UNIVERSIDADE ESTADUAL DE SANTA CRUZ

CIB084 - CULTURA DE CÉLULAS E TECIDOS VEGETAIS (PPGGBM)

CAA102 - CULTURA DE TECIDOS APLICADA À PRODUÇÃO VEGETAL (PPGPV)
PROF. MARCIO COSTA – MÓDULO IV/2018

ESTUDO DIRIGIDO 4:

1. Discuta sobre os efeitos do genótipo na morfogênese in vitro dos tecidos vegetais.

R.- O genótipo é um fator determinante em todos os processos morfogênicos, desde a
habilidade do explante em estabelecer condições in vitro até a proliferação de calos, ou a
diferenciação e crescimento de novos órgãos. Por esta razão, não é possível generalizar
metodologias ou protocolos de trabalho, porque os meios de cultura, bem como as
condições de cultura selecionadas, devem ser específicos para cada situação particular.
2. Discuta sobre a importância da fase de crescimento e determinação celular na
morfogênese in vitro.
R.- É provável que a expressão epigenética seja a razão pela qual uma célula é competente.
Talvez exista um gene ou genes expressos para a molécula receptora do regulador de
crescimento das plantas indutoras, o que permitiria àquela célula competente reconhecer a
substância de crescimento das plantas. No entanto, existem outras possibilidades que
podem levar à competição, como a expressão de um gene importante na via de transdução
de sinal em uma célula competente.
O tecido juvenil tem facil crecimento e são desdiferenciados, tem a característica de
responder melhor à cultura in vitro, eles parecem ter células competentes pré-existentes
que respondem aos estímulos do meio de cultura, porém os tecidos adultos parecem não
ter células como competição.
Células competentes em uma planta ou explante são aquelas capazes de reconhecer o
sinal do regulador de crescimento da planta e mudar ou se tornar determinado. Quando o
sinal é removido do regulador de crescimento da planta, as células determinadas
continuarão a responder. Desdiferenciarão (serão novamente meristemáticos) e suas
células filhas se diferenciarão no novo surto, na raiz ou no embrião somático. No entanto,
nem todas as células de um tecido são competentes. Não é bem compreendido o que torna
uma célula competente para perceber um sinal regulador do crescimento da planta e que
sua célula adjacente não é competente. Sabe-se que os reguladores de crescimento de
plantas aplicados causam moléculas específicas de mRNA. Esta é uma evidência de genes
específicos que são expressos em resposta às substâncias de crescimento de plantas
exógenas. No entanto, essa expressão gênica específica está mais claramente relacionada
a mudanças em certas células do que ao que torna as células competentes.

3. Como fontes de tecidos juvenis podem ser obtidas a partir de uma planta lenhosa
adulta?
R.- O tecido joven para cultivo in vitro pode se obter, a partir de brotos após das podas, ou
da base da nos troncos na base dos arbores, chamadas de esferoblastos (crescimentos
nodulares) ou lignotubers (inflamações na base do caule que surgem nos nódulos inferiores
das plântulas).
As características juvenis encontradas nos brotos epicórmicos e basais podem ser de curta
duração e podem desaparecer rapidamente à medida que os brotos se prolongam.

4. Discuta sobre os efeitos do meio basal e de reguladores de crescimento na indução

de competência e determinação celular.
R.- O meio Murashige e Skoog (1962) (MS) mostrou-se adequado para o crescimento de
calos, morfogênese direta e indireta e cultura de brotos de muitas espécies de plantas. Este
é claramente um bom ponto de partida para a produção de plantas, mas devemos ter em
mente que a formação direta de brotações pode ocorrer nos explantes de algumas espécies
apenas na água. O crescimento e a organogênese in vitro dependem, em grande parte, da
interação entre substâncias de crescimento endógeno naturais (geralmente indefinidas ou
apenas mal quantificadas) e reguladores de crescimento sintéticos análogos que podem
ser adicionados ao meio.
Um problema em tentar entender ou se tornar uma célula competente é que é difícil
determinar se uma célula específica é competente e que ela responde às subestações de
crescimento da planta e é determinada. Uma vez determinadas, as alterações celulares e
sua expressão física podem ser testadas. No entanto, é difícil saber qual célula é
competente e qual célula não foi determinada antes. Células competentes respondem a um
sinal, invadindo invariavelmente uma subestação de crescimento de plantas. Quando as
células podem responder, elas podem se mover a partir de um caminho predeterminado de
desenvolvimento. Por exemplo, uma célula dá folha pode se mover de modo que ela
começa a ser dividida em uma raiz ou broto será formado.
O meio Murashige e Skoog (1962) é importante para que as plantas adquiram competência,
uma vez que as celulas tornan-se competentes a adição dos reguladores fazen formar um
tecido especifico, determinado.

5. Quais fatores relacionados a planta-mãe ou plantas-estoques podem afetar as

respostas obtidas in vitro? Discuta sobre cada um deles.
R.- Aqueles que são influenciados pelo modo em que a planta-mãe é tratada e o ambiente
em que a planta-mãe é mantida.
Status nutricional.- Falta ou excesso do nutrientes como de nitrogênio e potássio pode inibir
o número de brotos regenerados por explante e afetar o enraizamento das plantas.
Status fitossanitário.- A presença de patógenos ou qualquer tipo de doença reduz o
crescimento e a morfogênese in vitro.
Época de coleta dos explantes.- Mudanças de temperatura, fotoperíodo, qualidade da luz,
regime pluviométrico ao longo do ano resultam em plantas-mãe com níveis alterados de
carboidratos, proteínas e hormônios de crescimento dentro de seus tecidos. Assim como
os níveis de contaminação encontrada nos explantes também variam de acordo com a
estação do ano, a coleta depende de o tipo de cultura. Uma poda a la planta-mãe, para
obter explantes mais vigorosos e menos contaminados.
6. Como a idade de tecidos ou órgãos usados como fonte de explantes pode ser
mensurada? Discuta sobre a influência da idade do material vegetal no sucesso da
iniciação do cultivo in vitro?
R.- A idade do tecido pode influenciar a iniciação das culturas in vitro, bem como modificar
o potencial morfogênico do tecido. A idade ontogenética e a idade do órgão são os fatores
mais importantes afetando o crescimento e a morfogênese in vitro, explantes coletados de
plantas juvenis, particularmente de plântulas, são altamente responsíveis.
A fonte de expantes pode ser mesurada por a:
Idade do órgão ou da planta intacta, período de tempo de crescimento da planta a partir de
uma gema ou embrião, ou a partir da iniciação de um órgão ou tecido particular.
Idade fisiológica ou ontogenética, que é a fase em que o tecido pode ser classificado como
jovem ou maduro de acordo com a sua origem de planta juvenil ou adulta, respectivamente.
Grau de diferenciação, onde as partes mais jovens da planta são os meristemas
indiferenciados, enquanto as células ou órgãos diferenciados são as partes mais velhas.
O periodo do cultivo tem um limite maximo de subcultivos, cuanto maior o número de
subcultivo a planta perde sua capacidade, os primeros subcultivos (um a dois) aumentan a
capacidade na iniciação do cultivo in vitro, despois reduz de uno a dos aumenta, a o longo
do tempo.
7. Quais os efeitos do tipo, posição, tamanho e polaridade dos explantes na
morfogênese in vitro?
R.- O tamanho do explante é importante, porque si e muito pequeno são debiles y a
supervivencia é menor, si foise grande é mais dificil de descontaminar e manupular.
Para selecionar o material mais jovem em uma planta adulta, o fenômeno de topófisis deve
ser considerado. Este é um processo pelo qual o tipo de crescimento de um novo indivíduo
é determinado pela posição que ocupou na planta adulta. Isso é causado pelo efeito do
envelhecimento fisiológico e implica que os explantes mais reativos in vitro são encontrados
nos brotos das áreas basais do tronco e das raízes.
A polaridade de regeneração varia em diferentes genótipos e pode ser às vezes revertida
por reguladores de crescimento.

8. Discuta sobre a importância do ferimento dos explantes na morfogênese in vitro.

R.- Todos os explantes transferidos para cultura in vitro estão sujeitos a ferimento durante
o seu isolamento; o ferimento aumenta a absorção de nutrientes e reguladores de
crescimento e induz a produção de etileno, frequentemente fornece um estímulo a formação
de calo e/ou morfogênese. A sonicação é um método bastante empregado na
transformação de plantas visando aumentar os sítios de ferimento dos explantes.

Bibliografia:
George, E.F. Plant propagation by tissue culture - part 1. 2a Ed. Edington: Exegetics Ltd.,
1993.
George, E.F.; Hall, M.A.; De Klerk, G-J. Plant propagation by tissue culture - v. 1: The
background. 3a Ed. Dordrecht: Springer , 2008. 501 p.