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ITEM PUNTAJE
Presentación y formato /0,5
Resumen y abstract /1,0
Introducción /0,5
Metodología /0,5
Resultados y discusión /2,5
Electroforesis
Conclusiones /1,0
ATRASOS - /1,0
Gonzales Nataly1; Villarroel Laura2 TOTAL /6,0

1,2 Escuela Politécnica Nacional, Facultad de Ingeniería Química y Agroindustrial, Quito,

Ecuador

Resumen: El objetivo de esta práctica fue determinar el peso molecular de muestras de proteínas con el uso de un
simulador de electroforesis, se utilizó el simulador ya que esta práctica tiene una larga duración y uno de sus
componentes como es el gel de poliacrilamida es de uso delicado, pues es cancerígeno. Con esta técnica se pudo
separar moléculas y se empleó para esto un campo eléctrico el cual actuó sobre las moléculas y causó su movimiento
a través de la matriz. En el simulador el equipo estuvo preparado, el equipo contó con la cámara de electroforesis,
gradilla de plástico, gel de poliacrilamida y la solución buffer o tampón. Se observó de manera rápida el proceso de
una electroforesis con diferentes parámetros y con estos se pudo concluir que la velocidad de migración es
proporcional a la relación entre las cargas de la proteína y su masa, cuanto mayor carga por unidad de masa más
rápida será la migración, también que, al aumento de la concentración de acrilamida del gel, el tamaño de poro
disminuye.

Palabras clave: electroforesis, simulador, gel de poliacrilamida.

Electrophoresis
Abstract: The aim of this practice was to determine the molecular weight of samples of proteins with the use of a
simulator of electrophoresis, the simulator was in use since this practice has a long duration and one of its components
as it is the gel of polyacrylamide is of delicate use, since it is carcinogenic. With this skill it was possible to separate
molecules and there was used for this an electrical field which acted on the molecules and caused their movement
across the counterfoil. In the malingerer the equipment was prepared, the equipment possessed the camera of
electrophoresis, test tube rack of plastic, gel of polyacrylamide and the solution buffer or tampon. The process of an
electrophoresis was observed in a rapid way by different parameters and with these it was possible to conclude that
the speed of migration is proportional to the relation between the loads of the protein and its mass, major load for unit
of more rapid mass will be the migration, also that, to the increase of the concentration of acrylamide of the gel, the
size of pore diminishes.

Keywords: electrophoresis, simulator, polyacrylamide gel.

1 1. INTRODUCCIÓN conocer las características ácido-básicas de las proteínas con

La electroforesis es un término que proviene de las palabras
griegas elektro = electricidad y phoros = movimiento. Es una
técnica de separación de moléculas, emplea un campo
eléctrico el cual actúa sobre las moléculas con carga causando
su movimiento a través de una matriz. (Santarén, 2004)
Los métodos electroforéticos son de alta sensibilidad, poder de
resolución y versatilidad, sirven como método de separación
de mezclas complejas de ácidos nucleicos, proteínas y otras
biomoléculas, mediante esta técnica se puede determinar
parámetros como punto isoeléctrico, peso molecular, número
de cadenas polipeptídicas de las proteínas y también se puede
lo que se da una separación cromatográfica basada en las
diferencias de cargas. (García, 2000)
Existen varios medios de soporte en el que se puede realizar
una electroforesis en este caso el medio de soporte es un gel
de poliacrilamida, la poliacrilamida cuenta con ventajas
químicas ya que es inerte, tiene propiedades uniformes, es
insoluble en agua y es relativamente no iónico, cuenta también
con ventajas físicas ya que es transparente con estabilidad
mecánica y permite la visualización de las bandas por un
tiempo prolongado, otra ventaja muy importante es que
variando la concentración de polímeros se puede controlar el

natmisga_24@hotmail.com1 , damariz_2503@hotmail.com 2
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tamaño del poro. Tiene la desventaja de que es cancerígeno por Lisozima (clara de huevo de gallina) 14300
esta razón se emplea menos. (Herráez, 2007) Mioglobina( corazón de caballo) 16700
Quimotripsina ( páncreas bovino) 25200
En la electroforesis se emplean sistemas tampón, la fuerza Quimotripsinógeno (bovino) 25700
iónica del tampón debe estar a un nivel adecuado para Hemoglobina (humana) 64500
garantizar la capacidad amortiguadora y la solubilidad de la Albúmina sérica (humana ) 66000
muestra, las concentraciones usuales de tampón están entre un Hexoquinasa (levadura) 107900
rango de 0,025 y 0,1 mol/L, se pueden emplear también
RNA polimerasa (E. coli) 450000
concentraciones sobre 0,5 mol/L en sistemas fuertemente
Apolipoproteína B (humana) 513000
ácidos, ya que a bajos valores de pH muchos ácidos débiles
Glutamina sintetasa (E. coli) 619000
están ionizados de forma débil y es necesaria una
concentración alta para tener una apropiada capacidad Titina (humana) 2993000
amortiguadora. (García, 2000) Ovalbúmina 45000
Fosforilasa b 97000
Es este caso se quiere determinar el peso molecular de una Gluttamato dehidrogenasa 55000
proteína, esta técnica permite estimar el peso molecular Fructosa 6-fosfato-quinasa 84000
comparando su movilidad electroforética con las proteínas de *(Padilla, F., Guédez, T., Alfaro, M., Regnault, M., Rincón A.,
peso molecular conocido. (Herráez, 2007) 2010)
*(Tomas, M., 2004)
¿Qué es la movilidad relativa?
La movilidad electroforética o relativa es la velocidad por En la table se encuentran tabladas las respuestas de los
unidad de campo, cada molécula se desplaza por efecto del ejercicios realizados.
campo, alcanza de manera rápida una velocidad constante al
estar en equilibrio la fuerza del campo eléctrico con la fuerza Tabla 2. Respuestas de los ejercicios 1 y 2.
de fricción, el coeficiente de fricción dependerá de la forma y
Ejercicio Preguntas Respuestas
tamaño de las moléculas. (Herráez, 2007)
¿Cuál es el efecto de
aumentar la
2. METODOLOGÍA diferencia de Los patrones
1
potencial eléctrico avanzan más rápido
Se ingresó al simulador de electroforesis de biomodel, se eligió entre ambos
todos los parámetros para realizar la electroforesis, como electrodos?
fueron la velocidad de animación, la concentración del gel de
acrilamida entre 7,5% y 15%, se marcó todos los recuadros en
la sección de patrones, se eligió un voltaje entre los siguientes Una mayor
valores: 50 V, 100 V, 150 V, 200 V (Imagen 1), se pulsó el concentración de
botón de añadir patrón y se observó como la simulación ¿Cómo lo
acrilamida genera
agregaba el patrón en el primer pocillo, acto seguido se pulsó interpretas en
un gel con poros
el botón de añadir muestra y se observó nuevamente como el 2 términos del
más pequeños, por
simulador añadía la muestra en el segundo pocillo, se dio clic mecanismo de la
lo que las proteínas
en el botón de comenzar y se observó como la simulación de separación?
avanzan ms
electroforesis empezó y las barras de colores empezaron a despacio.
bajar, se pulsó el botón detener antes de que las muestras y el
patrón se fueran directo a la acrilamida (Imagen 2). Se pulsó
el botón de gráfica y se observó la gráfica de calibrado de la
electroforesis que se realizó, con este procedimiento se realizó Se tabulan los resultados de las masas moleculares.
los ejercicios indicados (Imagen 3).
Tabla 3. Resultados de masas moleculares relativas.
3. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Proteína
Muestra Masa molecular
En la siguiente tabla se presentan las masas moleculares de problema relativa.(Dalton)
diferentes proteínas.
1 80942 6-fosfato-quinasa
Tabla 1. Masas moleculares bibliográficas
Masa 2 25964 Quimotripsinógeno
molecular
Proteína 3 64884 hemoglobina (humana)
relativa.
(Dalton)
4 43389 Ovalbúmina
Citocromo c (humano) 12400 5 91986 fosforilasa b
Ribonucleasa A (páncreas bovino) 13700
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glutamato 4. CONCLUSIONES
6 57230
dehidrogenasa
ribonucleasa a Se demostró que los patrones avanzaron más rápido cuando se
7 13777 aumentó la diferencia de potencial eléctrico entre ambos
(páncreas bovino)
electrodos.
8 23692 Quimotripsina
Se manifestó que los patrones tuvieron menor movilidad de
9 40233 Ovalbúmina cuando se le aumento la concentración de acrilamida del gel.
mioglobina (corazón de Se comprobó que la velocidad de migración es proporcional a
10 16173 la relación entre las cargas de la proteína y su masa, cuanto
caballo)
mayor carga por unidad de masa más rápida será la migración.

En el ejercicio 1 se determinó que los patrones avanzaron más

rápido cuando se aumentó la diferencia de potencial eléctrico
entre ambos electrodos, esto se debe a que la velocidad de
migración es proporcional a la relación entre las cargas de la REFERENCIAS
proteína y su masa. Cuanto mayor carga por unidad de masa
más rápida será la migración. (Nature, 2007, p. 680). 1. Cutlek., (s.f). Electroforesis de proteínas.
En el ejercicio 2 se determinó que los patrones tuvieron menor Recuperado de
movilidad cuando se le aumentó la concentración de http://www.cultek.com/inf/otros/soluciones/Solucio
acrilamida del gel, esto se debió a que el tamaño de poro nes-Electroforesis-protocolos.pdf.
disminuye cuanta más bisacrilamida vs. acrilamida se use. La
2. García, H. (2000). Electroforesis en geles de
porosidad del gel la determina las proporciones relativas de
poliacrilamida y bis-acrilamida. Así, la mayoría de las poliacrilamida: fundamentos, actualidad e
proteínas se separan bien en el rango de 5 a 10%. Un menor importancia. Laboratorios Beterá. La Habana –
porcentaje (mayor tamaño de poro) es mejor para separar Cuba. Recuperado de:
proteínas de gran tamaño. (Lomonte, B., 1990) http://www.bvs.sld.cu/revistas/uni/vol1_2_00/uni07
En el ejercicio 3 se determinó las masas moleculares relativas 200.htm
de las proteínas y de acuerdo a estos resultados se comparó con 3. Herráez, A. (2007). Electroforesis de proteínas
datos bibliográficos que se muestran en la tabla 3. De acuerdo
y de ácidos nucleicos. Sociedad Española de
a esto se deduce que las proteínas problemas fueron: para la
muestra 1 se tendría Fructosa 6-fosfato-quinasa ya que la masa Bioquímica y Biología Molecular. Alcalá de
molecular fue de 80942 Da; para la muestra 2 se tendría Henares- España. Recuperado de:
quimotripsinógeno ya que la masa molecular fue de 25964 Da; http://biomodel.uah.es/tecnicas/elfo/inicio.htm
para la muestra 3 se tendría hemoglobina (humana) ya que la 4. Lomonte B., (1990). Electroforesis en gel de
masa molecular fue de 64884 Da; para la muestra 4 se tendría poliacrilamida. Recuperado de
ovalbúmina ya que la masa molecular fue de 43389 Da; para
http://www.ciens.ucv.ve:8080/generador/sites/lab-
la muestra 5 se tendría fosforilasa b ya que la masa molecular
fue de 91986 Da; para la muestra 6 se tendría glutamato bioq-gen/archivos/Lomonte%20-
dehidrogenasa ya que la masa molecular fue de 57230 Da; para %20Cap13%20PAGE.pdf.
la muestra 7 se tendría ribonucleasa A (páncreas bovino) y que 5. Nature, P., (2007). Electroforesis de proteínas con
la masa molecular fue de 13777 Da; para la muestra 8 se geles de poliacrilamida. Recuperado de
tendría quimotripsina ya que la masa molecular fue de 23692 https://bioquibi.webs.ull.es/practicas/4.pdf. (Junio,
Da; para la muestra 9 se tendría ovalbúmina ya que la masa 2016), p.680.
molecular fue de 40233 Da y la muestra 10 tendria mioglobina
6. Padilla, F., Guédez, T., Alfaro, M., Regnault, M.,
(corazón de caballo) ya que la masa molecular fue de 16173
Da. Estas deducciones se obtuvieron comparando las masas Rincón A., (2010). Fraccionamiento y
moleculares con la tabla 3, pero ningún valor fue exactamente caracterización de las proteínas solubles de la harina
igual a los bibliográficos, por lo que se dedujo la existencia de de nuez de Barinas (Caryodendron orinocense K.).
la proteína más cercana al valor bibliográfico. (Cutlek., s.f). Recuperado de
http://www.scielo.org.ve/scielo.php?script=sci_artte
A partir de la recta obtenida en el simulador, ¿podría xt&pid=S0798-04772010000100006. (Junio, 2016)
determinar la movilidad relativa de una proteína cuyo peso
7. Santarén, J. (2004). De la tesis doctoral de Tiselius a
molecular es de 140 KDa; y de una proteína cuyo peso
molecular es de 5 KDa? Sí, no, ¿por qué? la proteomica: setenta y cinco años de electroforesis
El máximo valor qu se obtuvo en la recta fue de 91986 Da y el de proteínas. Consejo Superior de Investigaciones
valor mínimo que se obtuvo fue de 13777 Da, 140 KDa Científicas. España. Recuperado de:
equivale a 140000 Da y 5 KDa equivale a 5000 Da por lo que http://arbor.revistas.csic.es/index.php/arbor/article/vi
estos valores no están en el rango de la recta obtenida no se ewFile/608/610
podia dterminar su movilidad relativa.
8. Tomas, M., (2004). Bioquímica. (4ta edición).
Barcelona, España: Editorial Reverté.
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APÉNDICEA o ANEXOS

Imagen 1. Simulador con todos sus parámetros Imagen 3. Gráfica de la simulación de electroforesis

Imagen 2. Simulación en proceso