UNIVERSIDAD NACIONAL DEL

CALLAO
FACULTAD DE INGENIERÍA PESQUERA Y DE ALIMENTOS
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA DE ALIMENTOS

Microbiología de alimentos

Tema: TÉCNICAS DE SIEMBRA

Ciclo: 2018-B

Integrantes:

 Piero Espezúa Gastelú ……………1024120494

 Paredes chavez Karen …………….1514110138
 Bardales bueno lory ……………….1514120129
 Juan Carlos Calistro Aguilar …….1514120246

2018
OBJETIVOS

 Identificar el uso de medios de cultivo de acuerdo al microorganismo a

estudiar.
 reconocimiento de los materiales empleados en la siembra de
microorganismos.

INTRODUCCIÓN

En la naturaleza, los microorganismos se encuentran formando poblaciones

mixtas con otros tipos de microorganismos. Los cultivos de estas mezclas se
llaman por ello cultivos mixtos. Sin embargo, el conocimiento de los
microorganismos se consigue mediante el estudio de cepas aisladas,
cultivadasen el laboratorio en cultivos puros (o axénicos).
 Marco teórico

Siembra.
Sembrar o inocular es introducir artificialmente una porción de muestra (inóculo) en un
medio adecuado, con el fin de iniciar un cultivo microbiano, para su desarrollo y
multiplicación. Una vez sembrado, el medio de cultivo se incuba a una temperatura
adecuada para el crecimiento.

Las reglas fundamentales para efectuar la siembra exigen:

1. Que se efectúen asépticamente

2. Que los medios de cultivo y el instrumental a utilizar estén esterilizados
3. Que se realicen solo los manipuleos indispensables
4. Que se trabaje fuera de toda corriente de aire. De ser posible utilizando un mechero o
bien Flujo laminar.

Tipos de siembra (placa)

Siembra por inmersión: se coloca el inóculo en una placa o caja de Petri y sobre el mismo
se vierte el medio de cultivo previamente fundido. Este método se utiliza para
microorganismos aerobios.

Siembra en doble capa: se procede de la misma manera que por inmersión. Una vez
solidificado el medio se vierte una cantidad extra de medio necesaria para cubrir la capa
anterior (generalmente 10 ml. aprox.). Este método se utiliza para microorganismos
anaerobios facultativos y microaerofílicos.

Siembra en superficie: se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo fundido, se
deja solidificar y se coloca sobre la superficie el inóculo. Con ayuda de una espátula de
Drigalsky se extiende el inóculo hasta su absorción total por el medio de cultivo. Este tipo
de siembra se recomienda para microorganismos aerobios estrictos.

Siembra en estría: se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo fundido y se deja
solidificar.

Siembra volumétrica: Este método de siembra consiste en sembrar una muestra liquida
cuyo volumen no puede ser predeterminado, en medio de cultivo sólidos o líquidos. Por
ejemplo: En las muestras de exudado vaginal tomadas con pipetas de Pasteur, no puede
determinarse el volumen, ya que este tipo de pipeta carece de escala de graduación, sin
embargo, la orina empleadas en el urocultivo o la sangre para el hemocultivo se puede
determinar con pipeta o jeringuilla respectivamente el volumen que será sembrado.

Siembra masiva: Cuando se desea realizar una siembra masiva se puede utilizar la
espátula de Driglaski. En este caso la gota de muestra liquida se esparce con la espátula
por toda la superficie del medio de cultivo sólido imprimiéndo un movimiento en espiral. La
siembra masiva también se puede realizar con un hisopo grueso embebido de un cultivo
liquido, procediendo a su deslizamiento sobre toda la superficie de una placa de agar.
Técnicas de cultivo en placa:
Técnica de siembra por estría en placa
Es el método más fácil y el más usado para obtener cultivos axénicos. Para ello, con un
asa de siembra se toma una muestra de la población mixta y a continuación se hacen
estrías sobre la superficie de un medio sólido preparado en una placa Petri (a las placas
Petri también se les denomina simplemente placas). Conforme se van haciendo estrías en
zigzag con el asa, cada vez se van depositando en la superficie del medio menos
microorganismos. A continuación, se flamea el asa, se toca en la región donde se han
realizado las últimas estrías y se continúa la siembra con la misma técnica, en la superficie
de medio sin sembrar aún. Repitiendo este proceso varias veces se logra separar células
individuales. A continuación, las placas se incuban en un lugar adecuado, permitiendo que
las células aisladas experimenten un número suficiente de divisiones para formar colonias
visibles. Aunque cada colonia posiblemente representa un clon derivado de una sola
célula, no podemos asegurarlo. Quizás, dos células quedaron depositadas tan juntas que
han originado una única colonia mixta. Por tanto, para asegurarnos de que hemos
obtenido un cultivo axénico, conviene repetir el procedimiento a partir de una colonia bien
aislada en la primera placa. Las colonias que se desarrollen la segunda vez, serán, casi
con toda seguridad, cultivos axénicos.

Técnica de extensión en placa:

Las muestras diluidas se siembran directamente en la superficie de la placa de agar,

extendiéndolas con avuda de un asa de Diralsky de cristal estéril. La suspensión se
absorbe en el agar, dejando las células microbianas sobre la superficie. En ambas técnicas
las placas se incuban hasta la aparición de las colonias. Como en el método de siembra
por estría, no existe la seguridad de que las colonias que aparecen en las placas
sembradas por extensión o en el agar solidificado sembrado por el método del vertido en
placas sean cultivos axénicos hasta que se repita el proceso. Las dos técnicas de siembra
por dilución presentan la ventaja de que permiten obtener un mayor número de colonias
aisladas que el método de siembra por estría, por tanto se eligen cuando se ha de
seleccionar una cepa a partir de una mezcla con varios tipos de microorganismos
Tipos de siembra (Tubo)
Siembra por dilución: Se toma el tubo de ensayo con medio líquido, como el caldo simple.
Se toma el material a diluir y se siembra en el tubo con el uso del asa cargada con
el material bacteriológico, se agita, con movimientos moderados.

Siembra por estrías en superficie: Se siembra el material en la superficie del agar inclinado
en un tubo de ensayo, allí se extiende por toda la superficie con el asa bacteriológica,
previamente esterilizada y cargada con el material a sembrar, haciendo estrías no muy
amplias, pero tampoco muy estrechas. Se inicia por la parte más profunda de la superficie
inclinada y se termina la estría en la parte más cerca de la boca del tubo.

Siembra por punción

Como es obvio, el instrumento de siembra a emplear será la aguja de platino y el medio de
cultivo sólido, generalmente, en tubo de ensayo. Las manipulaciones y la observancia de
las precauciones de asepsia, son similares que cuando se utiliza el asa. La particularidad
que tiene este método, es que la aguja (con el inoculo) debe atravesar perpendicularmente
el medio de cultivo.

Técnicas de siembra (tubo)

Siembra por inoculación o agitación:

Con un asa bacteriológica, esterilizada, se toma cantidad de inoculo, se introduce en el
centro del medio líquido, agitándose, no tocando la pared del tubo.
Siembra por estría (en tubos de agar inclinado):
Muestra de material en asa de siembra, deslizar en zigzag, empezar por superficie más
profunda.

Siembra por picadura:

Asa recta, tomar la muestra, sembrar en agar semisólido, en el tubo de ensayo hasta que
la muestra quede bien impregnada al agar.

Siembra por vertido en placa:

Diluciones en varios tubos, pipeta 1cc de muestra o dilución, agregar tubo de ensayo
estéril, se agrega medio licuado, mantener a 55°C, movimientos rotatorios, solidificar.

El método más usual es la siembra por estría simple sobre un medio de cultivo
solido adecuado dispuesta en una placa de Petri.

Para ello se toma una pequeña cantidad de muestra con un asa de platino % se reparte sobre
la superficie del medio de cultivo. Sobre el medio quedan separadas e inmovilizadas las células
bacterianas. tras la incubación en condiciones adecuadas, cada célula viable origina una
colonia visible resultado de sucesivas divisiones celulares.

cada colonia bacteriana tiene unas características determinadas en cuanto a su forma, borde,
elevación, tamaño, consistencia, etc. Los tipos de bacterias presentes en la muestra original
son visibles como tipos diferentes de colonias. Apartar de colonias separadas suficientemente
es posible obtener un cultivo puro de cada uno de los tipos de bacterias presentes en la
muestra original
Estrías múltiples

En un asa de siembra, previamente esterilizada, se toma una muestra del cultivo de

microorganismos y se extiende sobre un área pequeña de la superficie de la placa con agar, en
forma de estrías muy juntas, pero sin hacer presión para no dañar el agar

Se flamea el asa, se enfría y después de rozar la siembra realizada previamente, se extiende de

nuevo por otra zona de la placa haciendo nuevas estrías. Este proceso se repite
sucesivamente, flameando % enfriando el asa al comienzo de las sucesivas siembras en estría.
Se lleva la placa a incubar, a la temperatura adecuada, siempre en posición invertida.

mediante esta técnica se obtienen colonias aisladas a partir de una muestra que contenga un
elevado numero de gérmenes

Técnica de los cuatro cuadrantes:

Se divide la placa en cuatro cuadrantes

Se toma el inoculo y se siembra consecutivamente en -1-2-3-4 encubar.

En el cuarto cuadrante, al menos, obtendríamos colonias aisladas

Estría por agotamiento

con éste procedimiento se puede conseguir una buena separación de las colonias y aislarlas
fácilmente. para ello se funde el medio de cultivo, se vuelca en cada de Petri y se dé la
solidificar. con el asa previamente esterilizada se toma material de un cultivo heterogéneo %se
descarga sobre la superficie del medio formando estrías. Esto puede realizarse de varias
formas

A-Al comienzo se coloca el inoculo, luego se continúa con las estrías. cuando se quiere
obtener colonias muy separadas se puede utilizar dos o tres cuadrantes de la cada de Petri,
para lo cual se repite la operación sin tomar con el asa nuevo material

el éxito del aislamiento, de la separación sobre el medio de cultivo, depende de la superficie

sobre la que se a distribuido la muestra. Es muy importante realizar el mayor número de estas
posible. En las primeras estrías aparecerán colonias con fluentes o una masa continua de
microorganismos. En las estrías finales deberán aparecer colonias separadas unas de otras. El
aislamiento requiere un reducido inoculo de partida. La sucesiva disminución del tamaño de la
población sobre el asa (por descarga sobre el medio de cultivo) al recorrer el medio de cultivo,
debe asegurar que finalmente algunas células pueden suficientemente separadas (aisladas
unas de otras) sobre la superficie.

Por picadura o punción

con una aguja se toma el material que se quiere sembrar y se lo introduce en el tubo, con
medio semisólido. introducir el agua hasta el fondo, formando un canal de punción, trayecto
por el cual la retiraremos luego. Este método se utiliza para estudiar la movilidad de los
microorganismos. medio de cultivo. Semisólido (medio SIM O MIO ) Instrumento: agua
bacteriológica
Por picadura y estría en la superficie:

En este método se siembra por picadura en el fondo del tubo a medida que va saliendo del
botón se realiza una estría en la superficie del gel, esto se hace con la finalidad de estudiar los
cambios que ocurran en superficie y profundidad. A lo largo del canal se desarrollan los
microorganismos, y según lo hagan en la parte superior o inferior del tubo, estarán indicando
su comportamiento frente a los nutrientes del medio.

Asada en caldo:

Se esteriliza el asa y se toma el inoculo con el asa con punta redondeada y se esteriliza la boca
del tubo y el tapón que posteriormente se introduce el asa dentro del tubo que contiene
medio de fluido y se agita con dos o tres movimientos circulares, se saca el asa del tubo % se
vuelve a esterilizar para eliminar el exceso de microorganismo que haya quedado adherido.