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AZUCARES TOTALES POR EL METODO DE FENOL
SULFURICO
OBJETIVOS
Aplicar uno de los procedimientos estudiados en clase.
Conocer el porcentaje de azúcares totales en una muestra de miel.
Calcular la absorbancia de la muestra.
FUNDAMENTO
El método de Dubois y cols. (1956) fue el utilizado para la cuantificación
de los azúcares totales:
A alícuotas de 0.4 ml de muestra se le añadieron 0.4 ml de fenol al 5% y
posteriormente 2 ml de H2SO4 concentrado, agitándose la mezcla. A los
30 minutos de acabado el proceso se midió la absorbancia a 490 nm. La
recta de calibrado se realizó con distintas concentraciones de glucosa.
Los ácidos urónicos generan una respuesta menor que la glucosa al test
del fenolsulfúrico. Por ello las fracciones enriquecidas en ácidos urónicos
daban resultados minusvalorados del contenido en azúcares totales. Para
solucionar este problema, especialmente importante en las fracciones
pécticas, se realizó una curva patrón con ácido galacturónico para el test
del fenolsulfúrico y los resultados se rectificaron del siguiente modo:
MATERIALES
Muestra de alimento(miel de abeja).
Balanza analítica.
Glucosa anhidra p.a
Agua destilada
Solución de fenol al 5%(bi destilada).
Ácido sulfúrico concentrado.
Espectrofotómetro.
PROCEDIMIENTO
Se sigue de acuerdo al flujo de preparación de la muestra mostrado mas
adelante.
También de acuerdo al modelo de la curva padrón que se muestra para la
elaboración de la muestra.
CURVA PADRÓN: (MÉTODO DE FENOL SULFÚRICO AZÚCARES
TOTALES)
A partir del padrón dc glucosa, cuya concentración es: 0,01 % (0,1 g/
1000 ml) (glucosa) se prepara la curva padrón conforme los datos
indicados a bajo.
En forma semejante se hace las lecturas de las absorbancias de la
muestra problema. Para ello se toman alícuotas de 0,1; 0,2 ml de
filtrado y se completa a volumen para 1,0 mL con agua destilada.
Seguidamente se hacen las lecturas a 490 nm.
Después de agregar el Fenol, debe adicionarse el H2SO4
Esperar 30 minutos y realizar las lecturas de absorbancia
PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
Pesar 5,0 gr de
muestra
Filtración
Completar a 100 ml
1/100 ml de
Filtrado
12.5/50 ml
Fenol sulfúrico (1
ml)
RESULTADOS Y CÁLCULOS
Muestra de Miel
Para ello:
Se pesó 5.028g, se disuelve en 100ml con H2O.
Luego llevamos a baño maría por 5 minutos.
Se filtra.
Se extrae 1ml y enrasamos a 100; de esta mezcla extraemos 25ml y
nuevamente enrasamos a 100ml
Determinamos la concentración
0.1ml X
X = 0.1 x 0.1
1000
X = 10ug/ml
El tubo # 1 presenta un color claro amarillo.
En el resto del tubo naranja claro de mayor a menor hasta #11.
Luego medimos la absorvancia: a 490nm
A = 0.0409
B = 0.0094
R2 = 0.99
Absorvancia de la muestra: del tubo #10 = 0.55
Y = A +Bx
0.55 = 0.0409 + 0.0094x
x = 54.1606383
Para de determinar:
54.16 0.5ml
x 100ml
x = 10832.1ug = 10.8321mg
10.8321 25ml
x 100ml
x = 43.3285mg
43.3285 1ml
x 100
x = 4332.85mg = 4.33285g
Entonces:
4.33285 5.07g
x 100g
Azúcares totales = 85.46%
Otra manera:
5.07 100%
4.33285 x
x = 85.46%
En 5 gramos de miel, hay 4.33285 gramos de azúcares totales, lo que
representa el 85.46%.
DISCUSIÓN
La reacción que se produjo en los tubos de la curva padrón con los
de la muestra fueron exotérmicas, debido al calentamiento
excesivo de estas, teniendo que esperar 10 minutos para su
enfriamiento.
El fenol sulfúrico deshidrata el azúcar formando:
CONCLUSIONES
Hay que tener cuidado de la cantidad de muestra diluída ya que
esta depende del resultado óptimo de la práctica.
El azúcar es deshidratado debido a la presencia del ácido fenol
sulfúrico.
La temperatura de las soluciones influye positivamente o
negativamente, según los otros compuestos.
En la miel se encuentra la fructuosa libre acompañada siempre de
glucosa y sacarosa
BIBLIOGRAFÍA
Norman Potter, “Tecnología de los alimentos “
R. Matissek, F.M. Schnepel, G. Steiner, 1992
“Análisis de los Alimentos”, 2da Edición, Editorial Acribia S.A.
Zaragoza España.
www.wikipedia.com