Tersedia online di www.sciencedirect.

comScienceDirect
Jurnalhomepage: www.e-jds.com

Original Article Nikotin merupakan faktor risiko

untuk karies gigi: Sebuah studi in vivo
Shiyu Liu a, b, Tianmu Wu a, b, Xuedong Zhou a, b, Bo Zhang b, Sibei Huo b, Yutao Yang
b, Keke Zhang a, Lei Cheng a, b, Xin Xu a, b, Mingyun Li a *
Laboratorium Kunci Negara Penyakit Mulut, Universitas Sichuan, Chengdu, B Department
China Kedokteran Gigi Operatif dan Endodontik, Rumah Sakit Stomatologi China Barat,Sichuan
Universitas, Chengdu, China
Diterima 17 Januari 2017; Revisi akhir diterima 11 Agustus 2017 Tersedia online 17 Januari
2018
KATA KUNCI Karies gigi; Streptococcus
mutans; Nikotin; Tikus
Abstrak Latar belakang / tujuan: Streptococcus mutans adalah patogen penting dalam
perkembangan karies gigi. Banyak penelitian telah berfokus pada hubungan antara nikotin dan S.
mutans secara in vitro. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menyelidiki pengaruh nikotin
terhadap pertumbuhan S. mutans dan potensi kariogenik in vivo. Bahan dan metode: Enam belas
laki-laki tikus Wistar bebas-patogen bebas dibagi menjadi 2 kelompok (kelompok yang diobati
nikotin dan nikotin yang tidak diobati) dan terinfeksi dengan S. mutans. Suspensi S. mutans
diobati dengan 1 mg / mL nikotin pada kelompok yang diobati nikotin. Metode Keyes digunakan
untuk mengevaluasi karies sulses tikus, dan plak gigi pada gigi geraham diamati dengan
scanning electron microscopy (SEM). Hasil: Insiden karies sulk lebih tinggi pada kelompok yang
diobati nikotin dibandingkan dengan kelompok yang tidak mendapat nikotin (42,7 Æ 1,7 vs 37,3
Æ 4,9, PZ 0,009). Keparahan karies meningkat dengan pengobatan nikotin. Skor karies sedikit
dentin dan skor karies dentin sedang lebih tinggi dengan adanya nikotin (P <0,001). Peningkatan
jumlah sel S. mutans yang melekat pada permukaan gigi diamati di bawah SEM pada kelompok
yang diobati dengan nikotin. Kesimpulan: Nikotin akan mempromosikan perlekatan S. mutans
ke permukaan gigi, dan lebih meningkatkan insiden dan keparahan karies gigi. Oleh karena itu,
nikotin mungkin menjadi faktor risiko karies yang diinduksi oleh rokok. © 2018 Taiwan
Asosiasi Obstetri & Ginekologi. Layanan penerbitan oleh Elsevier BV Ini adalah artikel akses
terbuka di bawah lisensi CC BY-NC-ND (http://creativecommons.org/ license / by-nc-nd / 4.0 /).
* Penulis yang sesuai. Laboratorium Kunci Negara Penyakit Mulut, Rumah Sakit Stomatologi
China Barat, Universitas Sichuan, Chengdu, Cina.
Alamat e-mail: limingyun@scu.edu.cn (M. Li).
https://doi.org/10.1016/j.jds.2017.09.006 1991-7902 / © 2018 Taiwan Asosiasi Obstetri &
Ginekologi. Layanan penerbitan oleh Elsevier BV Ini adalah artikel akses terbuka di bawah
lisensi CC BY-NC-ND (http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/).
Journal of Dental Sciences (2018) 13, 30e36
Pendahuluan
Karies gigi merupakan masalah kesehatan utama yang mempengaruhi 60e90% anak usia sekolah
dan kebanyakan orang dewasa, 1 dan kedua hanya untuk flu biasa pada manusia.2 Karies adalah
kompleks dan multifaktorial kondisi yang menyebabkan demineralisasi dan penghancuran
jaringan keras gigi secara progresif. Banyak faktor, seperti mikroorganisme, lingkungan dan
makanan, berhubungan dengan karies gigi. Plak gigi adalah yang paling bertanggung jawab
untuk pembentukan dan perkembangan karies. Streptococcus mutans dianggap sebagai patogen
penting yang terlibat dalam pembentukan karies gigi dan kehadiran S. mutans adalah 70 kali
lebih tinggi pada subyek yang terkena karies dibandingkan pada subyek bebas karies. 4
Kemampuan S. mutans untuk sintesis polisakarida ekstraseluler (EPS) dan menghasilkan asam
mengarah pada pembentukan dan perkembangan biofilm dental yang sangat kariogenik.5,6 Dan
toleransi terhadap pH rendah membantu kelangsungan hidup S. mutans pada ekosistem
mulut.7,8Dibawa bersama, semua karakteristik ini membuat S. mutans kariogenik.
Bahwa merokok tembakau berbahaya bagi kesehatan manusia telah ditunjukkan dengan baik.
Ini menyebabkan penyakit kardiovaskular, kanker dan penyakit sistemik lainnya.9e11 Rongga
mulut pasti dipengaruhi oleh merokok, karena ini adalah bagian pertama yang terpapar asap
tembakau. Insiden penyakit periodontal dan kanker mulut jauh lebih tinggi pada perokok
dibandingkan pada bukan perokok.12,13 Dalam beberapa tahun terakhir, semakin banyak
penelitian telah menemukan korelasi erat antara merokok dan karies gigi. Di Inggris, paparan
produk tembakau selama bertahun-tahun secara signifikan meningkatkan karies koronal dan
akar.14 Di Amerika Serikat, ada hubungan tergantung dosis antara mengunyah tembakau dan
karies permukaan akar.15 Di Jepang, keberadaan perokok di rumah dan jumlah perokok dalam
keluarga secara signifikan terkait dengan karies anak usia dini (ECC) .16 Sebuah penelitian in
vivo menunjukkan bahwa paparan asap rokok dan infeksi virus dapat secara sinergis
meningkatkan kerentanan tikus terhadap invasi bakteri sekunder.17 Studi in vivo lain
menunjukkan bahwa paparan asap rokok memperluas area yang terkena karies pada geraham
rahang atas.18 Akibatnya, hubungan antara merokok tembakau dan karies gigi tidak ambigu.
Nikotin adalah alkaloid dan komponen dari asap rokok. Banyak penelitian berfokus pada
hubungan antara nikotin dan S. mutans secara in vitro. Penelitian in vitro kami sebelumnya
menunjukkan bahwa nikotin memiliki efek promosi pada pertumbuhan S. mutans, aktivitas
metabolik, agregasi sel, produksi asam dan sintesis EPS.19e21 Namun, tidak ada laporan yang
pernah mengkhawatirkan tentang hubungan mereka secara in vivo. Akan sangat menarik untuk
menyelidiki efek nikotin pada pertumbuhan S. mutans dan potensi kariogenik in vivo dan lebih
lanjut memverifikasi penelitian in vitro kami sebelumnya.
Bahan dan metode
Pernyataan Etika
Penelitian ini dilakukan dengan persetujuan dari komite etika Dewan Penelitian Rumah Sakit
Stomatology Institute (WCSHIRB) China Barat dan semua percobaan dilakukan sesuai dengan
Panduan Institut Kesehatan Nasional untuk Perawatan dan Penggunaan Hewan Laboratorium.
Nikotin merupakan faktor risiko untuk karies gigi 31
Bahan kimia, strain bakteri dan kondisi pertumbuhan
S. mutans UA159 (ATCC 700610, patogen bakteri kariogenik) diinokulasi ke dalam kaldu
jantung otak (BHI) dengan atau tanpa 1 mg / mL nikotin (SigmaeAldrich, St Louis, MO, USA)
dan diinkubasi semalam. Penelitian kami sebelumnya menunjukkan bahwa konsentrasi
penghambatan minimum (MIC) nikotin ke S. mutans adalah 16 mg / mL, 22 dan konsentrasi
fisiologis nikotin dalam air liur perokok berkisar dari 70 hingga 1560 μg / mL.23 In Penelitian
ini, 1mg / mL nikotin dipilih sebagai konsentrasi yang tepat. Untuk setiap perawatan, konsentrasi
bakteri disesuaikan dengan 1 Â 109 unit pembentuk koloni (CFU) / mL. Bakteri 37 C.
diinkubasi dalam atmosfir 5% CO
2
pada
model in vivo karies gigi
Tikus telah digunakan sebagai model untuk menetapkan karies gigi sejak 1922,24 Enam belas
laki-laki tikus Wistar yang bebas spesifik patogen yang berusia 21 hari secara acak dan rata-rata
dibagi menjadi 2 kelompok (n Z8), satu diobati dengan nikotin dan yang lainnya tanpa nikotin.
Pemilihan umur tikus sesuai dengan artikel bahwa Bowen WH et al.25
Selama tiga hari pertama, setiap mikroorganisme pribumi dihilangkan dengan memberi makan
tikus diet yang mengandung antibiotik (kloramfenikol, ampisilin, karbenisilin, 1,0 g / g). diet kg)
.26 S. mutans diinkubasi dalam kultur media (BHI) dengan atau tanpa 1 mg / mL nikotin selama
24 jam dan kemudian diinokulasi ke gigi tikus. Setiap tikus kemudian ditantang dengan 400 μL
suspensi Â1109 CFU / mL S. mutans (suspensi mengandung 1mg / mL nikotin dalam kelompok
yang diobati nikotin) selama tiga hari berturut-turut (dua kali sehari, interval 30 min, tidak ada
makanan atau air selama 1 jam setelah inokulasi) dan kemudian BHI steril ditambah 1mg / mL
nikotin (kelompok yang diobati nikotin) atau BHI steril (kelompok nikotin yang tidak diobati)
setiap empat hari sampai tikus dikorbankan. Jadwal ini ditunjukkan pada Gambar. 1. Semua tikus
diberikan diet makanan organik National Institutes of Health 2000 dan 5% air sukrosa. 27
Percobaan berlangsung selama 24 hari dan kemudian tikus-tikus dikorbankan. Rahang secara
aseptik dibedah dan diproses untuk penilaian karies Keyes28 dan scanning electron microscopy
(SEM). Kami secara acak memilih 7 tikus yang diproses untuk penilaian karies Keyes dan 1
tikus (4 rahang) untuk SEM di setiap kelompok.
Metode untuk penilaian karies Keyes: Empat rahang setiap tikus diwarnai dalam 0,4% larutan
garam amonium selama 16 jam, terlindung dari cahaya. Rahang dibilas, dikeringkan dan di
hemiseksi, dan akhirnya diamati dengan mikroskop stereo. Lesi karies diwarnai dengan warna
merah dan aturan skor Keyes digunakan untuk menilai karies setiap tikus. Kedalaman dan
ukuran larutan garam amonium merah disebarluaskan ke gigi mewakili tingkat keparahan dan
daerah dampak lesi karies. Menurut metode Keyes, karies dibagi menjadi empat kelas: hanya
enamel (E), sedikit dentin (Ds), dentin sedang (Dm), dan dentin luas (Dx). Karies D melibatkan
sekitar 1/4 dentin antara enamel dan ruang pulpa. Karies dm termasuk keterlibatan sekitar 1 / 4e3
/ 4 dari dentin, sedangkan penetrasi di luar 3/4 dari daerah dentin diberi label karies Dx. Lesi
karies dubur dari setiap gigi geraham pada setiap level (E, Ds, Dm,
dan Dx) pada setiap tikus (tikus yang dipilih mulai untuk penilaian karies Keyes) diberi skor.
Kemudian kami menambahkan skor E dari setiap gigi molar pada tikus dan total jumlah skor E
pada tikus adalah data yang kami kumpulkan untuk dianalisis secara statistik. Kalkulus yang
sama diterapkan untuk mengumpulkan data skor Ds, Dm, Dx. Karena kerusakan gigi dimulai
dari daerah enamel dan secara bertahap berlanjut ke daerah dentin, skor E mewakili kejadian
karies dan skor Ds, Dm, Dx mewakili keparahan karies. 28
Scanning electron microscopy (SEM)
Kami secara acak memilih 1 tikus dalam setiap pemrosesan kelompok untuk SEM. Setelah
mengeluarkan tulang ekstra dan daging yang mengelilingi rahang, rahang dicuci dua kali dengan
fosfat buffer saline (PBS) dan diperbaiki semalam dengan glutaraldehid 2,5% pada 4 C. Rahang
kemudian dicuci dua kali dengan air suling, didehidrasi oleh serangkaian larutan etanol (30, 50,
70, 80, 85, 90, 95 dan 100%), direndam selama 10 menit dalam hexame- thyldisilazane dan
dikeringkan dalam desikator. Setelah lapisan sputter dengan emas-paladium, sampel dicitrakan
setidaknya tiga kali pada posisi yang dipilih secara acak dalam mikroskop elektron scanning
pada 2000, 5000, 10.000 pembesaran.
Gambar 1 Jadwal tantangan tikus. Tikus diberi makan dengan antibiotik selama tiga hari
berturut-turut dan kemudian ditantang dengan suspensi S. mutans selama tiga hari berturut-turut
dan BHI steril (dengan atau tanpa 1 mg / mL nikotin) setiap empat hari sampai tikus
dikorbankan.
32 S. Liu et al
Gambar 2 Lesi karies representatif dideteksi dengan mikroskopi stereo. Karies berkembang
menjadi moderat dentin (Dm) dan dentin yang luas (Dx) pada kelompok yang diobati dengan
nikotin. Karies Dm & Dx jarang terlihat pada kelompok lain.
Analisis statistik
Skor E, Ds, Dm, dan Dx masing-masing tikus diperiksa dan dicatat sesuai dengan metode Keyes.
Perangkat lunak SPSS 21.0 digunakan untuk analisis data. Uji t independen dilakukan untuk
membandingkan kelompok yang diobati dengan nikotin dan yang tidak diobati. Tingkat
signifikansi p <0,05 diadopsi untuk pengujian hipotesis statistik.
Hasil
Skor karies Sulfus setelah S. mutans challenge
Lesi karies pada gigi tikus diamati oleh mikroskop stereo (Gbr. 2) dan skor menggunakan
metode Keyes. Analisis statistik ditunjukkan pada Gambar. 3.
Karies Sulcal telah berkembang menjadi lesi dentin moderat atau ekstensif (Dm, Dx) pada
kelompok yang diobati nikotin, dan hanya sedikit lesi dentin (Ds) yang diamati (Gambar 2A).
Namun, pada kelompok yang tidak diobati dengan nikotin, sebagian besar karies gigi sulk hanya
berkembang menjadi Ds, dan Dm & Dx jarang terdeteksi (Gambar 2B).
Seperti ditunjukkan pada Gambar. 3A, secara signifikan lebih banyak lesi karies, termasuk
enamel (E), sedikit dentin (Ds) dan lesi karies dentin (Dm) sedang, diamati pada kelompok yang
diberi nikotin (P <0,05). Meskipun skor total dentinal (Dx) total dentin lebih tinggi pada
kelompok yang mendapat nikotin dibandingkan pada kelompok yang tidak diobati, tidak ada
perbedaan statistik pada lesi karies Dx antara kedua kelompok (P> 0,05). Sebagaimana
dinyatakan sebelumnya, lesi Karies E mewakili kejadian karies dan Lesi karies Ds, Dm, Dx
mewakili keparahan karies. Gambar. 3B menunjukkan bahwa ada peningkatan yang jelas dalam
kejadian dan keparahan karies sulses pada kelompok yang diobati dengan nikotin. Oleh karena
itu, kami menyimpulkan bahwa nikotin meningkatkan perkembangan karies gigi pada tikus yang
ditantang dengan S. mutans.
Lampiran S. mutans ke permukaan gigi
Mikroskop elektron scanning menghasilkan gambar morfologi yang memperbesar material pada
permukaan sampel. Memindai gambar mikroskop elektron menunjukkan plak bakteri pada
permukaan bukal molar tikus. Meskipun tidak ada metode pengukuran biomassa plak atau nomor
sel menurut gambar SEM, itu intuitif bahwa lebih banyak sel bakteri yang diamati pada
kelompok yang diperlakukan nikotin seperti yang ditunjukkan pada Gambar. 4. Nikotin
meningkatkan jumlah sel S. mutans yang melekat. ke permukaan gigi. Selain itu, panjang rantai
sel lebih lama dalam kelompok yang diobati nikotin, dengan sel-sel juga membentuk gumpalan
dan agregat. Namun, lebih sedikit sel yang diamati pada kelompok kontrol dan sel-sel lebih
terdistribusi secara acak.
Diskusi
Untuk pengetahuan kita, ini adalah studi pertama untuk mengeksplorasi efek nikotin pada
potensi kariogenik S. mutans
Nikotin merupakan faktor risiko untuk karies gigi 33
Gambar 3 Analisis statistik skor Keyes. (A) Skor untuk karies enamel (E), karies dentin (Ds),
dan karies dentin dentin (Dm) secara signifikan lebih tinggi pada kelompok yang diobati nikotin
(P <0,05), sementara tidak ada perbedaan statistik dalam karies dentin yang luas (Dx). ) terlihat
antara kedua kelompok (P> 0,05). * P <0,05, *** P <0,001, ns, tidak signifikan. Baris kesalahan
mewakili SD. (B) Nilai menunjukkan saranaÆ SD (n Z 7), nd, tidak terdeteksi. Ada peningkatan
yang jelas dalam kejadian dan keparahan karies sulses.
in vivo. Mengenai ukuran sampel berkisar dari 6 hingga 10 tikus untuk setiap kelompok dalam
kebanyakan studi karies, 29e34 kami mengambil 16 tikus dan membagi mereka menjadi dua
kelompok (n Z8). Hasil penelitian kami memberikan bukti yang mencolok bahwa nikotin
meningkatkan perlekatan S. mutans ke permukaan gigi dan perkembangan karies in vivo, dan
tampaknya menjadi faktor promosi untuk perkembangan karies gigi.
Sejak 1968 ketika laporan pertama dari S. mutans menginduksi karies merajalela di hamster
dicatat, 35 S. mutans telah dianggap sebagai patogen kariogenik utama. Kemampuan produksi
glukosiltransferase (Gtfs), mensintesis polisakarida ekstraseluler (EPS), menghasilkan asam dan
toleransi pada pH rendah mempengaruhi S. mutans dengan kariogenisitas yang kuat.36 Biofilm
bertindak sebagai mekanisme persistensi penting, karena biofilm mampu melawan kemoterapi.
agen terapeutik, faktor imun, antibiotik, serta agen antibakteri yang berasal dari host.37 Nikotin
telah dilaporkan memiliki efek biphasic pada pertumbuhan planktonik S. mutans, karena 10À3
hingga 10À4 M nikotin meningkatkan pertumbuhan S. mutans, sementara 10À1 hingga 10À2 M
nikotin menurun pertumbuhan.19 Dalam penelitian kami, konsentrasi nikotin 1mg / mL, yaitu, 6
Â10À3 M pasti mempromosikan pertumbuhan S. mutans dan jumlah sel S. mutans yang
menempel pada permukaan gigi. . Sebagai bakteri mulut terutama hidup sebagai biofilm, efek
promosi nikotin pada lampiran S. mutans ke permukaan gigi dan lebih meningkatkan
pembentukan biofilm pada tikus berkontribusi terhadap peningkatan kelangsungan hidup dan
meningkatkan kemampuan kariogenik S. mutans.
Telah dilaporkan bahwa faktor virulensi kunci dari S. mutans adalah produksi poly-saccharide
(EPS) ekstraseluler yang tidak dapat larut melalui eksoenzim, seperti glucosyl-transferases (Gtfs)
.38 EPS adalah konstituen utama dari biofilm dan tidak hanya mempromosikan kolonisasi S.
mutans pada permukaan gigi, tetapi juga menarik mikroorganisme lain untuk membentuk plak
gigi. Sebagai akibatnya, komunitas atau matriks yang terstruktur terbentuk.39 Matriks yang kaya
EPS
menciptakan lingkungan mikro yang bersifat asam di dalam biofilm, dan mengarah ke
demineralisasi jaringan keras gigi.40 Penelitian in vitro kami sebelumnya menunjukkan bahwa
kedua nomor sel dalam biofilm juga Karena EPS meningkat oleh nikotin, dan ekspresi protein
Gtf naik regulasi.20 Hasilnya juga menunjukkan bahwa lebih banyak sel S. mutans yang diamati
pada permukaan gigi pada kelompok yang diobati nikotin. Karena lebih banyak sel bakteri
mengeluarkan lebih banyak EPS dan lebih banyak EPS mengembangkan matriks yang lebih
kaya, menurunkan pH biofilm dan meningkatkan demineralisasi. Ini akan menjadi alasan
mengapa ada peningkatan yang jelas dalam kejadian dan keparahan karies sulses pada kelompok
yang diobati nikotin dalam penelitian kami.
Beberapa penelitian menunjukkan bahwa perokok memiliki kesehatan mulut yang lebih buruk
dan dua kali lebih mungkin untuk datang ke dokter gigi dibandingkan dengan yang bukan
perokok (75% vs 57%) .41 Laporan lain menunjukkan bahwa perokok saat ini menerima
perawatan karies / endodontik yang jauh lebih tinggi daripada yang tidak merokok. perokok
(47,1% vs 43,6%) .42 Dan laporan terbaru menunjukkan bahwa paparan asap tembakau pada
usia 4 bulan dikaitkan dengan hampir 2 kali lipat peningkatan risiko mengembangkan karies gigi,
dan risiko karies juga meningkat di antara mereka yang terpapar asap rokok rumah tangga
sebesar 1e1,5 kali lipat.43 Penelitian-penelitian ini sekali lagi membuktikan kontak dengan asap
rokok dan akumulasi nikotin yang secara signifikan meningkatkan risiko karies. Namun,
konsentrasi nikotin dalam oral dipengaruhi oleh banyak faktor, termasuk volume air liur yang
berbeda yang disekresikan oleh individu, berbagai jenis rokok, durasi
34 S. Liu dkk.
Gambar 4 Plak bakteri representatif pada permukaan gigi diamati dengan memindai mikroskop
elektron. Kedua kelompok nikotin diperlakukan (atas) dan nikotin yang tidak diobati (yang lebih
rendah) sampel terdeteksi setidaknya tiga kali pada posisi yang dipilih secara acak pada 2000,
5000, 10.000 pembesaran. Lebih banyak sel diamati pada kelompok yang diobati nikotin, dan
sel-sel membentuk gumpalan dan agregat.
merokok, lokasi sampel dan metode pengukuran. Satu penelitian melaporkan konsentrasi nikotin
dalam saliva berkisar antara 96 ng / mL hingga 1,6 mg / mL.44 Lainnya melaporkan adanya
kadar nikotin 367 ng / mL sampai 2,5 mg / mL dalam air liur terstimulasi dan 900 ng / mL
hingga 4,6 mg / mL dalam bentuk tak distimulasi. saliva.45 Penelitian lain melaporkan
konsentrasi nikotin bervariasi dari 70 ng / mL hingga 1,56 mg / mL.23 Dalam penelitian kami, 1
mg / mL nikalin mempromosikan perkembangan karies gigi pada gigi molar tikus. Fenomena
bahwa ada risiko karies yang lebih tinggi pada perokok mungkin dijelaskan.
Dalam penelitian in vivo ini, pengobatan dengan nikotin secara signifikan meningkatkan
jumlah sel S. mutans yang menempel pada permukaan gigi dan perkembangan karies sulk (P
<0,05) pada tikus. Oleh karena itu, nikotin merupakan faktor risiko untuk karies gigi.
Pernyataan Konflik Kepentingan
Para penulis menyatakan tidak ada potensi konflik kepentingan sehubungan dengan kepenulisan
dan / atau publikasi artikel ini.
Ucapan Terima Kasih
Kami berterima kasih kepada Chaoliang Zhang atas dukungan teknisnya. Penelitian ini didukung
oleh National Science Foundation Alam Cina (81400501 to ML)
Referensi
1. Petersen PE, Bourgeois D, Ogawa H, Estupinan-Hari S, Ndiaye C. Beban global penyakit mulut dan risiko terhadap kesehatan
mulut. Organ Kesehatan Dunia Bull 2005; 83: 661e9. 2. Islam B, Khan SN, Khan AU. Karies gigi: dari infeksi hingga
 pencegahan. Med Sci Monitor 2007; 13: 196e203. 3. Selwitz RH, Ismail AI, Pitts NB. Karies gigi. Lancet 2007; 369:
51e9. 4. Peterson SN, Snesrud E, Liu J, dkk.palsi gigi
Mikrobiomadalam kesehatan dan penyakit. PLoS One 2013; 8: e58487. 5. Bowden GHW. Mikrobiologi karies permukaan akar
pada manusia. J
Dent Res 1990; 69: 1205e10. 6. Marsh PD, Bradshaw DJ. Plak gigi sebagai biofilm. J Ind
Microbiol 1995; 15: 169e75. 7. Belli WA, Marquis RE. Adaptasi Streptococcus mutans dan Enterococcus hirae menjadi stres
asam dalam budaya berkelanjutan. Appl Lingkungan Microbiol 1991; 57: 1134e8. 8. Svensater G, Borgstrom M, Bowden GHW,
Edwardsson S. Mikrobiota toleran asam yang terkait dengan plak dari karies awal dan permukaan gigi yang sehat. Karies Res
2003; 37: 395e403. 9. Mainali P, Pant S, Rodriguez AP, Deshmukh A, Mehta JL. Kesehatan tembakau dan kardiovaskular.
Cardiovasc Toxicol 2015; 15: 107e16. 10. Depp CA, Bowie CR, Mausbach BT, dkk. Merokok saat ini dikaitkan dengan fungsi
kognitif dan adaptif yang lebih buruk dalam penyakit mental yang serius. Acta Psychiatr Scand 2015; 131: 333e41. 11. Aizawa
K, Liu C, Tang S, dkk. Karsinogen tembakau menginduksi kanker paru-paru dan steatohepatitis non-alkohol dan karsinoma
hepatoselular dalam musang yang dapat dilemahkan oleh suplementasi lisagel. Int J Cancer 2016; 139: 1171e81. 12. Bibars AR,
Obeidat SR, Khader Y, Mahasneh AM, Khabour OF. Efek merokok Waterpipe pada kesehatan periodontal. Kesehatan Mulut
Sebelumnya Dent 2015; 13: 253e9. 13. Maleki D, Ghojazadeh M, Mahmoudi SS, dkk. Epidemiologi kanker mulut di Iran:
tinjauan sistematis. Asian Pac J Cancer Prev 2015; 16: 5427e32. 14. Jette AM, Feldman HA, Tennstedt SL. Penggunaan
tembakau -A Faktor risiko yang dapat dimodifikasi untuk penyakit gigi di kalangan lansia. Am J Public Health 1993; 83: 1271e6.
15. Tomar SL, Winn DM. Mengunyah penggunaan tembakau dan karies gigi di
kalangan pria AS. Am J Public Health 1993; 83: 1271e6. 16. Nakayama Y, Mori M. Asosiasi merokok tembakau lingkungan
dan kebiasaan ngemil dengan risiko karies anak usia dini di antara anak-anak Jepang berusia 3 tahun. J Public Health Dent 2015;
75: 157e62. 17. Li M, Huang R, Zhou X, Zhang K, Zheng X, Gregory RL. Efek nikotin pada biofilm dual-spesies Streptococcus
mutans dan Streptococcus sanguinis. FEMS Microbiol Lett 2014; 350: 125e32. 18. Fujinami Y, Nakano K, Ueda O, dkk. Karies
gigi daerah molar tikus diperluas oleh paparan asap rokok. Karies Res 2011; 45: 561e7. 19. Huang R, Li M, Gregory RL. Efek
nikotin pada pertumbuhan dan metabolisme Streptococcus mutans. Eur J Oral Sci 2012; 120: 319e25. 20. Huang R, Li M,
Gregory RL. Nikotin mempromosikan sintesis polisakarida Streptococcus mutans ekstraseluler, agregasi sel dan aktivitas
dehidrogenase laktat secara keseluruhan. Arch Oral Biol 2015; 60: 1083e90. 21. Li M, Huang R, Zhou X, Qiu W, Xu X, Gregory
RL. Efek nikotin pada virulensi kariogenik Streptococcus mutans. Folia Microbiol 2016; 61: 505e12. 22. Li M, Huang R, Zhou
X, Gregory RL. Peran sortase di Strep- tococcus mutans di bawah pengaruh nikotin. Int J Oral Sci 2013; 5: 206e11.
Nikotin merupakan faktor risiko untuk karies gigi 35
23. Hoffmann D, Adams JD. Sebuah studi tentang karsinogenesis tembakau .23. N-nitrosamine spesifik tembakau karsinogenik
dalam tembakau dan dalam air liur dari gayung tembakau. Cancer Res 1981; 41: 4305e8. 24. McCollum EV, Simmonds N,
Kinney EM, Berduka CJ. Hubungan nutrisi untuk perkembangan gigi dan pengawetan gigi. I. Sebuah studi awal tentang defek
gigi rahang atas dan gigi palsu pada dua ratus dua puluh tikus pada diet yang defektif dan defisien. Bull Johns Hopkins Hosp
1922; 33: 202e15. 25. Bowen WH. Model tikus dalam penelitian karies. Odontologi 2013;
101: 9e14. 26. Bao R, Yang JY, Sun Y, dkk. Protein fusion Flagellin-PAc menghambat perkembangan karies. J Dent Res
2015; 94: 955e60. 27. Falsetta ML, Klein MI, Colonne PM, dkk. Hubungan simbiotik antara Streptococcus mutans dan Candida
albicans mensinkronisasikan virulensi biofilm plak in vivo. Menginfeksi Immun 2014; 82: 1968e81. 28. Keyes PH. Karies gigi
pada gigi molar tikus. II. Metode untuk mendiagnosis dan mencetak beberapa jenis lesi secara bersamaan. J Dent Res 1958; 37:
1088e99. 29. Garcia SS, Blackledge MS, Michalek S, dkk. Penargetan biofilm Streptococcus mutans oleh molekul kecil baru
mencegah karies gigi dan mempertahankan mikrobioma oral. J Dent Res 2017; 96: 807e14. 30. Hwang G, Liu Y, Kim D, Li Y,
Krysan DJ, Koo H. Candida albicans mannans menengahi Streptococcus mutans exoenzyme GtfB mengikat untuk memodulasi
pengembangan biofilm lintas-kerajaan in vivo. PLoS Pathog 2017; 13: e1006407. 31. Galvao LCC, Rosalen PL, Rivera-Ramos I,
dkk. Inaktivasi gen spxA1 atau spxA2 dari Streptococcus mutans menurunkan virulensi pada model karies tikus. Mol Oral
Microbiol 2017; 32: 142e53. 32. Kusumaningsih T, MS Subijanto, Indrawati R, Devijanti RR. Tingkat beta defensin-2 dalam air
liur dan ekspresinya dalam sel epitel kelenjar parotid setelah induksi probiotik (Lactobacillus reuteri) untuk menghambat
Streptococcus mutans pada karies. Eur J Dent 2016; 10: 556e60. 33. Yan Yh, Yu F, Zeng C, Cao Lh, Zhang Z, Xu Qa. CCL17
digabungkan dengan CCL19 sebagai adjuvant hidung meningkatkan imunogenitas vaksin DNA anti-karies pada hewan pengerat.
Acta Pharmacol Sin 2016; 37: 1229e36. 34. Bachtiar EW, Afdhal A, Meidyawati R, Soejoedono RD, Poerwaningsih E. Efek
topikal anti-Streptococcus mutans IgY gel pada kuantitas S. mutans pada permukaan gigi tikus. Acta Microbiol Immunol Hung
2016; 63: 159e69. 35. Edwardsson S. Karakteristik Streptococcus yang menginduksi karies manusia menyerupai Streptococcus
mutans. Arch Oral Biol 1968; 13: 637e46. 36. Xu JS, Cui Y, Liao XM, Tan XB, Cao X. Pengaruh emodin pada sifat kariogenik
dari Streptococcus matans dan perkembangan karies gigi pada tikus. Exp Ther Med 2014; 8: 1308e12. 37. Donlan RM, Costerton
JW. Biofilm: mekanisme bertahan hidup dari mikroorganisme yang relevan secara klinis. Clin Microbiol Rev 2002; 15: 167e93.
38. Koo H, Bowen WH. Candida albicans dan Streptococcus mutans: alergen sinergis potensial untuk menyebabkan kerusakan
gigi yang ganas pada anak-anak. Future Microbiol 2014; 9: 1295e7. 39. Bowen WH, Koo H. Biologi Streptococcus mutans-
derived glucosyltransferases: peran dalam pembentukan matriks ekstraselular biofilm kariogenik. Karies Res 2011; 45: 69e86.
40. Xiao J, Klein MI, Falsetta ML, dkk. Matriks exopolysaccharide memodulasi interaksi antara arsitektur 3D dan virulensi dari
biofilm oral campuran-spesies. PLoS Pathog 2012; 8: e1002623. 41. Csikar J, Kang J, Wyborn C, Dyer TA, Marshman Z,
Godson J. Status kesehatan mulut yang dilaporkan sendiri dan kehadiran dokter gigi
perokok dan non-perokok di Inggris. PLoS One 2016; 11: e0148700. 42. Ojima M, Hanioka T, Shimada K, Haresaku S,
Yamamoto M, Tanaka K. Peran penggunaan tembakau pada perawatan gigi dan keparahan penyakit mulut di klinik gigi
masyarakat di Jepang. Tob Induc Dis 2013, 11: 13. 43. Tanaka S, Shinzawa M, Tokumasu H, Seto K, Tanaka S, Kawakami K.
Perokok pasif dan insidensi karies gigi pada gigi sulung antara anak-anak di Jepang:
36 S. Liu et al
populasi berdasarkan penelitian kohort retrospektif. Br Med J 2015; 351: h53978. 44. Bara ̃o VA, Ricomini-Filho AP, LP
Faverani, dkk. Peran nikotin, cotinine dan kafein pada perilaku elektrokimia dan kolonisasi bakteri ke cp-Ti. Mater Sci Eng C
Mater Biol Appl 2015; 56: 114e24. 45. Robson N, Bond AJ, Wolff K. konsentrasi nikotin dan cotinine saliva dalam air liur yang
tidak distimulasi dan distimulasi. Afr J Pharm Pharmacol 2010; 4: 61e5.