UNIVERSIDAD DEL VALLE DE MEXICO

LAUREATE INTERNATIONAL UNIVERSITIES

Carrera: QUÍMICO FARMACÉUTICO BIOTECNÓLOGO

Grupo: 01B Materia: Biología Celular Fecha: //16

INTRODUCCIÓN
La espectrofotometría es el método de análisis óptico más usado en el área de
investigación. Es la medida de la cantidad de energía radiante absorbida por las
moléculas de una muestra en función de las longitudes de onda específicas.

Una radiación electromagnética se puede describir como un flujo de partículas llamadas

fotones, o bien como una onda propagándose en el espacio. De esta última descripción se
toma el concepto de longitud de onda, definiéndolo como la distancia entre dos máximos
consecutivos de la onda. La longitud de onda es inversamente proporcional a la energía
de la misma, de tal manera que el espectro de radiaciones electromagnéticas abarca un
amplio rango de energías, las de menor energía son las ondas de radio y las de mayor
energía son las llamadas radiación gamma.

La medición de concentraciones es la aplicación más importante y frecuente de la

espectrometría de absorción molecular UV- visible. Puede realizarse de diferentes
maneras.

 Se pueden representar los valores de absorbancia de distintos calibradores en

función de su concentración, que es conocida. La grafica resultante es la curva de
calibración. Una vez medida la absorbancia de la muestra analizada, la curva
permite hallar la concentración correspondiente. Es un procedimiento puramente
gráfico, si bien existen sistemas de ajuste electrónico.
 Según la ley de Beer-Lambert-Bouguer, la absorbancia es función de la
concentración mediante el coeficiente de absorción molar (ɛ) y el recorrido de la
radiación (l):A.ɛ..l.c. El producto ɛ.l es la pendiente de la curva de calibración. Si se
conocen ɛ y l, la medida de la absorbancia permite calcular de manera inmediata
la concentración de la disolución en estudio.
 Aunque no se sepa cuánto vale ɛ, se puede calcular la concentración de la
disolución en estudio a partir del conocimiento de la concentración de un
calibrador.
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OBJETIVO
El alumno conocerá el fundamento y aplicación de la espectrofotometría como herramienta para
determinar la concentración de una sustancia u obtener su espectro de absorción.

HIPOTESIS
A partir de absorbancias obtenidas por espectrofotometría, se procederá a realizar los cálculos
correspondientes para conseguir los valores de concentración y posterior plasmarlo
gráficamente.

MATERIAL

2,6dicloro-indofenol RIESGO A LA SALUD: SIN RIESGO

INFLAMABILIDAD: SOBRE 93°C
REACTIVIDAD: ESTABLE

PROCEDIMIENTO
“2,6 dicloro-indofenol a 0.01 M →.5.08016g” .03M→2.9008gr
g= 0.14504gr g= 0.29gr
Determinación del espectro de absorción de 2-6 dicloro indofenol
1. Preparar solución de 2,6 dicloro-indofenol a 0.3 M
2. Medir de 500 a 700 nm de longitud de onda a intervalos de 25 nm
3. Con los resultados obtenidos graficar en las ordenadas (y) las absorbancias y en las
abscisas (x) la longitud de onda. Indicar la máxima

Determinación de la concentración de una solución de 2-6 dicloro indofenol

1. Preparar 10 ml de una solución 0.01M de 2,6 dicloro indofenol. Rotular como solución
patrón.
2. A partir de la solución patrón, preparar 4 tubos haciendo diluciones 1/10 y rotularlos del 1 al 4
3. Tomar 5 ml de una solución de 2,6 dicloro-indofenol cuya concentración es desconocida, la
cual será proporcionada por el Químico. Rotular este tubo como numero 5
4. Siguiendo las instrucciones para el manejo del aparato, mida las absorbancias de los tubos
1, 2, 3, y 4 a 650 nm
5. Usar como blanco de reactivo un tubo con agua destilada
6. Con los datos obtenidos graficar la absorbancia en el eje de las ordenadas y la
concentración en el eje de las abscisas.
7. Leer la absorbancia del tubo número 5 y buscar en la curva patrón a que concentración
corresponde.
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DATOS/RESULTADOS

 Determinación del espectro de absorción de 2-6 dicloro indofenol

NM ABS
500 2.260
525 3.238
550 3.332
575 3.317
600 3.400
625 3.450
650 3.415
675 3.285
700 2.209

El resultado posterior a la
traficación de las
absorbancias vs longitud
de onda, nos proporciona
que la longitud de mayor
valor fue la de 625nm.

NOTA: Se determina la longitud de onda óptima de absorción de una sustancia

dada. El espectro de absorción de una sustancia se obtiene midiendo la
absorbancia de la muestra a diferentes longitudes de onda; si se trabaja en el
espectro visible, el rango de medición es de 400nm hasta 700nm.
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 Determinación de la concentración de una solución de 2-6 dicloroindofenol

C1V1=C2V2
Dónde:
V1= Volumen de la solución inicial necesitado para preparar la nueva solución.
V2 = Volumen final de la nueva solución.
C1= Concentración de la solución inicial.
C2 = Concentración final de la nueva solución.

CELDA TUBO ABS CONCENTRACION

BLANCO 0
PATRON 0 3.412 .01 M
1 1 3.396 9.9531x10−3
2 2 0.164 4.8065x10−4
3 3 0.0500 1.4654x10−4
4 4 0.1390 4.0738x10−4
5 5 0.136 3.9859x10−4

3.5

2.5

2
Series1
1.5

0.5

0
3.412 3.396 0.164 0.05 0.139 0.136
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DISCUSIÓN
Considerando el resultado obtenido en la determinación del espectro de absorción,
consideramos que, según la gráfica realizada, la mejor longitud de onda para
evaluar al dicloro indofenol , ya que es allí donde hay mejor absorbancia.

CONCLUSIÓN
La espectrofotometría UV- visible es una técnica analítica que permite determinar
la concentración de un compuesto en solución. Se basa en que las moléculas
absorben las radiaciones electromagnéticas y a su vez que la cantidad de luz
absorbida depende de forma lineal de la concentración. Para hacer este tipo de
medidas se emplea un espectrofotómetro, en el que puede seleccionar la longitud
de onda de la luz que pasa por una solución y medir de la cantidad de luz
absorbida por la misma. Las diluciones son concentraciones de una disolución
disminuida al añadir un disolvente.
Para los cálculos de absorbancias para obtener las concentraciones utilizamos el
método C1V1=C2V2 aplicado para conocer así las concentraciones dependiendo
de uno ya conocido.

CUESTIONARIO
1. ¿Cómo se logra obtener el espectro de absorción de una sustancia?
La identificación de un compuesto mediante su espectro de absorción es empírica y se hace por
comparación y superposición con el espectro
correspondiente de un compuesto conocido. Hay que
considerar en primer lugar la existencia de máximos y
mínimos y la reacción de sus alturas y, en el segundo
lugar, la longitud de onda de los máximos. La
sustancia debe absorber en las zonas visibles y UV.
El análisis cualitativo fotométrico se aplica, por lo
general, a compuestos coloreados

2. ¿Que se requiere para determinar fotométricamente la concentración de una

sustancia de naturaleza química conocida?
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La determinación cuantitativa del color de las sustancias es la etapa de extracción, sobre todo
esta unidos en la estructura química de las sustancias. El extracto debe ser purificado,
eliminando las sustancias co-extraidas y debido a que esta sustancia se emplea en bajas
cantidades, a veces es necesaria su concentración antes de ser identificados y determinados.
Los métodos propuestos dependen fundamentalmente del tipo de elemento, y del tipo de
colorante (ácido o básico).

3. ¿Cuál fue la concentración encontrada de la solución problema?

3.9859x10−4

BIBLIOGRAFÍA
Fuentes Arderiu, 1997,” Bioquímica clínica y patología molecular. I”, edit. Reverte,
pág. 215, 216.

Silvia Quesada Mora, 2007, “Manual de experimentos de laboratorio para

bioquímica”, EUNED, pág. 11.