Aula 3 Cels Procariotas e Eucariotas Betania

Aula 6 – Crescimento bacteriano
Microbiologia
Curso Medicina Veterinária
Prof(a): Betânia Glória Campos
M. Veterinária – Doutora Produção Animal UFMG
Patos de Minas, 2018

CONTEÚDO
 2.Bacteriologia
 2.1 - Morfologia bacteriana: estrutura celular e tipos morfológicos;

(ok visto na abordagem de células procariotas)
 2.2 – Necessidades nutricionais das bactérias: exigências,

classificação nutricional e transporte de nutrientes para o interior da
célula bacteriana. Ok
 2.3 - Crescimento bacteriano

 2.3.1 - Condições físicas para o crescimento bacteriano
 2.3.2 - Modos de reprodução
 2.3.3 - Curva de crescimento
CRESCIMENTO BACTERIANO
 Crescimento em número e não em tamanho;
 Os microrganismos em “crescimento” estão, na verdade,

aumentando o seu número e se acumulando em colônias
que agrupam milhares a bilhares de células.
Porque estudar o crescimento bacteriano?
Em razão do entendimento das condições necessárias para

o crescimento microbiano podemos:
 Determinar como controlar o crescimento dos

microrganismos patogênicos;
 Determinar como controlar o crescimento dos

microrganismos deteriorantes de alimentos;
 Estimular o crescimento dos microrganismos que

desejamos estudar;
Fatores necessários para o crescimento
Físicos Químicos
• Fontes de C,O,N,S,
• Temperatura fósforo,
• pH • Micronutrientes
• Pressão osmótica • Fatores de
crescimento
FATORES NECESSÁRIOS PARA O
CRESCIMENTO
1- Temperatura
Velocidades de crescimento características de diferentes tipos de
microrganismos em resposta à temperatura.
CRESCIMENTO
3- Pressão Osmótica
 Os microrganismos retiram da
água do seu ambiente, a
maioria dos seu nutrientes H2O
solúveis. 80 a 90%
 Portanto, precisam de água para

seu crescimento.
CRESCIMENTO
Ex:
Peixes salgados;
Mel;
Leite condensado.
 Adição de sais/solutos – aumenta a pressão osmótica =

conservação de alimentos
CRESCIMENTO
Fatores químicos
 C, N, S, P, micronutrientes e fatores de crescimento.
Oxigênio:
 Anaeróbio facultativo: E.coli; leveduras.

 Anaeróbios obrigatórios: Clostridium.
 Anaeróbios aerotolerantes: Toleram o O2 porém não
podem utilizá-lo.
 Microaerófilos: aeróbias e precisam de O2 mas em

concentrações pequenas.
CRESCIMENTO
MEIOS DE CULTURA
 Conceito: Material nutriente preparado em laboratório
para crescimento de microrganismos.
No caso de desejarmos o crescimento de uma cultura de
um certo microrganismo proveniente de uma amostra.
Que critérios deverão ser observados para o meio de
cultura?
1. Nutrientes corretos;
2. Qtde de água necessária;
3. pH ajustado;
4. Qtde específica de O2 ou ausência;
5. Meio estéril;
6. Finalmente incubada na temperatura correta.
MEIOS DE CULTURA
Meios Sólidos
ÁGAR – polissacarídeo complexo obtido a partir de algas
marinhas.
 Poucos microrganismos podem
degradar o ágar e então ele fica
sólido.
 Ágar se liquefaz a 100°C

(temp. de ebulição da água).
 Em laboratório Banho Maria

50 °C o ágar não causa danos
a bactéria.
MEIOS DE CULTURA
Meios Comerciais
 Contém todos os componentes desejados.
Esterilização
MEIOS DE CULTURA
Meios quimicamente definidos
 Deve conter fontes de carbono e energia.

MEIOS DE CULTURA
Meio complexo
 Quando o meio é líquido é chamado de CALDO

NUTRIENTE, quando é sólido ÁGAR NUTRIENTE.
MEIOS DE CULTURA
Meios e metodologias para crescimento de anaeróbios
• Usar meios de cultivo redutores: Meio Tioglicolato de Sódio
• Necessário uso placa de petri (jarras especiais):

MEIOS DE CULTURA
Meios e metodologias para crescimento de anaeróbios
MEIOS DE CULTURA
Cultivo seletivo e diferencial
MEIOS DE CULTURA
Meio Seletivo
MEIOS DE CULTURA
Meio Seletivo Caldo Verde Brilhante
O Caldo Verde Bile Brilhante 2% é utilizado
para confirmar um resultado positivo
presuntivo para coliformes.
Grupo dos coliformes: bacilos aeróbios e

anaeróbios facultativos, Gram-negativos, não
formadores de esporos e que fermentam lactose,
formando ácido e gás a 35°C dentro de 48 horas.
Princípios do Procedimento A Digestão Enzimática de Gelatina é a fonte de

carbono e nitrogênio utilizados para o crescimento do organismo no Caldo Verde
Bile Brilhante 2%. A Bile Bovina e o Verde Brilhante inibem as bactérias Gram
positivas e muitas Gram-negativas que não sejam coliformes. A Lactose é a
fonte de carboidrato. Bactérias que fermentam a lactose e produzem gás são
detectadas.
MEIOS DE CULTURA
Meio Seletivo Ágar Sabouraud Dextrose
Utilizado para crescimento de fungos que são favorecidos, em relação às
bactérias, pelo baixo ph.
.
Digestão Enzimática de Caseína e Digestão Enzimática de Tecido Animal

fornecem nitrogênio e vitaminas necessárias para o crescimento do
organismo no Ágar Sabouraud Dextrose. A alta concentração de dextrose
serve como fonte de energia. O ágar é o agente solidificante. Tem adição de
cicloheximida, estreptomicina e penicilina para produzir um meio excelente para o
isolamento de fungos.
MEIOS DE CULTURA
Meio Diferencial
Ágar Sangue (5% de sangue de carneiro)
Utilizado para crescimento de fungos que são favorecidos, em relação às

bactérias, pelo baixo ph.
.
Streptococus S. aureaus
Pneumoniae
Enterococcus
faecalis
MEIOS DE CULTURA
Meio Diferencial
Ágar Sangue (5% de sangue de carneiro)
O meio de cultura ágar sangue de carneiro proporciona o crescimento

da grande maioria das bactérias gram-positivas e gram-negativas
bem como de fungos (bolores e leveduras), a partir de uma base rica
e suplementada, oferecendo ótimas condições de desenvolvimento
para microrganismos não fastidiosos.
A conservação dos eritrócitos íntegros favorece a formação de halos de

hemólise nítidos, facilitando a diferenciação de algumas espécies
hemolíticas.
.
MEIOS DE CULTURA
Meio Seletivo e Diferencial
Ágar Sal Manitol
Contém 7,5% de Nacl.

Impede o crescimento de outros
organismos competidores e
favorece S. aureus. O meio contém
indicador de pH que altera a sua
cor quando o manitol do meio é
fermentado, produzindo ácido.
MEIOS DE CULTURA
Ágar Sal Manitol
 As colônias de bactérias no meio
diferencial têm uma aparência
diferente. Esse meio é o ágar
hipertônico manitol, e as bactérias nas
colônias capazes de fermentar o
manitol do meio em ácidos levam a
uma mudança na coloração.
 Na realidade, esse meio também é

seletivo por causa da alta
concentração de sal que previne o
crescimento da maioria das bactérias,
exceto os Staphylococcus spp.
MEIOS DE CULTURA
Ágar MacConkey
MEIOS DE CULTURA
Ágar MacConkey
➥Inibe o crescimento de microrganismos Gram-positivos,

especialmente enterococos e estafilococos.
➥Finalidade: isolamento de bacilos Gram-negativos
(enterobactérias e não fermentadores) e verificação da fermentação
ou não da lactose.
➥ Interpretação
•Cor original do meio: rosa avermelhado.
•Colônias cor de rosa: fermentadoras de lactose.
•Colônias incolores: não fermentadoras de lactose.
•Não há crescimento de cocos Gram-positivos.
MEIOS DE CULTURA
Meio de enriquecimento
➥Geralmente líquido, de composição rica em nutrientes, com a

finalidade de permitir que as bactérias de interesse contidas em
uma amostra aumentem seu número, permitindo a sua
detecção.
Ex: Caldo Brains Heart Infusion (BHI)

Caldo Tetrationato
Caldo Brain Heart Infusion (BHI)

MEIOS DE CULTURA
➥ Meio de cultura líquido rico em nutrientes;

➥Finalidade: cultivo de micro-organismos, preparação de
inóculos para testes de suscetibilidade aos antimicrobianos e
outros;
➥ Interpretação:
•Cor original do meio: amarelo claro e límpido.
•Presença de turvação: crescimento bacteriano.
•Ausência de turvação: sem crescimento bacteriano.
MEIOS DE CULTURA

MEIOS DE CULTURA
Caldo Tetrationato
O Caldo Tetrationato é utilizado para o

enriquecimento seletivo para o cultivo
de Salmonella spp. que pode estar
presente em pequena quantidade na
flora intestinal, competindo com a
mesma.
MEIOS DE CULTURA
Definição: aumento no número de indivíduos e não
aumento do tamanho de determinada célula.
Objetivo do Estudo?
REPRODUÇÃO BACTERIANA
Assexuada:
Divisão celular:
 Bipartição,
 Divisão Binária,
 Cissiparidade,
 Fissão Binária.
Sexuada:
Processo de transferência de fragmentos de DNA de uma
célula para outra:
 Ocorre de três maneiras:
1. Transformação
2. Transdução
3. Conjugação
Transformação:
Transdução
Conjugação:
Pedaços de DNA passam diretamente
de uma bactéria doadora, o "macho",
para uma receptora, a "fêmea"
Esporulação:
CRESCIMENTO CRESCIMENTO
NÚMERO DE CÉLULAS
EM CULTURA
REPRODUÇÃO FISSÃO BINÁRIA

Tempo de geração:
Tempo necessário para a célula se dividir e sua população dobrar de
tamanho.
O crescimento ocorre em progressão geométrica, EX:
1------------2-------------4------------8-----------16-----------32
1 – 21 – 22 – 23 – 24 – 25 ....2n
n = número de gerações (expoente)
Tempo de geração:
Tempo de geração:
Fases do crescimento:
Fases do crescimento:
Fase lag: ausência ou muito pouco crescimento. As células
estão em latência e aumentam a maquinaria celular para
aumentar a produção.
Fase log: ou crescimento exponencial. Reprodução ativa e o

tempo de geração constante, responsável pela reta no gráfico.
Período de maior atividade metabólica.
Fase estacionária: velocidade diminui, número de morte

celular é equivalente a produção de céls novas e a
população se torna estável. Diminui a atividade metabólica.
Fase morte celular: número de células mortas excede
as novas.
Medidas de Crescimento
Diretos Indiretos
 Contagem em placa;  Turbidimetria;

 Número Mais Provável;  Atividade Metabólica;
 Filtração;  Peso Seco;
 Contagem direta ao
microscópio;
1.Contagem em Placa
Determina o tamanho de uma população bacteriana.
 VANTAGEM: céls viáveis são quantificadas;
 DESVANTAGEM: tempo (24 hs) para o aparecimento das colônicas

visíveis em placas.
1 COLÔNIA ?? 1 BACTÉRIA ARRANJOS??
1 UFC
1.Contagem em Placa
1.Contagem em Placa
 CONTAGEM em placas que contenham de 25 a 250 ou

de 30 a 300 colônias.
 MUITAS COLÔNIAS presentes: ocorrerá saturação e

impedimento do crescimento de novas colônias.
 UTILIZAR O MÉTODO DE DILUIÇÃO SERIADA para

garantir que o número de colônias na placa permaneça
na faixa desejada.
1.Contagem em Placa
DETECTA em um alimento, o número

TOTAL DE MICROORGANISMOS AERÓBIOS MESÓFILOS,
AERÓBIOS PSICROTRÓFILOS,
BOLORES E LEVEDURAS.
CONTAGEM PADRÃO EM PLACAS (CPP) tem sido usada como

indicador, fornecendo também ideia sobre o tempo útil de
conservação alimento.
Diluição Seriada
3,2 x 105 UFC

Diluição Seriada
Métodos de Espalhamento
a) Método de profundidade
(pour plate);
b) Método de superfície.
2.Número Mais provável
Essa técnica estatística com base no seguinte princípio:
quanto maior o número de bactérias em uma amostra,
maior será o número de diluições necessárias para eliminar
totalmente o crescimento em tubos contendo meio de
cultura
2.Número Mais Provável
1.Este método é mais utilizado quando as bactérias a
serem contadas não cresceriam em meio sólido (como as
bactérias quimiautotróficas nitrificantes).
2. O método tb é usado quando o crescimento de bactérias

em um meio líquido diferencial é usado para diferenciar os
microrganismos (como coliformes em água, que seletivamente
fermentam lactose produzindo ácido).
2. O método fornece uma estimativa de 95% de

probabilidade.
2.Número Mais Provável
3.Filtração
• Método utilizado para concentrar o número de bactérias,
em amostras onde o número é muito pequeno. Ex: água,
lagos.
• A aplicação desta metodologia

permite que a bactéria seja
concentrada sobre a superfície
de uma membrana de filtro de
poros muito pequenos (bactéria
não passa), após a passagem de
um volume de 100 ml de água
3.Filtração
• Filtro – transferido – placa de Petri – que contém um
suporte envolvido em nutriente líquido
• Método rotineiro na detecção de

coliformes fecais (amostras de
alimentos e água).
• Colônias identificadas quando se

usa meio diferencial.
124 colônias por 100 ml

4.Contagem Direta ao Microscópio
• Neste método um volume conhecido da suspensão

bacteriana é colocado em uma área definida da lâmina
de microscópio.
• Ex: Contagem bacteriana leite – 0,01 mL é espalhado

em uma região de 1 cm2 da lâmina, a bactéria é
visualizada com a adição de um corante e a amostra é
visualizada com óleo de imersão.
4.Contagem Direta ao Microscópio
1.Turbidimetria
• Monitoramento bacteriano através da turbidez da cultura.
Quando uma bactéria se multiplica em meio líquido, esse
meio fica túrbido ou com alta densidade de células.
Quanto menos luz é

transmitida, maior é a
quantidade de
bactérias na amostra.
2.Atividade Metabólica
• Este método considera que a quantidade de um certo
produto metabólico, como o ácido ou o CO2, pode ser
uma relação direta do número de células bacterianas
presentes.
3.Peso seco
• Uma das melhores maneiras de analisar o crescimento de
fungos filamentosos. Nesse procedimento, o fungo é
removido do meio de cultura por filtração, seco em
dessecador para posterior pesagem. Tb pode ser usada
para bactérias.
FIM
Apoio às
Bactérias!
Pode ser a única
cultura que algumas
pessoas tem!
Referências
TORTOTRA Gerard J. et al. Microbiologia 8. ed.
Porto Alegre: Artmed, 2005. 894 p
Cap 6 – pag 155
MADIGAN, Michael T. et al. Microbiologia de

Brock. 12. ed. Porto Alegre: Artmed, 2010. 1128 p
TRABULSI, Luiz Rachid; ALTERTHUM, Flávio (Ed.)

Microbiologia. 5. ed. São Paulo: Atheneu, 2008.
760 p
COMENTÁRIOS SOBRE O
RELATÓRIO
RELATÓRIO
Foi visto os meios de cultura quanto a sua composição,

finalidade e característica.
E tb foi visto as técnicas de semeadura (??????) em

meio inclinado em tubos, meios em camadas (AlTA,
AHA)???? Meio em placa de petri e os objetivos de
cada um deles. QUAIS????
COMENTÁRIOS SOBRE O
RELATÓRIO
CONCLUSÃO
Concluímos que a técnica é eficaz ??????? (PARA

QUE?) e tem um resultado significativo para o controle
bacteriano? COMO???????????????
MEIOS DE CULTURA
6. Para uma cultura que esteja guardada há muito
tempo (sob refrigeração), qual o tipo de meio
devemos utilizar para retornar a utilizá-la numa
atividade prática?
O meio SELETIVO. (favorece o crescimento da bactéria de interesse
e impede o crescimento de outra).
O método de esgotamento por estrias funciona bem quando o

organismo a ser isolado está presente em grande número em rela-
ção à população total. Contudo, quando o micro-organismo a
ser isolado está presente em um número muito pequeno,
sua quantida-de pode ser aumentada por enriquecimento seletivo
antes do isola-mento com o método de esgotamento por estrias.
MEIOS DE CULTURA
7. Para determinar a presença de um
microrganismo específico num material que esteja
muito contaminado, quais os tipos
Os organismos podem ser reativados a qualquer momento

colocando-os em temperatura ambiente e por hidratacão com um
meio nutriente liquido apropriado, ou enriquecimento.
EXERCÍCIO
40 5
10-4 10-5
1- Diluição vc escolheria e porque?

2- Qual o número da UFC da diluição escolhida?
3- O que é um meio seletivo e um meio diferencial?
EXERCÍCIO
40 5
10-4 10-5
1- Diluição vc escolheria e porque?

2- Qual o número da UFC da diluição escolhida?

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Aula 6 – Crescimento bacteriano

Patos de Minas, 2018

 2.1 - Morfologia bacteriana: estrutura celular e tipos morfológicos;

 2.2 – Necessidades nutricionais das bactérias: exigências,

 2.3 - Crescimento bacteriano

 Crescimento em número e não em tamanho;

 Os microrganismos em “crescimento” estão, na verdade,

Em razão do entendimento das condições necessárias para

 Determinar como controlar o crescimento dos

 Determinar como controlar o crescimento dos

 Estimular o crescimento dos microrganismos que

 Portanto, precisam de água para

 Adição de sais/solutos – aumenta a pressão osmótica =

 Anaeróbio facultativo: E.coli; leveduras.

 Microaerófilos: aeróbias e precisam de O2 mas em

 Ágar se liquefaz a 100°C

 Em laboratório Banho Maria

 Deve conter fontes de carbono e energia.

 Quando o meio é líquido é chamado de CALDO

• Usar meios de cultivo redutores: Meio Tioglicolato de Sódio

• Necessário uso placa de petri (jarras especiais):

Grupo dos coliformes: bacilos aeróbios e

Princípios do Procedimento A Digestão Enzimática de Gelatina é a fonte de

Digestão Enzimática de Caseína e Digestão Enzimática de Tecido Animal

Utilizado para crescimento de fungos que são favorecidos, em relação às

O meio de cultura ágar sangue de carneiro proporciona o crescimento

A conservação dos eritrócitos íntegros favorece a formação de halos de

Contém 7,5% de Nacl.

 Na realidade, esse meio também é

➥Inibe o crescimento de microrganismos Gram-positivos,

➥Geralmente líquido, de composição rica em nutrientes, com a

Ex: Caldo Brains Heart Infusion (BHI)

Caldo Brain Heart Infusion (BHI)

Caldo Brain Heart Infusion (BHI)

➥ Meio de cultura líquido rico em nutrientes;

Caldo Brain Heart Infusion (BHI)

O Caldo Tetrationato é utilizado para o

 Ocorre de três maneiras:

REPRODUÇÃO FISSÃO BINÁRIA

O crescimento ocorre em progressão geométrica, EX:

Fase log: ou crescimento exponencial. Reprodução ativa e o

Fase estacionária: velocidade diminui, número de morte

 Contagem em placa;  Turbidimetria;

 VANTAGEM: céls viáveis são quantificadas;

 DESVANTAGEM: tempo (24 hs) para o aparecimento das colônicas

1 COLÔNIA ?? 1 BACTÉRIA ARRANJOS??

 CONTAGEM em placas que contenham de 25 a 250 ou

 MUITAS COLÔNIAS presentes: ocorrerá saturação e

 UTILIZAR O MÉTODO DE DILUIÇÃO SERIADA para

DETECTA em um alimento, o número

CONTAGEM PADRÃO EM PLACAS (CPP) tem sido usada como

3,2 x 105 UFC

2. O método tb é usado quando o crescimento de bactérias

2. O método fornece uma estimativa de 95% de

• A aplicação desta metodologia

• Método rotineiro na detecção de

• Colônias identificadas quando se

124 colônias por 100 ml

• Neste método um volume conhecido da suspensão

• Ex: Contagem bacteriana leite – 0,01 mL é espalhado

Quanto menos luz é

MADIGAN, Michael T. et al. Microbiologia de

TRABULSI, Luiz Rachid; ALTERTHUM, Flávio (Ed.)

Foi visto os meios de cultura quanto a sua composição,