Laboratorio No.

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Biotecnología agrícola AISLAMIENTO DE HONGOS FITOPATÓGENOS
Prof. Diana Cárdenas Caro

Yenny Lorena Patiño Ramírez. Cód.1610312

Luisana Cristina Villamizar Flórez. Cód.1610250
Ana María Arismendy Pabón.Cód.1610319

INTRODUCCION OBJETIVOS

Para controlar una enfermedad es Objetivo general: Realizar el diágnostico

indispensable conocer su agente causal.
De lo contrario cualquier estrategia de
control podría ser infructuosa o
eventualmente agravar el estado sanitario
del cultivo. Si no se conoce el
fitopatógeno (causante de la enfermedad
en la planta) podría estarse utilizando un
mecanismo inapropiado contra algo
desconocido. Un correcto diágnostico
provee una cantidad considerable de
información básica para seleccionarmétodos
acordes al organismo o enfermedades encontradas.
condición que esta causando el problema.
Un diágnostico preciso se inicia siempre
con una muestra representativa y la
observación apropiado del entorno de la
planta. En el laboratorio la muestra es
sometida a diferentes análisis en busca de
evidencias, pistas o la identificación
definitiva del agente causal. En el
procedimiento se incluyen exámenes
macroscópicos, microscópicos, cultivo,
pruebas bioquímicas, serólogicas, o
patológicas. En muchos casos los simples
exámenes preliminares responden a la
incógnita, pero a veces se requiere
realizar procedimientos específicos para
obtener el resultado preciso.
de enfermedades en plantas ocasionadas
por hongos.
Objetivos específicos:
Conocer y describir los principales
síntomas de enfermedades fúngicas en las
plantas.
Realizar los procedimientos preliminares
de identificación del agente causal de la
enfermedad vegetal.
Proponer algunos controles para las
Equipos, Materiales y otros Reactivos.
Estudiante:
Muestras de órganos de plantas con
lesiones, deformaciones de tejido,
decoloraciones, pudriciones así (llevar en
cámara húmeda según el ítem 4
Metodología),Frutos de naranja con
pudrición y con moho verde,
Frutos de fresa con pudrición y moho
gris, Bulbos de cebolla con pudrición y
moho blanco, Hojas y tallos de plantas de
tomate con lesiones de color marrón y
con moho del mismo color, Hojas de rosa
con presencia de polvo blanco, Hojas de
planta de tomate con lesiones
redondeadas de color marrón, Hojas de
plantas de papa con lesiones de colornegro,
Plántulas de hortalizas (repollo,
brócoli, coliflor, apio, tomate o pimentón)
con pudrición en el cuello del tallo y
presencia de moho blanco.Bisturí estéril

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(hojilla), cinta transparente, guantes,

cofia, tapabocas, bata, cuaderno de que permitan identificar el género del
hongo causante de la enfermedad.

laboratorio, portaobjetos y cubreobjetos,

alcohol de 90 º. PROCEDIMIENTO

Laboratorio: • Tomamos los frutos y cortamos con el

Cajas de agar PDA, Hipoclorito de sodio
y alcohol, Agua destilada, Azul de
lactofenol, Incubadora, Microscopio y
estereoscopio, Mechero
METODOLOGÍA
Tomar la muestra de la planta infectada y
colocarla en un recipiente con algodón
embebido en agua, taparlo con vinipel
con el objeto de que se desarrolle el
hongo y no se afecten sus estructuras.
Observación directa por presencia de
signos en el tejido: Utilizando tinción
simple con azul de lactofenol, observe las
estructuras al microscopio describiendo el
género al cual pertenece el agente causal
de la enfermedad.
bisturí las partes infectadas.
Remolacha, Papaya, Guanábana, Cacao.
Realizamos la observación
directa por presencia de signos en el
tejido, para ello identificamos
diferentes estructuras en el
microscopio.
Finalmente realizamos el
aislamiento del agente causal a partir de
tejido enfermo, realizando la
siembra en cajas de petri con el
medio de cultivo PDA, el utilizado
para el aislamiento de hongos.
RESULTADOS

Aislamiento del agente causal a partir OBSERVACIÓN DIRECTA

de tejido enfermo: Realizar pequeños POR PRESENCIA DE SIGNOS
cortes de la zona de avance de la EN EL TEJIDO
infección, donde el patógeno está en
activo desarrollo. Los trozos son Observación macroscópica
desinfectados superficialmente con
alcohol de 70º y luego con una solución Remolacha
de hipoclorito a 1% durante 2 minutos,
enjuagados 2 veces con agua destilada
estéril y sembrados en cajas de Petri con
medio de cultivo para hongos PDA. Se
incuban a 28ºC por 4 a 7 días.

Identificación microscópica de los

aislamientos: Realice montajes con
tinción azul de lactofenol y observe al
microscopio para describir las estructuras

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Características: Hongo blanco Nombre del hongo: Rhizopus sp.

algodonoso. Presencia de un hongo
negro, también de aspecto algodonoso.
Papaya
Características: Hifa no septada o
hialina. Color negro o verde pardo.
Se observa el esporangióforo.
Produce esporas sexuales y
asexuales.

Naranja

Características: Hongo gris de aspecto

algodonoso, que presenta un hongo
blanco en el centro de este.
Nombre del hongo: Penicillum
Cacao digitatum.

Características: Hifas septadas

hialinas. Los conidióforos son simples
o ramificados, que terminan en
racimos de fiales en forma de botella.
Conidias sueltas.

Papaya

Características: el tejido enfermo

presenta hongo de color balnco

Observación microscópica:

Remolacha

Nombre del hongo: Clodosporium

cladosporoides
Cararterísticas: Hifa no sepatada.
Color verde oscuro. Se observa el
esporangióforo. Se trata de conidios
hialinos, multicelulares y con forma
característica de media luna.

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Cacao • Hongo blanco de textura

algodonosa.
Se observa el agente causal Rhizopus
sp.

Papaya

Nombre del hongo: Monilopthora

roreri

Características: Hifas septadas hialinas

siempre phialides. Conidias sueltas,
hialinos, pigmentados, globosos o Características:
cilíndricos.
• Hongo Blanco de textura
algodonosa.
AISLAMIENTO DEL AGENTE • Hongo blanco de textura
CAUSAL A PARTIR DE TEJIDO aterciopelada.
ENFERMO:
Naranja
OBSERVACIÓN MACROSCÓPICA:

Remolacha

• Se observa un hongo blanco de

textura algodonosa que cubre toda la
superficie del fruto.
Características:
Cacao
Se observan colonias de distintos
tipos de hongos:

• Hongo verde claro de textura

algodonosa.
• Hongo verde oscuro de textura
algodonosa.
• Elevación.
Características

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Características: se observa el agente

• Hongo verde oscuro de textura causal de la pudrición en la naranja,
algodonosa. Penicillium digitatum
• Hongo blanco de textura
algodonosa que se extiende sobre la Cacao
caja de petri.

OBSERVACION MICROSCOPICA

Remolacha

Características: se observa el agente

causal de la moniliasis, Monilopthora
roreri

Características: se observa claramente el DISCUSIONES DE LOS

agente causal de la enfermedad, Rhizopus RESULTADOS
sp.
En los resultados obtenidos en el
Papaya laboratorio se observo que en las cajas
sembradas con agar PDA las cuales tenían
tejidos enfermos de cacao; se presento
crecimiento de un hongo el cual se
observa micelio de color blanco y
manchas de color marrón en diferentes
partes del fruto del cacao; después de
sacar las cajas de Petri con los tejidos
enfermos se observo crecimiento del
Características: se observa el agente micelio de color blanco, la moniliasis se
causal de la enfermedad, Clodosporium presenta principalmente en cultivos que
cladosporoides no tengan buen índice de humedad,
sombra, estén sometidos a descensos
Naranja bruscos de temperatura, mal drenaje del
suelo y falta de poda.

En la caja de Petri con tejidos enfermos

de papaya se observo crecimiento del
micelio de color blanco y textura
algodonosa del hongo Cladosporium
cladosporoides; este hongo generalmente
se encuentra en el suelo, plantas pero casi

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no es nocivo al se humano; sus hifas se
encuentran organizadas en pequeñas
cadenas que son ovaladas.
En la caja de Petri con tejidos de
remolacha se observo crecimiento del
micelio de Rhizopus sp el cual era de
verde claro y textura algodonosa; en su
observación microscópica se observa un
condioforo llenos de pequeñas espora;
Rhizopus generalmente se encuentra en
plantas marchitas o con cierto grado de
pudrición. Las enfermedades en plantas
con este hongo se caracterizan por
presentar en la parte inferior del capítulo,
manchas acuosas irregulares, de tamaño
variable que posteriormente son de colormarón.
La consistencia del receptáculo
se torna esponjosa y se cubre de micelio y
esporangios de color gris negruzco o
negro, fácilmente visibles en las partes
infectadas.
En la caja de petri que contenia tejidos
enfermos de naranja se observo
crecimiento del micelio del hongo
Penicillium digitatum el cual era de color
blanco y textura algodonosa; este hongo
causa pudriciones en los cítricos sobre
todo la naranja; este hongo crea un moho
verde; este patógeno ataca a la ruta solo si
esta presenta algún tipo de herida o lesión
en su superficie, difícilmente se propaga
por contacto; las fuentes de infección
puede suelo, del aire, envases, etc.
CONCLUSIONES
En la realización de la práctica de
laboratorio se observo microscópicamente
la presencia de el hongo Cladosporium
cladosporoides en tejidos enfermos de
papaya y tomate de árbol; Cladosporium
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se caracteriza por ser un hongo que se
encuentra en la carne, el cuelo, plantas,
textiles y pinturas; es un hongo que no
son patógenos para los humanos salvo en
algunos casos que es capaz de
desencadenar reacciones alérgicas a
algunas personas sensibles. Las esporas
de Cladosporium se encuentran formando
simples o ramificadas cadenas que
pueden tener forma ovoide, oblonga o
esférica.
En la observación microscópica de tejidos
enfermos de remolacha se observo la
presencia del hongo Rhizopus sp; el cual
se encuentra clasificado dentro de las
clase de los Zygomicetes debido a que
producen esporas asexuales no móviles
contenidas en cuerpos fructíferos
denominados esporangios. Sexualmente
producen esporas denominadas
zigosporas.
En la observación microscópica de tejidos
enfermos de cacao se encontro presencia
del hongo Moniliopthera roreri; el cual se
caracteriza por ser la plaga que más ataca
a cultivo de cacao, pero únicamente ataca
a la mazorca del cacao es decir el fruto;
sus conidias se encuentran distribuidas
como en pequeñas cadenas de forma
ovalada.
En la observación micróscópica de tejidos
de naranja se encontro la presencia del
hongo Penicillium digitatum el cual se
caracteriza por ser el hongo que mas
coloniza frutas cítricas en especial la
naranja en la cual se observa un moho
verde; que es el micelio del hongo;
microscópicamente se observaron las
hifas septadas hialinas del hongo.
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CUESTIONARIO es un hongo que

1. ¿Cuáles síntomas reconoció en las
muestras recolectadas?
• Pudrición blanda bacteriana.
• Tizón tardío
• Pudrición casera
2. ¿Cuáles microorganismos encontró?
Penicillum digitatum,
crece muy rápido y es uno de los más
frecuentes que causa pudriciones en
frutos. Ataca principalmente frutos de
naranja, en los cuales causan lesiones
graves.
Cultivo que ataca: Naranja.
Enfermedad: Moho verde de los citrus.
Agente causal: Penicillum digitatum

Rhizopus oligosporuses un hongo de la

familia de las Mucoraceae, ampliamente
usado como levadura (cultivo arrancador)
para la producción casera de tempeh. Las
esporas producen un micelio blanquecino,
esponjoso, uniendo a los granos de soja y
creando una "torta" comestible de granos
de soja parcialmente fermentados.

Rhizopus oligosporus produce un

antibiótico inhibidor de bacterias gram-
positivas, incluyendo a la potencialmente
dañina Staphylococcus aureus y a l a
benéfica Bacillus subtilis (presente en
nattō), aún después de que Rhizopus se
consuma.
Fusarium sp, es un hongo que causa
graves daños en diferentes cultivos,
especialmente en cultivo de manzana,
pera, aguacate, plátano y maiz.

Algunas spp de Rhizopus son agentes

oportunistas de cigomicosis humana.
Pueden causar serias (y con frecuencia
fatales) infecciones en humanos y en
animales debido a su rápido crecimiento a
relativamente altas temperaturas. Algunas
especies son patógenos vegetales. Dos
son usados en fermentación: Rhizopus
oligosporus, en la producción de tempeh, Micelio y esporas de Fusarium sp.
un alimento fermentado derivado de en fruto de zapallo.
grano de soja; R. oryzae se usa en la
producción de bebidas alcohólicas.

Fruto que ataca: Melón

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Conidios septados de Fusarium sp. Se
trata de conidios hialinos, multicelulares
y con forma característica de "banana "
Cultivo que ataca: maíz.
Enfermedad: Pudrición de la raíz y tallo.
Agente causal: Fusarim spp
Cultivo que ataca: Plátano
Enfermedad: Mal de Panamá
Agente causal: Fusarium oxisporum f.
sp
Acremonium sp, hongo de morfología
simple, largo. Hialino, erecto. Phialides
derivaos de hifas. El género
Acremonium incluye patógenos, que en
pocas ocasiones son patógenos de
humanos.
Las colonias
Aureobasidium pullulans,
son de crecimiento rápido, suave,
cubierto con viscosa masa de conidias,
8
crema o rosado a marrón o negro. Hifas
son hialinas y septadas, con frecuencia
cada vez marrón oscuro con la edad y en
holothallic transformación para formarcadenas
de 1 - 2-celled, de paredes
gruesas, oscura pigmentada
arthroconidia comúnmente se llama
chlamydoconidia. Estos arthroconidia
en realidad representan la Scytalidium
anamorfo de Aureobasidium y sólo son
de importancia secundaria en el
reconocimiento de los miembros de este
género. Conidias se producen
sincrónicamente en densos grupos de
cicatrices o indistinta de corto denticles
en indiferenciada, hialino a sub-hifas
hialinas. Conidias son hialinas, de
paredes lisas, de un solo celled
(ameroconidia), elipsoidales, pero de
forma y dimensiones variables (8-12 x 4-
6 um), a menudo con un indistinto hilo
(una marca o cicatriz en el punto de
fijación). Rango de temperatura para el
crecimiento 2-35C; óptimo 25C;
máximo 35C (superior en algunos
patógenos humanos aislados).
Esta especie tiene dos variedades: A.
pullulans var. pullulans, con una colonia
que sigue siendo de color rosa, marrón
claro, amarillo o por lo menos tres
semanas, y A. pullulans var.
melanogenum que pronto se convierte en
negro o negro-verdoso debido a la
oscuridad hifas que a menudo quedan al
margen en celdas separadas.
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Cultivo que ataca. Yuca
Enfermedad: Pudrición
Agente causal: Aureobasidium
pullulans,
Helminthosporium sp,es un hongo que
ataca diferentes tipos de cultivos en
especial de guayabo (psidium guajaval)
Algunas especies también atacan el maiz
causando tizón tardío de las hojas del
maíz.
3. ¿Qué medidas de control
recomendaría para estas enfermedades?
Para el moho verde de los cítricos:
• Adelantar la cosecha de la fruta,
despojando el árbol completamente.
• La recolección de la fruta vieja y
manchada antes de fumigar y recoger la
fruta del suelo después de la cosecha.
• Desinfectar el equipo, las cajas y los
vehículos.
Para la pudrición de la raíz y el tallo:
• Implementar un buen control en base a
incremento de la población de los
enemigos naturales
Para el Mal de Panamá en el plátano:
9
• Uso de material de plantación
libre de enfermedad.
• Plantar en suelos que no
alberguen la enfermedad en ese
momento, o en caso de existirantecedentes
de
plantas afectadas, no
realizar movimientos de tierra en las
zonas donde se hayan
detectado
plantas enfermas.
• Realizar enmiendas al suelo si
fuese necesario, principalmente
aportando calcio a unos niveles
adecuados (entre 1 y 2
Kgrs/planta de yeso agrícola o
tiosulfato cálcico a los niveles
adecuados).
• No deshijar aquellas plantas
afectadas hasta el verano, para
evitar el periodo de máxima
incidencia y procurando que en
esta labor se rompan las
mínimas raíces, además de
desinfectar la barreta con lejía
después de cada uso.
• Eliminar los tratamientos
nematocidas, a no ser que exista
un ataque severo de nemátodos
corroborado por un análisis
previo.
• Aplicar productos estimulantes
de los mecanismos de defensa de
la planta. Optimizar todas las
prácticas de cultivo,
especialmente el riego y el
abonado.
• La baja incidencia de la
enfermedad no amerita control
químico; sin embargo, se
recomienda el entresaque de las
plantas enfermas.
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• El control de Fusarium se ha
logrado satisfactoriamente
mediante resistencia genética.
Actualmente se cuenta con
diversos materiales comerciales
que poseen resistencia a las razas
1, 2 y 3.
• Usar suelos con buen drenaje,
semilla y plántulas libres del
patógeno.
• Rotar los terrenos por al menos
cinco años, solarizar el suelo y/o
fumigarlo.
• Adicionar materia orgánica
(estiércol y pajas o residuos de
plantas que liberen productos
tóxicos para los patógenos como
la col, lechuga, neem y otros),
microorganismos o agentes de
control biológico (Trichoderma
lignorum (Biotrol),
Gilocladium, Fusarium,
Penicillium, Funiculosum,
Bacillus spp, la micorriza
Glomus intraradices, entre
otros), tener un buen balance de
nutrientes (los cuales se pueden
incrementar con el uso de
extractos de algas marinas) y
excelente raíz, tratar la madera,
hilo o metales, las charolas de
poliuretano y la desinfección de
los invernaderos, entre otras.
¿En qué otras plantas podrían estar
presentes?
Penicillum digitatum:
Ataca cítricos en general.
Variedades como Penicillium expansum
causa una pudrición blanda de manzanas.
Podrido La parte de la manzana contiene
1
una micotoxina producida por patulina
llamado por el hongo. Si tal se ven las
manzanas para jugo entonces persiste la
patulina en el zumo. Por lo tanto, las
manzanas con la podredumbre parda no
debe ser nunca utiliza el zumo de
manzana.
Acremonium sp:
Ataca cultivos de importancia comercial
como el melón.
El cultivo del melón es una planta anual,
originaria de Asia occidental y África, se
cultiva para el aprovechamiento de los
frutos que poseen un sabor delicioso,
delicado y apetecido, especialmente en la
época de mucho calor, presentan
diferentes tipos de pulpa desde color
naranja, verde y salmón.
Igualmente ataca cultivos como el
plátano, especialmente el hartón ( Musa
AAB) que es un cultivo de vital
importancia en el sector del Zulia.
Aureobasidium pullulans:
Esta presente en cultivos como el tomate
de árbol, sin embargo no causa daños en
este sino que sirve como controlador
El tomate de árbol es una baya aromática
de forma oboidal, punteada en su extremo
inferior.
BIBLIOGRAFÍA
MOHO VERDE DE LOS CITRUS.
Disponible en la Word Wide Weeb.
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Prof. Diana Cárdenas Caro

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education/364.php&h=215&w=312&sz=
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