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UNIVERSIDAD DE SANTIAGO DE CHILE

FACULTAD DE QUÍMICA Y BIOLOGÍA


DEPARTAMENTO DE BIOLOGÍA
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA

Informe de Laboratorio 2:
Soluciones buffers y capacidad amortiguadora de un aminoácido.

Asignatura : Bioquímica

Integrantes : Victor Cortes

Victor Urbano

Profesora : Alejandra Saavedra

Ayudante : Pamela Mieres

Sección : L2

Fecha de experiencia : 12 de Noviembre de 2018

Fecha de entrega : 19 de Noviembre de 2018


1. Introducción.

En la biología de cada ser vivo es fundamental la regulación de pH para mantener la


homeostasis, asegurando el correcto funcionamiento de los procesos metabólicos. El
cambio enorme de pH sería intolerable para la mayoría de los sistemas biológicos, dado
que incluso cambios de pH pequeños pueden afectar en gran medida la estructura y las
funciones de las moléculas biológicas (2).

Para que lo anterior sea posible existen unas disoluciones que ofrecen una gran
resistencia a la modificación de pH y por ello se denominan disoluciones buffer o
amortiguadoras. Esta capacidad reside en el hecho de que el equilibrio químico de un
electrolito débil viene regulado, en definitiva, por la constante de equilibrio. Si la
concentración de uno de los iones intervine en dicha constante se modifica, el equilibrio
se desplaza en el sentido de contrarrestar dicha acción.

La actividad catalítica de las enzimas de las células vivas, la capacidad portadora de


oxigeno por la sangre, en general, las funciones de los fluidos de los organismos animales
y vegetales dependen de pH (1).

Para obtener un buffer se requieren incorporar dos especies a una misma solución, una
capaz de neutralizar la adición de protones y un ácido capaz de neutralizar la adición de
hidroxilos. Según los requerimientos, el pH del buffer puede ser determinado de forma
teórica a partir de la ecuación de Henderson- Hasselbalch.(3)

[base conjugada (sal)]


pH = pK a + log ( )
[ácido débil ]
[ácido conjugada (sal)]
pOH = pK b + log ( )
[Base débil]
2. Procedimiento experimental.

Se procedió a preparar un set de 6 tubos de ensayo, para ello se etiquetó cada uno y con
la ayuda de una micropipeta se recolectaron los siguientes volúmenes de materiales:

Solución/Tubo 1 2 3 4 5 6

H2O (mL) 11 10 10 1 --- ---

Buffer fosfato pH 7 (mL) --- --- --- 10 10 10

HCl 0,1 M (mL) --- 1 --- --- 1 ---

NaOH 0,1 M (mL) --- --- 1 --- --- 1

Una vez teniendo todos los contenidos en los tubos, se adicionó 3 gotas del indicador de
pH azul de Bromotimol, luego se tapó con papel film y se precedió a homogenizar.
Finalmente se registraron los colores obtenidos en la tabla 3.1

Para proceder a la siguiente actividad, se transfirió 25mL de glicina (0.05 M; pH=2) a un


vaso precipitado de 50mL. A esta solución se agregaron 3 gotas de bromotimol y se midió
el pH con un pH-metro.

A continuación, se llenó una bureta de 25mL con una solución de NaOH (0.1 M). Acto
seguido se colocó el baso precipitado bajo la bureta, procurando que esta esté cerrada y
se incorporaron alícuotas de 1 mL de NaOH a la solución de glicina. Luego se midió el pH,
se registró en la tabla 3.2.

Se continuó realizando la adición de NaOH hasta completar la tabla anteriormente


descrita
3. RESULTADOS.

3.1 Medición con papel pH y titulación de pH con azul de Bromotimol.


Tabla 3.1 Capacidad amortiguadora del buffer de fosfato.
Tubo
1 2 3 4 5 6
color Verde Amarillo Azul Turquesa Verde azulado Azul cobalto
pH 7 2 10 6 6 8

Figura 1: Colores indicadores de pH.

3.2 Titulación de glicina buffer con azul de Bromotimol.


Tabla 3.2: pH de solución a medida que se agrega volumen de NaOH.
NaOH [ml] pH
0 2
1 3
2 3,5
3 3,7
4 3,8
6 4
8 4
10 4
12 4,5
14 5
Tabla 3.2: pH de solución a medida que se agrega volumen de NaOH(Cont.).
NaOH [ml] pH
16 6,5
18 7
19 7,5
21 8,5
22 9
24 9,5
26 10,5

12

10

pH 6

0
0 0.0005 0.001 0.0015 0.002 0.0025 0.003
equivalencia [OH-]

Figura 2: Curva de titulación de Glicina (0,05 M) con distintos volúmenes de


NaOH(0,1M) en concentración molar de equivalencia de OH-.
4. DISCUSIONES

4.1 Comparación capacidad amortiguadora en distinta soluciones.


Para el tubo 1 y 6 presenta pH=7 como era de esperarse, confirmando la neutralidad
del agua y del buffer fosfato. En los resultados del tubo 2 y 3 podemos observar la
poca capacidad de amortiguación del agua frente al volumen agregado de HCl (0,1 M)
y de NaOH (0,1M), ya que en ambas soluciones el pH fue extremo 2 y 10
respectivamente. Estos dos casos podemos darle una explicación dado el bajo grado
de ionización del agua(H2O), cuando añadimos en ésta una pequeña cantidad de
ácido o de base, el pH varía en mucha cantidad, llegando a niveles de pH en los
cuales las biomolecular no podrían cumplir sus funciones. Por esta razón los líquidos
fisiológicos contienen tampones que, a diferencia del agua, mantienen el pH
constante. En comparación la solución ácida diluida tubo 2 y la solución acida del tubo
5 la cual fue agregado el ácido al buffer el pH no sufrió un cambio tan alto como en en
el tubo 2 con agua lo que muestra que este presenta una mayor capacidad de
amortiguación. De la misma manera para las soluciones básicas, aquella diluida en
agua tubo 3 presenta un pH más básico que aquel en el buffer tubo 6. Todas estas
medidas fueron analizadas frente a la Tabla 3.1 Capacidad amortiguadora del buffer
de fosfato.

4.2 Glicina - aminoácido como solución amortiguadora o buffer.


A pH ácido la Glicina se encuentra como un ácido diprótico, ya que el grupo amino
como el grupo carboxilo se encuentran protonados. A partir de la figura 2 podemos
encontrar dos posibles puntos de inflexión, donde se lee el pka del aminoácido, los
leídos por esta fueron pka1=3 ; pka2= 9. Por la estructura de este aminoácido
podemos concluir que su punto isoléctrico se encuentra entre ambos pKa, entonces al
calcular la semi-suma de estos pka, podemos decir que el pH será igual al pka en el
punto:
3+9
𝑝𝐻 = =6
2
Este punto sería el óptimo de amortiguación en la solución, sin embargo sin
conocimientos previos de la estructura no se logra encontrar, ya que la gráfica no lo
muestra.
Al comparar con datos bibliográficos, se puede decir que se realizó una titulación de
buena manera ya que los pKa1 y pKa2 son 2.36 y 9.60 respectivamente, en donde el
punto isoeléctrico se encuentra en 5.97, valores que siguen la tendencia de los
obtenidos de la realización de la experiencia de titulación para la glicina. (4)
5. CONCLUSIONES

5.1 Se concluyó que la solución buffer fosfato presenta una mayor capacidad de
amortiguación respecto a la capacidad del agua.

5.2 Se observó que el aminoácido diluido presenta dos puntos de inflexión, donde se
logró determinar el punto isoeléctrico pI=6.
Referencias

(1) Garrido, A., Teijón, J., Blanco, D., Villaverde, C., Mendoza, C. and Ramírez, J.
(2006). Fundamentos de bioquímica estructural. Madrid: Tébar, pp.40-41.
(2) Gismondi, M., Mas, E., Mikkelsen, K., Pertierra, A., Preciado, M., Rondinone, S.
and Pirolo, D. (2007). Fundamentos de Bioquímica. 2nd ed. Madrid: editorial
medica panamericana, p.35.
(3) Saaavedra Alejandra, (2018). Guía de laboratorio de bioquímica Actividad N°2:
“Soluciones buffers y capacidad amortiguadora de un aminoácido.”
(4) Veronica Gonzales Núñez. (2012) 4. Curvas de titulación de aminoácidos.
Universidad de Salamanca.

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