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Laboratorio de Análisis Instrumental en Ingeniería II

ESPECTROFOTOMETRIA DEL VISIBLE


DEMOSTRACION DE LAS LEYES FOTOMETRICAS Y ERROR
RELATIVO DE LA CONCENTRACION
I OBJETIVOS
 Construir curvas de calibración
 Verificar la conformidad de la ley Beer
 Determinar las concentraciones límites de los patrones

II GENERALIDADES

Después de determinar la longitud de onda a la cuál deben de realizarse las medidas, se calibra el
método midiendo una serie de patrones del constituyente en estudio. Generalmente se prepara una
solución diluida de la sustancia que se desea determinar, se pipetean cuidadosamente porciones de
esta solución, de distinto volumen, se añade el reactivo que forma color, y se ajustan las condiciones
para que se desarrolle el color en forma óptima, se diluye cada solución a un volumen
predeterminado en una fiola, y luego se mide la absorbancia de cada solución a la longitud de onda
analítica o de trabajo.

Las medidas de la absorbancia se realizan comúnmente utilizando un blanco, que debe ser idéntico a
la muestra en todo, excepto en que no debe contener el constituyente que se ha de determinar. El
blanco deberá contener los reactivos, aditivos, disolvente, etc., en la misma naturaleza y
concentración que las utilizadas en cada muestra desconocida en la que se desarrolle color. De esta
manera, las lecturas de las muestras están corregidas automáticamente para cualquier absorción
pequeña por acción de los reactivos y del disolvente. Con los datos absorbancia para las diferentes
concentraciones de las series patrón se construye una curva de calibrado. La cantidad de luz
absorbida por cada patrón se encuentra bien definida y se debe ajustar a ciertas leyes físicas
denominadas leyes fotométricas:

a) Ley Lambert - Bouguer

Presenta dos partes:

1.- “La relación entre la energía radiante transmitida, P, y la incidente, Po, es una constante
expresada como T, y se denomina TRANSMITANCIA”.
T = P / Po
2.- “La energía de radiación transmitida decrece en progresión geométrica cuando la longitud del
camino óptico aumenta en progresión aritmética”. Se expresa matemáticamente de la siguiente
manera:
 log T = ab = A = - log T = - ( P/ Po ) = log ( Po/ P )

b) Ley Beer
Expresa la relación entre transmitancia y concentración de material absorbente, es decir, que la
transmitancia disminuye en progresión geométrica cuando la concentración aumenta en progresión
aritmética. Por tanto:
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-log T = ac = A = - log (P / Po) = log (1/ T)

c) Ley Combinada Lambert - Beer


Resulta de la combinación de la ley de Lambert con la de Beer y suele llamarse simplemente ley de
Beer. Esta ley establece que: “la cantidad de luz o energía ultravioleta o infrarroja absorbida o
transmitida por una solución es una función exponencial de la concentración de sustancia absorbente
presente y de la longitud de la trayectoria hacia la muestra”. Se obtiene las siguientes relaciones:
A = abc = = - log T = -log (P/ Po) = log (Po / P) = log (1 / T).

Donde:
T = transmitancia
a = absortividad del medio
b = Trayecto óptico
P = poder de radiación transmitida
Po= poder de radiación incidente.

Esta forma matemática de la ley combinada muestra que la absorbancia A en función de la


concentración “c” es una línea recta de pendiente “a”, y la representación de log T frente a la
concentración es una línea recta de pendiente negativa. La representación gráfica de esta ley se
denomina representaciones de la ley Beer.

III FUNDAMENTO
La obtención de la curva de calibrado y la demostración de la ley de Beer se determinan
experimentalmente, preparando una serie de soluciones patrones y midiendo la absorbancia de cada
solución a la longitud de onda analítica, máxima o de trabajo. Con los datos de absorbancia frente a
las concentraciones de los patrones se gráfica en un sistema cartesiano y la representación debe ser
una línea recta de pendiente positiva si cumple con la ley Beer.

IV ARREGLO EXPERIMENTAL

V APARATOS
 Espectrofotométro : HACH DR 2800
 Cubeta : 2.5 cm. De trayecto óptico
 Región de trabajo : Espectro visible
 Longitud de Onda de trabajo : 525 nm
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VI MATERIALES
 Fiolas de 100 y 250 ml.
 Buretas por 25 ml.

VII REACTIVOS
 Solución Stock O,100N de permanganato de potasio
 Solución diluída de permanganato de potasio de 100 ppm .de manganeso
 soluciones patrones.

VIII TECNICA
1.- Preparación de soluciones patrones
Preparar a partir de la solución Stock de KMnO4 0, 1000N una solución estandard diluida de 100 ppm
en manganeso para un volumen de 250 ml y luego por dilución preparar las soluciones patrones
siguientes:
CUADRO DE SOLUCIONES

No Concentración ppm Volumen a Volumen a preparar


Patrón Medir del estándar ml
1 0,5 50.0
2 1,0 50.0
3 2,0 50.0
4 4,0 50.0
5 6,0 50.0
6 8,0 50.0
7 10,0 50.0
8 12,0 50.0
9 16,0 50.0
10 20,0 50.0
11 30,0 50.0
12 40.0 50.0

2.- SELECCIÓN DE MODO BÁSICO DE TRABAJO

(a) ENCENDIDO Y APAGADO


 Conecte la toma de alimentación externa en un enchufe de la red eléctrica.
 Pulse el interruptor de encendido/apagado durante aproximadamente un
segundo para encender el instrumento
 Pulse el interruptor de encendido/apagado durante 3 a 5 segundos para
apagar el instrumento. Una señal acústica confirma que el instrumento se
ha apagado (no prender el instrumento rápidamente después de apagarlo,
espere unos 20 segundos antes de volver a encenderlo, para no dañar los
sistemas electrónico y mecánico)
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(b) DIAGNOSTICO
 Cada vez que se enciende el instrumento, se ejecuta automáticamente una
serie de pruebas de autodiagnóstico para asegurar el correcto
funcionamiento de los principales componentes del sistema
 Este procedimiento, que dura unos dos minutos, autocomprueba el normal
funcionamiento del sistema, pruebas de lámpara, ajustes de filtros, la
calibración de las longitudes de onda y el voltaje. Los distintos tests que
funcionan correctamente se confirman con una marca de verificación.
Una vez completados los diagnósticos de puesta en mercha, aparece el
MENU PRINCIPAL
 Si el instrumento detecta alguna desviación relativa a la última calibración,
es recomendable llevar a cabo una verificación del sistema.(pulsar la tecla
INICIO, esta verificación dura aproximadamente 6 minutos).

(C) MENU PRINCIPAL


 En el menú principal se pueden seleccionar diversos modos de trabajo

MENU DE MODO PRINCIPAL


Modo No “ “

1.- PROGRAMAS ALMACENADOS /PROGRAMAS DE CODIGOS DE BARRAS


2.- PROGRAMAS DEL USUARIO
3.- PROGRAMAS FAVORITOS
4.- LONGITUD DE ONDA UNICA
5.- LONGITUD DE ONDA MULTIPLE
6.- LAPSO DE TIEMPO
7.- VERIFICACIONES DEL SISTEMA
8.- RECUPERAR DATOS
9.- CONFIGURACION DEL INSTRUMENTO

(D) MODO LONGITUD DE ONDA UNICA


El modo “longitud de onda única” se puede utilizar de tres maneras. Para
mediciones de la muestra a una longitud, se puede programar el instrumento para
medir la absorbancia, el % de transmitancia o la concentración del analito.
 En el menú principal pulse LONGITUD DE ONDA UNICA
 Pulse OPCIONES para configurar los parámetros

AJUSTE DE PARÁMETROS ANALÍTICOS


Luego que el modo longitud de onda única es seleccionado, aparecen las opciones
de configuración de longitud de onda única. Estos parámetros son los siguientes:

OPCIONES DE CONFIGURACIÓN DE LONGITUD DE ONDA ÚNICA


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OPCION
1. MEMORIZAR APAGADO/ENCENDIDO los datos de medición se memorizan
automáticamente)

2. % TRANS/ABS/CONC cambia entre % de Transmitancia, lecturas de


absorbancia o concentración)
3. LONGITUD DE ONDA ( ) introduce la longitud de onda de la medición, uitlice
el teclado alfanumerico para introducir la longitud e onda de medición (rango
entre 340-900 nm
4. ICONO TEMPORIZADOR (funciona a modo de cronometro)
5. FACTOR DE CONCENTRACION (factor de multiplicación para convertir los
valores de ABS en valores de concentración)
6. RESOLUCION DE LA CONCENTRACION (seleccione la posición de la coma
decimal en las lectruras de concentración calculadas)
7. GUARDAR COMO PROGRAMA DEL USUARIO (memoriza los parámetros
seleccionados como programa de usuario)
8. RECUPERAR DATOS (recupera datos de medición escaneados de longitudes de
onda o lapsos de tiempo guardados)
9. CONFIGURACION DEL INSTRUMENTO (ajustes de funcionamiento básicos del
isntrumento)

4 - MEDICIÓN DE ESTÁNDARES A LA LONGITUD DE ONDA UNICA


 Coloque la cubeta de blanco (agua destilada) completamente limpia y seca
EN EL SOPORTE PORTACUBETAS.
 Seleccionar ern opciones la tecla longitud de onda e Introducir la longitud
de onda de la medición utilizando el teclado alfanumérico (450 nm)
 Pulse CERO (La tecla medición sólo se activará cuando se haya realizado
la medición del cero).
 Coloque la cubeta de muestra en el soporte portacubetas.Pulse medición
y tome nota del valor de absorbancia
 Realizar mediciones de absorbancia de cada patrón a la longitud de onda de
trabajo.

5.- MEDICION DE LAS MUESTRAS


Medir la absorbancia de cada solución patrón a la longitud de onda de trabajo.
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IX INTERPRETACIÓN DE DATOS
Para copiar la curva de trabajo obtenida en pantalla en función de los valores de absorbancia en el
eje de la ordenada frente a las concentraciones en partes por millón de manganeso en el eje de la
abcisa, presionar la tecla “COPY “.

Para seleccionar las soluciones patrones para la construcción de la curva de calibración es necesario
calcular el error relativo de la concentración o de la absorbancia que surge de un error fotométrico de
1 %, y se efectua a partir de la ecuación siguiente:

dA = dC = 0.434 dT
A C t log t
Donde:
dA = dC = error relativo de la concentración o de la absorbancia
A C
dT = error fotométrico de 1 %
t = transmitancia.
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Informe de laboratorio No 2

DEMOSTRACIÓN DE LAS LEYES FOTOMÉTRICAS Y ERROR RELATIVO


DE LA CONCENTRACIÓN

Fecha: 06-09-2017 No GRUPO: 6


Análisis:
Preparación de la soluciones patrones
Obtención de la curva de calibración
Demostración de la ley de Beer
Selección de soluciones patrones

Método: Espectrofotométrico del visible


Muestra:
Solución STOCK de KMnO4 0.1N
Solución diluida de 100 ppm Mn
Soluciones patrones

DATOS:
 Solución diluida : 100 ppm Mn
 Longitud de onda de trabajo: 520 nm
 Blanco : agua destilada

TABLA DE RESULTADOS

CUADRO DE SOLUCIONES PATRON

No Volumen de la solución Volumen final Concentración ppm


Patrón diluida
1 0,5 100 0,5
2 1,0 100 1,0
3 2,0 100 2,0
4 4,0 100 4,0
5 6,0 100 6,0
6 8,0 100 8,0
7 10,0 100 10,0
8 12,0 100 12,0
9 16,0 100 16,0
10 20,0 100 20,0
11 30,0 100 30,0
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CUADRO DE MEDICIONES

No Concentración ppm ABS %T


Patrón
1 0,5 0.079 83.37
2 1,0 0.143 71.94
3 2,0 0.236 58.08
4 4,0 0.424 37.67
5 6,0 0.634 23.23
6 8,0 0.815 15.31
7 10,0 1.004 9.91
8 12,0 1.037 9.18
9 16,0 1.560 2.75
10 20,0 1.923 1.19
11 30,0 2.829 0.15

*Soluciones diluidas

CURVA DE CALIBRACIÓN

CURVA DE CALIBRACION
3
2.5
2
Abs

1.5
1
0.5
0
0 2 4 6 8 10 12
concentracion (ppm)

CÁLCULO DEL ERROR RELATIVO DE LA ABSORBANCIA O LA CONCENTRACIÓN


Relación Matemática
∆𝑪 𝟎. 𝟒𝟑𝟒 ∆𝑻
=
𝑪 𝒕 𝐥𝐨𝐠 𝒕
Dónde:
 c/c = Error relativo de la concentración
 T = grado de incertidumbre 1% (0.01)
t = transmitancia
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MEDICIÓN
Para 1% de t
0.434(0.01)
= = 21.70
0.01 log(0.01)

Para 5% de t
0.434(0.01)
= = 6.67
0.05 log(0.05)

Para 10% de t
0.434(0.01)
= = 4.34
0.10 log(0.10)

Para 15% de t
0.434(0.01)
= = 3.51
0.15 log(0.15)

Para 20% de t
0.434(0.01)
= = 3.10
0.20 log(0.20)

Para 30% de t
0.434(0.01)
= = 2.77
0.30 log(0.30)

Para 40% de t
0.434(0.01)
= = 2.73
0.40 log(0.40)

Para 50% de t
0.434(0.01)
= = 2.88
0.50 log(0.50)

Para 60% de t
0.434(0.01)
= = 3.26
0.60 log(0.60)

Para 70% de t
0.434(0.01)
= = 4.00
0.70 log(0.70)

Para 80% de t
0.434(0.01)
= = 5.60
0.80 log(0.80)

Para 90% de t
0.434(0.01)
= = 10.54
0.90 log(0.90)

Para 95% de t
0.434(0.01)
= = 20.51
0.95 log(0.95)
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TABULACIÓN DE DATOS

t Ac/c
95 20.51
Soluciones
90 10.54
muy diluidas
80 5.60
70 4.00
60 3.26 Soluciones
50 2.88 diluidas
40 2.73
30 2.77
20 3.10
15 3.51 Soluciones
10 4.34 concentradas
5 6.67
1 21.7

CURVA DE ERROR RELATIVO

CURVA DE ERROR RELATIVO


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Error relativo (Ac/c)

20
15
10
5
0
0 20 40 60 80 100
Transmitancia (t)

DISCUSIÓN DE RESULTADOS
Se aprecia que las concentraciones de los estándares deben de estar en un rango de 20 y 40 % de T
para poder desarrollar las practicas.

CONCLUSIONES

Se construye la curva de calibración, verificándose la ley de Beer, determinando las concentraciones


límites de los patrones de no estar en el rango adecuado se diluye o concentra
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CUESTIONARIO

1.- ¿Que son y cuáles son las leyes fotométricas?

Todas las sustancias pueden absorber energía radiante. La absorción de las radiaciones
ultravioletas, visibles e infrarrojas depende de la estructura de las moléculas, y es
característica para cada sustancia química. Además, no está de más mencionar el hecho de
que la absorción y trasmitancia de luz depende tanto de la cantidad de la concentración
como de la distancia recorrida. Definidas por las siguientes leyes:
Ley de Beer: La Ley de Beer declara que la cantidad de luz absorbida por un cuerpo depende
de la concentración en la solución.
Ley de Lambert: En la Ley de Lambert se dice que la cantidad de luz absorbida por un objeto
depende de la distancia recorrida por la luz.
Ley de Bouguer-Beer-Lambert: Una ley muy importante es la ley de Bouguer-Beer-Lambert
(también conocida como ley Lambert Bouguer y Beer) la cual es solo una combinación de las
citadas anteriormente.

2.- Como obtiene y para que se utiliza una curva de calibración o de trabajo

La curva de calibrado es un método de química analítica empleado para medir la


concentración de una sustancia en una muestra por comparación con una serie de elementos
de concentración conocida. Se basa en la existencia de una relación en principio lineal entre
un carácter medible (por ejemplo la absorbancia en los enfoques de espectrofotometría) y la
variable a determinar (la concentración). Para ello, se efectúan diluciones de unas muestras
de contenido conocido y se produce su lectura y el consiguiente establecimiento de una
función matemática que relacione ambas; después, se lee el mismo carácter en la muestra
problema y, mediante la sustitución de la variable independiente de esa función, se obtiene
la concentración de esta. Se dice pues que la respuesta de la muestra puede cuantificarse y,
empleando la curva de calibración, se puede interpolar el dato de la muestra problema hasta
encontrar la concentración del analito. Las curvas de calibración suelen poseer al menos una
fase de respuesta lineal sobre la que se realiza un test estadístico de regresión para evaluar
su bondad.

3.- Como comprueba experimentalmente la ley Beer

La obtención de la curva de calibrado y la demostración de la ley de Beer se determinan


experimentalmente, preparando una serie de soluciones patrones y midiendo la absorbancia
de cada solución a la longitud de onda analítica, máxima o de trabajo. Con los datos de
absorbancia frente a las concentraciones de los patrones se gráfica en un sistema cartesiano
y la representación debe ser una línea recta de pendiente positiva si cumple con la ley Beer.
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4.- Señalar las razones por las cuáles se dan las limitaciones de la Ley de Beer

Es una ley límite (0.01 M) la distancia promedio entre las especies disminuye hasta el punto
en que cada una afecta la distribución de carga de sus vecinas alterando la capacidad de
absorción a una λ. En soluciones de baja concentración del absorbente pero a
concentraciones elevadas de otras especies (electrolitos), la gran proximidad de iones al
absorbente altera (interacciones electrostáticas) la absortividad molar. Este efecto se reduce
al diluir.

5.- A que se denominan y cuáles son los errores personales

Se dan en la utilización y cuidado de las cubetas, deben de estar correctamente limpias, sin
huellas y sin ralladuras. Deben evitarse los ácidos concentrados que puedan atacarlas, y se
debe comprobar antes y después de la medida que no tengan burbujas ni partículas no
disueltas que pueden producir dispersión de la luz. Otro error puede producirse en el control
de la temperatura y tiempo.
- La temperatura influye dependiendo de qué reacción sea.
- El tiempo se debe de controlar cuando tenemos reacciones que tardan un tiempo en
producirse y al cabo de un tiempo decaen.
- También hay que tener en cuenta el orden de adición de los reactivos, porque puede
influir en la obtención de la absorbancia.

6.- Qué criterios se maneja para seleccionar las soluciones patrones para ser utilizadas en
un método espectrofotométrico

Tienen composición conocida. Deben tener elevada pureza. Debe ser estable a temperatura
ambiente. Debe ser posible su secado en estufa. No debe absorber gases. No debe
reaccionar con los componentes del aire. Debe reaccionar rápida y estequiométricamente
con el titulante. Debe tener un peso equivalente grande.

7.- Representar en forma gráfica el error relativo de la concentración considerando el 0.5 %


de error fotométrico si las lecturas son de 1, 5, 10, 20, 30 ,40, 50, 60, 70, 80, 90, y 95 % de
transmitancia

Δ𝐶 0.434 ∗ Δ𝑇
=
𝐶 𝑇 ∗ 𝑙𝑜𝑔𝑇

Donde
Δ𝑇= error fotométrico
T= transmitancia
Δ𝐶
= Error relativo
𝐶
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% T Error
relativo Error relativo
1 0 0.07
5 0.06209136 0.06
10 0.0217 0.05
20 0.00833955
0.04
30 0.00489691
40 0.00338627 0.03
50 0.00255449 0.02
60 0.00203395 0.01
70 0.00168013 0
80 0.00142531 0 20 40 60 80 100
90 0.00123378
95 0.00115497

8.- Dar razones porque en espectroscopia se utilizan soluciones diluidas

La ley de Bourguer-Lambert-Beer predice, para una longitud de onda constante y paso óptico
fijo, una relación lineal entre Absorbancia y Concentración conpendiente en el intercepto
cero. Sin embargo esta ley sólo se cumple estrictamente o está limitada para soluciones
diluidas, generalmente concentraciones menores o iguales que 10-2 M. La suposición de que
e es independiente de la concentración de una sustancia para una longitud de onda dada,
sólo se cumple en soluciones diluidas ya que no es constante para soluciones concentradas
sino que depende del índice de refracción de la solución

9.- Cuando una curva de calibración no parte del origen señalar las razones que determinan
este tipo de curva

Cuando una curva de calibración no parte del orígenes debido a que no se tomó las medias
correctas de absorbancia en el espectroscopio, también puede ser debido a que no se calibro
el equipo correctamente o el blanco utilizado en la el experimento no era el adecuado para
medir la absorbancia.

10.- Señalar los rangos de transmitancias y absorbancias de los patrones y de la muestra


coloreada donde el error relativo es mínimo

Rangos de transmitancia: 6.30 a 6.72 % T


Rangos de absorbancia: 1.2000 a 1.172 de Abs
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PROCEDIMIENTO

Solución stock de
Preparar por dilución a partir de la solución diluida
KMnO4 0.1000 N
de 100 ppm, 100 mililitros de soluciones patrones

Medición de estándares a la longitud de onda única

Coloque la Seleccionar en opciones la


cubeta de tecla longitud de onda e
blanco (agua Introducir la longitud de
destilada) onda de la medición
completamente utilizando el teclado
limpia y seca en alfanumérico (450 nm)
el soporte
portacubetas.

Coloque la cubeta
de muestra en el
soporte
portacubetas. Pulse Realizar mediciones de
medición y tome absorbancia de cada
nota del valor de patrón a la longitud de
absorbancia onda de trabajo