nitrogênio.
As partes restantes das secções do núcleo foram examinadas por um
logger multisensor de núcleo inteiro (MSCL-W) para densidade de
atenuação de raios gama (GRA), susceptibilidade magnética (MS) e
radiação gama natural (NGR). A análise MSCL-W foi realizada em
intervalos de 4 cm para GRA e MS e em intervalos de 16 cm para
NGR. Subsequentemente, a condutividade térmica foi determinada se
o estado de consolidação do sedimento permitisse a medição.
Após a varredura MSCL-W e medição de condutividade térmica, a
seção do núcleo foi dividida longitudinalmente ao longo das linhas que
delimitam as metades de arquivo e de trabalho. Seqüências de arquivo-
metade foram processadas da seguinte maneira: imagens digitais
foram tiradas com o registrador de imagem de foto (MSCL-I) e
registrador de espectroscopia de cor (MSCL-C) antes da descrição do
núcleo visual pelos cientistas de bordo. Embora a descrição central se
concentrasse principalmente na litologia, características de possível
interesse estrutural foram anotadas para que seu complemento
pudesse ser identificado na metade de trabalho para descrição,
medição e amostragem adicionais, se necessário. Amostras minúsculas
(aproximadamente a quantidade que poderia ser facilmente coletada
no final de um palito de dente) foram retiradas da metade do arquivo
em áreas de interesse litológico para análise de lâminas de esfregaços.
Para as seções de meio-trabalho de sedimentos consolidados, a
medição da condutividade térmica na superfície dividida das seções de
meia-parte começou imediatamente após a divisão do núcleo. Em
seguida, amostras discretas foram retiradas da porção homogênea, que
é livre de fraturas ou estruturas (por exemplo, falhas, foliações, etc.),
nas metades de trabalho para análise de propriedades físicas a bordo
(ver Medições de umidade e densidade). Posteriormente, as
metades de trabalho foram investigadas em relação à geologia
estrutural e as características relevantes foram descritas conforme
descrito na descrição estrutural . Finalmente, as metades de
trabalho foram amostradas para investigação paleomagnética de
amostras discretas (ver amostras Discretas e coordenadas de
amostras) e para pesquisa pós-crítica de acordo com as solicitações
de amostra aprovadas para a Expedição 370.
Todas as seções do núcleo de meia-volta foram seladas a vácuo em
sacolas ESCAL (Mitsubishi Gas Chemical, Japão) após 3 × N 2 flush e
transferidas para armazenamento a frio. Após a expedição, todos os
núcleos foram transportados sob temperatura fria (4 ° C) para
arquivamento no KCC em Kochi, Japão.

Transporte de amostras para terra

Amostras selecionadas foram transportadas para o KCC com uma
frequência de seis vôos, em média, por semana, para posterior análise
pela equipe do partido de ciências. As amostras foram acondicionadas
com pacotes de gelo em uma caixa de gelo para manter as condições
refrigeradas ou congeladas. Amostras para contagem de células foram
mantidas refrigeradas, enquanto amostras para análise de DNA foram
congeladas a bordo do navio. O transporte demorou cerca de 3 a 4 h da
embalagem da amostra no laboratório de bordo para desembalar no
KCC. As medições preliminares do teste mostraram que a temperatura
estava abaixo de -50 ° C para amostras congeladas simuladas após esse
período. As amostras foram imediatamente transferidas para o espaço
de armazenamento apropriado no KCC após a entrega e mantidas até
processamento adicional.

Controle de contaminação
Impulsionados pelos objetivos de encontrar células microbianas e
atividades até os limites de detecção dos métodos existentes, foi
implementado controle de qualidade e controle de qualidade rigoroso
para todas as etapas principais de recuperação, processamento central
e, em particular, análises microbiológicas e geoquímicas de
amostras. Os procedimentos foram usados para identificar e
contabilizar a introdução de células microbianas, vírus e espécies
químicas nas amostras de sedimentos e rochas das seguintes fontes
potenciais de contaminação:

 Intrusão de água do mar e lama de perfuração durante o corte e

recuperação do núcleo, potencialmente emparelhados com
contaminação cruzada resultante de enchimentos de poços soltos
acumulados no fundo do furo;
 Formação de hidrogênio molecular devido à corrosão da broca e
liberação de compostos orgânicos devido ao aquecimento do
revestimento central em altas temperaturas in situ;
 Introdução de células microbianas e compostos químicos de
equipamentos e produtos químicos utilizados durante o
processamento de amostras; e
 Contaminação de amostras de sedimentos durante o trabalho de
laboratório a partir de partículas transportadas pelo ar.

A fim de minimizar o risco de contaminação induzida pela perfuração,

amostras para investigações microbiológicas e geoquímicas foram
tomadas como WRCs das partes não perturbadas dos núcleos
recuperados, que foram identificadas com base na inspeção visual e na
tomografia por raios X das seções centrais individuais . Além disso, a
amostragem combinada para análises microbiológicas e geoquímicas
fornece um meio para a confirmação da integridade da amostra (por
exemplo, concentrações elevadas de sulfato em amostras IW seriam
um indicador para a intrusão de água do mar durante a
perfuração). Além disso, em geral, a primeira seção não foi amostrada
para investigações microbiológicas, a fim de evitar contaminação
cruzada com preenchimentos de poços.
Para rastrear sensivelmente a intrusão de fluido de perfuração nos
núcleos de sedimentos, um composto perfluorocarbono (PFC) foi
adicionado como um traçador químico ao fluido de perfuração, e sua
presença foi monitorada na parte externa, intermediária e interior das
WRCs tomadas para investigações microbiológicas. A fim de
determinar a concentração de PFC no fluido de perfuração,
amostramos o fluido de perfuração preso dentro do revestimento
central (doravante chamado de “fluido de revestimento central”)
quando os núcleos foram cortados em seções na área de corte
central. Além disso, as concentrações de PFC foram determinadas em
amostras a granel retiradas do topo da Secção 1, a fim de se ter um
meio de comparação entre todos os núcleos, no caso de nenhum fluido
de perfuração ter sido capturado no revestimento central. Além disso,
amostras de referência foram retiradas dos tanques ativos de lama
contendo gel de água do mar uma vez por dia. Para detalhes, vejaQC:
avaliação da potencial contaminação de amostras de
sedimentos do fluido de perfuração durante a perfuração .
A fim de monitorar a contaminação dos núcleos de sedimentos com
hidrogênio molecular e compostos orgânicos, que são potencialmente
liberados da broca e do revestimento central, respectivamente,
amostras de fluido de revestimento central, sedimento exposto e fluido
de perfuração de tanques ativos de lama foram tomadas para ambos
geoquímica inorgânica (ver hidrogénio dissolvido e monóxido de
carbono ) e geoquímica orgânica (ver testes de contaminação ).
Numerosas medidas foram tomadas para minimizar a introdução de
células microbianas durante o processamento da amostra (para obter
detalhes, consulte Garantia de qualidade e controle de
qualidade para processamento de amostras ). WRCs foram
embalados com tampas que foram esterilizadas por exposição a etanol
e UV. As superfícies das bancadas de trabalho foram rotineiramente
descontaminadas por limpeza com RNase AWAY (Molecular
Bioproducts Inc., EUA) ou por exposição à luz UV. Além disso, a
superfície de trabalho foi coberta com uma nova folha de alumínio cada
vez que um novo WRC era processado. Todas as amostras
microbiolicas foram recolhidas utilizando ferramentas esterilizadas, e o
g azoto usado para lavar as amostras a serem armazenadas sob condies
anaericas foi filtrado atrav de um filtro de 0,22 para remover a
potencial contaminao.
Contaminação de amostras de sedimentos com partículas
transportadas pelo ar no laboratório é uma grande preocupação. Por
esse motivo, o processamento de bordo de amostras microbiológicas
focadas no armazenamento de amostras e o processamento de
amostras adicionais e análises foram realizados no KCC. No Chikyu, a
amostragem microbiológica foi feita em ambientes limpos criados por
uma unidade móvel de filtração de ar que produz fluxo de ar laminar
filtrado que corresponde aos padrões de sala limpa da Classe 1 da
Organização Internacional para Padronização (KOACH T 500-F,
Koken Ltd., Japão) e um ionizador (Koken Ltd., Japão) que reduz a
atração estática de partículas suspensas potencialmente
contaminantes. No KCC, mais processamento de amostras, incluindo
trituração em pó, separação de células e filtração para contagem e
extração de DNA, foi conduzido em uma sala superlimpa, equipada
com um Floor KOACH Ez (KOACH F 1050-F, Koken Ltd., Japão). que
produz qualidade horizontal ISO Class 1 de fluxo de ar laminar a partir
da parede final do espaço limpo e um ionizador para neutralizar a
carga estática em todo o espaço de trabalho da bancada de
trabalho. Durante o trabalho a bordo e em terra, partículas
aerotransportadas na câmara anaeróbica, bancada limpa e ar de
laboratório foram periodicamente monitoradas por um contador de
partículas durante a expedição, e a concentração de células
microbianas no ar que potencialmente contaminam núcleos durante o
manuseio do núcleo foi determinada em amostras de ar representativas
de vários espaços de trabalho. Para detalhes, vejaGarantia de
qualidade e controle de qualidade para processamento de
amostras .

Operações
Este capítulo descreve um HPCS modificado de avanço curto (HPCS
curto) recém-desenvolvido e o observatório temporário de temperatura
(TTO) que foi implantado no Hole C0023A durante a Expedição 370.

HPCS curto
O HPCS é capaz de obter amostras de núcleo de alta qualidade (menos
perturbadas e menos invadidas) de sedimentos moles a
semiconsolidados. No entanto, a penetração do sapato do núcleo é
recusada em profundidades maiores uma vez que o sedimento se torna
firme e / ou litificado. Para estender a aplicabilidade do HPCS a
formações sedimentares mais profundas e mais duras, o HPCS
convencional foi modificado para um menor comprimento antecipado
de um sapato de núcleo de 1,5, 3,0 ou 4,5 m (Figura F3).). Além disso,
a configuração do pistão e das hastes de extensão pode ser modificada
para o comprimento de avanço curto (isto é, o avanço mais curto cria
maior potência de penetração com a velocidade de disparo aumentada
e, consequentemente, estende a profundidade aplicável mais profunda
que a HPCS padrão de 9,5 m) . O diâmetro da amostra do núcleo (61
mm) é o mesmo que o HPCS padrão. O conjunto do furo inferior e a
aplicabilidade da ferramenta avançada de temperatura do corador do
pistão (APCT-3) na sapata do núcleo são compatíveis tanto para o
HPCS padrão quanto para o HPCS curto.

Figura F3. HPCS convencional e HPCS curto.

Observatório de temperatura
O TTO foi instalado para monitorar o perfil de temperatura de
formação no poço coberto. O TTO foi equipado com 39 registradores
de sensor de temperatura independentes (registradores de temperatura
em miniatura [MTLs]) em um cabo e 13 sensores de termistor em 3
tubos de flatpack. As primeiras foram projetadas para serem
recuperadas do TTO por um veículo operado remotamente (ROV), e as
últimas foram projetadas para instalação permanente no furo e
equipadas com unidades de registro de dados na cabeça CORK. A
plataforma operacional do ROV e a cabeça do CORTE foram colocadas
na cabeça do poço C0023A, permitindo que as futuras operações de
ROV recuperem o cabo com os registradores do sensor de temperatura
e / ou os dados do termistor.
Originalmente, o TTO foi projetado para cobrir toda a profundidade do
fundo do furo, mas a condição do furo abaixo da carcaça (a 858 mbsf)
não permitiu a instalação da tubulação. Portanto, o projeto foi alterado
no local e a tubulação foi encurtada para 863 m, que se estende 5 m
abaixo do sapato da carcaça. A Tabela T1 mostra as posições finais dos
sensores.
Tabela T1 Posições do sensor do termômetro, incluindo termistores e
MTLs. Faça o download da tabela no formato .csv.

Corda termistor
O termistor é composto por 13 sensores termistores (30 kΩ a 0 ° C)
instalados ao longo de 3 cabos planos planos em profundidades
direcionadas à zona de decolagem (Figura F4 ; Tabelas T1 , T2 ). O
flatpack cable é um produto da Gulf Coast Downhole Technologies,
registrado como cabo elétrico inoxidável com Safety-Strip. É de 11 mm
de diâmetro e feito de tubo de aço inoxidável (6,35 mm de diâmetro)
encapsulado com material de Santoprene. Dentro do tubo há sete
condutores elétricos para a conexão do termistor. Para monitoração de
pressão futura, implantamos uma linha de flatpack sem condutor
interno.

Figura F4. Configuração do sistema TTO e CORK.

Tabela T2 Especificações do sensor de temperatura. Faça o
download da tabela no formato .csv.
Para proteger os cabos e sensores durante a instalação, os protetores
dos cabos são conectados em todas as juntas de tubulação e em todos
os módulos de sensores (Figura F5 ). O módulo do sensor do termistor
e as peças de conexão do condutor são protegidos por um tubo de aço
inoxidável preenchido com epóxi (Figura F6 ).
Figura F5. Configuração da corda do termistor perto da ponta da
tubulação de 4½ polegadas.

Figura F6. Módulo do sensor do termistor e conexão elétrica da corda

do termistor.

Registradores de temperatura em miniatura

Um total de 39 registradores autônomos de auto-registro foram
anexados a uma corda Vectran de 1 cm de espessura (Figuras F4 , F7 ;
Tabela T2 ). Eles incluíam 6 registradores MTL1854, 7 registradores
MTL1882 e 27 registradores HOBO U12. A parte inferior da corda foi
conectada a uma barra de impacto para auxiliar na queda livre da
tubulação. Os sensores de MTL foram implantados em intervalos de 50
m, mas a resolução de profundidade foi aumentada em intervalos com
picos proeminentes em perfis geoquímicos (Tabela T1 ).

Figura F7 Registradores de temperatura de auto-registro anexados por

corda.
MTL1854
O MTL Modelo 1854 é um produto da Antares Datensysteme GmbH. É
um pequeno sistema autônomo com precisão de temperatura muito
alta (~ mK) a uma profundidade de água de 6000 m para observação a
longo prazo na coluna de água ou em sedimentos de águas
profundas. Os dados de temperatura são armazenados em sua
memória interna e são recuperados através do acoplamento galvânico
(ou seja, o registrador de dados é colocado em grampos com mola para
comunicação e transferência de dados através de uma interface USB ou
RS-232C). A temperatura máxima de operação é de 50 ° C.
MTL1882
O MTL Modelo 1882 é outro registrador de dados Antares
desenvolvido recentemente para operações de até 120 ° C por 1 ano.
HOBO U12
O registrador de temperatura de oceano profundo HOBO U12 é um
registrador de temperatura de canal único com resolução de 12 bits que
pode gravar até 43.000 medições. Ele é projetado para suportar
pressão de água a 11.000 me temperaturas variando de -40 a 125 ° C.
Os dados de temperatura são armazenados na memória e podem ser
baixados via conexão USB para um PC. A bateria durará ~ 3 y para
intervalos de registro> 1 min e com não mais de 60 minutos de
operação a 125 ° C por dia.
Calibração e teste de alta temperatura
Todos os elementos sensores do termistor e os registradores HOBO
U12 foram calibrados em banho-maria para uma faixa de temperatura
entre 2 ° e 60 ° C e em autoclave entre 60 ° e 120 ° C. Todos os
madeireiros Antares MTL1882 foram testados por 48 h em ambientes
de 60 ° a 120 ° C. Todos os madeireiros HOBO U12 foram testados por
6 dias em um ambiente de 120 ° C. Dois dos sensores HOBO U12 foram
testados por ~ 2 meses a 120 ° C.
Lama gel
O annulus do invólucro e do tubo é preenchido com uma lama de gel,
que tem uma resistência ao cisalhamento de 2 ~ 3 kg / m 2 , a fim de
evitar a circulação de água devido ao gradiente geotérmico na
formação.

Litoestratigrafia
Durante a Expedição 370, uma grande fração das seções centrais
recuperadas foi tomada como WRCs para análises geoquímicas e
microbianas cruciais. As amostras foram retiradas imediatamente após
a imagem por TC de raios-X. No entanto, uma descrição
litoestratigráfica detalhada ainda era necessária para fornecer uma
correlação do Site C0023 com os Locais 1174 do Programa Mundial de
Perfuração (ODP) (Shipboard Scientific Party, 2001b) e 808
(Shipboard Scientific Party, 1991) e fornecer amostras padrão e
descrições dos locais. . A correlação litoestratigráfica do Site C0023
com os sites legados era um objetivo importante do trabalho a bordo. A
descrição litoestratigráfica dos núcleos durante a Expedição 370 teve
como objetivo fornecer uma caracterização geológica fundamental e foi
baseada em

 Observações macroscópicas durante a descrição do núcleo visual

 Petrografia direcionada para apoiar a descrição do núcleo visual e
os objetivos da ciência de expedição, e
 Observação de imagem por tomografia computadorizada por raios
X.

Descrição do núcleo visual

As seções divididas foram descritas por sedimentologistas a bordo e
geólogos estruturais. A descrição do núcleo visual (VCD) foi realizada
nas metades de arquivo (litoestratigrafia) e de trabalho (geologia
estrutural) de cada núcleo usando procedimentos tradicionais de ODP
e IODP (por exemplo, Mazzullo e Graham, 1988). Os núcleos foram
registrados por seção e as informações dos formulários VCD foram
transferidas para o banco de dados J-CORES antes da conversão para
plotagens de escala de núcleo. Quando faltava uma parte significativa
de uma seção devido à amostragem freqüente do WRC, foram
utilizadas imagens de TC de raios X e descrição litológica de resíduos
de amostra de todo o ciclo. A legenda usada para os VCDs é mostrada
na Figura F8 . A folha de registro VCD sedimentológica é apresentada
na Figura F9. Varreduras de formulários VCD manuscritos inseridos
no banco de dados J-CORES estão disponíveis em VCDDATA
em material suplementar .

Figura F8. Padrões gráficos, abreviaturas e símbolos usados em

descrições de núcleo macroscópicas.

Figura F9. Formulário VCD.

Descrição litoestratigráfica
A descrição litoestratigráfica foi realizada com a nomenclatura de
formação utilizada nos locais 808 e 1174, sempre que possível para
correlação litoestratigráfica com esses dois locais. Trabalhos anteriores
nesses locais fizeram uso de associações de fácies e estilos de
deformação distintos dentro da zona de subducção de Nankai Trough
ao largo do Cabo Muroto. Unidades registradas anteriormente e seus
critérios de identificação estão resumidos aqui e tabulados na
Tabela T3.com dados sintetizados a partir do Shipboard Scientific
Party (1991, 2001a). Uma lava de travesseiro basáltico forma a unidade
superior do porão (16 Ma), que é sobreposta por uma unidade basal de
vulcanoclásticos ácidos (15 Ma). Sobrepondo estas unidades está a
fácies da Bacia de Shikoku inferior (isto é, meados do Mioceno a meio
do Plioceno), que se distingue da unidade acima pela ausência de
camadas de cinzas vulcânicas. A face superior da bacia de Shikoku é
diferenciada da unidade abaixo pela presença de abundantes camadas
de tephra (isto é, o Plioceno superior ao Pleistoceno inferior). Acima
deste é uma fácies hemipelágica quaternária compreendendo lama e
turbiditos (ie, Pleistoceno). Na ODP Leg 190, local 1174, esta unidade
foi dividida em (1) uma fácies transicional compreendendo lama
hemipelágica com camadas de tephra e as primeiras ocorrências de
turbiditos, (2) lama hemipelágica contendo turbiditos de silte e (3)
uma unidade compreendendo lama hemipelágica e turbiditos de areia
e silte (Shipboard Scientific Party, 2001a). A unidade mais alta
encontrada no Site 1174 era lama hemipelágica. Uma comparação entre
essas unidades e seus equivalentes correlativos no Site C0023 é
apresentadaLitoestratigrafia no capítulo Site C0023 (Heuer et al.,
2017b).
Tabela T3 Critérios para identificar unidades correlacionáveis. Faça o
download da tabela no formato .csv.
Uma abordagem litoestratigráfica baseada apenas em fácies
sedimentares não é suficiente para permitir a correlação com outros
locais devido à presença de características estruturais rastreáveis
lateralmente. Estas incluem uma zona de desolamento regionalmente
extensa, consistindo em brecha de falha, que foi relatada como tendo
aproximadamente 30 m ou mais de espessura no Local 1174
(Shipboard Scientific Party, 2001a). Estilos de deformação acima da
brecha de falha são distintamente diferentes daqueles abaixo; acima
dos estilos de deformação da zona de decaimento predominantemente
consistem em fratura, enquanto que abaixo, é observado o aumento da
inclinação da cama. Porque a recuperação do núcleo em horizontes
brechados pode ser baixa e porque a brecciação geológica pode ser
difícil de distinguir de brección causada por operações de
perfuração, as características estruturais também foram registradas
para ajudar a demarcar os limites e diferenciar os distúrbios de
perfuração e manipulação do núcleo da brechação de falhas. Mais
detalhes das características estruturais estão listadosDescrição
estrutural .

Sedimentologia e mineralogia
Os principais dados quantitativos reunidos para ajudar a demarcar os
limites de formação foram (1) instâncias de largura de núcleo para
formas de leito de escala de lâmina, tais como ondulações assimétricas,
laminação cruzada e laminação planar de baixo ângulo; (2) as bases de
areia e leitos de areia e lâminas de areia e silte; (3) o nível de
bioturbação; (4) a presença de vulcanoclásticos; e (5) a ocorrência de
macrofósseis e madeira macrofitoclástica. Essas observações foram
inseridas no banco de dados J-CORES.
Mineralização
A mineralização foi descrita de acordo com seu hábito e principais
componentes minerais observáveis. Distinções foram feitas entre veias
estigmáticas formadas em sedimentos moles, mineralização hospedada
em estruturas de deformação e mineralização associada ou seguindo
características sedimentares. A ocorrência de minerais diagenéticos em
estágio inicial (por exemplo, pirita e calcita) foi registrada
separadamente e, quando apropriado, incluída na descrição de uma
litologia (por exemplo, calcários calcários).
Sedimentos vulcânicos
Para enfatizar as diferenças na composição dos horizontes
sedimentares contendo sedimentos vulcanoclásticos, o esquema de
classificação de Fisher e Schmincke (1984) foi modificado para rápida
descrição do núcleo. O prefixo "vulcanoclástico" foi reservado para
rocha sedimentar contendo> 25% mas <75% de vulcanoclásticos (por
exemplo, um arenito com> 25% vulcaniclásticos seria chamado de
"arenito vulcanoclástico" e um lamito com> 25% vulcaniclásticos seria
denominado " lama vulcanoclástica ”). Trabalhos anteriores na região
diferenciaram entre volcaniclásticos retrabalhados e piroclastos menos
alterados (Saito, Underwood, Kubo e Expedition 322 Scientists,
2010). Tal abordagem tem muitos pontos fortes, como o potencial para
diferenciar entre mecanismos deposicionais e de posicionamento. Mas
neste caso, Para facilitar a descrição rápida do núcleo, a frescura dos
clastos vulcânicos não foi rotineiramente diferenciada. As unidades
eram registradas como tufos se continham> 75% de clastos vulcânicos.
Bioturbação
A intensidade da bioturbação foi estimada usando uma versão
modificada do índice icnofabric como descrito por Droser e Bottjer
(1986, 1991). Para facilitar o registro, esses valores foram então
recodificados para entrada no banco de dados J-CORES da seguinte
forma:

 Nível 1 = tocas observadas.

 Nível 2 = ligeira bioturbação onde se enterram buracos entre si
ou outro tecido sedimentar.
 Nível 3 = tocas e outras bioturbações são o principal tecido
sedimentar à custa de todas as outras estruturas sedimentares
 (por exemplo, as lâminas são descontínuas e as alterações na
composição devido a processos deposicionais são ofuscadas).

Descrição estrutural
Nossos métodos para documentar a geologia estrutural dos núcleos da
Expedição 370 seguiram amplamente aqueles usados pela Expedition
315 Scientists (2009) e pela Expedition 316 Scientists (2009), que por
sua vez foram baseados em procedimentos anteriores do ODP
desenvolvidos na margem acronial de Nankai (ie, ODP Legs 131 e
190). Nós documentamos a deformação observada nos núcleos
divididos classificando as estruturas, determinando a extensão da
profundidade, medindo os dados de orientação e registrando o sentido
do deslocamento. Os dados coletados foram registrados manualmente
em um formulário impresso na tabela principal e depois digitados em
uma planilha e no banco de dados J-CORES. Varreduras de
formulários de descrição estrutural manuscrita estão disponíveis em
VCDDATA em material suplementar.. Os dados de orientação
devem ser corrigidos para rotações relacionadas à perfuração com base
na declinação paleomagnética. No entanto, devido às limitações de
tempo, número de especialistas paleomagnéticos e sobrecarga
magnética pesada, não realizamos a restauração paleomagnética
durante a Expedição 370.
Aquisição de dados estruturais e medições de
orientação
Cada estrutura foi registrada manualmente em uma tabela de descrição
(Figura F10 ). Usamos um transferidor de plástico para medições de
orientação (Figura F11 ). O uso da metade de trabalho do núcleo
dividido proporcionou maior flexibilidade na remoção - e corte, se
necessário - peças do núcleo para medições.

Figura F10 Folha de registro de estrutura.

Figura F11 Transferidor usado para medir quedas, tendências,

mergulhos e ancinhos aparentes.
Orientações de características planares e lineares em materiais
tubulares foram determinadas em relação ao eixo central, que
representa o eixo vertical no referencial central, e a linha dupla
marcada na metade de trabalho do revestimento central dividido, que
representa 000 ° (e 360 °) no plano perpendicular ao eixo central
(figura F12 ). Para determinar a orientação de um elemento estrutural
planar, dois afundamentos aparentes deste elemento foram medidos
no referencial central e convertidos em um plano representado por um
ângulo de mergulho e uma direção de golpe ou de afundamento
(Figura F13 ). Um mergulho aparente é geralmente representado pela
intersecção da feição planar com a face dividida do núcleo e é
quantificado medindo-se a direção e o ângulo de imersão no referencial
do núcleo (β 1na figura). Medições de mergulho aparente típicas têm
uma tendência de 090 ° ou 270 ° e variam em mergulho de 0 ° a 90 °
(β 2na figura). O segundo mergulho aparente é geralmente
representado pela interseção da característica planar e uma superfície
cortada ou fraturada em um ângulo alto para a face dividida do
núcleo. Na maioria dos casos, esta era uma superfície paralela ou
perpendicular ao eixo central. Nos primeiros casos, a lineação aparente
de imersão tenderia a 000 ° ou 180 ° e mergulharia de 0 ° a 90 °; nos
últimos casos, a tendência varia de 000 ° a 360 ° e mergulha 0 °. As
características lineares observadas nos núcleos foram sempre
associadas a estruturas planares (por exemplo, estrias em falhas), e
suas orientações foram determinadas medindo-se a inclinação (ou
inclinação) no plano associado ou a tendência e o mergulho no
referencial central. Durante a Expedição 370, medimos o ancinho para
estrias na superfície da falta (Figura F14), enquanto o azimute e o
mergulho foram medidos para outras linhagens (por exemplo, eixos de
dobra). Todos os dados foram registrados na folha de registro com
profundidades apropriadas e informações descritivas.

Figura F12. Quadro de referência central e coordenadas x , y e z para

cálculos de dados de orientação.

Figura F13. Cálculo da orientação do plano a partir de dois mergulhos

aparentes.

Figura F14. Medição de inclinação aparente de estrias em uma

superfície de falta.
Descrição e classificação de estruturas
Construímos um modelo de geologia estrutural para o banco de dados
J-CORES que facilitou a descrição e classificação das estruturas
observadas. Para maior clareza, definimos a terminologia usada para
descrever as rochas relacionadas a falhas, bem como a base para
diferenciar as estruturas naturais das características induzidas pela
perfuração.
As falhas foram classificadas em várias categorias com base no senso
de falha e suas características estruturais. O sentido da falha foi
identificado usando deslocamentos de marcadores (por exemplo, cama
e falhas mais antigas) através do plano de falha e predominância por
degraus de aterramento. Uma falha com coesão através da zona de
falha foi descrita como uma falha curada. Zonas de distribuição de
falhas densas e deformações intensas foram denominadas “zonas de
falha”. As zonas de falha são zonas deformadas intensamente
fragmentadas em fragmentos menores e com tamanho de centímetro,
contendo apenas alguns fragmentos maiores. O tamanho da maioria
dos fragmentos foi então registrado e a zona registrada como uma
brecha intraformacional - brecha compreendendo os clastos de
litologias subjacentes e subjacentes. Claramente, existe o potencial de
tais unidades serem um artefato do processo de perfuração, bem como
muitos processos geológicos, além de falhas. Onde a informação e o
contexto geológico apoiaram tal interpretação, estes intervalos foram
tratados como um tipo de rocha gerada por falhas distintas e nomeados
em conformidade.
O estilo de mineralização e a mineralogia dos minerais da veia foram
descritos pelos sedimentologistas (ver acima), mas as orientações das
veias, foliações e outras características estruturais foram medidas pelos
geólogos estruturais.
Os dados estruturais às vezes podem ser perturbados por estruturas
induzidas por perfuração, como estruturas de entrada em núcleos
HPCS e biscuiting, fraturamento, falha e rotação de fragmentos em
sistemas de núcleo de sapata estendido (ESCS) e núcleos RCB. Onde as
estruturas foram perturbadas pelo fluxo de entrada que ocupa mais de
50% da largura da seção transversal do núcleo, excluímos as medidas
de cama por causa da intensa perturbação (isto é, flexão, rotação, etc.)
dessas estruturas.
Cálculo da orientação do plano
Para estruturas planas (por exemplo, camas ou falhas), duas quedas
aparentes em duas superfícies diferentes (por exemplo, uma sendo a
superfície central dividida, que é vertical leste-oeste, e a outra sendo a
superfície vertical horizontal ou norte-sul) foram medidas no
referencial central como azimutes (medidos no sentido horário a partir
do norte, olhando para baixo) e mergulhando (Figura F12 ). Um
sistema de coordenadas foi definido de tal forma que as direções
positivas x , y e z coincidem com o norte, o leste e o vertical para baixo,
respectivamente. Se os azimutes e mergulhos dos dois mergulhos
aparentes forem dados como (α 1 , β 1 ) e (α 2 , β 2 ), respectivamente,
como na figuraF13 , então os vetores unitários representando essas
duas linhas ( v 1 e v 2 ) são os seguintes:
v1= ⎛⎝⎜eu1m1n1⎞⎠⎟= ⎛⎝⎜cosα1cosβ1pecadoα1cosβ1pecadoβ1⎞⎠⎟eν1=l
1m1n1=cos⁡α1cos⁡β1sin⁡α1cos⁡β1sin⁡β1, and

v2= ⎛⎝⎜eu2m2n2⎞⎠⎟= ⎛⎝⎜cosα2cosβ2pecadoα2cosβ2pecadoβ2⎞⎠⎟.ν2=l

2m2n2=cos⁡α2cos⁡β2sin⁡α2cos⁡β2sin⁡β2.

onde l , m e n representam os componentes x , y e z dos vetores.

O vetor unitário normal ao plano ( v n ) (Figura F15 ) é então definido
da seguinte forma:
vn= ⎛⎝⎜eunmnnn⎞⎠⎟= v1 × v 2| v1 × v 2|,νn=lnmnnn=ν1 × ν2ν1 × ν2,

Onde
v1 × v 2= ⎛ ⎝⎜⎜⎜⎜⎜⎜⎜⎜∣∣∣m1n1m2n2∣∣∣∣∣∣n1eu1n2eu2∣∣∣∣∣∣eu1m1eu2m2∣∣∣⎞
⎠⎟⎟⎟⎟⎟⎟⎟⎟= ⎛⎝⎜m1n2- m2n1n1eu2- n2eu1eu1m2-
l2m1⎞⎠⎟.ν1 × ν2= m1m2n1n2n1n2l1l2l1l2m1m2=m1n2-m2n1n1l2-
n2l1l1m2-l2m1.

Figura F15 Direção de mergulho, golpe de regra do lado direito e

mergulho de um plano.
O azimute (α n ) e de imersão (β n ) de v n são dadas pelo seguinte:
αn= tan- 1( mn/ ln) eαn=tan-1⁡mn/ln and

βn=sin−1nn .βn=sin-1⁡nn .

A direcção de imersão (α d ) e o ângulo de mergulho (β) deste plano

s? N e + 90 ° β n , respectivamente, quando β n<0 ° (Figura F15 ). Eles
são α n ± 180 ° e 90 ° - β n , respectivamente, quando a p n ≥ 0 °. O
ataque regra da mão direita deste plano (α s ) é então dada por α d - 90
°.
Cálculo do rake de slickenline
Para uma falha com estriações, o ângulo de inclinação aparente da
estriação ( ϕ a ) foi medido na superfície da falta a partir da direção 090
° ou 270 ° do traço da superfície do núcleo dividido (Figura F14 ). A
orientação da falha foi medida conforme descrito acima. Contanto
que v n e v c sejam vetores unitários normais para as superfícies centrais
de falha e divisão, respectivamente, o vetor unitário da linha de
interseção ( v i ) é perpendicular a ambos v n e v c (Figura F16 ) e é,
portanto, definido como segue:
vEu= ⎛⎝⎜euEumEunEu⎞⎠⎟= vn × v c| vn × v c|, νi=limini=νn × νcνn × νc,

Onde
vc= ⎛⎝⎜100⎞⎠⎟ eνc=100 , and

vn × v c= ⎛ ⎝⎜⎜⎜⎜⎜⎜⎜⎜∣∣∣mnnn00∣∣∣∣∣∣nneun01∣∣∣∣∣∣eunmn10∣∣∣⎞⎠⎟⎟⎟⎟
⎟⎟⎟⎟= ⎛⎝⎜0nn- mn⎞⎠⎟ .νn × νc= mn0nn0nn0ln1ln1mn0=0nn-mn .

Figura F16 Ancinho de estriações.

Conhecendo o golpe da regra da mão direita do plano de falta (α s ), o
vetor unitário ( v s ) em direção a essa direção é então
vs= ⎛⎝⎜cosαspecadoαs0⎞⎠⎟ .νs=cos⁡αssin⁡αs0 .

O ângulo de inclinação da linha de interseção ( ϕ i ) medido a partir da

direção da batida é dado por
ϕ=cos−1(νs × νi), ϕ=cos-1⁡νs × νi,

Porque
νs × νi=|νs||νi|cosϕi=cosϕi,∴|νs|=|νi|=1.νs × νi=νsνicos⁡ϕi=cos⁡ϕi,∴νs=νi=1.

O ângulo de inclinação da estria ( ϕ ) da direção de ataque é ϕ i ± ϕ a ,

dependendo da direção a partir da qual a inclinação aparente foi
medida e na direção de mergulho da falta. ϕ a deve ser subtraído
de ϕ i quando o plano de falha mergulha em direção ao oeste e ϕ a foi
medido na direção superior ou 090 ° ou quando o plano de falha
mergulha na direção leste e ϕ a foi medido na parte inferior ou 090 °
direção (Figura F16 ). Por outro lado, ϕ a deve ser adicionado
a ϕ iquando o plano de falha mergulha para o oriente e φ uma foi medido
a partir da parte superior ou 270 ° ou direcção quando o plano de falha
mergulha para o ocidente e φ uma foi medido a partir de qualquer parte
inferior ou 270 ° direcção.

Base de dados estrutural J-CORES

O banco de dados J-CORES é um programa usado para armazenar uma
descrição visual (macroscópica e / ou microscópica) das estruturas
centrais em um determinado índice de seção. Durante a Expedição
370, apenas os locais de características estruturais e orientações
calculadas no referencial central foram inseridos no banco de dados J-
CORES, e o gerenciamento de dados de orientação e a análise de tecido
planar foram feitos com uma planilha conforme descrito acima.

Análise petrográfica e mineralógica

Slides de smear
As lâminas de smear foram produzidas esfregando uma pequena
quantidade (~ 0,1 cm) de amostra em uma lâmina de vidro usando um
palito de dentes, dispersando a amostra em água corrente e, em
seguida, secando-a em uma chapa quente. Após a secagem, foi
adicionado adesivo óptico e um vidro de cobertura foi colocado no
topo. O adesivo foi curado sob radiação UV.
A localização da amostra para cada lâmina de difamação foi inserida no
banco de dados J-CORES com um código de amostra de SS. A
descrição da lâmina de smear seguiu a folha mostrada na
Figura F17 ; um esquema que combinava com os recursos dos
cientistas de bordo. A descrição da lâmina de esfregaço focou
principalmente no fornecimento de descrição litológica para o
componente de granulação fina e rochas de lama. Imagens
microscópicas de lâminas de esfregaço estão disponíveis em
SMEARSLD em material suplementar .

Figura F17 Folha de descrição do slide de smear.

Seções finas
Secções finas foram retiradas apenas do núcleo semiconsolidado ou
consolidado. Secções finas foram preparadas para análises mais
intensivas de componentes minerais não passíveis de difração de raios
X (DRX) e para observar microestruturas e tecidos petrográficos,
particularmente rochas ígneas de grãos finos. Uma seção de 30 µm × 2
cm × 3 cm foi usada para cada seção delgada. As seções finas foram
polidas e observadas em luz transmitida usando um microscópio de
polarização Zeiss Axioskop AX10 equipado com uma câmera digital
Nikon DS-Fi1. Em alguns casos, a contagem de pontos foi realizada
para obter informações quantitativas sobre as fases minerais e as fases
minerais autigênicas em particular. Imagens microscópicas de seções
finas estão disponíveis em THINSECT em material suplementar .

Difração de raios X
O objetivo principal da análise de XRD foi estimar as porcentagens de
peso relativo do total de minerais de argila, quartzo, feldspato e calcita
em amostras de sedimentos a granel. Material para XRD foi obtido a
partir de 10 cm 3de amostra que também foi utilizado para a
fluorescência de raios-X (XRF) e carbonato de análises. Todas as
amostras foram secas a vácuo, esmagadas com um moinho de bolas e
montadas em pó a granel orientadas aleatoriamente. Análises de rotina
de pós a granel foram concluídas usando um difratômetro PANalytical
CubiX3 recém-adquirido. Este sistema foi usado no Chikyu desde o
Expedition 365. As configurações do instrumento foram as seguintes:

 Tensão do gerador = 45 kV.

 Corrente do tubo = 40 mA.
 Ânodo do tubo = Cu.
 Comprimento de onda = 1,540598 Å (Kα1) e 1,544426 Å (Kα2).
 Ângulo de partida = 2 ° 2θ.
 Ângulo final = 60 ° 2θ.
 Passo espaçamento = 0,005 ° 2θ.
 Tempo de etapa de digitalização = 1,27 s.
 Velocidade de varredura = 0,50134 ° 2θ / s.
 Fenda divergente = 1/4 fixo.
 Monocromador usado = sim.
 Comprimento irradiado = 10 mm.
 Faixa de varredura = 2 ° - 60 ° 2θ.
 Tipo de digitalização = contínuo.

Para manter o máximo de consistência possível com os resultados

anteriores obtidos nas expedições do IODP Nankai Trough Sismogenic
Zone Experiment (NanTroSEIZE), processamos os dados digitais
usando o MacDiff 4.2.5 ( http://www.ccp14.ac.uk/ccp/web-
espelhos / krumm / html / software / macdiff.html ). As
funções incluídas encontram a linha de base, contagens suaves e
correção da posição do pico usando o pico de quartzo a 3.343 Å. Os
limites superior e inferior para cada pico de diagnóstico foram
ajustados manualmente seguindo as diretrizes da Expedition 319
Scientists (2010).
Cálculos de abundância mineral relativa utilizaram curvas de regressão
que foram geradas a partir de análises de misturas minerais padrão,
com todos os valores normalizados para 100%. Isto segue um
procedimento geral descrito pela primeira vez em Fisher e Underwood
(1995). As misturas em pó para o Nankai Trough são as mesmas que as
relatadas por Underwood et al. (2003): quartzo (arenito de São Pedro),
feldspato (albita rica em Ca), calcita (giz de Chipre), esmectita
(montmorilonita-Ca), ilita (Sociedade Mineral de Argila IMt-2, polipé
2M1) e clorita (Argila Mineral). Sociedade CCa-2). Os padrões foram
executados três vezes e as correlações para cada mineral estão entre a
área média do pico e a porcentagem do peso. As seguintes equações
polinomiais fornecem os ajustes estatísticos, onde X = área de pico
e r = coeficiente de correlação
Total clay minerals=5.0314+0.0072495(X)−1.919E–
7(X2), r=0.923;Total clay minerals=5.0314+0.0072495X-1.919E–
7X2, r=0.923;

Quartz=−1.1695+0.00037795(X)−1.2198E–10(X2), r=0.991;Quartz=-
1.1695+0.00037795X-1.2198E–10X2, r=0.991;

(E14)

Feldspar=0.96439+0.00052385(X)+4.2326E–
9(X2), r=0.990;Feldspar=0.96439+0.00052385X+4.2326E–
9X2, r=0.990;

(E15)

Calcite=−1.9208+0.00082643(X)+2.3405E–9(X2),r=0.997;Calcite=-
1.9208+0.00082643X+2.3405E–9X2,r=0.997;

(E16)

Os erros médios (porcentagem de peso calculada menos o percentual

de peso real) para as misturas minerais padrão são os seguintes:

 Argila mineral total = 3,3%.

 Quartzo = 1,9%.
 Feldspato = 1,1%.
 Calcita = 1,7%.

Valores de abundância relativa para espécimes naturais, no entanto,

devem ser interpretados com alguma cautela. Um dos problemas
fundamentais com qualquer método XRD de pó a granel é a diferença
no pico de resposta entre minerais pouco cristalinos em ângulos de
difração baixos (por exemplo, minerais de argila) e minerais altamente
cristalinos em ângulos de difração maiores (por exemplo, quartzo e
plagioclásio). O conteúdo mineral de argila é melhor caracterizado pela
medição da área do pico, enquanto a intensidade do pico pode ser mais
precisa para quartzo, feldspato e calcita. Analisando agregados
orientados de frações do tamanho de argila aumenta reflexões basais
dos minerais de argila, mas essa abordagem é demorada. Para
assembleias minerais de argila em pós a granel,T4 ). O clorito não
contribui contagens para esse pico composto; portanto, espécimes
naturais com alto teor de clorito produzirão erros maiores. Essa fonte
de erro também se aplica às misturas minerais padrão. Outras fontes
de erro incluem a contaminação de padrões minerais por impurezas
como quartzo e zeólitas (por exemplo, o padrão de ilita contém ~ 20%
de quartzo) e diferenças de cristalinidade entre padrões e minerais
naturais de argila.
Tabela T4 Picos de XRD característicos para análise
semiquantitativa. Faça o download da tabela no formato .csv.
Na avaliação final, as abundâncias minerais calculadas relatadas aqui
devem ser consideradas como porcentagens relativas dentro de um
sistema de quatro componentes de minerais argilosos + quartzo +
feldspato + calcita. O quão perto essas estimativas se assemelham a
suas porcentagens absolutas dentro do volume total de sólidos depende
da abundância de sólidos amorfos (por exemplo, opala biogênica e
vidro vulcânico) e do total de todos os outros minerais que ocorrem em
menor ou menor quantidade. Para a maioria das amostras naturais do
Local C0023, a diferença entre a abundância relativa calculada e a
porcentagem de peso absoluto é provavelmente entre 5% e 10%.

Fluorescência de raios X
Os materiais do núcleo foram submetidos a espectrometria
quantitativa de XRF de rocha total para análise dos principais
elementos (Na, Mg, Al, Si, Fe, P, K, Ca, Ti e Mn). As análises de XRF
foram realizadas em divisões de amostras usadas para XRD. Todas as
amostras foram secas e trituradas antes da análise, juntamente com
amostras para XRD.
Preparou-se uma esfera de vidro a partir de aproximadamente 1 g de
pó de amostra antes da análise. As análises foram realizadas usando
um espectrômetro Supermini XRF (Rigaku) com um tubo de raios X de
ânodo de 200 W Pd operado a 50 kV e 4 mA. Os padrões de rocha do
Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia Industrial Avançada foram
usados para calibração do espectrômetro XRF, usando correções de
matriz dentro do software de operação. Os resultados foram relatados
como óxido por cento em peso (Na 2 O, de MgO, Al 2 O 3 , SiO 2 , P 2 O 5 ,
K 2 O, o CaO, TiO 2 , MnO, e Fe 2 O 3 ). Os resultados de XRF estão
disponíveis em XRF emMaterial suplementar .

Tomografia computadorizada de raios X

Durante a Expedição 370, a avaliação preliminar da qualidade do
núcleo foi realizada usando imagens de TC de raios-X. A varredura
para avaliação preliminar foi feita imediatamente depois de dividir o
núcleo em seções. As seções do WRC foram examinadas para evitar a
destruição das principais características geológicas e distúrbios de
perfuração (Figura F18 ).

Figura F18. Fotografias e imagens de tomografia computadorizada de

raios X de perturbações de perfuração.
Também foram utilizadas imagens de TC de raios X para identificar
características estruturais e sedimentares tridimensionais, como tocas
de bioturbação, planos de acamamento, falhas, veios minerais e assim
por diante, e também para inferir litologias em intervalos onde a
descrição do núcleo visual não era possível porque Núcleo foram
tomadas como amostras WRC para análise IW ou análises
microbiológicas.
Nossos métodos seguiram os do manual de medição preparado pelo
CDEX (Tomografia Computadorizada por Raios-X, Versão 3.00; 24 de
março de 2015) e utilizados em expedições anteriores (por exemplo,
Expedições Integradas nos Programas de Perfuração Oceânica 337 e
348). O instrumento de TC de raios-X do Chikyu é um Discovery CT
750HD (GE Medical Systems) capaz de gerar trinta e duas imagens de
0,625 mm de espessura a cada 0,4 s, o tempo de uma revolução da
fonte de raios X ao redor da amostra. Os dados gerados para cada
núcleo consistem em planos normais de eixo central de valores de
atenuação de raios X com dimensões de 512 × 512 pixels. Os dados
foram armazenados no servidor como arquivos formatados em
Imagem Digital e Comunicação em Medicina (DICOM). Os arquivos
DICOM foram reestruturados para criar imagens 3-D para
investigações adicionais.
A teoria por trás da tomografia computadorizada por raios-X tem sido
bem estabelecida por meio de pesquisas médicas e é descrita
resumidamente aqui. A intensidade de raios X varia em função do
comprimento do caminho de raios X e do coeficiente de atenuação
linear (LAC) do material alvo:
I=I0×e−μL,I=I0×e-μL,

(E17)

Onde

 I = intensidade de raios X transmitida

 I 0 = intensidade inicial de raios X
 µ = LAC do material alvo e
 L = comprimento do percurso de raios X através do material.

A LAC é um índice físico sobre a redução do feixe de raios X durante a

tradução dos materiais alvo. A LAC é conduzida a partir da relação
entre as propriedades físicas dos materiais-alvo (isto é, composição
química, densidade e estado). A medida básica de atenuação, ou
radiodensidade, é o número CT dado em unidades de Hounsfield (HU):
CT number=[(μt−μw)/μw]×1000,CT number=μt-μw/μw×1000,

(E18)

Onde

 µ t = LAC para o material de destino e

 µ w = LAC para água.

A distribuição dos valores de atenuação mapeados para uma fatia

individual compreende os dados brutos que são usados para
processamento de imagem subseqüente. Sucessivas fatias 2-D geram
uma representação dos valores de atenuação em pixels 3-D referidos
como voxels. Os padrões analíticos utilizados durante a Expedição 370
foram ar (número CT = -1000), água (número CT = 0) e alumínio
(2477 <número CT <2487) em um modelo de núcleo de acrílico. Todos
os três padrões foram executados uma vez por dia após a calibração do
ar. Para cada análise padrão, o número CT foi determinado para
uma área de 24,85 mm 2 em coordenadas fixas próximas ao centro do
cilindro.
Fator de qualidade central usando o número CT
O principal fator de qualidade (CQF) é uma medida da qualidade do
núcleo recuperado que é calculada usando dados adquiridos durante a
tomografia de raios X. Foi medido em cada seção usando-se arquivos
DICOM digitalizados por tomografia computadorizada de raios X com
imagens de cortes de 0,625 mm de espessura. O processo de medição
do CQF neste relatório é o seguinte. Primeiro, selecionamos uma região
circular de interesse de 30 a 50 mm de diâmetro no centro da fatia,
dependendo do diâmetro do núcleo. Um histograma do número de
pixels com um determinado número de CT foi examinado para
identificar o material representativo dentro da seção; o número CT do
material representativo cria um pico no histograma, e 70% do número
representativo de CT no pico foi usado como o limiar para diferenciar
áreas intocadas e de alta qualidade de áreas danificadas. Quando a
relação entre a área de alta qualidade e a área total foi superior a
0,99, a fatia era considerada como uma “fatia de alta qualidade”. Isso
era repetido para cada fatia da seção. Finalmente, a porcentagem de
fatias de alta qualidade para o número de todas as fatias da seção foi
medida como a pontuação do CQF. Esses cálculos foram realizados
utilizando o software ImageJ (Schneider et al., 2012).
Número médio de CT
Para caracterizar os principais materiais constituintes das amostras do
núcleo, o número médio de CTs de cada fatia foi medido com uma fatia
de 10 mm de diâmetro x 0,625 mm de espessura, tomada no centro da
fatia. Arquivos DICOM das fatias foram processados usando ImageJ.
Área de alta CT
Um perfil de áreas com números CT distintamente altos foi feito para
mostrar a distribuição de minerais com maior densidade, como pirita,
rodocrosita e barita. Dentro de cada imagem de fatia de 0,625 mm,
selecionamos uma área circular de 30 a 50 mm de diâmetro no centro
de uma fatia, dependendo do diâmetro do núcleo. Dentro da área
selecionada, a área fracionária que possui números de CT> 3000 foi
calculada usando ImageJ. O cálculo foi realizado para cada imagem da
fatia e, em seguida, apresentado como um perfil de profundidade.
Microscopia Eletrônica de Varredura
Microscopia eletrônica de varredura (SEM) e espectrometria de
energia dispersiva (EDS) usando um microscópio eletrônico JEOL
no Chikyu foi usado para observação detalhada e detecção de minerais
para algumas amostras selecionadas. As observações foram de
natureza qualitativa e limitadas principalmente à morfologia de cristais
e grãos, com dados limitados sobre a abundância elementar relativa
obtida. Os dados do SEM-EDS estão disponíveis em SEM em material
suplementar .

Paleomagnetismo
Investigações paleomagnéticas durante a Expedição 370 foram
projetadas principalmente para determinar as direções remanescentes
características para estabelecer a magnetostratigrafia e reorientar os
núcleos para a análise estrutural. Para atingir esses objetivos, medições
paleomagnéticas foram realizadas em metades de arquivo e amostras
de cubos discretos. É essencial conhecer os principais componentes de
magnetização para estimar a magnetostratigrafia. Para obter esses
dados, primeiro os componentes de magnetização secundária
precisavam ser desmagnetizados. As metades de arquivo foram
desmagnetizadas com um sistema de desmagnetização de amostras
2G600 acoplado a um SRM. Para amostras discretas, a
desmagnetização por campo alternado (AF) foi usada. Após a
desmagnetização, as medições SRM foram realizadas em metades de
arquivo, e as medições do magnetômetro giratório foram realizadas em
amostras discretas. Direção paleomagnética (declinação, inclinação e
intensidade magnética) foi gerada usando essas
medidas. Procedimentos detalhados e coordenadas de amostra são
descritos abaixo.

Instrumentos de laboratório
A blindagem magnética é particularmente importante para proteger os
núcleos do ruído magnético durante a medição. O laboratório de
paleomagnetismo no Chikyu é uma sala magneticamente protegida
(7,3 m × 2,8 m × 1,9 m), na qual o campo magnético total interno é de
~ 1% do campo magnético da Terra. A sala é orientada com seu longo
eixo transversal ao longo eixo da nave e abriga um SRM e outros
instrumentos magneticamente sensíveis. A sala é grande o suficiente
para lidar confortavelmente com uma seção central IODP padrão (~
150 cm de comprimento).
Magnetômetro de rocha supercondutora
O sistema SRM de núcleo longo (2G Enterprises, modelo 760) tem ~ 6
m de comprimento com um diâmetro de acesso de 8,1 cm que permite
a medição de um núcleo dividido de 1,5 m de comprimento. O SRM
possui três conjuntos de bobinas de partida supercondutoras, duas
para medição de momento transversal ( eixos x e y ) e um para
medição de momento axial ( eixo z ) (Figura F19 ). O nível de ruído do
magnetômetro é <10 −7 A / m para 10 cm 3rock volume. Um sistema de
desmagnetização de amostras 2G600 é acoplado ao SRM para permitir
a desmagnetização automática AF de amostras até 100 mT. O sistema é
controlado por um computador externo e permite programar uma
sequência completa de medições e ciclos de desmagnetização sem
remover o núcleo longo do suporte. Durante a Expedição 370, o
intervalo de medição foi de 2,5 cm. As metades de arquivo foram
desmagnetizadas a 10 e 20 mT para permitir a desmagnetização
adicional durante a análise de pós-conversão. Devido a limitações de
tempo, as amostras do coletor central e as seções do núcleo <10 cm de
comprimento não foram medidas. Metades de arquivo mais profundas
do que o Core 370-C0023A-84R foram desmagnetizadas a 20 mT e
foram medidas por técnicos de laboratório.

Figura F19. Sistema de orientação de núcleos, amostras discretas e

SRM.
Magnetômetro giratório
Um magnetômetro giratório, modelo SMD-88 (Natsuhara Giken Co.,
Ltd.), está disponível no Chikyu para medição de magnetização
remanente de amostras discretas. O nível de ruído é ~ 5 × 10 −7 mAm 2 e
a faixa mensurável é de 5 × 10 −6 a 3 × 10 −1 mAm 2 . Durante a expedição
370, foram utilizados dois tamanhos diferentes de porta-amostras para
a medição fraca (1 x 10 -5 ~ 1 x 10 -2 MAM 2 ) e forte (1 × 10 -4 ~ 1,0
MAM 2 ) amostras, respectivamente. Cinco amostras padrão com
diferentes intensidades foram preparadas para calibrar o
magnetômetro. Amostras no padrão 7 cm 3 Os cubos de Natsuhara
foram medidos em três ou seis posições com empilhamento típico de
64–256 rotações.
Desmagnetizador de campo alternado
O desmagnetizador DEM-95 AF (Natsuhara Giken Co., Ltd.) equipado
com um sistema de rotação de amostras foi ajustado para a
desmagnetização AF de amostras discretas padrão (AF máximo = 180
mT). Depois de medir a magnetização remanente natural (NRM), as
amostras foram desmagnetizadas em etapas a 10 e 20 mT para decifrar
dados paleomagnéticos. Algumas amostras perto de características
estruturais foram desmagnetizadas usando até 80 mT.

Amostras discretas e coordenadas de amostra

Amostras cúbicas discretas (~ 7 cm 3 ) foram tomadas, uma por seção, a
partir das metades de trabalho, a fim de determinar a direção
paleomagnética para a magnetostratigrafia e a reorientação dos
núcleos. O espaçamento real dependia das propriedades e condições do
material do núcleo (por exemplo, evitando vazamentos, distúrbios de
núcleo, etc.). Amostragem paleomagnética concentrada principalmente
na lama hemipelágica (ou argilito) como litologia dominante. Em
alguns casos, amostras foram tomadas perto de características
estruturais para auxiliar na reorientação das características. Amostras
da litologia dominante foram desmagnetizadas até 20 mT, e amostras
próximas a características estruturais foram desmagnetizadas até 80
mT. A orientação de amostras discretas é mostrada na Figura F19 .
Magnetostratigrafia
A polaridade magnética foi determinada com base no sinal de
inclinação das amostras discretas após a desmagnetização de AF a 20
mT. Para algumas amostras discretas, foram realizadas etapas
adicionais de desmagnetização de AF (0, 10, 20, 30, 40, 60 ou 80
mT). As parcelas de Zijderveld (Zijderveld, 1967) foram inspecionadas
visualmente quanto ao comportamento da magnetização remanescente
após a desmagnetização. Direções de magnetização remanentes
(primárias) estáveis de amostras discretas foram ajustadas usando
análise de componentes principais (PCA) (Kirschvink, 1980), e a
inclinação obtida foi usada para a determinação da polaridade do
campo paleomagnético. As idades dos intervalos de polaridade usados
durante a Expedição 370 foram da escala de tempo da polaridade
geomagnética 2012 (Gradstein et al., 2012) (Tabela T5 ).
Tabela T5 Escala de tempo da polaridade geomagnética. Faça o
download da tabela no formato .csv.

Processamento de dados
Os dados das metades de arquivo e amostras discretas foram salvos nos
formatos de arquivo DAT e TXT e carregados no banco de dados J-
CORES por técnicos de laboratório de bordo. A redução de dados
(gráficos de desmagnetização de Zijderveld e projeções de área igual)
foi conduzida usando o software de visualização Progress, programado
por H. Shibuya (Universidade de Kumamoto, Japão). Este software
também permite PCA (Kirschvink, 1980).

Propriedades físicas
Medições de propriedades físicas contínuas fornecem parâmetros
cruciais necessários para identificar unidades litoestratigráficas, para
correlacionar dados de reflexão sísmica com medições e descrições
discretas do núcleo e para caracterizar o habitat de comunidades
microbianas do subsolo. Uma variedade de técnicas e métodos foram
usados em amostras do núcleo do Expedition 370. Antes da
amostragem e interpretação, foram capturadas imagens de TC de raios
X para todos os núcleos. Após a realização das tomografias com raios
X, mediu-se a densidade de GRA, MS e NGR utilizando o MSCL-W
(Geotek, Ltd., Londres, Reino Unido) para análise de todo o ciclo. Após
as medições MSCL-W e divisão de núcleo, a digitalização digital de
imagens de fotografias utilizando o MSCL-I e a digitalização de
espectrofotometria de cores utilizando o MSCL-C foram realizadas nas
superfícies divididas das metades de arquivo.Medidas de velocidade de
onda P e resistividade elétrica foram tomadas em amostras de cubos
discretos em x , y e z-direcionamentos para avaliação de anisotropia de
velocidade e resistividade. A umidade e densidade (MAD) foram
medidas em amostras discretas coletadas de WRCs para análise de gás
a bordo (amostras de gás comunitário [COMGAS]) e de metades de
trabalho. As análises de MAD fornecem informações sobre o conteúdo
de água, densidade do solo, porosidade, taxa de vazios e densidade de
grãos. As medidas de recuperação de tensão anelante (ASR) foram
realizadas em 15 WRCs para avaliar a orientação e a magnitude do
estresse principal atual de 3-D. Além das medições de propriedades
físicas em amostras de núcleo, as medições de temperatura in situ
foram realizadas usando o APCT-3. Detalhes e procedimentos para
cada medição são descritos abaixo.

MSCL-W
Densidade de atenuação de raios gama
A densidade a granel é usada para avaliar o volume de poros em
sedimentos, o que fornece informações sobre o estado de
consolidação. O GRA baseia-se na detecção de um feixe de raios gama
durante a sua passagem pelo sedimento. O feixe, produzido por
uma fonte de raios gama 137 Cs de 137 Cs dentro de um escudo de chumbo
com um colimador de 5 mm, foi dirigido através de WRCs. O detector
de raios gama inclui um cintilador e um tubo fotomultiplicador integral
para registrar os raios gama que passam pelo WRC. A densidade
aparente do GRA (ρ b ) foi calculada como
ρb=ln(I0/I)/μd,ρb=ln⁡I0/I/μd,

(E19)

Onde

 I 0 = intensidade da fonte de raios gama

 I = intensidade medida dos raios gama que passam pela amostra,
 µ = coeficiente de atenuação de compton e
 d = diâmetro da amostra.

O coeficiente de atenuação Compton (μ) e intensidade da fonte ( I 0 )

foram tratados como constantes, de modo ρ bpodem ser calculados a
partir de I . O detector de raios gama foi calibrado com um núcleo de
calibração selado (um revestimento de núcleo padrão preenchido com
água destilada e cilindros de alumínio de vários diâmetros). Para
estabelecer as curvas de calibração, as contagens de raios gama foram
medidas através de um cilindro padrão de 7 cm de diâmetro composto
de alumínio com seis diâmetros diferentes (1-6 cm) (densidade = 2,7 g
/ cm 3 ) preenchidos com água circundante. A relação entre eu e µ d é
 ln(I)=A(μd)+B,ln⁡I=Aμd+B,

(E20)

onde A e B são coeficientes determinados a partir da experiência de

calibração. Medidas de densidade GRA em amostras de núcleo foram
realizadas a cada 4 cm por 4 s. A resolução espacial é de 5 mm.
Suscetibilidade Magnética
MS é o grau em que um material pode ser magnetizado por um campo
magnético externo. Portanto, a MS reflete a composição do
sedimento. Um sensor Bartington de 8 cm de diâmetro foi utilizado
para medir a EM. Um circuito oscilador no sensor produz um campo
magnético alternado não-saturado de baixa intensidade (~ 80 A / m,
raiz quadrada média) (0,565 kHz). Essa freqüência de pulso foi
convertida em MS. A resolução espacial do sensor de loop é de 23 a 27
mm. Dados MS foram coletados a cada 4 cm ao longo do núcleo.
Radiação gama natural
As medições de NGR fornecem informações sobre a composição do
sedimento e, portanto, podem ser usadas para identificar litologia. As
WRCs são monitoradas para emissões de NGR para obter variabilidade
espacial na radioatividade. A medição NGR emprega contadores
blindados de chumbo acoplados opticamente a um tubo
fotomultiplicador e conectados a uma base de polarização que fornece
energia de alta tensão e um pré-amplificador de sinal. Dois sensores
horizontais e dois verticais são montados em um alojamento em forma
de cubo de chumbo. O sistema NGR registra decaimento radioativo
de 40 K, 232 Th e 238U e tem uma resolução de 120-170 mm em termos de
comprimento do núcleo. As medições foram realizadas a cada 16 cm
com um tempo de contagem de 30 s. Ruído de radiação de fundo foi
determinado tomando medições em um núcleo de calibração
preenchido com água. Dois padrões de isótopos radioativos ( 133 Ba
e 60 Co) foram usados para calibração de energia e ajuste das janelas de
detecção espectral.

Condutividade térmica
A taxa na qual o calor flui através de um material depende da
condutividade térmica e depende das composições, porosidade e
estrutura minerais e fluidas. A condutividade térmica foi medida em
amostras de sedimentos e rochas usando a sonda de agulha de espaço
total (Von Herzen e Maxwell, 1959) ou a fonte de linha de meio espaço
(Vacquier, 1985), que se aproxima de uma fonte de linha infinita. Em
sedimentos não consolidados, onde uma sonda poderia ser inserida no
núcleo sem fraturar o sedimento, a sonda de agulha de espaço total foi
inserida nos WRCs através de um orifício perfurado no revestimento
central. Quando a força sedimentar impedia o uso da sonda de espaço
total, a sonda de meio espaço era usada na metade de trabalho
dividida. Para sedimentos consolidados, a sonda de meio espaço foi
colocada diretamente na superfície dividida com água do mar usada
para fornecer um bom contato.
Todas as medições foram feitas após os núcleos terem se equilibrado à
temperatura ambiente (isto é, ~ 24 ° C). No início de cada medição, a
temperatura no núcleo era monitorada para garantir que a variação
térmica fosse <0,4 mC / min (normalmente dentro de 1 a 2
minutos). Depois que ficou estabelecido que a temperatura estava
perto do equilíbrio, uma fonte de calor calibrada foi aplicada e o
aumento na temperatura foi registrado por ~ 80 s. Os valores de
condutividade térmica foram baseados no aumento da temperatura
observado para uma determinada quantidade de calor. A agulha de
espaço total e as sondas de linha de meio espaço foram calibradas pelo
menos uma vez a cada 24 h. A calibração foi realizada em amostras
Macor de condutividade térmica conhecida (1,611 ± 2% W / [m · K] e
1,652 ± 2% W / [m · K] para as sondas de espaço total e meio espaço,
respectivamente).

Velocidade de onda P
A velocidade discreta da onda P foi medida com o registrador de
ondas- P (Geotek, Ltd., Londres, Reino Unido) em amostras cúbicas (~
2 cm × 2 cm × 2 cm) cortadas das metades de trabalho. As amostras
cúbicas orientadas foram embebidas em solução de NaCl a 35 and e
giradas manualmente para medir as velocidades dos
eixos x , y e z (Figura F20 ). O registrador P- Wave está equipado com
dois transdutores de 230 kHz, um usado como transmissor e um como
receptor. Comprimento da amostra ( L) foi medido com um sensor de
distância a laser. Durante a medição, a amostra foi colocada entre os
transdutores e mantida no lugar com uma força constante. O
transmissor foi conectado a um gerador de pulsos e o receptor foi
conectado a um osciloscópio sincronizado com o gerador de pulsos. O
tempo total de viagem da onda P ( t ) para a primeira chegada foi
escolhido e registrado a partir do sinal do osciloscópio exibido
digitalmente. A velocidade em qualquer direção (por exemplo, V Px ) foi
calculada a partir do comprimento da amostra (por exemplo, L x ),
tempo total de viagem ( t x ) e tempo de retardo calibrado pelo sistema
( t atraso ):
VPx=Lx/(tx−tdelay).VPx=Lx/tx-tdelay.

(E21)
Figura F20. Quadro de referência central para amostragem de
propriedades físicas.
Anisotropia horizontal de velocidade ( A vh ) e anisotropia vertical de
velocidade ( A vv ) foram calculadas usando as seguintes equações:
Avh=200[(VPx−VPy)/(VPx+VPy)], andAvh=200VPx-VPy/VPx+VPy, and

(E22)

Avv=200[(VPx+VPy)/2−VPz]/[(VPx+VPy)/2+VPz],Avv=200VPx+VPy/2-
VPz/VPx+VPy/2+VPz,

(E23)

onde V Px , V Py e V Pz são a velocidade em cada direção axial.

As medições de rotina do CQ foram realizadas a cada 24 h, medindo a
velocidade nos padrões de vidro e acrílico com comprimentos e
velocidades conhecidos.

Impedância elétrica
A impedância elétrica foi medida com um analisador de impedância de
precisão Agilent 4294A usando o método da ponte com dois eletrodos
para amostras cúbicas ou um eletrodo de quatro pinos para sedimentos
não consolidados.
Para o sedimento consolidado a partir do qual uma amostra cúbica
poderia ser feita, o cubo orientado foi colocado entre dois eletrodos de
aço inoxidável cobertos com papel de filtro saturado com água do
mar. A magnitude (| Z |) e a fase (θ) da impedância complexa foram
medidas a 25 kHz entre as faces opostas do cubo. O cubo foi girado
para medir a impedância nas direções x, y e z (Figura F20 ). A
resistividade eléctrica para cada direcção (por exemplo, R x ) foi
calculado a partir da impedância complexa medido ao longo de cada
direcção (por exemplo, x ) e as dimensões das amostras definidas pela
cara comprimento ( L ):
Rx=(|Zx|cosθ−|Zf|cosθf)×(Ly×Lz/Lx)/100,Rx=Zxcos⁡θ-
Zfcos⁡θf×Ly×Lz/Lx/100,

(E24)
onde | Z f | cosθ f é a resistência dos filtros de papel e L x , L y e L z são os
comprimentos das direções triaxiais. Outros valores de resistividade
no y - e z -directions ( R y e R z ) são descritos pela mesma equação.
Anisotropia horizontal de resistividade elétrica ( A rh ) e anisotropia
vertical de resistividade elétrica ( A rv ) foram calculadas usando as
seguintes equações:
Arh=200(Rx−Ry)/(Rx+Ry), andArh=200Rx-Ry/Rx+Ry, and

(E25)

Arv=200[(Rx+Ry)/2−Rz]/[(Rx+Ry)/2+Rz],Arv=200Rx+Ry/2-
Rz/Rx+Ry/2+Rz,

(E26)

onde R x , R y , e R z são resistividade eléctrica em cada direcção axial.

De modo a contabilizar as variações de temperatura, entre 23,5 e 24,4 °
C no laboratório, os dados de resistividade são representados como
fator de formação aparente, que é a razão entre a resistividade do
sedimento e a resistividade da água do mar na mesma temperatura:
Fx=Rx/Rf,Fx=Rx/Rf,

(E27)

onde F x é o fator de formação aparente no sentido x e R f é a

resistividade da água do mar padrão à temperatura ambiente como
mencionado abaixo. A relação entre R f e de temperatura ( t ) é dada
por (Shipley, Ogawa, Blum, et al., 1995):
Rf=1/(2.8+0.1T).Rf=1/2.8+0.1T.

(E28)

Os fatores de formação aparente para os sentidos y e z ( F y e F z ) foram

derivados pela mesma relação.
Fator de formação de rocha a granel ( F bulk ) é definido como
Fbulk=Rbulk/Rfluid,Fbulk=Rbulk/Rfluid,

(E29)

onde R bulk é o valor médio da resistividade triaxial descrito como

Rbulk=(Rx2+Ry2+Rz2)1/2Rbulk=Rx2+Ry2+Rz21/2

(E30)
e o fluido R é a resistividade da água do mar padrão (Shipley, Ogawa,
Blum, et al., 1995).
A calibração foi necessária antes da medição e a cada 24 horas ao usar
o instrumento continuamente. Para calibração, a ponte de dois
eletrodos foi levada para estados abertos e curtos. Um disco anexo
padrão foi aplicado à calibração com a tampa não-condutiva em um
estado aberto e também sem a tampa em um estado curto.
Para os sedimentos não consolidados, a impedância complexa foi
medida usando o analisador de impedância com um arranjo de quatro
pinos consistindo de quatro eletrodos espaçados de 7,5 mm. O array foi
inserido diretamente na direção y da metade de trabalho (Figura F20 )
e medido a impedância complexa (magnitude [| Z |] e fase [θ]) a 25
kHz, a partir da qual a resistividade elétrica é calculada:
Ry=|Zy|cosθy/dr,Ry=Zycos⁡θy/dr,

(E31)

onde d r depende da geometria da matriz de eletrodos e foi

determinada a cada 24 h comparando a impedância medida com uma
solução de água do mar padrão da Associação Internacional de
Ciências Físicas dos Oceanos (IAPSO) (35 g / L NaCl) de uma
conhecida impedância elétrica. O fator de formação no eixo y ( F y ) foi
calculado a partir das Equações E27 e E28 .

Medições de umidade e densidade

Amostras discretas de núcleos de meio trabalho e de WRCs coletadas
para análise de gás a bordo foram usadas para determinar as
propriedades do índice (densidade do solo, densidade do grão,
densidade seca, teor de água, porosidade e taxa de vazios). As
propriedades do índice foram determinadas a partir de relações de
fase, medições de massa em amostras úmidas e secas, medições de
volume em amostras secas e correções para salinidade. Em geral, uma
amostra discreta (~ 8 cm 3 ) adjacente a amostras de cubo
para medições de onda- P e impedância elétrica foi coletada de cada
seção central para a determinação das propriedades do índice. Os
intervalos de amostragem foram ajustados para obter amostras
homogêneas minimamente perturbadas.
As massas úmidas e secas foram medidas usando um sistema de
balança eletrônica emparelhado, que é projetado para compensar o
empuxo do navio. Uma massa padrão de valor semelhante à amostra
foi colocada no balanço de referência para aumentar a precisão. A
massa da amostra foi determinada com uma precisão de ± 0,005 g. O
sistema de balanceamento foi calibrado pelo menos uma vez por 12 h.
Para minimizar a dessecação, a coleta de amostras de MAD foi seguida
imediatamente pela medição da massa de sedimento úmido
( M úmido ). Após as medições úmidas M , as amostras foram secas em estufa
de convecção a 105 ° ± 5 ° C por 24 h. As amostras secas foram
colocadas num exsicador durante pelo menos 1 h para equilibrar a
temperatura ambiente (~ 24 ° C), e depois a massa do sedimento seco
( M seco ) e o volume do sedimento seco ( V seco ) foram medidos. Um
pentagrama de cinco câmaras de quantacromo foi usado para
medir V seco com uma técnica de deslocamento de hélio, com precisão de
± 0,04 cm 3.. O sistema de cinco câmaras permitiu a medição de quatro
volumes de amostra e uma esfera de calibração. Cada volume medido é
a média de cinco medições de volume. A esfera de calibração foi girada
entre todas as câmaras de medição para monitorar erros em cada
câmara. O picnômetro foi calibrado pelo menos uma vez por 24 h.
Práticas ODP / IODP padrão foram usadas para determinar a massa e
volume de água dos poros, massa e volume de sal e massa e volume de
grãos sólidos (Blum, 1997). A partir destes dados, a densidade
aparente, a densidade seca, a densidade de grãos, a porosidade e a
razão de vazios foram calculadas (Blum, 1997) como descrito abaixo. A
densidade padrão da água do mar (1,024 g / cm 3 ), a salinidade (35
partes por mil [ppt]) e uma densidade salina constante (2,22 g / cm 3 )
foram assumidas para todos os cálculos.

Teor de água
Teor de água ( W c ) foi determinada seguindo a American Society for
Testing and Materials (ASTM) D2216 padrão (ASTM International,
1990). Correções são necessárias para o sal ao medir o teor de água de
amostras marinhas. Em adição ao cálculo do conteúdo de água no
D2216 ASTM (ou seja, a proporção de massa de fluido de poros à
massa seca do sedimento; W c [seco]), que também calculada a
proporção de massa de fluido de poro para o total de massa da amostra
( W c [molhado] ). As equações para o teor de água são
Wc(dry)=(Mwet−Md)/(Md−sMwet), andWcdry=Mwet-Md/Md-sMwet, and

(E32)

Wc(wet)=(Mwet−Md)/Mwet(1−s),Wcwet=Mwet-Md/Mwet1-s,

(E33)

Onde

 M úmido = massa total da amostra discreta,

 M d = massa da amostra seca e
  s = salinidade (constante adimensional assumida em 0,035).

Densidade aparente
Densidade a granel é a densidade de uma amostra central discreta
(ρ b = M úmida / V t ). A massa total da amostra húmida ( M húmida ) foi
medida imediatamente após a recolha de cada amostra discreta
utilizando o sistema de equilíbrio duplo. O volume total de amostra
assumindo 100% de saturação ( V t = V g + V pw ) foi determinada a
partir da medição picnómetro de volume de grão ( V g ) e o volume
calculado de água dos poros ( V PW ). O volume de grãos sólidos e poros
foi determinado como
Vg=Vd−(Mwet−Md)s/ρsalt(1−s), andVg=Vd-Mwet-Mds/ρsalt1-s, and

(E34)

Vpw=(Mwet−Md)/ρsw(1−s),Vpw=Mwet-Md/ρsw1-s,

(E35)

Onde

 V d = volume seco
 ρ sal = densidade do sal e
 ρ sw = densidade padrão da água do mar.

Porosidade e taxa de vazios

A porosidade ( ϕ ) relaciona o volume dos poros ao volume total da
amostra; razão de vazios ( e ) relaciona o volume de poros com o
volume de grãos sólidos. Eles são calculados como
ϕ=ρbVpw/Mwet, andϕ=ρbVpw/Mwet, and

(E36)

e=Vpw/Vg.e=Vpw/Vg.

(E37)

Densidade de Grão
Densidade de grãos (ρ g ) foi determinado a partir de medições de
massa seca e volume seco feita com o equilíbrio e o picnómetro,
respectivamente. Massa e volume foram corrigidos para sal, rendendo
ρg=(Md−Msalt)/{Vd−(Mwet−Md)s/[ρsalt(1−s)]},ρg=Md-Msalt/Vd-Mwet-
Mds/ρsalt1-s,
(E38)

onde a densidade do sal (ρ sal ) é assumida como constante em 2,22 g /

cm 3 .

MSCL-I: logger de imagens de fotos para

metades de arquivamento
Imagens digitais de núcleos de arquivo-meio foram adquiridas por uma
câmera de varredura de linha equipada com três dispositivos de carga
acoplada. Cada dispositivo de carga acoplada tem 2048 matrizes. A luz
refletida da superfície do núcleo é dividida em três canais (vermelho,
verde e azul [RGB]) por um divisor de feixe dentro da câmera de
varredura de linha e detectado pelo dispositivo de carga acoplada
correspondente. Os sinais são combinados e a imagem digital é
reconstruída. Uma correção é feita para quaisquer pequenas diferenças
mecânicas entre as respostas do dispositivo de carga acoplada. Uma
calibração é realizada antes de escanear cada núcleo para compensar a
variação de resposta de pixel a pixel, iluminação irregular e efeitos de
lente. Depois que as cores preto (RGB = 0) e branco (RGB = 255) forem
calibradas com f-stop de f / 16, a luz será ajustada para ter uma escala
de cinza adequada de RGB = 137 a uma f-stop de f / 11 . A distorção
óptica foi evitada pelo movimento preciso da câmera. Resolução
espacial é de 100 pixels / cm. Um gráfico branco e um cartão em tons
de cinza foram digitalizados como medições de CQ durante a
digitalização de cada seção. Aproximadamente a cada 20 cm de
intervalo de uma seção foi escaneada para produzir vários arquivos de
imagem deste instrumento, e então todas as imagens relevantes foram
mescladas para produzir uma imagem inteira da seção. Resolução das
imagens obtidas noChikyu é de 300 dpi. Imagens mescladas foram
processadas por correção gama no valor de 1,4 usando um arquivo de
lote para alterar o brilho. As imagens foram processadas pelo Adobe
Photoshop para ajustar os valores RGB da escala de cinza para cerca de
100, 100 e 100, respectivamente.

MSCL-C: espectroscopia de cor para metades

de arquivo
O sistema MSCL-C equipado com um espectrofotômetro colorido
(Konica-Minolta, CM-2600d) foi usado para medir a refletância de
cores de seções centrais divididas. O espectrofotômetro se move sobre
cada seção e desce para entrar em contato com a superfície do núcleo
do arquivo dividido a cada 4 cm de intervalo para coletar dados de
cores. A luz refletida é coletada na esfera de integração do
espectrofotômetro de cores e dividida em comprimentos de onda no
passo de 10 nm (400-700 nm). O espectro de cores é então
normalizado pela luz da fonte da refletância e calibrado com a medição
de um padrão branco puro. O espectro de cores medido é normalmente
convertido em leveza (L *) e variáveis de cromaticidade a * eb * (para
detalhes, ver Blum, 1997). O valor L * representa a luminosidade, do
preto (L * = 0) ao branco (L * = 100). O valor a * representa a mudança
de cor de verde puro (a * = −127) para vermelho puro (a * = 127) e o
valor b * representa a mudança de cor de amarelo puro (b * = −127)
para azul puro (b * = 127). Estes parâmetros podem fornecer
informações sobre mudanças relativas na composição do material a
granel que são úteis para analisar a correlação estratigráfica e
características litológicas e ciclicidade.

Medições de temperatura in situ

Medidas diretas da temperatura in situ são críticas para definir
transporte, diagênese e atividade microbiana em sedimentos
marinhos. Durante a Expedição 370, a medição de temperatura in situ
foi realizada usando o APCT-3 (Heesemann et al., 2006), que foi
equipado com o calço central HPCS para medir as temperaturas in situ
no poço. O APCT-3 é composto por três componentes: eletrônica,
hardware de núcleo e software de computador
( http://iodp.tamu.edu/tools/pdf/apct3.pdf ). As medições de
temperatura in situ foram realizadas durante o encurtamento curto de
HPCS entre 189,3 e 407,6 mbsf. O sensor foi calibrado para uma faixa
de trabalho de -5 ° a 50 ° C.
A eletrônica se encaixou em um sapato de corte especial, que foi
baixado até o fundo do mar e disparado na formação. Para equilibrar
com a temperatura do fundo do mar, o sapato de corte foi mantido na
linha de lama por ~ 10 minutos antes de disparar. Após o disparo,
demora ~ 10 min para o sensor se equilibrar com a temperatura in situ
da formação. Bombas de lama precisavam estar desligadas durante o
equilíbrio da temperatura. Fotografar o cano na formação
normalmente causa um rápido aumento de temperatura devido ao
aquecimento por fricção. Depois disso, a temperatura muda com o
tempo para se equilibrar em direção à temperatura de formação. A
temperatura foi medida como uma série temporal com uma taxa de
amostragem de 1 s. Os dados de temperatura foram registrados em um
microprocessador dentro da ferramenta de fundo; Quando a
ferramenta foi recuperada, os dados foram baixados em um
computador.
As temperaturas in situ são extrapoladas das medições de APCT-3
durante aproximadamente 10 min, utilizando o programa TP-Fit
desenvolvido por Heesemann et al. (2006), que inclui o efeito de
geometria 3-D e a dependência do processo de difusão térmica em
propriedades térmicas (por exemplo, condutividade
térmica). Heesemann et al. (2006) relataram que o tempo exato de
penetração da ferramenta é virtualmente impossível de prever a
priori. Isso ocorre porque a penetração real (e, portanto, o
aquecimento por atrito) ocorre de maneira complicada, enquanto o
modelo assume o aquecimento por atrito instantâneo. Praticamente, o
deslocamento de tempo relativo à penetração é estatisticamente
determinado para minimizar o desajuste entre as medidas e o
modelo. As incertezas globais nas temperaturas de equilíbrio são
estimadas em 0,1 ° a 0,2 ° C (por exemplo, Kinoshita et al., 2015).
Se a transferência de calor for por condução e o fluxo de calor for
constante, o gradiente térmico será inversamente proporcional à
condutividade térmica, de acordo com a lei de Fourier. Essa relação
pode ser linearizada pela plotagem da temperatura como uma função
da resistência térmica cumulativa (Bullard, 1939):
T( z) =T0+ q∑Ni = 0( Δ zEuk ( z)Eu) ,Tz=T0+q∑i=0NΔzikzi,

(E39)

Onde

 T = temperatura
 z = profundidade
 T 0 = temperatura no fundo do mar
 q = fluxo de calor,
 ∑Ni = 0( Δ zEuk ( z)Eu)∑i=0NΔzikzi= resistência térmica,
 k = condutividade térmica e
 N = número de medições de condutividade térmica.

Na prática, q e T 0 são estimados pela representação gráfica de T ( z )

contra resistência térmica cumulativa. Usando o gráfico de
temperatura versus resistência térmica cumulativa, podemos fazer uma
avaliação da consistência do fluxo de calor com a
profundidade. Assumindo que o fluxo de calor é constante com a
profundidade, a temperatura de formação é estimada pelo produto do
fluxo de calor e resistência térmica à profundidade de interesse.

Análise de recuperação de tensão anelástica

A técnica ASR é uma medida de estresse baseada no núcleo que pode
avaliar tanto a orientação quanto a magnitude do estresse principal
atual em rocha em 3-D. A abordagem do ASR é medir a mudança da
tensão anelástica, liberando o estresse logo após a recuperação do
núcleo. A metodologia utilizada para a medição de ASR durante a
Expedição 370 é baseada em Matsuki (1991), seguindo as diretrizes
descritas em Lin et al. (2007). Uma secção WRC não perturbada com
cerca de 15 cm de comprimento foi seleccionada para a medição de
ASR através da verificação da imagem de tomografia por raios-X. As
medições de MSCL-W não foram realizadas nas amostras de ASR
porque a medição é sensível ao tempo e requer instrumentação assim
que o núcleo é recuperado da subsuperfície para capturar a
recuperação de tensão inicial. As amostras WRC para medição ASR
foram empurradas para fora de seus revestimentos,
As cepas anelásticas mostradas pela forma elíptica dos corpos de prova
em nove direções, incluindo seis direções independentes, foram
medidas usando extensômetros de 18 fios (6 medidores cruzados e 6
medidores únicos). Nos casos em que algumas fraturas se
desenvolveram no espécime, as fraturas foram coladas para evitar que
a amostra se dividisse em pedaços. Levou de 1 a 2 h para montar 18
medidores de tensão, e o tempo total decorrido logo após o núcleo no
convés foi de 2 a 4 h antes de começar a registrar a recuperação da
deformação. As amostras do núcleo foram duplamente ensacadas (com
plástico e alumínio) e submersas em banho-maria termostático, onde
as mudanças de temperatura foram mantidas controladas a 22 ° ± 0,1 °
C durante a medição. Os valores da cepa foram coletados a cada 10 min
por pelo menos 5 dias.

Geoquímica inorgânica
Dados geoquímicos inorgânicos, em particular perfis sedimentares de
PI, fornecem informações essenciais sobre a disponibilidade de
reagentes metabólicos e a abundância de produtos metabólicos. Esses
dados são usados para identificar e quantificar as taxas de reações
biogeoquímicas. Além disso, reações abióticas, alteração mineral (por
exemplo, transformação de esmectita para ilite ou precipitação de
carbonatos authigênicos) e fluxo de fluido advectivo podem ser
identificados usando perfis de espécies dissolvidas.
Durante a Expedição 370, amostramos a IW para uma ampla gama de
análises químicas e isotópicas a bordo e em terra. Também coletamos
"squeeze cakes" (resíduos de sedimentos após extração de água porosa)
e outras amostras em fase sólida de metades de trabalho para análises
de espécies químicas orgânicas e inorgânicas.

Coleta de água intersticial

Recolhemos amostras IW espremendo amostras WRC em
espremedores de titânio (87 mm de diâmetro) modificados após o
espremedor de aço inoxidável de Manheim e Sayles (1974). As WRCs
foram selecionadas com base na análise de imagens por tomografia
computadorizada de raios X para evitar horizontes com fraturas e
distúrbios e variaram em comprimento de 10 a 80 cm, dependendo da
recuperação central, da litologia e do volume de IW desejado. A
frequência espacial da amostra variou tipicamente entre 1 e 2 por 10
m. Após o corte, as WRCs foram colocadas em uma bolsa de luvas
inundadas com nitrogênio, onde foram limpas do fluido de perfuração,
e os espremedores foram preenchidos com sedimentos, lavados com
nitrogênio e fechados. Realizamos esse procedimento em um saco de
luvas para minimizar a oxidação de espécies sensíveis ao oxigênio,
como Fe 2+ e H 2 S / HS - .
Nós cuidadosamente removemos a camada externa de sedimento com
uma faca de cerâmica para minimizar a contaminação da amostra IW
pela água do mar e fluido de perfuração. Inicialmente, removemos ~ 3
mm do lado de fora do núcleo e aumentamos para 5 mm após o Core
370-C0023A-54R (715 mbsf) porque descobrimos uma variação no
sulfato dissolvido que, baseado em um modelo de difusão, poderia ser
explicado por difusão do sulfato fluido no interior do núcleo. Depois do
Core 83R, aumentamos ainda mais essa remoção da camada externa
para 7 mm. A espessura do material removido do WRC foi medida com
um paquímetro. Para WRCs com fraturas internas, todas as superfícies
de fratura foram limpas para a profundidade de raspagem do alvo.
Aplicamos uma força de até 30.000 libras aos espremedores usando
uma prensa hidráulica de laboratório da Carver. Essa força máxima foi
escolhida para evitar a desidratação do mineral argiloso. Um
subconjunto selecionado de WRCs de baixo volume foi primeiro
espremido a 30.000 libras e espremido a 60.000 libras para aumentar
o rendimento total do volume de IW. Titulações de clorinidade foram
realizadas em água extraída em ambas as forças, no caso de pressões
mais altas causaram o resfriamento da amostra.
Os espremedores foram enxaguados com água de 18 MΩ e
completamente secos com ar comprimido antes de cada utilização. O
IW foi passado através de um filtro de 3 µm Advantec 13 100% alfa
algodão celulose pré-lavado (com 18 MΩ de água) montado acima de
uma tela de titânio dentro do espremedor e coletado em uma seringa
plástica lavada com ácido de 24 mL. O IW expresso foi ent extrudido
atrav de um filtro descartel de politetrafluoroetileno (PTFE) hidrofilico
de Millipore Millex-LH de 0,45, encaixado na ponta da seringa num
frasco de polietileno de alta densidade lavado com ido
(HDPE). Recuperamos entre 0,5 e 33 mL de água.
Determinamos volumes de alíquotas para as várias análises baseadas
no rendimento. Alíquotas para análises de sulfeto e ferro foram
tomadas primeiro em uma caixa com nitrogênio para minimizar a
oxidação desses analitos. Veja a Tabela T6 para uma lista de alíquotas
coletadas para análises em terra.
Tabela T6. Amostras de IW para análises não embarcadas. Faça o
download da tabela no formato .csv.

Análise intersticial da água

Salinidade
Usamos um refratômetro Atago RX-5000i para determinar a
salinidade. Água do mar padrão IAPSO e água de 18 MΩ foi usada para
calibração. O desvio padrão da medição diária da água do mar padrão
da IAPSO é equivalente a 0,4 mg / kg de salinidade.
Alcalinidade
Medimos a alcalinidade imediatamente após a extração, exceto para as
amostras 370-C0023A-27R-1, 40,0-65,0 cm, através de 54R-1, 6,0-
36,0 cm, que foram analisadas dentro de 7 dias da coleta, período em
que realizamos modificações no método. Além disso, as amostras 21R-
2, 10.0–32.0 cm, 22R-8, 122.0–147.0 cm, 25R-6, 0.0–31.0 cm e 26R-1,
65.0–97.0 cm, foram reavaliadas usando o método modificado 15–16
dias. após a coleta da amostra. A alcalinidade foi determinada por
titulação de Gran com um autotitulador Titrino básico Metrohm 794 e
um eléctrodo de pH de vidro. Volumes de IW entre 0,3 e 3,0 mL foram
titulados com 0,1 ou 0,01 M HCl nominal a 25 ° C. Os volumes totais
titulados foram feitos para 3,0 mL com uma solução de KCl a 0,7
M. Um Na 2 CO 3 100 mMsolução foi utilizada para a calibração
semanal do ácido. As verificações de qualidade foram realizadas duas
vezes por dia, utilizando uma solução de 50 mM de Na 2 CO 3 para a
HCl 0,1 M ou 1: 3 padrão diluída IAPSO para o HCl 0,01 M. Os desvios
padrão foram 0,5 mM ( N = 15) e 0,09 mM ( N = 33),
respectivamente. Dosagem ácida durante a parte linear da titulação
Gran foi ou 8 ou 12 etapas. Para todas as amostras acima mencionadas
que foram executadas com o método de alcalinidade modificada com
HCl 0,01 M, o número de etapas foi 12, o que aumentou a precisão e
cobriu de forma mais eficaz a faixa de tensão de 220-240 mV.
Carbono inorgânico dissolvido
Determinamos a concentração de carbono inorgânico dissolvido (DIC)
com um sistema analisador de carbono infravermelho inorgânico
(AIRICA) automatizado da Marianda, uma ferramenta de terceiros
fornecida pelo Laboratório de Geobiologia da Escola de Pós-Graduação
em Oceanografia da Universidade de Rhode Island (EUA). O sistema
AIRICA consiste de um módulo de seringa, um distribuidor de
decapagem de amostras e um analisador LI-COR LI-7000 CO 2 /
H 2 O. Uma amostra ou padrão de IW foi acidificada no decapante com
três cursos de 50 µl de ácido fosfórico a 10%. O CO 2 foi retirado da
amostra com N 2 e seco usando uma série de dois tubos Perma Pure
Nafion e uma câmara de resfriamento antes da medição da absorção de
infravermelho devido ao CO 2 . A absorção foi integrada eo total de
CO2 de uma amostra foi calculada com base na comparação com o
padrão usando a lei de Beer-Lambert. Uma única determinação
consistiu em três injeções separadas de 1 mL de amostra ou
padrão; cada injeção foi precedida por duas lavagens de 1,1 mL do
decapante. A absorção integrada da primeira injeção foi descartada
para evitar o transporte, e os dois restantes foram calculados para
calcular a concentração de DIC. Amostras de IW foram diluídas de
forma variável com água de 18 MΩ arejada.
O padrão de laboratório para DIC foi o material de referência
certificado (CRM) Batch 156 de água do mar preparado no Marine
Physical Laboratory, Scripps Instituição de Oceanografia (EUA). O DIC
total no padrão é ensaiado por lote. O lote 156 tem uma concentração
de DIC de 2,099 mM. O padrão foi analisado no início de uma
execução analítica e foi subsequentemente analisado a seguir a cada
cinco amostras para restringir o desvio do instrumento. Todos os
padrões e amostras foram executados em duplicado. A média retificada
do lote de CRM 156 de água do mar de cada corrida analítica diária foi
usada para determinar a concentração.
A concentração de DIC foi calculada usando a seguinte equação:
D I C = ( As um m p l e/ As t a n d uma r d) ×2,099mM, DIC=Asample/Astandard×
2.099 mM,

(E40)

onde uma amostra e um padrão são a média integrada de Beer-Lambert

CO 2 absorções da amostra e padrão, respectivamente. A incerteza é
dada como o erro padrão da média com base no desvio padrão
agrupado (0,052 mM) de duplicatas.
Cloreto
A concentração de cloreto foi determinada pela titulação de AgNO 3 de
100 µL de IW. Todas as amostras foram analisadas em
duplicado. Usamos um autotitrator Titrino básico Metrohm 794 e um
eletrodo Metrohm Ag. O AgNO 3 titulante era nominalmente de 0,01 M.
Os resultados de cromatografia iónica demonstram que as
concentrações de brometo de não variam o suficiente para afectar as
concentrações de cloreto calculados. A padronização foi baseada em
análises replicadas do IAPSO Batch P157 (salinidade = 34.994; cloreto
= 559.2 M na temperatura típica medida em laboratório [21.5 °
C]). Relatamos o erro padrão da média como 0,052 mM com base nos
desvios padrão agrupados das análises duplicadas.
Sulfato e Brometo
Determinamos sulfato e brometo com um cromatógrafo iônico Dionex
ICS-2100. O forno da coluna foi ajustado a 30 ° C. A solução eluente foi
hidróxido de potássio 40 mM. Uma diluição de 1: 200 de IW com 18,2
MΩ de água desionizada foi analisada. Alíquotas de um padrão (IAPSO
Batch 157, salinidade = 34.994) foram usadas em todos os lotes
analíticos. Em cada lote, cada amostra diluída foi analisada duas
vezes. Um padrão IAPSO foi analisado após cada quinta análise.
As concentrações relatadas baseiam-se nas razões medidas para cloreto
(SO 4 2− / Cl ou Br / Cl) e cloreto de titulação, pois esse método remove
as variações causadas pelas mudanças dependentes da temperatura no
volume injetado e na diluição da amostra. As razões da área medida do
padrão variam ligeiramente com o tempo durante uma corrida
analítica (deriva) e com a área do pico de cloreto. A deriva foi corrigida
por diminuir o padrão IAPSO medido que foi analisado após cada
quinta análise, e a sensibilidade ao cloreto foi contabilizada usando o
padrão IAPSO diluído em várias extensões.
Os valores são relatados como anomalias percentuais em razões para
Cl - normalizadas para as taxas padrão IAPSO medidas e conforme as
concentrações descritas anteriormente (Expedition 329 Scientists,
2011). Anomalias de sulfato e brometo, simbolizadas por ΣSO 4 e ΣBr,
são a diferença percentual na razão X / Cl - (em que X = SO 4 2− ou Br - )
da amostra em relação à razão do padrão IAPSO:
ΣX=[(Rsample/RIAPSO)−1]×100,ΣX=Rsample/RIAPSO-1×100,

(E41)

Onde
Rsample/RIAPSO=(X/Cl−)sample/(X/Cl−)IAPSO.Rsample/RIAPSO=X/Cl-
sample/X/Cl-IAPSO.

(E42)

Apresentamos as anomalias, uma vez que são medidas com uma

precisão muito elevada e são independentes da diluição no laboratório
e in situ. Por exemplo, as reações de desidratação podem levar a um
gradiente de sulfato, mas não afetam a anomalia.
Os desvios padrão dos padrões de desvio foram 0,03 mM para SO 4 2− e
0,003 mM para Br. Isso foi semelhante aos desvios padrão agrupados
das amostras duplicadas. Com base nisso, relatamos a incerteza como o
erro da média para a média de análises duplicadas, 0,02 mM para
SO 4 2− e 0,002 mM para Br - .
As concentrações de sulfato e brometo (mM) foram calculadas a partir
de razões para Cl - e cloreto de titulação (mM) com as seguintes
fórmulas:
X=(Rsample/RIAPSO)×(Cl−)titration×(X/Cl−)sw,X=Rsample/RIAPSO×Cl-
titration×X/Cl-sw,

(E43)

onde (SO 4 2- / Cl - ) sw = 5,173 x 10 -2 e (Br - / Cl - ) sw = 1,543 x 10 -3 .

Amônio
O amônio dissolvido foi determinado colorimetricamente utilizando
um espectrofotômetro automático (analisador discreto SEAL Analytical
AQ2). O AQ2 possui uma sonda de amostragem com uma seringa
acionada por motor de passo, uma lâmpada de quartzo-halogênio, uma
cubeta de fluxo contínuo (50 µL) e um fotodiodo. O procedimento
analítico é baseado na espectroscopia de absorção do azul de
indofenol. O azul de indofenol é formado pela reação de amônio com a
diazotização do fenol e subsequente oxidação do composto diazo pelo
hipoclorito de sódio. Amostras e reagentes são levados em segmentos
de reação com a sonda de amostragem e aquecidos a 37 ° C por 8 min
para melhorar o desenvolvimento da cor. Em seguida, a solução
colorida é transferida para a cubeta e sua absorbância é lida a 620
nm. Todas as operações, incluindo diluição de amostra,
desenvolvimento de cor, medição e cálculo, são automatizados e
controlados por software de operação. As concentrações foram
calculadas com base em uma curva padrão determinada antes de cada
corrida analítica. Um padrão de desvio foi executado a cada cinco
amostras. O desvio padr das anises replicadas do padr QC 0,071 mM
foi de 0,001 mM.
Nitrato
O nitrato dissolvido foi determinado colorimetricamente utilizando um
analisador discreto AQ2. O nitrato é feito reagir com cloreto de vanádio
(III), HCl, e um reagente de cor (sulfanilamida e dicloridrato de N-1-
naftil etilenodiamina), e a absorbância é medida com um
fotodiodo. Uma curva de calibração foi medida no início de cada
lote. Para as amostras rasas, o limite de concentração da curva de
calibração foi 71,25 µM, enquanto que este foi ajustado para as
amostras mais profundas para um menor intervalo de concentração
<17,81 µM. Um teste em branco foi realizado após o primeiro lote de
amostras, consistindo em cinco espaços em branco diferentes
(Tabela T7 ). Os resultados indicam que a coleta cuidadosa de
amostras e o armazenamento em frascos limpos com ácido não-nítrico
estabelecerão o limite de detecção da análise de nitrato a um valor
conservador de 10 µM.
Tabela T7 Concentrações em branco de nitratos. Faça o download
da tabela no formato .csv.

Sulfureto
As concentrações de sulfeto de hidrogênio (H 2 S, HS - ) foram
determinadas usando o método do azul de metileno baseado em
Fischer (1883) após Cline (1969). Como o sulfeto de hidrogênio é
volátil e oxida rapidamente para sulfato, usamos amostras de IW
derivadas de WRCs que foram preparadas para espremer em
uma bolsa de luva preenchida com N 2 . Depois de espremer, 0,5-1,0
mL de IW foram transferidos para 0,4 ou 0,6 mL de uma solução de
acetato de zinco (ZnAc) 0,05 M (fator de diluição = 1,4) para precipitar
o sulfeto como ZnS. As amostras foram armazenadas a 4 ° C até a
medição em lotes (no máximo 2 semanas após a amostragem) usando
um espectrofotômetro Hach DR 2800. As calibrações foram realizadas
para concentrações de até 1,5 mg / L de sulfeto usando uma solução de
Na 2 S · 9H 2O. Antes da análise, as amostras foram cuidadosamente
agitadas e pipetadas para cubetas semi-micro. Amostras de pequeno
volume foram diluídas 1: 2 com N 2 -bubbled solução ZNAC. Em
seguida, 15 uL de reagente de cor (0,4 g de N, N-dimetil-
1.4.phenylendiammonium-di-hidrocloreto em 100 mL de 30% v / v de
HCI) e 30 ul de catalisador (1,6 g FeCl 3 .6H 2 O em 100 mL de 30% v /
v HCl) foram adicionados e misturados com a solução IW / ZnAc. As
amostras foram medidas após 10-15 min a 670 nm de comprimento de
onda. Os limites de detecção e quantificação do método foram 0,2 e 0,4
µM, respectivamente.
Ferro ferroso
A determinação de Fe 2+ foi baseada em Stookey (1970) e realizada com
um espectrofotômetro Hach DR 2800. À medida que o Fe 2+ se oxida
rapidamente, as amostras foram retiradas das WRCs que foram
preparadas para serem espremidas em um saco de luvas preenchido
com N 2 . Para evitar a exposição ao ar ambiente, as seringas em que o
IW foi coletado também foram colocadas em uma estação de trabalho
inundada com N 2 para transferência de amostras anaeróbicas em
cubetas.
Todos os frascos utilizados para preparações de reagentes e padrão
foram lavadas com HCl diluído 1:20 e 18 mohms água antes da sua
utilização e todas as soluções foram preparadas com N 2 -bubbled 18
mohms água. Para a calibração até 1 mg / L de Fe 2+ , uma solução
padrão de FeSO 4 ? 7H 2 O e ácido ascórbico (C 6 H 8 O 6 ) em O 2 foi
preparado -livre 18 mohms água. O reagente de cor foi preparado a
partir de 0,25 g de ferrozina em 5 mL de 18 M de água. Alíquotas de
100-1000 µL de IW foram pipetadas para cubetas pré-preenchidas com
50 µL da solução de ferrozina. Acima de 540 mbsf, as amostras foram
geralmente diluídas 1:10 com N 2-bolhas de água do mar artificial, como
volume de amostra foi limitado. Após 5 a 10 min, as amostras foram
medidas a 565 nm (fotômetro zerado com 18 MΩ de água). Os limites
de detecção e quantificação foram 0,3 e 0,8 µM Fe 2+ , respectivamente,
para amostras diluídas.

Cátions principais
Determinamos os principais cátions (Na + , K + , Mg +2 e Ca +2 ) usando
um cromatógrafo de íons Thermo Scientific Dionex ICS-2100 equipado
com uma coluna analítica IonPac CS12 (4 mm × 250 mm; número de
peça 46073) com metanossulfônico eluente ácido. As concentrações
foram determinadas com base numa curva padrão feita a partir do
padrão IAPSO diluído de forma variável. As amostras foram diluídas 1:
200 ou 1: 400 com 18 M de água. Um grande volume de padrão IAPSO
diluído 1: 200 foi preparado como padrão de deriva e medido após
cada cinco análises para permitir a correção de deriva. A relação entre
a área do pico e a concentração de Na + do padrão foi linear dentro da
precisão da medição; no entanto, K + , Mg +2e a Ca+2 A sensibilidade da
área do pico dependeu da área do pico de Na + , presumivelmente
devido ao pico de dispersão associado com maiores concentrações
de Na + . Corrigimos este efeito criando uma curva de trabalho padrão
para as áreas de pico de K + , Mg +2 e Ca +2 como uma função da área de
pico de Na + .
Precisão baseada nos desvios padrão do padrão de desvio retificado
foram 0,4, 0,03, 0,2 e 0,03 mM para Na, K, Mg e Ca, respectivamente.

Elementos menores
Elementos menores (B, Ba, Fe, Mn, Sr, Li, Si e Al) foram analisados por
espectrometria de emissão atômica com plasma indutivamente
acoplado (ICP-AES) (Horiba Jobin Yvon ULTIMA 2). As amostras de
IW foram acidificadas com HCl 6 M e armazenadas a 4 ° C até a
medição num total de 5 lotes, em que a distribuição da amostra nas
diferentes sequências foi aleatória. Uma alíquota da amostra
acidificada foi diluída 1:20 com 0,15 M de HNO 3contendo 10 ppm de
ítrio (Y) como padrão interno de água. Uma solução estoque
multielementar foi preparada a partir de padrões primários ultrapuros
(SPC Science PlasmaCAL) e diluída com fatores de diluição de 100, 20,
10, 4, 2 e 1 com 0,15 M de HNO 3. As soluções resultantes foram ainda
diluídas 1: 8 com água do mar artificial isenta de sulfato para
corresponder à matriz da amostra. Finalmente, estes padrões de
trabalho foram diluas 1:20 antes de cada sequência utilizando o mesmo
M HNO Y contendo 0,15 3 solução como para as amostras reais. Uma
segunda solução multielementar preparada separadamente da solução
estoque de calibração foi usada como QC. Além disso, o terceiro padrão
de calibração foi executado como uma amostra adicional de
“verificação de desvio”. QC, verificação de deriva e um branco foram
medidos após cada grupo de cinco amostras de IW. Subtraímos as
médias das intensidades de branco das intensidades líquidas de todos
os padrões de calibração, amostras, QCs e verificações de deriva e
dividimos a razão da intensidade corrigida em branco de cada cátion
(Int X ) sobre a respectiva intensidade Y (Int Y) por declive m da linha de
regressão de calibração:
X=(IntX/IntY)/m,X=IntX/IntY/m,

(E44)

Onde
m=(IntX−CAL/IntY−CAL)/X.m=IntX-CAL/IntY-CAL/X.

(E45)

Desta forma, nós corrigimos a deriva dentro de uma sequência

analítica. No entanto, as concentrações de cátions calculados ainda
mostraram pequenas compensações entre os lotes. Portanto, usamos as
amostras de verificação de desvio para uma segunda correção dos
dados, onde multiplicamos todas as concentrações de elemento
derivadas de uma corrida com a respectiva razão da concentração de
verificação de desvio sobre a concentração média de verificação de
desvio para a sequência específica. Os limites resultantes de detecção e
quantificação e a precisão de cada cátion são dados na Tabela T8 . As
concentrações de boro do teste de qualidade derivadas de uma
sequência foram consistentemente 15% altas demais. A respectiva
informação é fornecida como observação para todas as amostras
afetadas na folha de resumo de dados.
Tabela T8. Limites de detecção e quantificação e recuperações de
elementos em solução de verificação de qualidade. Faça o download
da tabela no formato .csv.

Análise de gás headspace

Hidrogênio e Monóxido de Carbono Dissolvidos
Quantificamos as concentrações de H 2 e CO dissolvidas usando um
cromatógrafo a gás Peak Performer 1 (PP1) (GC), uma ferramenta de
terceiros fornecida pelo Laboratório de Geobiologia da Escola de Pós-
Graduação em Oceanografia da Universidade de Rhode Island
(EUA). Imediatamente após a tomografia computadorizada por raios X
do núcleo recuperado, foi identificado um intervalo central
minimamente perturbado de 5-10 cm adjacente à amostra WRC
dedicada a IW para amostragem COMGAS. O COMGAS WRC foi
amostrado usando uma seringa de plástico ou uma faca de cerâmica,
dependendo da dureza do sedimento. Dois tipos de amostras foram
coletadas para medidas de concentração de H 2 e CO: (1) duplicata 5
cm 3as amostras foram retiradas da parte interior do núcleo e (2) uma
amostra adicional foi retirada da borda exterior de todo o ciclo para
avaliar a potencial contaminação do fluido de revestimento da amostra
WRC. Duas amostras adicionais foram coletadas na área de corte
central imediatamente após a recuperação do núcleo para
complementar a avaliação da contaminação do fluido de revestimento:
(1) amostras de fluido de revestimento de 5 mL foram coletadas na
parte superior, média e inferior do núcleo, dependendo da
disponibilidade de fluido de revestimento e (2) 1–5 cm 3 de sedimento
foi raspado da borda do núcleo com uma faca de cerâmica em dois
cortes de oportunidade (isto é, cortes da seção do núcleo).
As amostras foram extrudidas em 20 mL de frascos de headspace de
vidro de borossilicato com tampas de rosca de septo e completamente
cheias com água de 18M. Foi tomado cuidado para encher os frascos
com a água de 18 MΩ antes de fechar para evitar qualquer
contaminação do ar. A água de 18 MΩ utilizada para esta análise foi
preparada em um único lote e analisada periodicamente para avaliar o
branco.
O método baseia-se na extração quase completa de H 2 e
CO dissolvidos em um volume de gás livre de H 2 /
CO definido . Usando uma seringa à prova de gás, com 1 cm 3 de azoto
(N 2 ) espaço superior de gás foi introduzida no frasco por meio de uma
agulha. O gás N 2 utilizado para a injeção de headspace foi retirado da
saída de bypass do PP1, garantindo assim baixo teor de H 2 e CO, pois
este gás passou por um catalisador que oxida H 2 e CO. Para evitar a
superpressurização do frasco de amostra durante a injeção de
headspace, uma quantidade equivalente de água foi deixada escapar do
frasco através de uma agulha separada. Em seguida, as amostras foram
armazenadas de cabeça para baixo por até 24 h para permitir H 2 e CO
se difundam para fora do IW e se equilibrem com o espaço de
topo. Antes da medição, os frascos foram misturados em vortex
durante 30 s para assegurar que o H 2 e CO dissolvidos estavam
concentrados no espaço de topo. Abordagens similares para
H 2 análises foram aplicado com sucesso durante integrados Oceano
perfuração Programa Expedições 322, 329 e 337 (expedição de 322
cientistas de 2010; Expedition 329 cientistas de 2011; Expedition 337
cientistas, 2013), e informações mais detalhadas sobre este método
pode ser encontrado em Lin et al. (2012).
A PP1 foi equipado com um circuito de amostra de 25 ul e calibrado
diariamente utilizando um 14,3 partes por milhão em volume (ppmv)
H 2 um padrão de gás de CO 14,2 ppmv de gás e padrão. Obteve-se uma
curva de calibrao de quatro pontos medindo os padrs utilizando
diferentes ansas de amostra de tamanho (10, 25, 50 e 100). Para
realizar uma medição, 500 µl de gás no headspace foram extraídos
usando uma seringa à prova de gás com uma agulha e injetados no
PP1. As concentrações medidas de H 2 e CO do espaço livre foram então
convertidas em concentrações molares de IW H 2 e CO usando as
seguintes equações:
nH2=XH2(Vheadspace/Vmolar), andnH2=XH2Vheadspace/Vmolar, and

(E46)

nCO=XCO(Vheadspace/Vmolar),nCO=XCOVheadspace/Vmolar,

(E47)

Onde

 n = número total de moles de (H 2 ou CO) na amostra (mol),

 X = fração molar de H 2 (ou CO) no gás do espaço livre (ppm,
obtido da análise por CG),
 V molar = volume molar do gás do espaço livre à temperatura do
laboratório (L / mol) e
 V headspace = volume do headspace (L).

Além disso,
[H2]IW=nH2(Vsed/ϕ) andH2IW=nH2Vsed/ϕ and

(E48)

[CO]IW=nCO(Vsed/ϕ),COIW=nCOVsed/ϕ,

(E49)

Onde

 [H 2 ] IW = concentração de H 2 dissolvida no IW (M),

 [CO] IW = concentração de CO dissolvido no IW (M),
 V sed = volume da amostra de sedimentos (L) e
 ϕ = porosidade do sedimento.
Cada amostra foi analisada em duplicado. O desvio padrão relativo
agrupado desses duplicados foi 65 e 26 nM para H 2 e CO,
respectivamente. Com base nisso, relatamos o erro padrão da média
como 46 e 19 nM para a média de cada par duplicado. Um experimento
de eficiência de extração de headspace foi realizado em duplicata antes
da campanha de medição e demonstrou que, em média, 87% do total
de H 2 dentro de cada amostra foi capturado no headspace. Corrigimos
esta recuperação incompleta de H 2 e CO no espaço de topo,
multiplicando as concentrações medidas por um fator de 1,15.
Amostras em branco processuais, frascos headspace unicamente
preenchidos com 18 M de água, foram preparados para cada amostra
WRC para análise de gás. O branco de procedimento associado a este
método apresentou uma média de 3,4 ± 0,6 nM para H 2 e 4,0 ± 0,2
nM para CO. O limite de detecção de concentração corrigida em
branco PP1 H 2 e CO (baseado em três vezes o desvio padrão do branco)
obtido usando este O protocolo foi de 0,6 nM H 2e 0,2 nM CO.
As concentrações de H 2 e CO no ar do laboratório foram monitorizadas
regularmente ao longo do período da campanha de medição.
Em paralelo ao método de extração para determinação
das concentrações de H 2 , também realizamos experimentos de
incubação onde as concentrações de H 2 foram monitoradas como uma
série temporal, similar aos experimentos conduzidos por Hoehler et
al. (1998). Amostras WRC de aproximadamente 5 cm de comprimento
tomadas a cada 100 m de núcleo foram dedicadas a experiências de
incubação. Dado o fluxo central determinado no laboratório, as
amostras WRC não puderam ser processadas imediatamente e,
portanto, foram armazenadas em sacos de N 2 a 4 ° C por algumas
horas antes da amostragem. Usando uma faca de cerâmica, uma
camada de 5 mm ao redor das bordas do WRC foi cuidadosamente
raspada. Após a raspagem, cerca de 60 cm 3 de sedimento foram
coletados e, posteriormente, dispersos em seis frascos de 20 mL do
espaço de cabeça (ou seja, 10 cm3 por frasco), fechado com tampas de
borracha butílica espessa e com tampa crimpada. Headspace frascos
foram exaustivamente lavados com ultrapura e 0,22 um filtrado N 2 de
gás, a fim de criar um O 2 -livre e H 2 fase livre de gás no interior dos
frascos. Três frascos foram misturadas com H 2 de gás para criar um H
100 ppm de 2 concentração de gás do espaço interno, ao passo que as
restantes três frascos foram mantidos N 2 corado. Além disso, seis
amostras em branco processuais compostos de N 2 frascos headspace -
flushed foram preparados. Três destes frascos foram similarmente
misturados com H 2gás para obter uma concentração de gás no espaço
livre de 100 ppm. Após análise do inicial H 2 concentração, as amostras
foram incubadas a estimativa da temperatura in situ, e
H 2 concentração foi monitorizada como uma série temporal. Para cada
ponto no tempo série, 500 uL gás de topo foi extraída a partir do frasco
usando uma seringa à prova de gás para medir H 2 concentração. O
volume extraído do gás de topo foi imediatamente substituída por um
volume igual de pura N 2 de gás para manter a pressão constante no
interior do frasco. Pretendemos continuar a incubação até que
a concentração de H 2 permaneça inalterada com o tempo, no qual
uma concentração de H 2 no estado estacionário é alcançada entre
H 2 produção e o consumo deO método de incubação descrito acima
pode ser usado para determinar H 2 dissolvido em estado
estacionárioconcentrações se dois requisitos são cumpridos: (1) o gás
do espaço interior está em equilíbrio com o H Dissolveu-se 2 no IW
sedimento e (2) a incubação das amostras no laboratório permite o
estabelecimento de um estado estacionário entre a produção e
consumo. O método de incubação foi originalmente desenvolvido para
monitorar H2concentrações em ambientes caracterizados por atividade
microbiana relativamente alta (por exemplo, sedimento superficial; ver
Hoehler et al., 1998). Nos sedimentos de subsuperfície profunda
recuperados do Hole C0023A, prevemos que as taxas metabólicas da
comunidade microbiana in situ podem ser algumas ordens de grandeza
mais baixas do que aquelas tipicamente observadas em ambientes
subsuperficiais rasos. Portanto, é questionável se um estado
estacionário pode ser alcançado dentro do prazo da expedição e se um
estado estacionário é alcançado, se é representativo das condições in
situ. Se nenhum estado estacionário tiver sido alcançado nas amostras
incubadas durante o período de tempo da expedição, o período de
incubação será continuado em terra.

Geoquímica orgânica
Os dados geoquímicos orgânicos de bordo fornecem informações
cruciais e complementares aos estudos geoquímicos microbiológicos e
inorgânicos, como o tipo e a quantidade de substratos orgânicos e
produtos de atividade microbiana. Estes permitem a identificação e
quantificação de vias metabólicas que ocorrem in situ. Análises de pós-
emissão de moléculas de biomarcadores orgânicos, tais como lipídios
de membranas microbianas e ácido dipicolínico em endosporos,
fornecerão informações adicionais sobre a composição e a escala de
comunidades microbianas bentônicas. Com temperaturas in situ
atingindo até 120 ° C, a alteração térmica da matéria orgânica
sedimentar é um processo geoquímico altamente relevante no Local
C0023 e será investigada com métodos como espectrometria de massa
com GC-pirólise (GC-MS).
Uma ampla gama de amostras de gás, fluidos e de fase sólida foram
coletadas para pesquisa a bordo e pós-crise (Tabela T9 ). Além disso,
amostras de controle foram levadas em conta para diferentes fontes
potenciais de contaminação, tais como a intrusão de fluido de
perfuração em núcleos de sedimentos e a liberação de orgânicos do
revestimento central de plástico a temperaturas elevadas. O programa
de amostragem de gás foi um esforço conjunto de geoquímicos
orgânicos, geoquímicos inorgânicos e microbiologistas e incluiu
amostras para análise a bordo de hidrocarbonetos (C 1 –C 4 ), H 2 e CO
(detalhado em geoquímica inorgânica ) e o traçador de fluido de
perfuração PFC. (veja Microbiologia ). Amostras de gás também
foram tomadas para análise pós-crise de δ13 C-CO 2e análise de isótopos
concentrados e estáveis de gases de hidrocarbonetos livres e
sorvidos. Amostras para análise de matéria orgânica dissolvida foram
coletadas de amostras de IW (ver geoquímica inorgânica ).
Tabela T9 Códigos de amostra coletados durante a amostragem de
gás e de fase sólida. Faça o download da tabela no formato .csv.

Análises de gases
Amostragem de gás
As investigações de bordo incluíram monitoramento de gás de
segurança e análise de gás de alta resolução em amostras WRC usando
protocolos ODP / IODP estabelecidos (Kvenvolden e McDonald, 1986;
Pimmel e Claypool, 2001). A amostragem foi realizada imediatamente
após a retirada do núcleo na área de corte do núcleo e logo que possível
após as seções do núcleo terem sido fotografadas por TC de raios X e
cortadas em WRCs. Geralmente este procedimento foi concluído
dentro de 1 hora após os núcleos terem chegado na área de corte
central. Além disso, amostras de grande volume foram ocasionalmente
retiradas de profundidades selecionadas e transportadas a bordo para
extração e amostragem de gases de hidrocarbonetos para análise de
isótopos específicos de posições póspedição e agregados.
Amostragem na área de corte central
Amostras centrais para monitoramento de gás de segurança e amostras
para controle de contaminação sensível ao tempo de H 2 , CO e PFC no
fluido de perfuração foram coletadas na área de corte central
imediatamente após a chegada do núcleo para evitar a perda de gases
durante o processamento do núcleo. O esquema de amostragem é
descrito na Figura F21 e os códigos de amostra são definidos na
Tabela T9 . Para monitoramento de gás de segurança,
aproximadamente 5 cm 3de sedimento foi coletado do coletor do núcleo
com uma seringa de corte para sedimentos macios a semiconsolidados
ou foi esculpido para fora do núcleo do sedimento com uma faca de
cerâmica ou cinzel quando o sedimento tornou-se mais litificado (mais
profundo que 360 mbsf no Furo C0023A). As amostras de sedimento
foram extrudidas ou colocadas num frasco de vidro de 21,6 mL
previamente pesadas (pré-misturado a 450 ° C durante 4 h) e
imediatamente seladas com um septo de silicone (prebaked a 100 ° C
durante 4 h) e tampa crimpada de metal (código de amostra HS). Essas
amostras foram coletadas do coletor central em vez do topo da Seção 1,
como foi feito durante as expedições anteriores (por exemplo,
Expedition 322 Scientists, 2010; Expedition 337 Scientists, 2013) para
preservar as seções centrais para tomografia por raios X . O controle de
contaminação compreendeu um conjunto de amostras para H 2e análise
de CO (amostra de código 370RGA3) e monitoramento de PFC (código
de amostra HSECDM) que foram retirados da parte externa do núcleo
de sedimentos, que estava em contato com o fluido de perfuração, bem
como um conjunto de amostras retiradas do fluido de perfuração
capturado no interior do forro de núcleo (código de exemplo LCL) para
controlo da contaminação microbiológica e química
(ver Microbiologia ), para a análise de PFC (código de exemplo
HSECD), e para ambos H 2 e CO análise (código de exemplo
370RGA4). Para análise de H 2 e CO, ~ 5 cm 3 de sedimento ou 5 mL de
fluido de perfuração foram colocados em um frasco de 20 mL
preenchido com água com baixo H 2 18 MΩ e armazenado de cabeça
para baixo (veja Geoquímica inorgânicapara uma descrição
detalhada de amostragem e análise). Para análise de PFC, ~ 2
cm 3 Microbiologiade sedimento ou 5 mL de fluido de perfuração foi
transferido para um frasco de vidro de 21,6 mL, 5 mL de água 18 MΩ
foram adicionados à amostra HSECD, e os frascos foram
imediatamente selados com um septo de silicone e tampa metálica
(verpara uma descrição detalhada de amostragem e análise). As
amostras LCL foram coletadas em tubos Falcon estéreis de 50 mL,
divididos em amostras pessoais na plataforma de processamento do
núcleo. Quando foram observados vazios nos núcleos HPCS e ESCS
devido à expansão dos gases durante a recuperação, amostras vazias de
gás foram coletadas na área central de corte. Gases vazios foram
coletados perfurando o revestimento central com uma ferramenta de
perfuração personalizada e permitindo que o gás se expandisse em
uma seringa de 60 mL à prova de gás conectada à ferramenta. Tanto a
seringa como a ferramenta de perfuração foram lavadas com hélio
antes da perfuração. Esta medida foi tomada para minimizar a
contaminação das amostras de gás vazio por ar para permitir a
determinação de concentrações in situ de CH 4 por meio de medição de
CH 4 / N 2 e N 2 / O 2 razões (Spivack et al., 2006). As amostras foram
então transferidas para frascos de headspace com tampa prensada
previamente preenchidos com uma solução saturada de NaCl para
análise a bordo de gases de hidrocarbonetos (código de amostra
VAC). Amostras de gás no vácuo para análise de pós-emissão de
isótopos estáveis de CO 2 (código de amostra 370AIVG), gases de
hidrocarbonetos (código de amostra 370FSVG) e isótopos agregados de
metano (código de amostra 370DTWVG) também foram coletados.

Figura F21. Esquema de amostragem para análises de gases.

Amostragem no deck de processamento do núcleo
Após a tomografia de raios X dos núcleos, foram coletadas amostras de
5 a 10 cm de comprimento da COMGAS WRC para análise de gás como
parte de um programa de amostragem complexo no qual amostras para
análises interdependentes estavam localizadas uma ao lado da
outra. Tipicamente, um WRC para análise de gás foi coletado adjacente
à amostra IW e próximo às amostras de microbiologia (MBIO1 e
MBIO2) (Figura F21 ).
Um total de 141 fatias COMGAS WRC foram tiradas, com uma amostra
média de COMGAS por 4 m de núcleo. De cada COMGAS WRC, as
seguintes amostras foram coletadas para análise de bordo (todas as
amostras foram coletadas no centro do WRC, a menos que indicado de
outra forma; ver também a Figura F21 ):

 Amostra de um ~ 5 cm 3 para análise de bordo de gases de

hidrocarbonetos de headspace (código de amostra 370HS), tratados
da mesma maneira que a amostra HS tirada na área de corte central
(consulte Amostragem na área de corte central ).
 Amostras de dois a 5 cm 3 para análise a bordo de H 2 e CO (códigos
de amostra 370RGA1 e 370RGA2) (ver geoquímica
inorgânica ); um ~ 5 centímetros 3 exemplo também foi feita a
partir da extremidade do núcleo para verificar a existência de
qualquer contaminação induzida pela perfuração (código de
exemplo 370RGA5). Estas amostras foram tratadas do mesmo
modo que as amostras de H 2 e CO análise feita na zona de corte do
núcleo (códigos de amostra 370RGA3 e 370RGA4)
(ver Amostragem em área de corte do núcleo ).

Para análise pós-expedição em terra, as seguintes amostras foram

coletadas:

 Um ~ 5 centímetros 3 amostra para δ 13 C de DIC (código de exemplo

370AIHS), que foi completamente preenchido com uma solução
saturada de NaCl, selado com uma rolha de clorobutilo cinzento
 macio, e friso tampado. Dentro ~ 2 h após a amostragem, uma
câmara de expansão artificial foi introduzido através da
substituição de 5 mL de solução de NaCl com puro CO 2 livre de
N 2 de gás; frascos foram armazenados em seguida de cabeça para
baixo a 4 ° C (cf. Inagaki et al., 2015).
 Dois ~ 5 centímetros três amostras para determinação de
concentrações e proporções de isótopos estáveis (ô 13C e δ 2 H) de
livre e sorvido C 1 -C 5 hidrocarbonetos (códigos de amostra
370FSHS1 e 370FSHS2). As amostras 370FSHS1 foram
armazenadas em 5 mL de uma solução de NaOH 1 M, tapadas com
uma rolha butílica pré-lavada (aquecida à ebulição com KOH 1 M
durante ~ 1 h e subsequentemente lavadas e deixadas imersas com
água nanopure durante a noite; cf. Oremland et al., 1987), e
congelado de cabeça para baixo a -20 ° C (cf. Hinrichs et al., 2006;
Ertefai et al., 2010). As amostras 370FSHS2 foram tratadas da
mesma maneira que as amostras 370AHHS.
 Uma amostra de ~ 60 cm 3 para o desenvolvimento de um novo
método para determinar as concentrações in situ de CH 4 (código de
amostra 370DTWWR2). A ~ 60 centímetros três amostras foi tomado
como uma fatia ~ 2 centimetros toda a volta (ou um volume
equivalente de grandes peças) da parte superior da amostra
COMGAS, selado em Escal película de barreira aos gases
(Mitsubishi Gas Chemical, Japão), e imediatamente congelado a -
80 ° C.
 O material remanescente do interior da amostra COMGAS foi
usado para análises de MAD a bordo (vide propriedades
físicas ), DRX, FRX e carbono total / carbono inorgânico (códigos
de amostra XRD, XRF e CARB) das fases sólidas (veja abaixo) e
descrição visual (ver Litoestratigrafia ).

Amostragem para análise isotópica específica de posição e

agregada
Uma amostra de 10–80 cm WRC foi coletada em intervalos de ~ 30–
50 m (código de amostra 370DTWWR) para extração pós-emissão de
CH 4 e C 2+ para medição das abundâncias de isótopos agregados de
metano e de 13 C / 12C específicos de posição rácios em propano,
respectivamente (Ono et al., 2014; Wang et al., 2015; Gilbert et al.,
2016). Esta amostra foi selada em filme de barreira de gás ESCAL e
armazenada a -80 ° C ou colocada em um recipiente de vidro (Schott
Duran GLS 80, 500 mL), selada, lavada com He, e armazenada a 4 ° C
para determinar se diferentes métodos de armazenamento afetam as
concentrações de gás.
A determinação da abundância relativa de quatro isótopos estáveis de
metano ( 12 CH 4 , 13 CH 4 , 12 CH 3 D e um isotopólogo "agregado"
[ 13 CH 3 D]) de amostras 370DTWWR ocorrerá pós-partição via
espectroscopia de laser infravermelho sintonizável. Esta análise requer
um mínimo de 40 µmol de metano puro (~ 1 cm 3a temperatura e
pressão ambiente padrão [SATP]; 25, 1 bar); a análise é descrita em
Ono et al. (2014) e Wang et al. (2015). A quantidade de material do
núcleo necessária foi estimada a partir do conteúdo de metano
determinado pelas análises de gás no espaço livre. Material do núcleo
atribuído à amostra 370DTWWR código tinha comprimentos contuos
que variam entre 15 e 73 cm (ou seja, até 2000 centímetros ~ 3 de
sedimento). Amostras maiores que ~ 40 cm foram geralmente
divididas em duas ou três porções, com cada porção processada
separadamente.
Vários métodos diferentes de processamento e armazenamento foram
empregados para amostras 370DTWWR. Uma pesquisa bibliográfica
realizada antes da expedição não encontrou tentativas documentadas
de extrair quantitativamente metano de grandes quantidades de
material do núcleo de sedimentos durante as expedições anteriores do
IODP. Todos os procedimentos descritos aqui devem ser considerados
experimentais; sua eficácia deve ser melhor avaliada por pesquisas
pós-expedição. A maioria das amostras WRC foram seladas em filme
de barreira de gás ESCAL e imediatamente congeladas a -100 ° ou -80 °
C. Para várias amostras, foi utilizado um aparelho de purga e purgador
personalizado para extrair CH 4e outros gases da periferia das fatias do
núcleo. Estas amostras de WRCs foram acondicionadas em sacos de
filme com barreira contra gases ESCAL, nos quais dois furos de
tamanho padrão foram perfurados e através dos quais as torneiras de
passagem (GL Sciences) foram pré-instaladas. Os sacos à prova de gás
foram lavados sob uma corrente de hélio (a ~ 10–100 cm 3 SATP / min)
por meio de uma série de duas armadilhas em U mantidas a -196 ° C
em nitrogênio líquido. A primeira armadilha em U remove vapor de
água, dióxido de carbono e C 2+hidrocarbonetos. A segunda armadilha
em U continha sílica gel (Sigma-Aldrich, Bellefonte, Pensilvânia, EUA),
que adsorveia metano e ar. Após alguns minutos, a corrente de hélio foi
interrompida, as armadilhas em U foram isoladas e a segunda
armadilha em U foi evacuada para remover gases não condensáveis
(principalmente hélio). Em seguida, o segundo captador U foi aquecido
até à temperatura ambiente, a quantidade de gases retidos foi
quantificada manometricamente e os gases extraídos foram
transferidos para um frasco de armazenamento à prova de gás
contendo sílica gel mantida a -196 ° C. Em muitos casos, o volume de
gases extraídos foi substancialmente maior do que seria esperado, dado
o conteúdo de CH 4 nos sedimentos (<10 cm 3 SATP) e excedeu o limite
de pressão do manômetro. Volumes presos estimados foram de até ~
100 cm 3, sugestivo de possível arrastamento de ar atmosférico
derivado durante a lavagem com hélio. As amostras foram então
seladas novamente em filme de barreira de gás ESCAL e armazenadas
congeladas a -100 ° ou -80 ° C até a extração em terra. Algumas
amostras que foram armazenadas a –100 ° C tiveram que ser
transferidas para um freezer de –20 ° C em terra por causa das
limitações de espaço.
Várias outras amostras WRC foram colocadas em frascos Schott Duran
GLS 80 selados com rolhas de borracha personalizadas. O headspace
foi rapidamente lavado com hélio, e as garrafas foram então
armazenadas a 4 ° C até a extração em terra.

Análise de gases de hidrocarbonetos

As concentrações e distribuições de gases leves de hidrocarbonetos,
incluindo metano (C 1 ou CH 4 ), eteno / etileno (C 2 = ), etano (C 2 ),
propeno / propileno (C 3 = ), propano (C 3 ), i - butano ( i -C 4 ), e n -
butano ( n -C 4) foram monitorados seguindo procedimentos de
amostragem e análise de gases headspace padrão (código de
amostragem HS) (Kvenvolden e McDonald, 1986). O protocolo de
prevenção e segurança contra poluição do IODP (JOIDES Pollution
Prevention and Safety Panel, 1992; Shipward Scientific Party, 1994;
Fritz, 1980), exigido pelas normas de segurança do IODP, foi
modificado conforme descrito abaixo para melhor restringir as
concentrações e proporções de gases dissolvidos. Por meio disto, nós
seguimos as abordagens que foram empregadas durante expedições
anteriores com um forte enfoque biogeoquímico, em particular as
Pernas ODP 164 e 201 (Hoehler et al., 2000; Shipboard Scientific
Party, 2003) e Expedições Integradas do Programa de Perfuração
Oceânica 301, 307, 311 322 e 337 (Expedição 301 Cientistas, 2005;
Expedição 307 Cientistas, 2006; Expedição 311 Cientistas, 2006;
Expedição 322 Cientistas, 2010;
Para análise de gás de hidrocarboneto bordo C 1 a C 4 de amostras HS e
370HS, o frasco foi colocado em um amostrador de headspace Agilent
Technologies 7697A, onde foi aquecido a 70 ° C por 30 min antes de
uma alíquota do gás de headspace ser injetada automaticamente um
GC Agilent 7890B equipado com uma coluna empacotada (HP PLOT-
Q) e detector de ionização de chama (FID). Ele era o gás de arraste (10
cm de 3 / min). As amostras de VAC foram injetadas diretamente na
coluna GC sem aquecimento prévio. Após a injecção, a temperatura
inicial do forno da coluna de 60 ° C foi aumentada a uma taxa de 10 ° C
/ min a 150 ° C. A resposta cromatográfica do FID foi calibrada com
padrões comerciais contendo 1,0 × 10 4 ppm (por volume) de cada um
de C 1 , C 2, C 53 , e i - / n -C 4alcanos (padrão Tipo X de gás, GL Sciences,
Japão), assim como o C 2 -C 3 alcenos (C 2 = e C 3 = ; padrão Tipo gás XI,
GL Sciences, Japão). A linearidade da resposta do FID foi verificada
utilizando cinco padrões diferentes (Tipos de gás padrão VIII-XII, GL
Sciences, Japão), com quantidades variáveis de C 1 , C 2 = , C 2 , C 3 = ,
C 3 , i -C 4 , e n- C 4 (10 2 - 10ppm). A resposta do FID, verificada
diariamente através da análise do padrão do Tipo X, foi estável em ±
6% durante a expedição. Blanks de ar do laboratório mostraram
consistentemente 2,1 ppm CH 4 (próximo da concentração atmosférica,
1,9 ppm), e, ocasionalmente, continham quantidades detectáveis de C 3
= , até ~ 0,3 ppm); outros hidrocarbonetos estavam consistentemente

abaixo da detecção (<0,01 ppm). O alto índice de propeno branco

provavelmente está relacionado ao uso de seringas descartáveis de
polipropileno durante a preparação de amostras (Kuley, 1963) e,
portanto, os dados C3 = são suspeitos.
A concentração de metano no IW foi derivada da concentração de
headspace usando uma abordagem de balanço de massa (modificada
de Expedition 322 Scientists, 2010):
CH4=[χM×Patm×VH]/[R×T×Vpw],CH4=χM×Patm×VH/R×T×Vpw,

(E50)

Onde

 χ M = fração molar de metano no gás do headspace (obtida da

análise GC-FID),
 P atm = pressão no espaço da cabeça do frasco (assumido como
sendo a pressão atmosférica medida quando os frascos foram
selados),
 V H = volume de headspace no frasco de amostra,
 R = constante universal de gás (8,314 × 10 -2 LB. bar / mol · K)
 T = temperatura do headspace do frasco em Kelvin e
 V pw = volume de água porosa na amostra de sedimento.

O volume de PI na amostra de sedimento ( V pw ) foi determinado com

base na massa da amostra úmida a granel ( M b ), a porosidade do
sedimento ( ϕ , tomada das medições de bordo em amostras
adjacentes), densidade de grãos (ρ g ) e a densidade da água dos poros
(ρ pw ):
Vpw=Mpw/ρpw=ϕ×Mb/[ϕ×ρpw+(1−ϕ)ρg],Vpw=Mpw/ρpw=ϕ×Mb/ϕ×ρpw+1-
ϕρg,

(E51)

Onde

 M pw = massa de água dos poros na amostra,

 ρ pw = 1,024 g / cm 3 , e
 ρ s = 2,8 g / cm 3 .

O volume de espaço superior no frasco da amostra ( V H ) foi

determinado pela diferença entre o volume total do frasco ( V frasco ) e o
volume de sedimento da amostra a granel ( V b ):
VH=Vvial−Vb=Vvial−Mb/ρb,VH=Vvial-Vb=Vvial-Mb/ρb,

(E52)

Onde

 V frasco = 21,6 cm 3 e
 ρ b = densidade aparente do sedimento (a partir dos dados
MAD).

Após a medição do teor de gás do espaço interior através de GC-FID, a

massa da amostra a granel molhado ( M b ) foi medida. A massa da
amostra foi determinada com uma precisão de 0,01 g utilizando duas
balanças electrónicas e um sistema de cálculo de média computacional
que compensa o movimento do navio (Ocean High Technology
Institute, Inc., Tóquio, Japão).

Análise de fase sólida

Para análises em fase sólida, as amostras foram coletadas das mesmas
WRCs que as amostras de gás (amostras COMGAS). O programa de
fase sólida compreendeu a análise a bordo do conteúdo total de
carbonato e análise elementar do carbono total (CT), nitrogênio (TN) e
enxofre (TS) (Pimmel e Claypool, 2001). Nem a análise GC-MS nem a
pirólise Rock-Eval (Espitalié et al., 1977) foram realizadas a bordo
porque a instrumentação analítica não estava disponível durante esta
expedição. Em vez disso, essas análises serão conduzidas em póscruise
juntamente com a caracterização adicional da matéria orgânica por
pirólise-GC-MS.

Teor de carbono inorgânico

As concentrações de carbono inorgânico (IC) foram medidas usando
um coulômetro Coulometrics 5012 CO 2 . Aproximadamente 40 mg (± 5
mg) de amostra de núcleo em pó foram pesadas com precisão usando
duas balanças eletrônicas e um sistema de cálculo computacional que
compensa o movimento do navio (Ocean High Technology Institute,
Inc., Tóquio, Japão) e subsequentemente reagiu com 6,5 mL de 2 M
HCl. O CO libertado 2 fez-se reagir com uma solução contendo o
excesso de monoetanolamina, formando o carbamato de sal
monoetanolamina. Esta solução foi titulada com OH gerada
electroquimicamente -a um ponto final colorimétrico, e a alteração na
transmitância da luz foi monitorizada com uma célula de
fotodetecção. A percentagem em peso de carbonato de cálcio foi
calculada a partir do teor de IC, assumindo que todo o CO evoluído2 foi
derivado da dissolução do carbonato de cálcio, usando a seguinte
equação:
CaCO3 (wt%)=IC (wt%)×100/12.CaCO3 wt%=IC wt%×100/12.

(E53)

Nenhuma correção foi feita para a presença de outros minerais

carbonatados. Utilizaram-se materiais de refercia padr (material de
refercia padr 88b e JSd-2 do Instituto Nacional de Normas e
Tecnologia) para monitorizar a precis analica (desvio padr [SD] <0,1%
em peso). O limite de detecção para este método foi estimado em
0,03% em peso de CaCO 3 (três vezes o SD dos espaços em branco).

Teor total de carbono, nitrogênio e enxofre

As amostras foram coletadas em uma resolução média de 1 amostra por
4 m, dependendo da recuperação e comprimento do núcleo, para a
análise de bordo dos conteúdos TC, TN e TS. Estas amostras foram
coletadas diretamente de cada amostra de COMGAS (~ 3 cm3 de volume
úmido) juntamente com amostras para XRF (~ 10 cm3 de volume
úmido) e DRX (~ 5 cm3 de volume úmido). A amostra COMGAS foi
tipicamente tomada diretamente adjacente a amostras IW para
fornecer dados IW, de gás e elementares de horizontes o mais pareados
possível (veja acima; Figura F21). Para os teores de TC e TN, as
amostras foram liofilizadas, em pó e aproximadamente 40 mg (± 5 mg)
foram pesadas com precisão em taças de estanho, que foram
cuidadosamente dobradas. Para a análise de TS, aproximadamente 20
mg de (± 5) mg de amostra foram pesados com precisão num segundo
copo de estanho e misturou-se com uma massa equivalente de
V 2 O 5 catalisador. A análise foi realizada usando um (CHNS)
analisador, Thermo Finnigan flash EA 1112 de carbono-hidrogénio-
azoto-enxofre, onde a amostra foi combustão (1000 ° C) numa corrente
de O 2 , óxidos de azoto foram reduzidas para N 2 , e a mistura de CO 2 ,
N 2 e SO 2os gases foram separados por CG e detectados por um
detector de condutividade térmica. Um padrão de calibração
(sulfanilamida; 41,81% em peso C, 16,27% em peso N e 18,62% em peso
S) e dois materiais de referência (material de referência NCS do solo
[Thermo Scientific, Milão, Itália] e material de referência JMS-1) foram
usados para monitorar precisão analítica (DP <± 0,1%).
Os teores de carbono orgânico total (TOC) foram calculados por
subtração do IC do conteúdo de TC, conforme determinado por análise
elementar. Além disso, a razão atômica TOC / TN foi determinada
como indicador de fonte da matéria orgânica.

Testes de contaminação
Assegurar o QA / QC estrito foi uma parte essencial desta expedição
devido a (1) o objetivo de avaliar as comunidades microbianas
indígenas de baixa biomassa na biosfera sedimentar profunda e quente
(ver Introdução ) e (2) a potencial liberação de material orgânico da
forro de plástico usado durante a perfuração em altas
temperaturas. Compostos orgânicos que podem ser liberados incluem
estabilizantes e antioxidantes que têm o potencial de contaminar
futuras análises geoquímicas orgânicas. Em nosso QC, duas possíveis
fontes de contaminação das amostras nucleadas durante a perfuração
foram consideradas: (1) entrada de biomassa microbiana pelo fluido de
perfuração à base de água do mar (ver Microbiologia), e (2) a
liberação de plastificantes do revestimento do núcleo de plástico para o
interior do núcleo, induzida por altas temperaturas in situ de até ~ 120
° C no topo do porão basáltico. A fim de contabilizar essa fonte de
contaminação, coletamos fluido de perfuração (código de amostra
HSECDM), material do núcleo (código de amostra HSECD) e amostras
de revestimento central, normalmente a partir do topo do núcleo na
área de corte central (Figura F21 ) . Amostras de tanques de lama
também foram tomadas três vezes como referência de referência para
componentes orgânicos introduzidos pelo fluido de perfuração.

Microbiologia
Durante a Expedição 370, amostragens de núcleo de alta qualidade e
análises microbiológicas foram realizadas por microbiologistas a bordo
e baseados em terra usando tecnologias super-limpas no Chikyu.e no
KCC, respectivamente. Todo o processamento foi submetido a
rigorosos QA e QC. A fim de minimizar a potencial contaminação de
materiais nucleados durante o processamento e armazenamento de
amostras, todas as amostras microbiológicas que consideramos críticas
para explorar os limites da biosfera profunda no Local C0023 foram
transferidas para o centro de pesquisa em terra no KCC por
helicóptero. Os cientistas da expedição baseados em terra processaram
e investigaram imediatamente essas amostras no laboratório super-
limpo da KCC, utilizando técnicas microbiológicas de última
geração. As análises realizadas durante o período da expedição
incluíram a quantificação de células microbianas e estudos ecológicos
moleculares usando DNA ambiental extraído de amostras nucleadas,
todas acompanhadas por testes completos de contaminação química e
microbiológica. Além do que, além do mais, foram iniciados
experimentos sensíveis ao tempo que continuarão além do final da
expedição, tais como medições de atividade usando traçadores
isotópicos radioativos e estáveis e cultivo de microorganismos
subsuperfícies em biorreatores de lote e de alta pressão e alta
temperatura. Além disso, amostras foram cuidadosamente preparadas
para projetos de pesquisa pós-crítica que incluem, mas não estão
limitados a análises moleculares detalhadas usando abordagens
“ômicas” (ie, sequenciamento iTAG e metagenômica), cultivo com um
biorreator de fluxo contínuo e atividade microbiana sondando usando
nanoescala secundária. espectrometria de massa iica.
Complementarmente às amostras nucleares, um grande número de
amostras de controle foi obtido para avaliar a possível contaminação
que poderia ter ocorrido durante as operações de perfuração no furo ou
amostragem do núcleo e experiências subsequentes no
laboratório. Essas amostras de controle de contaminação fornecem
informações básicas cruciais para determinar o histórico analítico das
amostras da biosfera profunda de baixa biomassa esperadas. Os
métodos para amostragem e abordagens de QA / QC usados durante a
Expedição 370 são descritos nas seções seguintes.

Garantia de qualidade e controle de qualidade

para processamento de amostras
Amostragem microbiológica durante a Expedição 370 foi altamente
consciente do controle de contaminação. QA e QC rigorosos foram
implementados para todas as etapas envolvidas na recuperação central,
no processamento principal e na análise de amostras. Medidas
cuidadosas foram tomadas para levar em conta a introdução de células
microbianas e vírus nas amostras de sedimentos e rochas das seguintes
fontes potenciais de contaminação:

 Intrusão de água do mar e lama de perfuração durante o corte e

recuperação do núcleo, potencialmente emparelhados com
 contaminação cruzada resultante de enchimentos de poços soltos
acumulados no fundo do furo;
 Introdução de células microbianas e compostos químicos de
equipamentos e produtos químicos utilizados durante o
processamento de amostras; e
 Contaminação de amostras de sedimentos durante o trabalho de
laboratório a partir de partículas transportadas pelo ar.

Fluxo de trabalho e QA durante a amostragem

microbiológica no Chikyu
Para minimizar o risco de contaminação induzida pela perfuração, as
amostras para investigações microbiológicas foram tomadas como
WRCs das partes mais não perturbadas das seções centrais
recuperadas. Estes foram identificados pelos cientistas co-chefes e cães
de guarda de sedimentologia com base na inspeção visual e na
tomografia por raios X de seções individuais. Em geral, a primeira
seção não foi amostrada para investigações microbiológicas, a fim de
evitar contaminação cruzada com preenchimentos de poços. A
amostragem de WRCs para investigações microbiológicas e
geoquímicas a bordo, baseadas em shore e pós-crise foi baseada em um
plano de amostragem WRC coordenado de perto, onde todas as WRCs
foram cortadas de seções intactas no laboratório de QA / QC
imediatamente após CT de raios X imagem.
Durante o corte, os sedimentos só entraram em contato com espátulas
pré-limpas (com 18 MΩ de água) e autoclavadas. As WRCs foram
embaladas com tampas que foram limpas com etanol, secas em uma
bancada limpa e irradiadas com luz UV por pelo menos 20 minutos
antes do uso. As amostras que necessitavam de tratamento posterior
foram transferidos, quer para uma câmara anaeróbica (95: 5 [v / v]
N 2 : H 2 atmosfera; COY Laboratory Products, USA) ou a uma bancada
limpa, dependendo dos requisitos de amostragem. Uma unidade de
filtração de ar de mesa KOACH T 500-F (Figura F22) foi instalado na
câmara anaeróbica e na bancada limpa. A unidade KOACH T 500-F
produz fluxo de ar laminar filtrado, criando condições que
correspondem aos padrões de sala limpa da Classe 1 ISO. Um ionizador
também foi instalado dentro da câmara anaeróbica para reduzir a
atração estática de partículas potencialmente contaminantes do
ar. Partículas transportadas pelo ar na câmara anaeróbica, no banco
limpo e no ar do laboratório foram monitoradas periodicamente
durante toda a expedição (veja abaixo). As superfícies internas da
câmara anaeróbica foram rotineiramente descontaminadas por
limpeza com RNase AWAY. As superfícies interiores do banco limpo
foram descontaminadas pela exposição à luz UV. Além disso, a
superfície de trabalho foi coberta com uma nova folha de alumínio cada
vez que um novo WRC era processado. Todas as amostras
microbiológicas foram coletadas com ferramentas pré-limpas (com 18
MΩ de água) e esterilizadas, como seringas de corte, facas de cerâmica
e espátulas, dependendo da dureza do material do núcleo. As
ferramentas de amostragem foram esterilizadas em autoclave. O gás
nitrogênio usado para lavar as amostras a serem armazenadas sob
condições anaeróbicas e HAs condições sem 2 foram filtradas com um
filtro de 0,22 µm para remover a potencial contaminação.

Figura F22. Sistema KOACH no Chikyu .

Fluxo de trabalho e controle de qualidade durante a

amostragem microbiológica no KCC
No KCC, a amostragem inicial de amostras refrigeradas e congeladas
foi conduzida dentro de uma câmara anaeróbica (COY Laboratory
Products, EUA) com uma unidade de filtração de ar de fluxo laminar de
mesa KOACH T 500-F ou uma bancada limpa com exaustão de ar,
respectivamente. Para evitar a atração estática de partículas
transportadas pelo ar potencialmente contaminantes, um ionizador
(ionizador de ar Winstat, BF-X2MB; Shinshido Electrostatic Ltd.,
Japão) foi colocado na câmara anaeróbica e no ambiente limpo de
bancada para neutralizar a carga superficial do equipamento e
partículas transportadas pelo ar. . A superfície de trabalho foi coberta
com folha de alumínio pré-misturada (500 ° C durante 5
h); ferramentas para amostragem (facas de cerâmica, espátulas e
colheres) foram autoclavadas e substituídas sempre que suspeita de
contaminação potencial por contato com uma superfície não estéril.
Processamento adicional de amostras, incluindo trituração em pó,
separação de células e filtração para contagem e extração de DNA foi
conduzido em uma sala superlimpa no KCC (Figura F23 ). A sala
super-limpa está equipada com um Floor KOACH Ez que produz
qualidade de fluxo de ar laminar horizontal ISO Class 1 a partir da
parede final do espaço limpo. Todos os experimentos limpos foram
realizados a montante, em frente às unidades limpas KOACH, e
equipamentos eletrônicos (centrífugas, geladeira e sonicador) foram
colocados a jusante do espaço limpo. Para neutralizar a eletricidade
estática das amostras, equipamentos de plástico e luvas (mãos), um
ionizador com sensor de bainha tipo barra (SJ-H180, Keyence, Japão)
foi colocado aproximadamente 40 cm acima da área de trabalho da
bancada de laboratório de aço inoxidável. (Figura F24). O ionizador foi
operado a uma frequência de 1 Hz, de modo que a carga estática foi
efetivamente neutralizada em todo o espaço de trabalho da bancada de
trabalho (1800 mm × 750 mm). A capacidade de eliminação estática foi
verificada rotineiramente com sensores eletrostáticos de alta precisão
(SK-H055 e SK-J050, Keyence, Japão) verificando o tempo necessário
para neutralizar 1 kV de carga. A carga estática foi consistentemente
reduzida para <10% em 30 s.

Figura F23 Super-sala limpa no KCC.

Figura F24 Ionizador tipo barra em bancada de aço inoxidável no

KCC.

QC: avaliação da potencial contaminação de

amostras de sedimentos de partículas
transportadas pelo ar durante o trabalho de
laboratório
Monitorando partículas transportadas pelo ar
Partículas transportadas pelo ar a bordo com uma faixa de tamanho de
0,3 a 1,0 µm foram enumeradas com um contador de partículas
aerotransportadas Met One HHPC 3+ (Met One Instruments, Inc .;
Grants Pass, Oregon, EUA). O ar foi amostrado durante 1 min a uma
taxa de fluxo de 2,8 L / min. Subfrações de partículas> 0,3,> 0,5 e> 1
µm foram registradas. As contagens de partículas foram realizadas na
bancada limpa e na câmara anaeróbica de COY para cada núcleo (ou
seja, após a limpeza e antes do processamento de um novo núcleo na
área de corte do WRC). Em cada ponto de tempo, também foi
amostrado ar ambiente de laboratório para comparação
(Figuras F25 , F26 ). A qualidade do ar também foi medida nos
laboratórios e espaços de trabalho em terra no KCC usando um
contador de partículas Biotest (9303-01BT).

Figura F25 Medindo contagem de partículas no sistema KOACH

no Chikyu .
Figura F26 Contagem de partículas do ar de laboratório QA / QC
na plataforma de processamento do núcleo Chikyu .
Monitoramento de células microbianas no ar
Para quantificar a concentração de células microbianas transportadas
pelo ar que potencialmente contaminam os núcleos durante o
manuseio do núcleo do navio, foram contadas 1 l de ar de vários
espaços de trabalho: (1) o laboratório QA / QC, (2) o laboratório de
microbiologia, (3) Exaustor esterilizado por UV (ou seja, banco limpo)
equipado com um sistema de purificação de ar KOACH, e (4) a câmara
anaeróbica COY também equipada com um sistema de purificação de
ar KOACH. No KCC, 1 L de ar foi amostrado nos seguintes espaços de
trabalho: (1) o banco limpo na sala super-limpa, (2) a câmara
anaeróbica COY equipada com um sistema de purificação de ar
KOACH e (3) a super-limpa sala, onde o ar de laboratório não filtrado
também foi amostrado. Para coletar células de um volume de 1 L de ar,
50 mL de ar foram amostrados através de uma seringa até
0.F27 ; Tabela T10 ). A solução de fixação de formaldeído (solução a
3% de NaCl a 3%) foi subsequentemente aplicada ao filtro e incubada à
temperatura ambiente durante 10 a 20 minutos para fixar as células. A
solução de fixação foi então purgada da membrana de policarbonato
usando 5 mL de ar estéril KOACH com um filtro de polietersulfona
(PES) de 0,22 µm de tamanho de poro (unidade de filtro Millex-GP,
Merck Millipore). Os filtros foram armazenados a 4 ° C em sacos de
plástico esterilizados até processamento adicional e contagem de
células no KCC.

Figura F27. Filtragem de células microbianas no ar em ar de

laboratório.
Tabela T10 Visão geral de amostras para controle de qualidade. Faça
o download da tabela no formato .csv.

CQ: avaliação da potencial contaminação de

amostras de sedimentos do fluido de perfuração
durante a perfuração
O uso de fluido de perfuração durante as operações de perfuração é
necessário por uma série de razões, incluindo a limpeza do furo das
aparas, o resfriamento da broca e a garantia da estabilidade do
furo. Três tipos de amostras de contaminação de fluidos de perfuração
foram coletadas para análises de contaminação biológica e química: o
fluido em contato com as amostras do núcleo, fluido de perfuração da
bomba de distribuição e fluido de perfuração no tanque de preparação
como mostrado abaixo.
Fluido de perfuração como fonte potencial de
contaminação
Fluidos de perfuração são compostos de água do mar e quantidades
variadas de compostos químicos, todos os quais são fontes potenciais
de células microbianas, vírus e contaminação química em amostras
com baixo teor de biomassa (ver Masui et al., 2008). A composição do
fluido de perfuração é ajustada durante as operações para otimizar o
desempenho de perfuração (Figura F28 ). Para contabilizar a intrusão
de fluido de perfuração no núcleo, um composto de PFC é adicionado
como um traçador químico ao fluido de perfuração antes de bombeá-lo
pelo poço (Smith et al., 2000a, 2000b). Durante as operações RCB, o
fluido de perfuração preso dentro do revestimento central (código de
amostra LCL) foi amostrado quando os núcleos foram cortados em
seções na área de corte central imediatamente após a recuperação
(consulte Amostragem na área de corte do núcleo ;
Figura F21). Amostras de LCL foram usadas para monitorar a
concentração de entrada de PFC e mudanças no número e na estrutura
da comunidade de células microbianas e vírus durante operações de
perfuração e recuperação de amostras (Tabela T10 ). Além disso, o
fluido de perfuração da Bomba 2 (fluido de perfuração da bomba de
entrega) e do gel de água do mar de tanques ativos de lama (fluido de
perfuração em tanques de preparação) foram amostrados uma vez por
dia para avaliar a abundância de células microbianas e vírus no fluido
de perfuração. Mais informações sobre a composição dos fluidos de
perfuração estão disponíveis no Relatório Técnico da Expedição 370
(Center of Deep Earth Exploration, 2016). Uma visão geral conceitual
da circulação do fluido de perfuração durante a perfuração sem riser
no Chikyu e pontos de amostragem de fluido é mostrada na
Figura F28., e um resumo dos termos e acrônimos é encontrado na
Tabela T11 .
Figura F28. Procedimento de amostragem de bombeamento de fluidos
e contaminação.
Tabela T11 Termos e acrônimos para amostras de fluido de
perfuração e PFC. Faça o download da tabela no formato .csv.
Amostragem para avaliação biológica da contaminação de
fluidos de perfuração
Para enumeração de células microbianas, 1-2 mL de amostras de LCL
foram fixadas com solução de formaldeído salina pré-filtrada (0,22 µm
de tamanho de poro) (3% NaCl e 4% de formaldeído) e armazenada a 4
° C. Para enumeração de partículas semelhantes a vírus (VLP), 1 a 2 mL
de amostras de LCL foram fixadas com solução de formaldeído salina
livre de vírus (0,02 µm filtrada; Anodisc, GE), imediatamente
congeladas em nitrogênio líquido e armazenadas a -80 ° C (Suttle e
Furhman, 2010). Além disso, amostras de fluido de perfuração da
Bomba 2, gel de água do mar e LCL foram congeladas e armazenadas a
-80 ° C para avaliação baseada em DNA onshore da contaminação do
fluido de perfuração da amostra principal.
Para avaliar o potencial de infiltração de células microbianas e VLPs a
partir de fluido de perfuração para o interior de núcleos, com 1
cm 3 amostras foram tiradas periodicamente, a enumeração de células e
VLPs a partir do interior, a meio caminho, e as porções exteriores de
uma subsecção de MBIO1 WRC. As amostras foram coletadas dentro
da câmara anaeróbica de COY usando ferramentas estéreis (seringas de
corte, facas de cerâmica estéreis e outras ferramentas, dependendo da
dureza do material) e colocadas em tubos Falcon. Para a enumeração
da célula, as amostras foram fixadas em solução de formaldeído salina
pré-filtrada (0,22 µm) e armazenadas a 4 ° C. Para a enumeração do
vírus, as amostras foram fixadas em solução de formaldeído salina pré-
filtrada (0,02 µm), congeladas em nitrogênio líquido e armazenadas a -
80 ° C.
Monitoramento de contaminação por fluido de perfuração
com PFC
Um teste de contaminação por traçador baseado em PFC foi
implementado pela primeira vez na exploração do ambiente
subsuperficial terrestre (Colwell et al., 1992) e foi adotado durante a
ODP Leg 185 para fornecer uma estimativa da intrusão do fluido de
perfuração no interior do núcleo (Smith et al., 2000a). , 2000b). Desde
então, o PFC tem sido freqüentemente usado como um traçador
químico durante a perfuração científica oceânica, incluindo
a Resolução R / V JOIDES (Smith et al., 2000a, 2000b; House et al.,
2003; Lever et al., 2006) e o Chikyu (Yanagawa et al., 2013; Inagaki et
al., 2015). Durante a Expedição 370, usamos o composto
perfluorometilciclohexano (C 7 F 14) como o marcador químico PFC. Na
sala principal da bomba, o PFC foi fornecido através de uma bomba de
cromatografia líquida de alta pressão (HPLC) no fluido de perfuração
na entrada de carga da Bomba 2. A bomba de HPLC forneceu uma
vazão constante de 0,6 mL / min de PFC 94% puro. . Durante as
operações de perfuração, o fluxo no furo foi ajustado, usando até três
bombas de carga; portanto, a concentração de PFC de entrada variou
dependendo da vazão da Bomba 2 e sua relação relativa à vazão total.
Para verificar e quantificar a presença de PFC no fluido de perfuração,
foram coletadas amostras de LCL quando as seções do núcleo foram
cortadas na área de corte do núcleo, a menos que nenhum fluido fosse
capturado no revestimento central. As amostras LCL que foram
coletadas em tubos Falcon de 50 mL na área de corte central e depois
amostradas em frascos headspace (~ 5 mL de fluido em frascos de 20
mL) no laboratório de microbiologia foram designadas como amostras
FAL-L (Tabela T11 ). Amostras de LCL coletadas diretamente em
frascos headspace (~ 5 mL de fluido em frascos de 20 mL; código de
amostra HSECDM; ver também Tabela T9 e Figura F21) foram
designados como amostras de CCA-L. Além disso, amostras de fase
sólida (designadas como amostras CCA-S; código de amostra HSECD)
foram tiradas do topo da Seção 1 para cada núcleo, começando no
Núcleo 370-C0023A-34R na área de corte central (Figura F29 ) para
Ter um meio de comparação da concentração de PFC entre todos os
núcleos se o fluido de revestimento não estiver presente. Este esquema
de amostragem rápida, imediatamente após a recuperação do núcleo,
teve como objetivo evitar a perda de PFC, enquanto os núcleos foram
submetidos a varredura e varredura de imagens por tomografia
computadorizada por raios-X.

Figura F29. Esquema de amostragem para as WRCs comunitárias

microbiológicas.
Para determinar o potencial de difusão do fluido de perfuração no
interior dos núcleos, três amostras de fase sólida (~ 2 cm 3 ) foram
retiradas da parte externa (EX), intermediária (MD) e interior (IN) da
seção transversal do núcleo de cada MBIO2 WRC (Figura F29 ;
Tabela T11). Nos sedimentos macios, as amostras foram retiradas do
disco com uma seringa esterilizada de 5 mL. Em sedimentos duros
(após o Núcleo 14X), a amostra exterior e depois as amostras do
interior e do meio foram raspadas do disco com uma faca de
cerâmica. Os núcleos 111R e 112R não foram monitorados quanto à
presença de PFC porque o material do núcleo consistia em pequenas
peças basálticas. Cada amostra de sedimento foi colocada num frasco
de headspace de 20 mL, 5 mL de água foram adicionados, e o frasco foi
imediatamente crimpado com um septo de sílica revestido com
Teflon. Os pesos das amostras (CCA-S, IN, MD e EX) foram
determinados usando duas balanças eletrônicas e um sistema de
cálculo computacional que compensa o movimento do navio (Ocean
High Technology Institute, Inc., Tóquio, Japão). Os volumes de
amostras LCL (FAL-L e CCA-L) foram estimados por comparação com
frascos de referência.
No KCC, a amostragem de rotina do PFC foi conduzida como parte
integrante do processamento da amostra. As sucatas de amostras WRC
que foram processadas em uma câmara anaeróbica, bem como a parte
mais interna das WRCs também foram submetidas a medições de PFC
(veja o procedimento de amostragem baseado na costaabaixo).
Todas as amostras foram agitadas por 2 min cada para criar uma
suspensão e aumentar a liberação de PFC no headspace. Os frascos
foram então montados numa roda rotativa e incubados a 80 ° C
durante pelo menos 2 h. Após a incubação, os frascos foram colocados
em um amostrador headspace de rede Agilent G1888 (bordo de navio e
no KCC) que incubou os frascos a 80 ° C por mais 30 minutos antes da
injeção. No amostrador automático, 0,5 mL do espaço livre foi
transferido para um GC Agilent 7890B (GC 7890A no KCC) acoplado a
um detector de captura de elétrons (ECD). As amostras foram injetadas
a 180 ° C com uma razão de divisão de 1: 5. O navio GC-ECD foi
equipado com uma coluna GS-GasPro (30 m × 0,32 mm, Agilent, EUA)
e foi operado com um fluxo constante de hélio de 3,4 mL / min. A
temperatura inicial do forno foi ajustada para 120 ° C, seguido por um
aumento de 20 / min a uma temperatura final de 180 que foi mantida
durante 3,5 min. Após a amostragem de 6,5 min, foi iniciado um pós-
tratamento a 200 ° C por 15 min e um tempo final de equilíbrio de 1,5
min, igual a um tempo total de 23 min por amostra. O GC-ECD
baseado em terra também foi equipado com uma coluna GS-GasPro e
operou nas mesmas condições que o navio GC-ECD até 11 de outubro
de 2016, quando foi alterado para uma coluna HP-ALM (30 m × 0,53
mm, Agilent, EUA) operou com um fluxo constante de hélio de 4,8 mL
/ min (Smith et al., 2000a). Para a coluna HP-ALM, a temperatura
inicial do forno foi ajustada para 120 ° C, seguida por um aumento de
20 ° C / min para 150 ° C, temperatura final que foi mantida por 20
min, igual a um tempo total de 22 min por amostra . a postrun foi
iniciada a 200 ° C por 15 min e um tempo final de equilíbrio de 1,5 min,
igual a um tempo total de 23 min por amostra. O GC-ECD baseado em
terra também foi equipado com uma coluna GS-GasPro e operou nas
mesmas condições que o navio GC-ECD até 11 de outubro de 2016,
quando foi alterado para uma coluna HP-ALM (30 m × 0,53 mm,
Agilent, EUA) operou com um fluxo constante de hélio de 4,8 mL / min
(Smith et al., 2000a). Para a coluna HP-ALM, a temperatura inicial do
forno foi ajustada para 120 ° C, seguida por um aumento de 20 ° C /
min para 150 ° C, temperatura final que foi mantida por 20 min, igual a
um tempo total de 22 min por amostra . a postrun foi iniciada a 200 ° C
por 15 min e um tempo final de equilíbrio de 1,5 min, igual a um tempo
total de 23 min por amostra. O GC-ECD baseado em terra também foi
equipado com uma coluna GS-GasPro e operou nas mesmas condições
que o navio GC-ECD até 11 de outubro de 2016, quando foi alterado
para uma coluna HP-ALM (30 m × 0,53 mm, Agilent, EUA) operou
com um fluxo constante de hélio de 4,8 mL / min (Smith et al.,
2000a). Para a coluna HP-ALM, a temperatura inicial do forno foi
ajustada para 120 ° C, seguida por um aumento de 20 ° C / min para
150 ° C, temperatura final que foi mantida por 20 min, igual a um
tempo total de 22 min por amostra . quando foi alterado para uma
coluna HP-ALM (30 m × 0,53 mm, Agilent, EUA) operou com um fluxo
constante de hélio de 4,8 mL / min (Smith et al., 2000a). Para a coluna
HP-ALM, a temperatura inicial do forno foi ajustada para 120 ° C,
seguida por um aumento de 20 ° C / min para 150 ° C, temperatura
final que foi mantida por 20 min, igual a um tempo total de 22 min por
amostra . quando foi alterado para uma coluna HP-ALM (30 m × 0,53
mm, Agilent, EUA) operou com um fluxo constante de hélio de 4,8 mL
/ min (Smith et al., 2000a). Para a coluna HP-ALM, a temperatura
inicial do forno foi ajustada para 120 ° C, seguida por um aumento de
20 ° C / min para 150 ° C, temperatura final que foi mantida por 20
min, igual a um tempo total de 22 min por amostra .
Para quantificação de PFC nas amostras, uma curva de calibração de
cinco pontos foi preparada misturando solução líquida de PFC (94% de
pureza e 1,787 g / cm 3 de densidade) com metanol para criar soluções
estoque de 10 −8 a 10 −4 (PFC: metanol [v / v]) (consulte
EXP370_PFC_CALIBRATION_CURVE.XLSX em MBIO em material
suplementar ). A partir desta solução estoque, 10 µL foram
transferidos para um frasco vazio de headspace de 20 mL, resultando
em concentrações padrão de espaço livre do PFC de 8,4 × 10 −3 a 8,4 ×
10 1 µg / L. O limite de detecção de bordo do navio GC-ECD (~ 1,6 ×
10 −3µg / L PFC no headspace; área ~ 10) foi cerca de uma ordem de
grandeza inferior ao padrão de calibração mais baixo utilizado na
curva. A linearidade da curva padrão foi verificada separadamente no
KCC para 8,4 × 10 −4 µg / L PFC no headspace, que foi definido como o
limite inferior de quantificação (LOQ). Para os sedimentos, isso
corresponde a um LOQ médio de PFC de 8,4 × 10 −6 µg /
cm3 desedimento (suposições: sedimento de 4 g, densidade de 2 g /
cm 3 , adição de 5 mL de água e 20 mL de frasco para friso no
headspace). A linearidade foi assumida para todas as amostras entre o
padrão mais alto da curva de calibração (8,4 × 10 1PFC µg / L no
headspace) e saturação do detector. Sempre que a saturação excessiva
do detector foi observada, uma quantidade definida de gás do espaço
de aquecimento aquecido foi transferida para um novo frasco vazio de
espaço de topo e reanalisado.
A concentração de PFC foi calculada de acordo com o procedimento
delineado pela Expedition 337 Scientists (2013). Em resumo, para
amostras de fluidos, a concentração de PFC no headspace foi
multiplicada pelo volume do frasco e depois dividida pelo volume da
amostra. Para amostras de sedimento, a concentração de PFC no
headspace foi multiplicada pelo volume do frasco e depois dividida pela
massa da amostra. Concentração de PFC em sedimentos foi, em
seguida, convertido a partir de? G de PFC / g de sedimento de PFC ug /
cm 3 , utilizando os dados MAD específica de núcleo
(ver propriedades físicas no capítulo sítio C0023 [Heuer et al.,
2017b]).

Amostra WRC de bordo para investigações e

experiências microbiológicas
Amostragem WRC para investigações
microbiológicas
As WRCs para investigações microbiológicas foram realizadas de
acordo com o plano de amostragem da WRC da expedição
imediatamente após a recuperação central e a tomografia por raios X
das seções centrais na plataforma central de
processamento. Dependendo das condições de armazenamento
requeridas, WRC para investigações microbiológicas foram quer
anaerobicamente embalado e purgado com N 2 gás em Escal de barreira
ao gás sacos anteriores para embalagem em vácuo (V-301G, Fuji
impulso, Japão) ou selado em condições aeróbias, sem N 2rubor. O
WRC embalado foi então colocado num saco secundário de alumínio à
prova de gás e selado a vácuo após lavagem com azoto gasoso.
As WRCs para amostragem e análises expedicionárias (referidas como
“WRCs comunitárias”) tinham tipicamente 30 cm de comprimento e
geralmente duas secções WRC adjacentes (MBIO1 e MBIO2) foram
tiradas de cada intervalo de 9,5 m (Figura F29 ). O MBIO1 foi
armazenado e transferido em condições refrigeradas (4 ° C) para
contagem de células e vírus, visualização celular, atividade enzimática e
enriquecimento (Tabela T12 ), e MBIO2 foi congelado a -80 ° C para
análise molecular e visualização de vírus (Tabela T13 ). O
processamento de MBIO1 e MBIO2 WRC foi imediatamente realizado
em condições anaeróbicas e aeróbicas de super-limpeza,
respectivamente (consulte Garantia de qualidade e controle de
qualidade para processamento de amostras ).
Tabela T12 Alocação e tratamento para amostras de MBIO1
WRC. Faça o download da tabela no formato .csv.
Tabela T13 Amostras retiradas de subcores de MBIO2 WRCs. Faça o
download da tabela no formato .csv.
A superfície de cada MBIO1 WRC foi raspada com facas cerâmicas
esterilizadas na câmara anaeróbica. Depois disso, uma amostra de
disco foi coletada de MBIO1 e MBIO2 e amostras foram coletadas para
investigações microbiológicas, enzimáticas e geoquímicas
orgânicas; testes de contaminação por PFC; e geoquímica orgânica
(Figura F29 ). MBIO1 WRCs e amostras pessoais foram colocadas em
sacolas ESCAL e temporariamente fechadas dentro da câmara
anaeróbica. Os sacos foram removidos da câmara, imediatamente
lavados com gás nitrogênio para remover H 2gás e selado a vácuo. As
MBIO1 WRC foram então armazenadas a 4 ° C e amostras pessoais
foram armazenadas a temperaturas requeridas. Os MBIO2 WRC foram
removidos dos revestimentos do núcleo no banco limpo. As WRCs
foram colocadas em sacolas ESCAL, vedadas sem descarga de gás
nitrogênio, congeladas pelo freezer Cells Alive System (CAS) a bordo
(Abi Co. Ltd., Japão; ver Morono et al., 2015) e armazenadas a −80 ° C
.
Amostras WRC sensíveis a redox usadas para medições de atividade e
cultivo em terra / pós-expedição foram processadas na câmara
anaeróbica. Depois de remover a superfície externa com facas de
cerâmica estéreis, as amostras foram colocadas em sacos ESCAL. Os
sacos foram removidos da câmara de anaerobiose, lavada uma vez com
N 2 para remover H 2 gás, selada a vácuo, e armazenado a temperaturas
requeridas antes do envio.
Preparação de amostras WRC para determinação da
atividade metabólica potencial com radiotraçadores
Para determinação a bordo do potencial atividade metabólica (isto é,
redução de sulfato e metanogênese hidrogenotrófica) usando
radioisótopos, amostras WRC (aproximadamente 10 cm de
comprimento) foram raspadas, armazenadas e processadas sob
condições anaeróbicas quando um número suficiente de amostras foi
coletado. Na câmara anaeróbica (95: 5 [v / v] N 2 : H 2 ), outro ~ 2-3
mm foi raspado da superfície do WRC com uma faca de cerâmica
estéril. A parte mais interna do núcleo foi cortada com a faca para criar
uma mistura de cavacos e pó muito pequenos. Aproximadamente 5 mL
deste sedimento lascado foram colocados em um frasco de 20 mL, ao
qual 5 mL de metanogênico (sulfato-livre, 1 mM NaHCO 3 ) ou sulfato
de redução (5 mM de SO 4 2−, 5 mM de NaHCO 3 foi adicionado)
médio. Três frascos replicados foram preparados a partir de cada
amostra para determinação de metanogênese e taxa de redução de
sulfato, respectivamente. Os frascos foram selados por fricção com
rolhas de clorobutilo azuis não tóxicas (Bellco) e por frisos de
alumínio. Após a selagem, o espaço superior do frasco foi purgado com
N 2 gás para remover de hidrogénio em excesso, seguindo-se a adição
de 40 uL de N 2 : H 2gás (95: 5 [v / v]) para proporcionar,
aproximadamente, 400 nM de hidrogénio dissolvido para o fase
líquida. Todos os frascos e rolhas foram autoclavados e as soluções
foram autoclavadas ou filtradas através de filtros de seringa estéreis
(tamanho de poro de 0,20 µm) antes da utilização.
No laboratório radioisótopo no Chikyu , 10 uL de radiomarcada ( 35 S)
de Na 2 SO 4 (3,7 MBq) e 100 uL de radiomarcada ( 14 C) de
NaHCO 3 (3,7 MBq) foram injectadas em amostras de redução e
methanogenesis sulfato, respectivamente, seguido por agitação
vigorosa. As amostras foram incubadas a temperaturas dentro da faixa
in situ estimada: 40 ° C por 360 mbsf ou menos, 60 ° C por 405-585
mbsf, 80 ° C por 604 a 775 mbsf e 95 ° C por 816 mbsf ou mais. Após
um máximo de 10 dias de incubação, 3 mL de solução de acetato de
zinco a 20% (p / v) foram injetados em cada frasco de redução de
sulfato para 2S gasoso. Os frascos foram completamente agitados antes
de serem abertos para transferir as suspensões de sedimentos para
tubos de centrífuga de 50 mL contendo 7 mL de solução de acetato de
zinco a 20% (p / v). Os tubos foram agitados e congelados
imediatamente a -20 ° C para interromper a atividade microbiana e
enviados para a GFZ Potsdam (Alemanha) após a expedição para
análise. A actividade metanogica foi interrompida injectando 500 de
hidrido de sio a 50% (p / v) em cada frasco de metanogese seguido de
agitao. As amostras foram então enviadas para a Universidade de
Aarhus (Dinamarca) para análise. Os controles de sedimento para
ambos os métodos foram incubados sem adição de radiofármaco. O
radiofármaco foi então adicionado após a atividade microbiana ser
interrompida, a fim de verificar as reações abióticas após a
incubação. Controles negativos (5 mL de meio estéril e sem sedimento)
e controles de fluido de perfuração (5 mL de fluido de revestimento
central,
O meio artificial de ua do mar para as suspenss de sedimentos foi
preparado como se segue. Cada um dos sais subsequentes foi
adicionado a dois frascos de vidro de 2 L (um frasco para meio redutor
de sulfato e um para meio metanogênico):

 400 mg KH 2 PO 4
 500 mg de NH 4 Cl
 1 g de MgCl 2 · 6H 2 O
 1 g de KCl, 300 mg de CaCl 2 · 2H 2 O
 50 g de NaCl

Além disso, 1,42 g de Na 2 SO 4 foram adicionados a apenas o sulfato de

meio redutor. As garrafas foram cheias com 2 L com ultrapura H 2 O.
Algumas gotas de solução de resazurina (0,1% [w / v]) foram
adicionados. As garrafas foram cobertas (mas não completamente
fechadas) com uma tampa de rosca e autoclavadas. Após a
autoclavagem, o meio foi purgado com gás N 2 enquanto ainda estava
quente (> 60 ° C). Durante a purga, 10 e 2 mL de solução
de NaHCO 3 filtrada estéril (84 g NaHCO 3 em 100 mL H 2O) foi
adicionado ao meio redutor de sulfato e ao meio metanogico,
respectivamente. Quando necessário, o pH foi ajustado com solução de
HCl ou NaOH a 6,5% filtrada estéril até pH 7,5. Os frascos foram então
tapados com uma rolha butílica estéril e uma tampa de rosca, e ~ 3 mL
de solução de Na 2 S filtrada estéril (1,2 g de Na 2 S em 100 mL H 2 O)
foram adicionados através da rolha com uma seringa para reduzir a
médio. A redução foi confirmada pela descoloração da resazurina em
solução.
Envio de amostra para o KCC
Os WRCs MBIO1 e MBIO2 foram transportados de helicóptero para
KCC com uma frequência de seis vôos por semana, em média, para
garantir o processamento rápido e minimizar o viés potencial devido
aos efeitos do armazenamento prolongado após a recuperação do
núcleo. Durante o trânsito, as WRC foram armazenadas em sacos
termicamente isolados para manter as temperaturas nas quais foram
temporariamente armazenados no navio.

Amostragem WRC baseada em terra para

investigações microbiológicas e experimentos no
KCC
Procedimento de amostragem em terra
Todas as superfícies de amostra de MBIO1 WRCs foram prescrafadas
no Chikyu para evitar a difusão de potenciais contaminantes da água
do mar e do fluido de perfuração para dentro do núcleo durante o
armazenamento e o transporte. As amostras recebidas variaram em
comprimento de aproximadamente 10 a 30 cm de equivalente WRC. A
faixa de qualidade e coerência da amostra variou, especialmente em
profundidades menores. Para minimizar ainda mais a contaminação
potencial das amostras do núcleo, a camada externa do núcleo pré-
enxertado (~ 5 mm de espessura) foi removida de todas as superfícies
de WRCs duras e intactas, incluindo a superfície das rachaduras
através do núcleo, usando uma faca de cerâmica estéril. câmara
anaeróbica seguindo as rotinas QA / QC descritas em Garantia de
qualidade e controle de qualidade para processamento de
amostras. Uma amostra do material de superfície removido foi
coletada para análise de PFC (raspagens secundárias de KCC), e o
restante foi arquivado. Do núcleo restante, uma fatia inteira de 1 a 2 cm
intacta foi cortada com uma faca de cerâmica para análise de
visualização estrutural. Em seguida, a integridade das amostras para
contagens de células e vírus foi priorizada: para isso, o núcleo foi
colocado dentro de um saco estéril, montado em uma braçadeira e uma
amostra minicore foi retirada do centro do núcleo usando uma broca
com esterilização. bit de núcleo para obter a amostra mais limpa
possível. Este minicore foi dividido ao meio e armazenado de acordo
com a Tabela T12. A perfuração normalmente causou a desintegração
do núcleo remanescente dentro do saco estéril, e as amostras
subsequentes foram retiradas das peças desintegradas usando uma
espátula. Qualquer amostra restante raspada foi salva como núcleo
"Interno" em um novo saco estéril, lavada com N 2 em um saco de
alumínio selado a quente e, em seguida, armazenada a 4 ° C. Se as
WRCs recebidas fossem suaves mas intactas, o mesmo procedimento
foi seguido, exceto que as seringas de corte foram usadas no lugar da
broca minicore. Se os WRCs não estivessem intactos, a raspagem da
superfície não era possível, e as amostras foram tiradas diretamente
usando seringas de corte. O tratamento para amostras individuais é
dado na Tabela T12 .
Armazenados Anaerobicamente Os MBIO2 WRCs congelados em CAS
foram primeiro cortados em duas partes WRC quando o WRC foi maior
que 12 cm usando uma serra de fita com uma borda revestida de
diamante depositada por elétrons, localizada dentro de uma cabine
limpa equipada com duas unidades de filtro HEPA (Masui et al ., 2009;
Morono e Inagaki, 2016). Os MBIO2 WRCs anaerobicamente
armazenados com menos de 12 cm não foram cortados. A superfície do
WRC foi brevemente inflamada para amolecer o sedimento,
permitindo a remoção de sua superfície raspando com uma espátula
estéril, em um esforço para evitar que contaminantes da superfície
toquem o subcore. Um subcore foi então retirado assepticamente do
centro da amostra congelada WRC usando uma broca minicura de
mesa de 2 cm de diâmetro. A subcore foi seccionada para extração de
DNA, visualização de vírus e análise de PFC e armazenada a -80 ° C
antes da análise.T13 .
Contagens de células
Toda a preparação da amostra para contagem de células foi realizada
na sala super-limpa no KCC. Amostras de contagem de células de
fluidos de perfuração (ver Fluido de perfuração como fonte
potencial de contaminação ) e LCL foram diluídas com cloreto de
sódio a 2,5% e diretamente filtradas em membranas de policarbonato
(Millipore, EUA). As amostras de sedimentos para contagem de células
foram esmagadas em pó usando argamassas e pilões de cerâmica, que
foram queimados a 500 ° C por 5 h antes do uso. Aproximadamente 10
cm 3de sedimento em pó foi transferido para um tubo de centrífuga
estéril de 50 mL contendo 20 mL de cloreto de sódio a 3% (p / v), com
formalina neutralizada a 10% (v / v) (contendo 3,8% de formaldeído)
como um fixador e depois cuidadosamente misturada por vórtice para
formar uma suspensão homogênea. A amostra de pasta foi então
submetida aos passos de separação e separação celular como se segue:

1. Uma alíquota de 1 mL de suspensão de sedimento fixada em

paraformaldeído (PFA) foi colocada em um tubo de 15 mL. Em
seguida, adicionaram-se 1,4 mL de NaCl a 2,5%, 300 de mistura de
detergente [EDTA] a 100 mM de ido etilenodiamino-tetra-acico,
pirofosfato de sio 100 mM, Tween-80 a 1% [v / v] e 300 de metanol
puro . A amostra foi agitada pelo Shake Master (Bio Medical
Science, Japão) a 500 rpm por 60 min.
2. A amostra de pasta foi sonicada a 160 W durante 30 s durante 10
ciclos (Bioruptor UCD-250HSA; Cosmo Bio, Japão).
3. A amostra foi carregada sobre camadas de densidade compostas
por 30% de Nycodenz (1,15 g / cm 3 ), 50% de Nycodenz (1,25 g /
cm 3 ), 80% Nycodenz (1,42 g / cm 3 ), e 67% politungstato de sódio
(2,08 g / cm 3 ), que foram preparados pela sobreposição de solução
de densidade mais leve em camadas pesadas.
4. Células e partículas de sedimentos foram então separadas por
centrifugação a 10.000 × g por 1 h a 25 ° C com rotores giratórios.
5. A camada de densidade leve que pode conter células microbianas
foi cuidadosamente coletada usando uma seringa com agulha de
20G.
6. A fraco pesada, incluindo partulas de sedimento precipitado, foi
lavada ressuspendendo com 5 mL de NaCl a 2,5%, e depois
centrifugada a 5000 x g durante 15 min a 25. O sobrenadante
recuperado foi colocado na mesma frac�o celular obtida acima
(isto � Passo 5).
7. O sedimento precipitado foi ressuspenso em 2,1 mL de NaCl a 2,5%,
300 � de mistura de detergente e 300 � de metanol. Em
seguida, a amostra foi agitada a 500 rpm durante 60 min a 25 ° C.
8. A amostra de lama foi colocada em camadas num gradiente de
segunda densidade com 30% de Nycodenz, 50% de Nycodenz, 80%
de Nycodenz e 67% de politungstato de sódio (igual ao Passo 3).
9. Células e partículas de sedimentos foram então separadas por
centrifugação a 10.000 × g por 1 h a 25 ° C com rotores giratórios.
10.A camada de densidade leve que pode conter células microbianas
foi coletada usando uma seringa com agulha de 20G, e todos os
sobrenadantes foram misturados juntos como uma suspensão de
células para contagem de células.

A semi-aluota do sobrenadante foi passada atrav de um filtro de

membrana de policarbonato de 0,22. As células no filtro de membrana
foram coradas com solução de coloração SYBR Green I (1/40 de SYBR
Green I em tampão Tris-EDTA [TE]). O número de células coradas
com SYBR Green I foi enumerado por contagem microscópica direta
(Inagaki et al., 2015) ou por um sistema de contagem de células
baseado em imagens fluorescentes como descrito em Morono et
al. (2009) e Morono e Inagaki (2010).
Visualização de células com microscopia eletrônica
Algumas separações de densidade de amostras nucleares foram
submetidas a purificação adicional por triagem celular (Morono et al.,
2013). As células em uma densidade separada foram primeiramente
presas a uma membrana Anodisc (Whatmann, EUA) e coradas com
SYBR Green I. Após ressuspensão por sonicação suave, as células
foram classificadas especificamente por um classificador de células
Moflo (Beckman Coulter, EUA) diretamente em um nitreto de silício
Membrana (SiN).
Um microlitro de água do mar filtrada contendo 2,5% de glutaraldeído
foi depositado na membrana de SiN com as células separadas, que
foram então fixadas durante 1 h a 4 ° C em uma câmara úmida. A
amostra foi lavada 6 vezes durante 10 min com 1 de gota de ua do mar
filtrada a 4 numa cara hida. Subsequentemente, a amostra foi pós-
fixada e o contraste foi aumentado utilizando o procedimento do ósmio
e ácido tânico (Kajikawa et al., 1975; Bastini et al., 1984). Primeiro, 1 µl
de solução filtrada de tetróxido de ósmio a 2% foi depositado na
membrana de SiN por 1 h a 4 ° C em câmara úmida e lavado 6 vezes
por 10 min com 1 µL de água destilada a 4 ° C em câmara úmida . Em
seguida, 1 µl de solução de ácido tânico a 3% filtrada a pH 6,8 foi
depositado na membrana de SiN, incubado por 1 h a 4 ° C em câmara
úmida, e depois a membrana foi lavada 6 vezes durante 10 min com 1
de gota de ua destilada a 4 numa cara hida. Após a lavagem, 1 µL da
solução filtrada de tetróxido de ósmio a 2% foi adicionado a membrana
de SiN por 1 h a 4 ° C em câmara úmida e lavado 6 vezes novamente
por 10 min com 1 µL de água destilada em câmara úmida. O trabalho
de coloração foi feito pelo colaborador onshore Dr. Goichiro Uramoto
no KCC (Kochi University, Japão).
A localização das células coradas em uma membrana de SiN foi
verificada com um microscópio de fluorescência baseado na
fluorescência verde derivada do SYBR Green I, e a mesma localização
foi observada na microscopia eletrônica de transmissão (JEM-
ARM200F, JEOL, Japão) operada pelo colaborador Dr. Naotaka
Tomioka no KCC (JAMSTEC).
Extração de DNA
Uma amostra de sedimento congelado coletada por perfuração
minicora foi triturada em pó usando um almofariz e pilão de cerâmica,
que foram pré-lixados a 500 ° C por 5 h para eliminar o DNA
contaminante exógeno. O DNA foi extraído de 5 g do sedimento
triturado usando um kit de isolamento PowerLyzer PowerSoil DNA
(MO BIO Laboratories, EUA) de acordo com as instruções do
fabricante com modificações. Todos os componentes do kit foram
irradiados por raios gama para eliminar a contaminação endógena do
DNA antes do uso. As esferas de zircónio foram substituídas pelas
pérolas de granada no kit para melhorar a eficiência da ruptura
celular. O DNA obtido foi ainda concentrado por precipitação com
etanol pela adição de 10% (v / v) de acetato de sódio 3 M, etanol
absoluto a 250% (v / v) e 20 µl de acrilamida linear (Thermo Fisher
Scientific) à solução de DNA e incubação durante a noite a -20 °
C.g durante 1 h seguido de lavagem duas vezes com etanol a 70%. O
DNA precipitado foi dissolvido em 50 µl de tampão TE e armazenado a
-20 ° C para análises subsequentes.

PCR, sequenciamento e análise de dados

Para determinar a composição taxonômica microbiana e a estrutura da
comunidade, a região V4 dos genes 16S rRNA bacterianos e archaeais
foi amplificada por PCR utilizando os iniciadores U515F-U806R
(Tabela T14). As amplifica�es por PCR foram realizadas em Cyclers
T�micos Veriti ou Cyclers T�micos StepOnePlus (Thermo Fisher
Scientific) utilizando DNA polimerase ver.3 de MightyAmp (Takara
Bio) seguindo as instru�es do fabricante com 2 � do DNA
extra�o. O primeiro ciclo de ciclos térmicos de PCR consistiu em
desnaturação inicial durante 2 min a 98 ° C, seguido de 35 ciclos de 5 s
de desnaturação a 95 ° C, 15 s de hibridação a 55 ° C e 30 s de
alongamento a 68 ° C. Os produtos de PCR obtidos foram purificados
utilizando esferas AMPure XP (Beckman Coulter). As sequências
adaptadoras e de índice foram adicionadas aos produtos de
amplificação purificados por PCR de 2º ciclo utilizando KAPA HiFi
HotStart ReadyMix com iniciadores 515F-MiSeq e 806R-MiSeq de
acordo com as instruções do fabricante. Os ciclos de segunda fase da
PCR consistiram em desnaturação inicial a 95 ° C durante 3 min,
seguidos de 10 ciclos de 30 s de desnaturação a 95 ° C, 30 s de
hibridização a 55 ° C, 30 s de alongamento a 72 ° C e alongamento final
a 72 ° C durante 5 min. Purificámos o produto de PCR duas vezes
utilizando contas de AMPure XP e medimos a concentração de ADN
utilizando um fluorospectrómetro NanoDrop 3300 com reagente
PicoGreen (Thermo Fisher Scientific). Com base nas concentrações
medidas, uma quantidade igual de cada produto purificado foi reunida
para fazer uma biblioteca de sequências. Sequenciamos a biblioteca em
uma plataforma MiSeq usando um MiSeq Reagent Kit v3 em um
formato de 600 ciclos (Illumina). uma quantidade igual de cada
produto purificado foi reunida para fazer uma biblioteca de
sequências. Sequenciamos a biblioteca em uma plataforma MiSeq
usando um MiSeq Reagent Kit v3 em um formato de 600 ciclos
(Illumina). uma quantidade igual de cada produto purificado foi
reunida para fazer uma biblioteca de sequências. Sequenciamos a
biblioteca em uma plataforma MiSeq usando um MiSeq Reagent Kit v3
em um formato de 600 ciclos (Illumina).
Tabela T14 Sondas oligonucleotídicas. Faça o download da tabela
no formato .csv.
A diversidade microbiana baseada nas assembléias do gene 16S rRNA
foi analisada usando o pipeline MetaAmp desenvolvido por Dong e
Strous (não publicado, http://ebg.ucalgary.ca/metaamp ).
Alta pressão / temperatura de incubação
Amostras de núcleo de sedimento mais internas foram tiradas de
WRCs (código de amostra 370YMWR) para experimentos de incubação
de sondagem isotópica estáveis baseados em terra em condições de alta
pressão e alta temperatura em KCC. Os compostos marcados com
isótopos estáveis ( 13 C, 15 N, e deutério [D]) foram utilizados como
substratos para monitorizar a respiração dissimilatória microbiana e /
ou a assimilação de biomassa celular.
Para a incubação de alta temperatura / pressão (alta P / T), montamos
um sistema de câmara P / T feito sob medida com revestimento
térmico (Syn Corporation, Ltd., Kyoto, Japão). O sistema de câmaras P
/ T alto é composto por cinco unidades de câmara de pressão à base de
titânio, cuja temperatura interna pode ser controlada separadamente
(consulte a Figura 1). F30).). Cada uma das câmaras de pressão
comporta quatro unidades internas de incubação, que consistem de um
tubo de polieteretercetona (PEEK) (155 mm de comprimento e 24 mm
DI), tampa superior PEEK e pistão livre de PEEK. O bujão superior do
PEEK e o pistão livre do PEEK têm, cada um, dois O-rings. As tampas
superiores do PEEK são conectadas ao tubo de aço inoxidável (100 mm
× 0,2 mm DI) através da tampa da câmara de pressão. A outra
extremidade do tubo de aço inoxidável é conectada a uma seringa de
aço inoxidável para injeção de substrato e amostragem de fluido dentro
/ da célula interna sob condições de alta P / T. Cinco câmaras de
pressão são conectadas a uma bomba de cilindro (Teledyne Isco, NE,
EUA, 100 D, 100 mL) para manter a pressão constante durante todo o
período de incubação. Um circulador térmico (Julabo, Baden-
Württemberg,

Figura F30. Sistema de câmara de alta temperatura / pressão.

Na câmara anaeróbica, ~ 50 centímetros 3 de sedimento foi feita a
partir de cada uma das 11 amostras WRC, os quais foram recolhidos
660-855 mbsf. O sedimento em pó foi obtido por raspagem de uma
peça interior do WRC com uma faca de cerâmica esterilizada e depois
misturada completamente para fazer uma amostra principal. Um 30
centímetros 3 alíquota da amostra mestre sedimento foi colocado em
cada uma das unidades internas de incubação fixada na tampa da
câmara de alta P / T. Após 35 mL de um meio basal (ver Tabela T15)
foi adicionado a cada uma das unidades internas de incubação, eles
foram selados com o pistão livre de PEEK e depois transferidos da
câmara anaeróbica para as câmaras de alto P / T. As câmaras de alto P
/ T foram então pré-aquecidas a 50 ° C e pressurizadas a 55 MPa por
uma bomba manual para a verificação de vazamentos. Após a
conclusão da verificação de vazamentos, a bomba do cilindro foi
ativada para manter uma pressão constante de 55 MPa. Em seguida,
cada aquecedor colocado nas cinco câmaras de alto P / T foi ajustado a
80 °, 95 °, 110 °, 125 ° e 140 ° C, respectivamente. Após cada câmara
atingir a temperatura de incubação designada, 0,7 mL de solução de
substrato (ver Tabela T16) foi injetado em cada unidade de incubação
interna usando uma seringa de aço inoxidável. Como havia espaço
vazio na linha de conexão, 2 mL do meio basal foram injetados para
empurrar a solução para dentro da unidade de incubação interna após
a injeção da solução de substrato. O volume injectado dos substratos
ou soluções de meio foi monitorizado pela bomba de cilindro através
do volume de água retirado de cada câmara P / T alta para compensar
o volume de líquido adicionado. Durante a incubação, 2 mL de
amostras de fluido foram coletadas periodicamente usando uma
seringa de aço inoxidável para determinar a composição isotópica de
carbono do metano e DIC. Após a amostragem, 2 mL do meio basal foi
suplementado para a unidade de incubação interna usando a seringa
de aço inoxidável para manter o volume de líquido constante na
câmara de amostra. Dois mililitros do fluido amostrado foram
transferidos para um frasco de vidro de 5 mL da seringa inoxidável
através de uma agulha. Antes do fluido ser adicionado, 20 µL de ácido
fosfórico foram adicionados ao frasco, em seguida, foi coberto com
uma rolha de borracha butílica e uma tampa de alumínio e aspirado
com uma bomba de vácuo rotativa de óleo através de uma agulha.
Tabela T15 Médio para reator alto P / T. Faça o download da tabela
no formato .csv.
Tabela T16 Solução de substrato. Faça o download da tabela no
formato .csv.

Amostragem para investigações de pós-

expedição
Experimentos de cultivo
Amostras WRC foram preparadas para experimentos de cultivo pós-
expedição por microbiologistas a bordo. A superfície externa mais
contaminada de cada WRC foi removida usando uma faca de cerâmica
esterilizada. As partes internas limpas foram armazenadas em garrafas
de vidro, lavadas com N 2 e seladas com tampas de borracha
butílica. Em alternativa, as amostras foram embaladas em sacos de
Escal estanques ao gás, que foram coradas com N 2 e selados a
vácuo. Todas as amostras foram armazenadas a 4 ou temperatura
ambiente (aproximadamente 23) no escuro antes das expericias de
cultivo em terra.
Microscopia Eletrônica de Varredura
No Chikyu , foram amostrados aproximadamente 5 cm 3 de sedimento
do interior do disco PFC sob o sistema KOACH, na bancada limpa para
microscopia eletrônica de varredura, para determinar as características
da ligação micróbio-mineral. Essas amostras foram preservadas em 5
mL de glutaraldeído a 2,5% e armazenadas a 4 ° C. Mais 5 cm 3de
sedimento foi amostrado a partir do disco interior na câmara anaeróbia
superlimpa para posterior trabalho de cultivo pós-expedição, incluindo
o enriquecimento de bactérias redutoras de ferro e
metanogéneos. Futuros experimentos examinarão a fixação
preferencial de culturas de enriquecimento subterrâneo profundas aos
minerais presentes no material do núcleo. Todas as amostras fixas
serão visualizadas sob uma SEM de emissão de campo JEOL JSM-
7100F a 3 kV. A composição elementar dos minerais será determinada
usando espectroscopia de raios X dispersiva.

Sequenciamento de tag ambiental e metagenômica

Para estudar a extensão e adaptações da biosfera submarina profunda
caracterizada pelo aumento da temperatura in situ até uma
profundidade de 1180 mbsf, as WRC foram tomadas e
limpas Chikyu.para análises moleculares baseadas em DNA e RNA. De
acordo com estimativas de biomassa, diferentes quantidades de
amostra serão usadas para extrair DNA e RNA usando métodos
desenvolvidos especificamente para sedimentos profundos de baixa
biomassa (por exemplo, Lever et al., 2015). O seqüenciamento do gene
de 16S rRNA bacteriano e arqueaway será realizado usando um
sequenciador MiSeq (Illumina) para caracterizar a diversidade
taxonômica microbiana e a estrutura da comunidade. Outras amostras
WRC ultracongeladas pessoais (por exemplo, códigos de amostra
370LLWR e 370THWR) foram dedicadas a estudos ecológicos
moleculares, incluindo análise sequencial de genes funcionais
amplificados por PCR e quantificação molecular usando a técnica de
PCR digital (Hoshino e Inagaki, 2012), bem como análises
metagenômicas e transcriptômicas independentes e dependentes do
cultivo.
Marcação de aminoácidos não-ortogonais bio-
ortogonais
Métodos recentemente desenvolvidos para detectar a síntese protéica
in situ foram aplicados por microbiologistas a bordo. Seguindo o
protocolo de Hatzenpichler et al. (2014), introduzimos um análogo de
aminoácido artificial (L-homopropargilglicina [HPG]; Clique em
Ferramentas de Química), em WRCs selecionados após o
processamento do núcleo e preparação para a incubação. Este
aminoácido artificial, substituindo a metionina, poderia ser usado para
detectar a atividade microbiana in situ, já que a fração alcino no HPG
reagiria prontamente com corantes fluorescentes apropriados após a
introdução do corante na incubação, permitindo assim ao investigador
detectar a síntese de proteína microbiana via fluorescência de um dado
micróbio de biossíntese. A reação a jusante de HPG com corantes
alcinosos acompanhados por microscopia e triagem celular foi
planejada para o processamento de incubação pós-incrustação.
Interações micróbio-mineral
Para revelar a partição ecológica em microescala dentro dos
sedimentos, os microbiologistas a bordo prepararam amostras WRC
para a separação de minerais usando técnicas de densidade e
magnéticas seguindo os métodos de Harrison e Orphan (2012). Pós-
ruptura, a separação da densidade será realizada usando diferentes
diluições de um metatungstato de sódio (H 2 Na 6 O 40 W 12), permitindo
a partição de partículas de sedimentos em diferentes frações
correspondentes à sua densidade. As divisórias serão ainda separadas
por suscetibilidade magnética usando um separador magnético
isodinâmico Frantz L-1. O DNA será posteriormente extraído dessas
partições, amplificado por PCR e sequenciado usando a tecnologia
Illumina iTAG. Isso permitirá o exame da fixação microbiana a
diferentes argilas, cujas propriedades de superfície são conhecidas por
exibir controles importantes sobre o enterramento de carbono (Mayer,
1994), bem como a ligação microbiana a argilas autogênicas ou fases de
sílica, que podem controlar a esmectita. transição ilita através da
redução de Fe octaédrico (Vorhies e Gaines, 2009) ou modulação de
atividades de sílica dissolvida (Abercrombie et al., 1994).
Análises de vírus
As amostras para a enumeração de VLP foram processadas na sala
super-limpa baseada em terra no KCC. Pós-incrustação, os vírus serão
separados dos sedimentos pelo mesmo método que as amostras para
separação e enumeração de células (ver contagens de células). A
mistura de células destacadas e vírus será filtrada (0,22 µm, difluoreto
de polivinilideno [PVDF], Millipore) para remover as células. Os vírus
serão filtrados em filtros de óxido de alumínio com tamanho de poro de
0,02 µm (Anodisc, GE) e corados com SYBR Gold (concentração de 25
×) por 15 min. Os filtros corados serão montados em lâminas de vidro
com um meio de montagem antifade (VECTASHIELD, Vector Labs) e
observados por microscopia de epifluorescência com aumento de 1000
×. Os vírus serão enumerados a partir de 20 campos de visão aleatórios
(FOVs) ou até 200 partículas serem enumeradas. A abundância de
vírus será calculada a partir do número médio de partículas virais por
FOV.
A potencial contaminação viral decorrente do fluido de perfuração
também será avaliada pela enumeração de amostras de fluido de
perfuração que foram fixadas em formaldeído e congeladas em
nitrogênio líquido (Suttle e Furhman, 2010). As amostras de fluido de
perfuração fixas e congeladas foram armazenadas a -80 ° C até a
análise no KCC.
Amostras para análise de microscopia eletrônica de células infectadas
foram levadas para terra no KCC a partir de MBIO2 WRCs, que haviam
sido congeladas a bordo em um freezer CAS (Morono et al., 2015).
Plasticidade induzida pela temperatura do
metabolismo
Amostras de sedimentos (5–20 cm WRCs; código de amostra
370HLWR) tiveram a superfície externa removida no Chikyu para
evitar mais potencial penetração de contaminantes do fluido de
perfuração. Eles foram mantidos em condições anaeróbicas e enviados
para o KCC em embalagem estéril e hermética. Lá, as amostras foram
submetidas a uma segunda rodada de remoção de superfície na câmara
anaeróbica superlimpa antes de serem esmagadas até um pó
grosso. Uma alíquota deste pó foi fixada com formaldeído e posta de
lado como amostra T 0 . Outra alíquota foi reservada para potenciais
futuras experiências, e o resto foi armazenado em anaeróbia e
H 2 Livres de condições antes da inoculação com o meio que contém os
substratos marcados com isótopos estáveis (ver abaixo).
Os volumes de incubação variaram de 120 mL para as amostras de
sedimentos mais rasos até 1000 mL para as amostras mais profundas
para contabilizar parcialmente a diminuição nas densidades celulares
aparentes e maximizar o potencial para gerar material mensurável. O
meio de incubação foi anaeróbio estéril de água do mar artificial (5% [v
/ v] D 2 O), com 15 NH 4 + (50% [v / v]) como a fonte de azoto e de etilo
como o substrato de carbono e doador de electrões. Sulfato (5 mM) foi
incluído para redução de sulfato.
Pós-ruptura, a composição isotópica do CO 2 no headspace será
monitorada para determinar quando a fase lag termina e o crescimento
exponencial começa. Uma vez iniciado o crescimento exponencial, as
amostras de meio líquido serão extraídas usando uma agulha e seringa
estéreis em 3 pontos de tempo em intervalos de aproximadamente 1
mês, fixadas com formaldeído e armazenadas para análise. No final do
período de incubação, as células fixadas serão coradas
fluorescentemente, classificadas de sedimento com citometria de fluxo
e montadas em membranas condutoras, e a composição isotópica das
células será analisada usando espectrometria de massa de íons
secundários para avaliar a taxa de incorporação de marcadores
isotopicamente marcados. substrato (Morono et al., 2011).

Enriquecimento a alta temperatura de

microrganismos termofílicos formadores de
endósporos
No KCC, sedimento (35 g) de amostras WRC (código de amostra
370MCWR) foi pasteurizado a 80 ° C por 1 he incubado
anaerobicamente a 50 ° C, 60 ° C ou 70 ° C em 70 mL de meio de água
do mar artificial (Widdel e Bak, 1992; Isaksen et al., 1994) emendaram
com os ácidos orgânicos lactato, propionato, succinato, acetato,
formato e butirato, cada um para uma concentração final de 1 mM,
para enriquecer os microrganismos termofílicos formadores. Os
microcosmos foram incubados por 21 dias. Eles foram amostrados
diariamente durante os primeiros 6 dias de incubação. A amostragem
diminuiu em freqüência entre 6 e 21 dias de incubação. As amostras
serão utilizadas para análises moleculares e genéticas a jusante. Essas
análises incluirão o monitoramento de indicadores moleculares de
crescimento anaeróbico, como medição de ácido orgânico e medição de
sulfato, e perfis de comunidades microbianas,
Atividade exoenzimática
No KCC, a atividade enzimática foi medida pelo fornecimento de
substrato fluorogênico, que produz fluorescência somente após o grupo
funcional ser clivado pela enzima relevante. Isso resulta em um
aumento na fluorescência ao longo do tempo quando as concentrações
de substrato estão saturando. As atividades foram obtidas por
amostragem de cada incubação em dois ou três pontos de tempo e
medindo a fluorescência para obter uma inclinação. Cada amostra foi
corrida com uma curva padrão de porção fluorescente
(metilumbeliferona [MUF] ou 7-amino-4-metilcumarina [AMC]) para
obter unidades absolutas de substrato clivado.
As incubações foram estabelecidas colocando-se 15 mL de suspensão
de sedimentos contendo ~ 10 g (massa exacta determinada) de
sedimento em pó e água anaeróbica artificial isenta de P em frascos de
soro de 30 mL selados com rolhas de borracha butílica azul. A
instalação de esmagamento de sedimento e incubação foi realizada em
uma câmara anaeróbica e o headspace do frasco foi lavado com N 2 . O
substrato foi então adicionado a concentrações estimadas de saturação
enzimática (ver Tabela T17 ).
Tabela T17 Concentrações iniciais de análogos de substrato para
cada enzima. Faça o download da tabela no formato .csv.
Após a lavagem do headspace, 700 µL de suspensão homogeneizada
foram removidos para um tubo Eppendorf de 1,5 mL para servir como
ponto de tempo zero. Este foi brevemente centrifugado antes da
remoção do sobrenadante para ser lido em triplicado num fluorómetro
de leitura de placas com um comprimento de onda de excitação de 380
nm e um comprimento de onda de emissão de 454 nm para todos os
substratos e padrões. Pontos de tempo subseqüentes foram tomados
após 2 semanas e depois novamente em 4-6 semanas para gerar uma
inclinação de atividade. Durante esse período, as incubações foram
mantidas em temperaturas próximas ao local. A fluorescência de MUF
e AMC é máxima a pH 10, de modo que 67 µl de tetraborato de sódio
50 mM (pH 10,8) foram adicionados a cada poço para serem lidos no
leitor de placas.
Arquivos nucleares biológicos (DeepBIOS)
Durante a Expedição 370, coletamos ~ 10 cm WRCs para
armazenamento a longo prazo no KCC (Masui et al., 2009). Esses
núcleos de arquivos herdados, denotados como “DeepBIOS” (código de
amostra 370RMS), serão usados para futuras investigações biológicas,
mediante solicitação. As DeepBIOS WRC foram coletadas após a
varredura de imagens por tomografia de raios X no laboratório de QA /
QC e imediatamente congeladas por um freezer CAS. DeepBIOS WRCs
foram armazenados a -80 ° C antes do envio para o KCC.

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