26.

1 Defina
a) Elución
b) Fase móvil
La fase móvil en cromatografía es el que los movimientos encima o a través de una fase
inmóvil que se fija en su lugar en una columna o en la superficie de una placa plana.
c) Fase estacionaria
La fase estacionaria en una columna cromatográfica es un sólido o líquido se fija en su
lugar. La fase móvil entonces pasa encima o a través de la fase estacionaria.
d) Constante de distribución
La constante distribución K en cromatografía es la relación de la concentración del analito
en la fase estacionaria a su concentración (actividad) en la fase móvil cuando existe
equilibrio entre las dos fases.
e) Tiempo de retención
El tiempo de retención para un analito es el intervalo de tiempo entre su inyección en una
columna y la aparición de su pico en el otro extremo de la columna.
f) Factor de retención
El factor k de retención se define por la ecuación:
𝑘 = 𝐾𝐴 𝑉𝑆 /𝑉𝑀
Donde 𝐾𝐴 es la constante de distribución de la especie 𝐴, 𝑉𝑆 y 𝑉𝑀 son los volúmenes de las
fases estacionarias y móviles, respectivamente.
g) Factor de selectividad
El factor de selectividad α de una columna hacia las especies A y B es dada por 𝛼 =
𝐾𝐵 /𝐾𝐴 , donde 𝐾𝐵 es la constante de distribución de las especies más fuertemente
sostenidas y 𝐾𝐴 es la constante de distribución de las especies menos fuertemente
sostenidas.
h) Altura de pico

La altura 𝐻 de la placa de una columna cromatográfica se define por la relación 𝐻 = 𝜎 2 /𝐿

donde 𝜎 2 es la varianza obtenida de la Gaussiana en forma de pico cromatográfico y L es
la longitud de la columna en centímetros.
i) Difusión longitudinal
Es una fuente de banda ampliar en una columna en el cual un soluto difunde desde el
centro de concentración de la banda a las regiones más diluidas en ambos lados.

j) Difusión en remolino
Es un fenómeno en el cual las moléculas de un analito llegan al final de una columna en
diferentes momentos como consecuencia de viajar a través de la columna por las vías
que difieren en longitud.
k) Resolución de la columna
La resolución 𝑅𝑠 de una columna hacia dos especies 𝐴 y 𝐵 está dada por la ecuación
𝑅𝑠 = 2𝛥𝑍 /(𝑊𝐴 + 𝑊𝐵 ) donde 𝛥𝑍 es la distancia (en unidades de tiempo) entre los picos
de las dos especies, y 𝑊𝐴 y 𝑊𝐵 son las anchuras (también en unidades de tiempo) de las
cumbres en sus bases.
l) Eluyente
El eluyente en cromatografía es la nueva fase móvil que lleva el analito a través de la
columna.
26.4 ¿Cuáles son las principales diferencias entre la cromatografía gas-líquido y
liquido-liquido?

Gas-líquido Líquido-liquido
Fase móvil : gas Fase móvil : liquida
La fase estacionaria es líquida y los Puede separar macromoléculas y
analitos se separan mediante reparto especies iónicas, y gran variedad de
grupos poli funcionales de alto peso
molecular
El desplazamiento de la FM se realiza por Fase móvil interactiva y fase estacionaria
presión activa
La muestra se inyecta mediante una No está limitada por la volatilidad
jeringa en una cámara de vaporización
Usa como FE un compuesto orgánico La separación ocurre por la interacciones
polimérico de baja volatilidad especificas entre las moléculas de la
muestra con la FM y FE
Componentes: gas portados, sistema de La FE puede ser variada , lo que permite
inyección de muestras, columna, detector, una mayor interacción selectiva y más
registrador probabilidad de separación
Aplicaciones: separación de muestras Aplicaciones: fármacos, productos de la
orgánicas complejas, técnica muy limitada industria química, medicina clínica,
química forense, purificación y separación
etc.

26.5. ¿Cuáles son las principales diferencias entre la cromatografía líquido – líquido
y líquido – sólido?
En la cromatografía líquido-líquido, la fase estacionaria es un líquido que está
inmovilizado por adsorción o unión química a una superficie sólida. Los equilibrios que
causa la separación son equilibrios de distribución entre dos fases líquidas inmiscibles. En
la cromatografía líquido-sólido, la fase estacionaria es una superficie sólida y los
equilibrios implicados son equilibrios de adsorción.
26.6 ¿Qué variables tienen más probabilidad de afectar al factor de selectividad α
correspondiente a un par de analitos?
La composición de la fase móvil, la temperatura de la columna, la composición de la fase
estacionaria, y las interacciones químicas entre la fase estacionaria
26.7. Explique la manera en que se puede manipular el factor de retención de un
soluto.
En GC, el factor de retención se varía mediante el cambio de la temperatura de la
columna como se hace en la programación de la temperatura. En LC, las variaciones se
logran mediante la alteración de la composición del disolvente como en el gradiente de
elución.
26.8 ¿Describe un método para determinar el número de platos de una columna?
El número de platos en una columna se puede determinar midiendo el tiempo de
retención tR y la anchura de un pico en su base (W). Entonces el núm. De placas
N=16(tR/W)2
26.9. Mencione dos métodos generales para mejorar la resolución de dos
sustancias en la columna cromatográfica.
La disminución de las anchuras de los picos aumentará resolución será el aumento de la
separación de los picos. El aumento de la separación se puede hacer por el alargamiento
de la columna para aumentar el número de placas o el aumento de la selectividad.
26.11 ¿Qué es la elución de gradiente?
La elución de gradiente es un método que se lleva a cabo en cromatografía de líquido la
cual consisten en que la fase móvil se va cambiando continuamente o en pasos con el fin
de optimizar las separaciones.

DATOS. TABLA 26.14

Longitud De Relleno 24.7 cm
Tasa De Flujo 0.313 mL/min
VM (Velocidad de la FM) 1.37 mL
Vs (Velocidad de la FE) 0.164mL

Un cromatograma de una mezcla de las especies A, B, C y D proporciona los siguientes

datos
Tiempo de retención, min Anchura del pico en la base
(W), min
No Retenida 3.1 -
A 5.4 0.41
B 13.3 1.07
C 14.1 1.16
D 21.6 1.72
∑ 57.61 4.36
TM tiempo muerto U; coeficiente de elución

26.14. Los siguientes datos corresponden a una columna cromatográfica de

líquidos:
Longitud del relleno 24.7 cm
Tasa de flujo 0.313 mL/min
𝐕𝐌 1.37 mL
𝐕𝐒 0.164 mL

Un cromatograma de una mezcla de las especies A, B, C y D proporciona los siguientes

datos:
Tiempo de retención, Anchura del pico en la
min base (𝐖), min
No retenida 3.1 0.41
A 5.4 1.07
B 13.3 1.16
C 14.1 1.72
D 21.6 1.72
Calcule
a) El número de platos para cada pico

Se emplea la siguiente ecuación: 𝑁 = 16(𝑡𝑅/𝑊)2

Para A, 𝑁 = 16 × (5.4/0.41)2 = 2775.49 ≈ 2775

Para B, 𝑁 = 16 × (13.3/1.07)2 = 2472.04 ≈ 2472
 2
Para C, 𝑁 = 16 × (14.1/1.16) = 2363.97 ≈ 2364
Para D, 𝑁 = 16 × (21.6/1.72)2 = 2523.31 ≈ 2523

b) La media y desviación estándar de N

𝑁 = (2775.49 + 2472.04 + 2363.97 + 2523.31)/4 = 2533.70 ≈ 2500
𝑠 = 200

c) La altura de plato de la columna

Usando la ecuación: 𝐻 = 𝐿/𝑁
24.7𝑐𝑚
𝐻= = 0.0097 𝑐𝑚
2534 𝑝𝑙𝑎𝑡𝑜𝑠

26.15 con los datos del problema 26.14. Calcule para A, B, C y D

A) El factor de retención
𝑡𝑅 − 𝑡𝑀
𝑘𝑥 =
𝑡𝑀

5.4 − 3.1
𝑘𝐴 = = 0.74 𝑚𝑖𝑛
3.1
13.3 − 3.1
𝑘𝐵 = = 3.29 𝑚𝑖𝑛
3.1
14.1 − 3.1
𝑘𝐶 = = 3.54 𝑚𝑖𝑛
3.1
21.6 − 3.1
𝑘𝐷 = 5.96 𝑚𝑖𝑛
3.1

b) La constante de distribución

kVM
𝑲=
VS
0.74(1.37 𝑚𝐿)
𝐾𝐴 = = 6.18
0.164 𝑚𝐿
3.29(1.37)
𝐾𝐵 = = 27.48
0.164 𝑚𝐿
3.54(1.37 𝑚𝐿)
𝐾𝐶 = = 29.57
0.164 𝑚𝐿
5.96(1.37𝑚𝐿)
𝐾𝐷 = = 49.78
0.164 𝑚𝐿

26.16. Con los datos del problema 26.14, calcule para las especies B y C
a) La resolución
2[(𝑡𝑅 )𝐶 −(𝑡𝑅 )𝐵 ]
Se emplea la siguiente ecuación: 𝑅𝑠 =
𝑊𝐵 +𝑊𝐶

2(14.1 − 3.1)
𝑅𝑠 = = 0.72
(1.07 + 1.16)
b) El factor de selectividad α
(𝑡𝑅 )𝐶 − 𝑡𝑀
𝛼𝐶,𝐵 = = 1.08
(𝑡𝑅 )𝐵 − 𝑡𝑀

c) La longitud de columna necesaria para separar las dos especies con una resolución
de 1.5.

(𝑅𝑠 )1 √𝑁1 0.717 √2534

= = =
(𝑅𝑠 )2 √𝑁2 1.5 √𝑁2

(1.5)2
𝑁2 = 2534 × = 11090 𝑝𝑙𝑎𝑡𝑜𝑠
(0.717)2
𝐿 =𝐻×𝑁
Pero 𝐻 = 0.0097 𝑐𝑚/𝑝𝑙𝑎𝑡𝑜
Entonces: 𝐿 = 0.0097 × 11090 = 108 𝑐𝑚
d) El tiempo necesario para separar las dos especies con una resolución de 1.5.
(𝑡𝑅 )1 (𝑅𝑠 )1 2 14.1 (0.717)2 (1.5)2
(𝑡𝑅 )2
= 2 = (𝑡 = (1.5)2
→ (𝑡𝑅 )2 = 14.1 × (0.717)2 = 61.7 ≈ 62𝑚𝑖𝑛
(𝑅𝑠 )2 𝑅 )2

26.17 con los datos del problema 26.14 calcule las especies C y D
a) La resolución
2⌊(t R )D − (t R )⌋c
Rs =
WC + WD
2⌊14.1min − 13.3min⌋
Rs = = 0.55
1.16min + 1.72min

b) la longitud de la columna necesaria para separar las dos especies con una
resolución de 1.5

(R S )21
N1 = N2
(R S )2 2
1.52
N1 = 2534 ∗ = 210 PLATOS
5.212
cm
L = H ∗ N = 0.0097 ∗ 210 = 2 cm
plato
26.18. Los siguientes datos se obtuvieron mediante cromatógrafo gas – líquido con
una columna relativa de 40cm:
Compuesto 𝐭 𝐑 , 𝐦𝐢𝐧 𝐖, 𝐦𝐢𝐧
Aire 1.9 −
Metilciclohexano 10.0 0.76
Metilciclohexeno 10.9 0.82
Tolueno 13.4 1.06
Calcule:

a) El número de platos promedio a partir de los datos

𝑁 = 2.7 × 103
b) La desviación estándar para el promedio en a)
𝑠 = 100
c) La altura de plato promedio para la columna
𝐻 = 0.015
26.19 En relación con el problema 26.18, calcule la resolución para

COMPUESTO tR, min W, min

Aire 1.9 -
metilciclohexano 10 0.76
metilciclohexeno 10.9 0.82
Tolueno 13.4 1.06

a) metilciclohexeno y metilciclohexano
2⌊10.9min − 10min⌋
Rs = = 1.13
0.82min + 0.76min

b) metilciclohexeno y tolueno
2⌊13.4min − 10.9min⌋
Rs = = 2.65
0.82min + 1.06min

c) metilciclohexano y tolueno
2⌊13.4min − 10min⌋
Rs = = 3.73
0.76min + 1.06min
Referencias:

 http://www.ciens.ucv.ve:8080/generador/sites/LIApregrado/archivos/Guia%20para
%20cromatografia.pdf (Recuperado el 15 de nov del 2015)
 http://www.fao.org/docrep/field/003/ab482s/AB482S05.htm (Recuperado el 15 de
nov del 2015)
 http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/Cromatografia.pdf (Recuperado el 15 de
nov del 2015)
 http://es.scribd.com/doc/11642417/Cromatografia-Fundamentos-y-
Aplicaciones#scribd (Recuperado el 15 de nov del 2015)
 http://rua.ua.es/dspace/bitstream/10045/8246/7/T2cromagraf.pdf (Recuperado el
15 de nov del 2015)
 http://www2.ulpgc.es/hege/almacen/download/39/39360/separaciones_por_cromat
ografia_1.pdf (Recuperado el 15 de nov del 2015)