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BCM- 2018 Practica II.

Estudio de una ruta metabólica

Informe de Práctico: Estudio de una ruta metabólica

Nombre del estudiante: Agustina Phoyù


Compañeros de mesa: Diego Colasa, Juan Fagúndez, Gonzalo Méndez, Sabrina Pimienta,
Carol Valdez, Rocío Xavier.
Compañeros de informe (si corresponde): Sabrina Pimienta, Carol Valdez, Rocío Xavier.
Grupo: 40
Día de realización del práctico: 10/10/2018
1- Tabla de datos y grafica correspondiente a la Curva de calibración: Pegue aquí la tabla
de datos de la curva de calibración y la gráfica correspondiente de absorbancia a 570 nm
en función de la concentración de glucosa. (Pegar las tablas y figuras en los cuadros)

Tubo Glucosa 10mM H2O (µL) DNS (µL) [Glucosa] Abs 570nm
(µL) (mM)

B 0 100 900 0 0

1 20 80 900 2 0.111

2 40 60 900 4 0.142

3 60 40 900 6 0.226

4 80 20 900 8 0.184

5 100 0 900 10 0.310

Grafica: Abs 570nm=f[Glucosa]


0,35 y = 0,0265x + 0,0298

0,3

0,25
Abs 570nm

0,2

0,15 Abs 570 nm

0,1 Lineal (Abs 570 nm)

0,05

0
0 2 4 6 8 10 12
[Glucosa] (mM) 1
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2-Cálculo de Coeficiente de extinción molar (ε) para el DNS reducido a partir de ecuación
de curva de calibración.

Ecuación de la curva de calibración: Abs=ε.l.C

Valor de epsilon con unidades: 0.0265 cm-1 .mM-1

3- Tabla de datos de la determinación de glucosa en cultivo control y cultivo con


inhibidor.

Tiempo (min) Abs 570nm [Glucosa] (mM) Abs 570nm [Glucosa] (mM)
(sin inhibidor) (con inhibidor)

0 0.222 14.140 0.140 5.283

15 0.008 0.509 0.169 6.377

30 0 0 0.169 6.377

45 0 0 0.209 7.888

60 0 0 0.299 11.283

Con los datos obtenidos de absorbancia, usando el coeficiente de extinción molar de la


curva de calibración, calcule la concentración de glucosa para cada tiempo.
Para construir la tabla deberá tener los datos de concentración de glucosa del otro
matraz, es decir los valores de absorbancia obtenidos por la otra mesa y conocer el valor
de épsilon obtenido por ellos.

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4- Grafique [Glucosa]= f (tiempo) para las dos condiciones evaluadas en el practico


(cultivo control y cultivo con inhibidor) en el mismo gráfico. (2 puntos)

Grafica: [Glucosa]=f(Tiempo)
16
14
12
[Glucosa] (mM)

10
8 [Glucosa] (mM) sin
inhibidor
6
[Glucosa] (mM) con
4
inhibidor
2
0
0 20 40 60 80
Tiempo (min)

5- Tabla para evaluar la producción de CO2 en ambos cultivos (2 puntos)

Condición Color solución Rojo Fenol Globo


Cultivo control Amarillo Inflado
Cultivo con inhibidor Rojo Desinflado
Cultivo con Buffer Rojo Inflado

6- Conclusiones (1 punto)

En ausencia de inhibidor ocurre eficazmente la glucólisis y la fermentación alcohólica, lo


que se evidencia en el gráfico [Glucosa]=f(t) sin inhibidor, donde aumenta el consumo de
glucosa (disminuyendo su concentración) a medida que transcurrió el tiempo. A su vez,
observamos en la práctica la producción de dióxido de carbono (CO2). Esto se comprueba
al observar que el globo se infló y hubo un cambio en la coloración de la solución rojo
fenol, pasando de rojo a amarillo.

Al inhibir la enzima gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa, se inhibe la glucólisis. En el


gráfico de [Glucosa]=f(t) con inhibidor podemos observar que [Glucosa] es constante, es
decir, no varía la concentración. En este caso, el globo no se infla y el color de la solución
rojo fenol se mantiene.

En presencia de buffer el pH no se acidifica, ya que los buffer amortiguan los cambios de

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pH y mantienen el equilibrio entre la formación y expulsión de dióxido de carbono. El


globo se infla indicando que ocurrió glucólisis, pero la coloración de la solución rojo fenol
no cambia debido a la presencia de buffer agregado.