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2. ransferasas:
Transferasas: Catalizan la transferencia de un grupo funcional de una molécula a
otra.
Ejemplo: L-aspartato: 2 -oxoglutarato aminotransferasa o aspartato aminotransferasa
(2.6.1.1)
3. idrolasas: Catalizan la ruptura de enlaces C± N; C± O;
Hidrolasas: O; C±S y C±P por adición de
H2O y se nombran como el sustrato con el sufijo ± asa; asa; por ejemplo la
acetilcolinesterasa, ribonucleasa o la arginasa (ejemplo).
4. iasas: Estas catalizan la ruptura de enlaces C±
Liasas: N, C±S y C±C mediante un
mecanismo distinto al de la hidrólisis, ya sea mediante la eliminación de un grupo
para formar un doble enlace o ciclo (descarboxilasas,
(descarboxilasas, aldolasas, deshidratasas);
deshidratasas ); o
mediante la adición de un grupo a un d oble enlace ( sintasas
( sintasas).
). Ejemplo: Fructosa -1,6-
difosfato: D -gliceraldehído-3-fosfato liasa ó fructosa difosfato aldolasa
aldolasa (4.1.2.13).
5. somerasas: Catalizan la interconversión de cualquier tipo de isómeros ( e pimerasa,
Isomerasas: pimerasa,
racemasa, etc).
6. igasas: Estas catalizan la unión de dos moléculas utilizando la energía de un nucleósido
Ligasas:
trifosfato y a estas enzimas es a las que se las puede denominar sintetasas
denominar sintetasas y no sintasas.
sintasas.
Ejemplo: Glutamato: Amoníaco ligasa o glutamina sintetasa 6. 3.1.2.
COENZIMAS
Muchas enzimas realizan su función catalítica en presencia de otras moléculas generalmente
más pequeñas, no proteicas y denominadas coenzimas (algunos las denominan grupos prostéticos si
1
BLANCO , Antonio. Química biológica. 8va ed. El Ateneo. 2007. pp. 125 y ss. IS BN 950 -0-20422
-0-20422-3
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1
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También
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Federico Rivadeneira
existen enzimas multifuncionales como la ácido graso sintasa que es sintetizada a partir de la fusión de diferentes
enzimas resultando en una enzima multifuncional con diferentes dominios catalíticos.
DETERMINACIÓN DE LA ACTI VIDAD ENZIM ÁTICA
ÁTICA
La actividad de una enzima puede medirse como la cantidad de sustrato consumido o de producto formado en un
tiempo dado. Si medimos velocidad inicial es conveniente medirla hasta que se haya consumido al menos el 20% del
sustrato (o mejor el 5%). Y para definir esta actividad utilizamos las unidades internacionales (UI) donde se define
como la cantidad de micromoles de sustrato consumido por minuto.
Luego, la actividad específica de una enzima es la cantidad de micromoles de sustrato consumido por minuto por
miligramo de enzima presente. Esto denota una relación entre la acti vidad enzimática y la cantidad de enzima presente en
una mezcla variable de proteínas.
Luego, si tenemos una solución pura de determinada enzima podemos calcular su número de recambio,
recambio, actividad
molar o constante catalítica como la cantidad de micromoles de sustrato consumido por minuto y por la cantidad de
moles presentes en la solución trabajando con saturación de sustrato.
Concentración de enzima
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Federico Rivadeneira
Temperatura
Como es de suponer, las velocidades de reacciones enzimáticas aumentan con un
incremento de la temperatura dentro de ciertos rangos de esta última. Para eso definimos un valor
denominado Q10 o coeficiente de temperatura que es el valor por el cual cambia la velocidad de
reacción al aumentar en 10 ° C la temperatura. En el gráfico podemos ver que la velocidad o
actividad enzimática llega a un máximo que es denominado como la temperatura óptima de la
enzima (37 ° C para la mayoría de los homeotermos). Al aumentar la temperatura por encima de 60 ° C
aproximadamente las enzimas son completamente inactivas y esto se debe a la desnaturalización de las
proteínas.
pH
Las enzimas muestran un rango de pH óptimo de a ctividad que es generalmente entre 6 y 8. Sin
embargo enzimas como la pepsina presentan un pH óptimo de 1,5; la fosfatasa ácida uno de 5 y la
fosfatasa alcalina de 9,5. Esto se debe a que las cargas tanto de enzima como de sustrato varían en
función del pH (estado de ionización de las moléculas) provocando una mejor o peor interacción entre los mismos.
Además, a valores de pH más extremos podemos también desnaturalizar las enzimas
INHIBIDORES ENZIMÁTICOS
Inhibidores irreversibles
Deterioran definitivamente la capacidad catalítica de una enzima como en el caso de los organofosforados que
inhiben la acción de la acetilcolinesterasa. P or ejemplo los denominados inhibidores suicidas (alopurinol que inhibe la
xantina oxidasa) se unen específicamente mediante enlaces covalentes a las enzimas ocupando el sitio activo.
Inhibidores reversibles
1. Inhibidores competitivos: Estos aumentan el valor de K m de la enzima sin variar la
velocidad máxima de la misma. Lo hacen por diferentes mecanismos:
a. En estos casos el inhibidor se une al sitio activo de la enzima por una similitud
estructural que presenta con el sustrato. Por ejemplo la succinato deshidrogenasa con
el malonato. La misma presenta grupos cargados positivamente en su sitio activo que
interaccionan con los carboxilos cargados negativamente del succinato y también del
malonato que ocupa su lugar.
b. Algunos inhibidores no presentan esta similitud estructural con el sustrato pero
igualmente se unen al sitio activo como es el caso del salicilato en la alcohol
deshidrogenasa y la 3-fosfoglicerato quinasa.
quinasa .
c. En otros casos el inhibidor se une a un sitio diferente
al sitio activo inhibiendo la unión del sustrato a la
enzima mediante un cambio conformacional de la
misma.
Estos tipos de inhibición competitiva se pueden
compensar aumentando la concentración de sustrato
(competidor).
El mecanismo de acción de un inhibidor puede estudiarse midiendo la cinética enzimática a concentraciones
variables de inhibidor y en ausencia del mismo.
2. Inhibidores no competitivos: Estos aumentan V máx y dejan constante K m y no se previenen
con un aumento de S. Los mismos se unen a un lugar diferente al sitio activo y no inhiben
la unión del sustrato a la enzima lo que explica que se disminuya la actividad enzimática
sin modificar K m.
A este grupo pertenecen aquellos que se unen reversiblemente a los grupos ±S H de restos
de cisteína como los metales Cu 2+ , Hg2+ y
Ag2+ . Otro ejemplo es el del C N ± que
2+
posee mayor afinidad por el Fe de
citocromos, catalasas y peroxidasas o la
EDTA que se une a cationes divalentes de
enzimas impidiendo su funcionamiento.
En el caso de que el inhibidor modifique
K m y Vmáx se habla de una inhibición
mixta.
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Federico Rivadeneira
producto de la vía. Esta inhibición se denomina inhibición por retroalimentación o feedback . Como
también existen moléculas que al unirse estimulan la actividad.
Estos compuestos son denominados efectores alostéricos o moduladores enzimáticos y los
mismos se unen a un sitio distinto al sitio catalítico denominado sitio alostérico;
alostérico; el mismo puede ser
un modulador o efector positivo o negativo y también se puede decir que son homotrópicos (en caso
de que sean iguales al sustrato) o heterotrópicos en caso de que sean diferentes. Siendo las enzimas
capaces de ejecutar interacciones hetero u homotrópicas.
La curva de la actividad enzimática de una enzima alostérica es sigmoidea a diferencia de la
curva cinética clásica de tipo parabólico. Curva semejante a la que presenta la Hb respecto a la
saturación con O 2.
Modificación covalente (reversible)
La actividad de una enzima pu ede ser también regulada por la adicción o sustracción de
grupos químicos como el fosfato (a residuos de Ser, Thr o Tyr) en el caso de la glucógeno
fosforilasa que presenta una forma defosforilada (glucógeno fosforilasa b) con menor
actividad enzimática y una forma fosforilada (³glucógeno fosforilasa a´ con grupos fosfato
unidos a los ± OH
OH de los residuos de serina de la enzima).
Mientras que la remoción de grupos fosfato es realizada por las fosfatasas.
fosfatasas.
Enzimas constitutivas e inducibles
Las enzimas pueden ser constitutivas si su tasa de eliminación y producción de la
misma es similar por lo que mantienen niveles más o menos constantes de enzima a nivel
celular. En cambio, ciertas enzimas como las implicadas en el metabolismo de carbohidratos
son inducibles y se sintetizan de novo haciendo a este proceso mucho más lento que todos los
demás.
Procesos enzimáticos en cascada (regulación por proteólisis)
Estos procesos consisten en la activación de zimógenos y el cual se da en una escala logarítmica como ocurre en
la cascada de coagulación o en muchos otras vías enzimáticas. Como son el caso de la quimiotripsina, tripsina y pepsina
que son sintetizados y li berados como proenzimas.
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Federico Rivadeneira
ISOZIMAS
Las isoenzimas son enzimas con la misma actividad catalítica específica pero con
diferente secuencia aminoacídica. La presencia de estas se revela mediante una
electroforesis en gel seguida de tinción específica y se las numera de acuerdo a su
migración al ánodo siendo la que más migra la 1 y la que menos migra la de número más
alto.
Por ejemplo la lactato deshidrogenasa es una enzima que presenta cinco
isoenzimas y se encuentra distribuida ampliamente en diversos tejidos donde una isoenzima predomina sobre otra (en los
testículos aparece una sexta clase predominante). En el caso de la LDH tenemos que las mismas son tetrámeros de dos
cadenas polipeptídicas diferentes (A o M) y (B o H).
Esta enzima, cataliza la reacción de lactato a piruvato y viceversa utilizando NADH como cofactor (la LDH es
NADH dependiente o en algunos casos también Cit ±C dependiente que es la D -Lactato deshidrogenasa).
Además ciertas isozimas presentan una distribución subcelular determinada por lo que sirven también como
marcadores celulares o subcelulares.
L A RELACIÓN ENTRE LA CONCENTRACIÓN DE SUSTRATO Y LA VELOCIDAD DE REACCIÓN PUEDE SER
EXP
EXPRESADA CUANTITATIVAMENTE
La derivación moderna de la ecuación de Michaelis -Menten incluye la conjetura de Briggs y Haldane del estado
estacionario.
La derivación comienza con los dos pasos iniciales de formación y ruptura del complejo E S.
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Federico Rivadeneira
Siendo la segunda ecuación, la de la ruptura del complejo la que usualmente es más lenta y por lo tanto es el paso
limitante de la reacción.
Al comenzar la reacción podemos suponer que la cantidad de P es insignificante, entonces despreciamos k ± ± 2 y la
reacción queda como:
2. La hipótesis del estado estacionario nos dice que la velocidad de ruptura y formación de E S son las mismas
por lo que:
4. Siendo la expresión por lo que la expresión anterior queda como:
5. Luego, podemos expresar V 0 en términos de [E S]
LOS P AR ÁMETROS
ÁMETROS CINÉTICOS SON USADOS P ARA COMP
COMP ARAR ACTIVIDADES
ACTIVIDADES ENZIM ÁTICAS
ÁTICAS
Muchas reacciones enzimáticas (excepto las reguladas) siguen patrones
cinéticos de Michaelis -Menten pero esto no significa que las mismas reacciones sean
en dos pasos n ecesariamente.
Para las reacciones en dos pasos se cumple que .
Cuando k 2 es el paso limitante tenemos que por lo que podemos
decir que donde está definida como la constante de disociación
Y tenemos en cuenta que el último paso es el limitante entonces la velocidad máxima estará dada por la última
constante de velocidad, o sea, por lo que para no confundirnos definimos una nueva cantidad denominada
como la constante de velocidad de reacción correspondiente al paso limitante de la misma, en el último ejemplo,
; además este es equivalente al concepto antes definido com o número de recambio.
COM
OMP
P ARACIÓN ENTRE MECANISMOS CATALÍTICOS Y EFICIENCIA CATALÍT ICA
Los parámetros y poco nos dicen acerca de la eficiencia y el mecanismo de una reacción enzimática. Por
ejemplo, dos enzimas diferentes pueden tener iguales pero sin embargo no pueden ser igual de eficientes porque las
reacciones que catalizan no poseen el mismo .
Entonces, la mejor forma de comparar las eficiencias catalíticas de diferentes enzimas o el número de recambio de
una enzima frente a diferentes sustratos surge de la comparación entre los cocientes para ambas reacciones,
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Federico Rivadeneira
Como podemos ver la velocidad depende tanto de ambas concentraciones por lo que la reacción es de segundo
orden (por lo que las unidades son M ± 1 s ± 1) además es bueno notar que e xiste un límite superior de velocidad dado por las
velocidades de difusión máximas que pueden alcanzar en solución acuosa E y S (valores que se acercan a 10 8 y 10 9 M ± 1
± 1
s ).