Mekasnisme Bakteri Probiotik sebagai Antioksidan

Selama beberapa dekade terakhir, penelitian telah menunjukkan bahwa strain

bakteri probiotik yang berbeda memiliki kapasitas antioksidan di jalur yang
berbeda. Namun, beberapa ulasan mengenai dasar untuk mekanisme antioksidan
probiotik telah ditemukan. Berikut gambaran umum tentang mekanisme resisten
oksigen dari berbagai strain probiotik (Gambar) (Wang Yang et al, 2017).

Gambar Modulasi dari antioksidan oleh probiotik. 1. Probiotik mengkelasi ion

logam. 2. Probiotik memiliki anti oksidannya sendiri. 3. Probiotik menghasilkan
metabolit antioksidan. 4. Probiotik meregulasi aktivitas antioksidan pejamunya. 5.
Probiotik meningkatkan level antioksidan dari pejamu. 6. Probiotik mengatur jalur
sinyal. 7. Probiotik menurunkan aktivitas enzim yang menghasilkan ROS 8.
Probiotik meregulasi mikroba intestinal. (Wang Yang et al, 2017)

4.1. Kemampuan Kelasi Ion Logam

Kelator, seperti ethylene diamine tetraacetic acid (EDTA),
bathophenanthrolinedisulfonic acid (BPS), penicillamine, dan desferrioxamine, telah
dilaporkan untuk menangkap ion logam dan mencegah ion logam dari mengkatalisis
oksidasi. Ion logam (besi dan ion tembaga) memiliki kemampuan kelasi dari 19
strain LAB diukur oleh Lin dan Yen pada tahun 1999 (Lin dan Yen, 1999). Hasil
penelitian menunjukkan bahwa Streptococcus thermophilus 821 menunjukkan
kemampuan kelasi terbaik untuk kedua Fe2 + dan Cu2 +. Strain lainnya juga
menunjukkan kemampuan kelasi baik untuk Fe2 + atau Cu2 +. Selain itu, strain LAB
lain, Lactobacillus casei KCTC 3260, ditemukan memiliki kemampuan antioksidan
yang tinggi dengan kelasi Fe2 + atau Cu2 +, meskipun tidak ada aktivitas SOD
terdeteksi dari yang diamati (Lee et al, 2005). Demikian pula, ekstrak sel bebas
intraseluler dari Lactobacillus helveticus CD6 juga menunjukkan lebih tinggi kelasi
ion Fe2 + (Ahire et al, 2013). Meskipun faktor yang bertanggung jawab untuk kelasi
ion logam tidak dipahami dengan baik pada bakteri probiotik, diungkapkan bahwa
ion logam transisi dapat menghambat reaksi perpindahan ester fosfat enzim-katalis
dan menghasilkan radikal peroxyl dan alkoxyl oleh dekomposisi hydroperoxides
(Haliwel et al, 1995). Oleh karena itu, menurut pendapat Lin dan Yen, kapasitas
kelasi dari strain probiotik mungkin disebabkan oleh kelator fisiologis yang ada
dalam ekstrak probiotik sel bebas intraseluler (Lin dan Yen 1999)

4.2. Sistem Enzim Antioksidan

Seperti hewan, probiotik juga memiliki sistem enzimatik antioksidan sendiri. Salah
satu enzim yang paling dikenal adalah SOD. Superoksida adalah salah satu ROS yang
paling melimpah yang dihasilkan oleh mitokondria, sementara SOD mengkatalisis
pemecahan superoksida menjadi hidrogen peroksida dan air dan oleh karena itu
merupakan pengatur sentral tingkat ROS (Landis et al, 2005). Bakteri dapat
menggunakan Fe-SOD dan Mn-SOD, tetapi mamalia memanfaatkan kedua bentuk
sitoplasma dan ekstraseluler Cu, Zn-SOD, dan mitikondria Mn-SOD, yang terkait erat
dengan bakteri Mn-SOD dalam istilah evolusi (Davies et al, 2000). Dalam studi
Kullisaar dan rekan, Lactobacillus fermentum E-3 dan E-18 mampu
mengekspresikan Mn-SOD untuk menahan stres oksidatif (Kullisar et al, 2002).
Meskipun aktivitas antioksidan SOD terkenal (Koc et al, 2003, Segui et al, 2004),
aplikasi terapeutik SOD terbatas, terutama karena paruh waktu sirkulasinya yang
pendek, yang membatasi bioavailabilitasnya. Untuk mengatasi masalah ini, upaya
telah dilakukan untuk menemukan wadah yang cocok untuk SOD. Bakteri probiotik
mampu menjadikan SOD pendekatan baru untuk penyakit usus yang dicirikan oleh
produksi ROS. Sebuah penelitian yang mengeksplorasi dampak dari rekayasa
Lactobacillus casei BL23 strain memproduksi SOD pada tikus dengan penyakit
Crohn menunjukkan bahwa tikus yang menerima strain rekayasa memiliki
pemulihan lebih cepat dari penurunan berat badan awal, peningkatan aktivitas
enzimatik dalam usus, dan tingkat peradangan usus yang lebih rendah dari tikus
kontrol (LeBlanc et al, 2011).
Katalase (CAT) memiliki peran dalam pertahanan antioksidan seluler dengan
menguraikan hidrogen peroksida, sehingga mencegah pembentukan radikal
hidroksil oleh reaksi Fenton. LAB umumnya CAT-negatif (Spyropolus et al, 2011);
Namun, de LeBlanc dan rekannya membuktikan bahwa Lactococcus slactis yang
menghasilkan CAT dapat mencegah 1,2-dimethylhydrazine-menginduksi kanker
usus pada tikus. Selain itu, direkayasa Lactobacillus casei BL23 strain memproduksi
CAT mampu mencegah atau mengurangi keparahan patologi usus yang disebabkan
oleh ROS (De LeBlanc et al, 2008).

Probiotik juga dapat merangsang sistem antioksidan host dan meningkatkan

aktivitas antioksidan secara efisien. Studi pada babi menunjukkan bahwa
suplementasi Lactobacillus fermentum dapat meningkatkan SOD serum dan GPx
dan meningkatkan CAT hati, SOD otot, dan Cu dan Zn-SOD dibandingkan dengan
kelompok kontrol (Wang et al, 2009). Konsisten dengan hal ini, penelitian pada
manusia menunjukkan peningkatan aktivitas eritrosit SOD dan GPX serta status
antioksidan total pada pasien diabetes tipe 2 yang menerima yoghurt yang
mengandung Lactobacillus acidophilus La5 dan Bifidobacterium lactis Bb12
(Ejtahed et al, 2012).

4.3. Metabolit Antioksidan

Probiotik dapat menghasilkan berbagai metabolit dengan aktivitas antioksidan,
seperti glutathione (GSH), butirat, dan folat. Folat adalah vitamin yang menerima
satu karbon dari molekul donor dan terlibat dalam banyak jalur metabolik. Efisiensi
replikasi DNA, perbaikan, dan metilasi dipengaruhi oleh ketersediaan folat (Pompei
et al, 2007). Karena aplikasi berpotensi antioksidan, kemampuan untuk
memproduksi folat telah secara intensif diselidiki dalam beberapa strain probiotik
dari berbagai asal-usul (Rossi et al, 2011). Bukti menunjukkan bahwa Bifidobacteria
yang menghasilkan folat meningkatkan status folat pada tikus dan manusia (Strozzi
dan Mogna, 2008 Zilmer et al, 2005).

Tingkat metabolit antioksidan dari host juga dapat diatur oleh perawatan probiotik.
Kekurangan folat dan vitamin B12 meningkatkan stres oksidatif pada diabetes tipe
2 dewasa (Endo et al, 2013). Studi uji coba suplemen nutrisi secara acak dilakukan
pada anak-anak yang hidup bebas dari kedua jenis kelamin. Konsumsi setiap hari
dari yoghurt Lactobacillus acidophilus La1 secara signifikan meningkatkan tingkat
rata-rata folat plasma dan vitamin B12 pada anak-anak yang diteliti dibandingkan
dengan data dasar masing-masing (Mohammad et al, 2006), menunjukkan
peningkatan status oksidatif. Selain itu, tingkat GSH dan biosintesis GSH juga
ditingkatkan pada tikus yang diobati dengan probiotik untuk mengurangi stres
oksidatif pada pankreatitis akut eksperimental (Fabian et al, 2008).

4.4. Jalur Pensinyalan Antioksidan dimediasi oleh Bakteri Probiotik

4.4.1. Nrf2-Keap1-ADALAH
Sistem yang dipelajari dengan baik untuk mentransduksi rangsangan eksogen ke
dalam respons transkripsi eukariotik adalah jalur Nrf2-Keap1-ARE. Aktivasi Nrf2
meningkatkan serangkaian gen termasuk yang terlibat dalam detoksifikasi
xenobiotik dan ROS untuk melawan stressor oksidator dan elektrofilik lingkungan
(Kobayashi et al, 2009). Pada tingkat rendah ROS, Nrf2 terikat pada inhibitor
sitoplasmiknya Keap1, yang menekan aktivitas Nrf2 dengan menargetkannya untuk
polutan konstitutif melalui kompleks ligase E3 berbasis Cullin3 dan degradasi
proteasomal konsekuen (Zhang et al, 2004). Keap1 dianggap sebagai saklar molekul
Nrf2. Ketika sel diserang oleh radikal bebas atau nukleofil, residu sistein yang
redoks-sensitif dari Keap1 bereaksi dan mengubah konformasi fungsional Keap1,
sehingga menghapuskan inaktivasi Nrf2 (Motohashi dan Yamamoto, 2004). Setelah
itu, Nrf2 mentranslokasi ke nukleus dan berikatan dengan urutan elemen respon
antioksidan (ARE), mempromosikan transkripsi gen yang digerakkan oleh ARE
seperti gen yang mengkode enzim antioksidan dan protein detoksifikasi (Zhang,
2006). Dalam beberapa tahun terakhir, dari laporan in vivo dan in vitro
menunjukkan bahwa bakteri probiotik dapat melindungi terhadap stres oksidatif
melalui pengaturan jalur Nrf2-Keap1-ARE. Studi diet kolesterol tinggi (model
hiperlipidemia, HM) telah digunakan untuk membangun model hiperlipidemia tikus
jantan Kunming. Tikus hyperlipidemic dan normal diobati dengan Lactobacillus
plantarum CAI6, Lactobacillus plantarum SC4, dan garam fisiologis melalui gavage
oral. Seperti yang diharapkan, kadar Nrf2 di hati dan ginjal jauh lebih tinggi pada
tikus yang menerima HM. Dibandingkan dengan kelompok HM, liver Nrf2 secara
signifikan meningkat pada tikus yang diberi diet HM / CAI6 dan HM / SC4 (Wang et
al, 2013). Demikian pula, efek antioksidan dan hipolipidemik Lactobacillus
plantarum FC225 diselidiki pada tikus yang diberi diet tinggi lemak. Pengumpulan
radikal anion superoksida ditingkatkan oleh Lactobacillus plantarum FC225.
Analisis cytometric dari ekspresi Nrf2 dan translokasi pada hepatosit tikus yang
diberi perlakuan Lactobacillus plantarum FC255 sangat dipromosikan, dan
Lactobacillus plantarum FC225 selanjutnya mampu mencegah penghambatan diet
tinggi yang diinduksi enzim antioksidan (Gao et al, 2013). Selain itu, bukti terbaru
juga menunjukkan bahwa probiotik Bacillus amyloliquefaciens SC06 memperbaiki
tekanan oksidasi IPEC-1 yang diinduksi H2O2 dengan menurunkan tingkat ROS dan
mengatur ekspresi Nrf2 (Wang et al, 2016)
4.4.2. NF ĶB
Faktor transkripsi eukariotik pertama yang ditunjukkan untuk merespon langsung
terhadap stres oksidatif adalah NFĶB (Shreck et al, 1991). Dilaporkan bahwa, selama
peradangan, ROS dapat memediasi aktivasi faktor transkripsi redoks-sensitif NFĶB,
dan ekspresi berikutnya dari sitokin inflamasi (Srivastava et al, 2011). Polisakarida
ekstraseluler dari Bacillus sp. strain LBP32 mencegah peradangan yang diinduksi
oleh LPS pada makrofag RAW 264.7 dengan menghambat produksi NFĶB dan ROS
(Diao et al, 2014). Selain itu, campuran probiotik VSL#3 dapat menghambat NFĶB
dan menginduksi protein heat shock pada sel epitel kolon (Petrof et al, 2004)

4.4.3. PKC
Protein kinase C (PKC) mewakili familial yang bergantung pada fosfolipid kinase
yang terlibat dalam berbagai jalur yang mengatur pertumbuhan sel, kematian, dan
respon stres (Blumberg, 1991 Stabel dan Parker, 1991). Bukti menunjukkan bahwa
PKC adalah salah satu kelompok molekul pensinyalan sel yang merupakan target
sensitif untuk modifikasi redoks (Gopalakrishna, 1995). Redaman distribusi protein
H2O2 yang diinduksi oleh protein yang larut yang dihasilkan oleh Lactobacillus
rhamnosus GG dibatalkan oleh Ro-32-0432, sebuah inhibitor PKC (Seth, 2008)

4.5. Pengaturan Enzim yang Menghasilkan ROS

Stres oksidatif berasal baik dari peningkatan produksi ROS atau penurunan tingkat
protein ROS-scavenging. Dengan demikian, banyak penelitian telah menyelidiki efek
probiotik pada produksi ROS. ROS dihasilkan oleh beberapa reaksi enzimatik dan
proses kimia (Rahman et al, 2006). Kompleks NADPH oksidase (NOX) dianggap
sebagai sumber utama pembentukan ROS (Lin et al, 2012). Sekarang diketahui
bahwa ada tujuh homolog NOX (NOX1-5, dual oksidase 1 (DUOX1), dan DUOX2)
yang berfungsi secara sengaja menghasilkan ROS untuk berbagai pertahanan host
dan fungsi sinyal (Aguirre, 2010). Subunit katalitik kompleks ini adalah NOX2. NOX2
tidak menghasilkan superoksida sendiri; melainkan merangsang neutrofil
menyebabkan perekrutan faktor sitosol yang termasuk p40phox, p47phox,
p67phox, dan GTPase RAC1 kecil. Faktor-faktor sitosol ini bergabung dengan NOX2
dan p22phox yang terikat-membran untuk menghasilkan respon fagosit klasik
terhadap rangsangan yang dikenal sebagai respiratory burst (Holmstorm, 2014).
Stres oksidatif dari IPEC-1 yang diinduksi oleh H2O2 juga ditunjukkan sebagai
penurunan aktivitas NOX dan ekspresi p47phox oleh terapi Bacillus
amyloliquefaciens SC06 (Wang et al, 2016)
Cyclo-oxygenase (COX) adalah enzim pembatas laju di biosintesis prostaglandin dan
proses enzimatik dua langkah yang menghasilkan ROS (Hussain, 2003). COX-2
diregulasi pada lesi aterosklerotik dan mengkatalisis produksi sebagian besar
prostanoid vaskular pada daerah aterosklerotik manusia (Belton et al, 2000). COX-2
yang diregulasi ditemukan pada mongolian dengan helicobacter pylori yang
mendapat pengobatan Lacidofil probiotik komersial (Brozowski et al, 2006).
Pretreatment Lactobacillus acidophilus menurunkan ekspresi COX-2 pada makrofag
catla thymus dibandingkan dengan Aeromonas hydrophila dan makrofag co-
stimulated (Patel et al, 2006).

Enzim cytochrome P450 (CYP) penting dalam metabolisme oksidatif agen

xenobiotik (Bondy et al, 1994). Penggabungan yang buruk dari siklus katalitik P450
menyebabkan produksi ROS yang berkelanjutan, yang mempengaruhi jalur
pensinyalan dan fungsi seluler lainnya (Zangar et al, 2004). Beberapa penelitian
telah mengeksplorasi peran probiotik dalam mengatur CYP. Dengan aplikasi
Lactobacillus casei, ekspresi enzim CYP1A1 ditemukan menurun di bagian
proksimal jejunum dan kolon tikus jantan. Sementara itu, tingkat mRNA CYP1A1
juga menurun di bagian distal jejunum, ileum, dan sekum (Matuskova et al, 2010).
Dalam studi oleh Sharan, efek susu, Dhi, dan empat Dahi probiotik, yaitu Acidophilus
Dahi, Plantarum Dahi, Acidopholus-plantarum Dahi, dan Acidophilus-bifidus Dahi,
pada CYP dan aktivitas antioksidan tikus diselidiki (. Pemberian Acidophilus Dahi
selama delapan minggu dapat meningkatkan aktivitas quinone reductase dan
glutathione S-transferase di hati dan glutathione S-transferase di usus besar.
Bersamaan dengan ini, aktivitas CYP1A1, CYP1A2 dan CYP1B1 secara signifikan
menurun pada hati tikus yang diberi Acidopholus-plantarum Dahi dan Acidopholus-
plantarum Dahi atau Acidopholus-plantarum Dahi dan Acidophilus-bifidus [108].