Cátedra de Citogenética. Seminario N° 1.

Orden y desorden en el núcleo.

Wallace F. Marshall

Estudios han demostrado que:

1) Los cromosomas no están distribuidos aleatoriamente por todo el núcleo, sino que están
bastante bien organizados.
Al comparar muchos núcleos, se hicieron evidentes varias características de la organización
nuclear. Primero, el núcleo como un todo estaba polarizado, con centrómeros en un
extremo del núcleo y telómeros en el otro, lo que refleja la disposición de los cromosomas
en la última anafase. En segundo lugar, los cromosomas no estaban entrelazados entre sí,
sino que cada cromosoma ocupaba un dominio separado dentro del núcleo, reflejando
nuevamente de cerca la disposición de los cromosomas como entidades separadas durante
la mitosis que precede a la polytenization. En tercer lugar, los cromosomas
reproduciblemente contactaban con la envoltura nuclear en loci particulares.
Estos estudios mostraron que los cromosomas se organizaron según dos principios
organizativos fundamentales: la retención de la geometría cromosómica mitótica, reflejada
por la polarización del núcleo a lo largo de un centrómero al eje del telómero y la separación
de los cromosomas en territorios no superpuestos; y contactos específicos con la envoltura
nuclear.
Como resultado de las interacciones con la envoltura nuclear en algunos sitios discretos,
todo el cromosoma se organiza en una serie de bucles anclados en la envoltura. Como
resultado de este bucle, incluso los loci que no están directamente asociados con la
envoltura están posicionados de manera no aleatoria con respecto a la superficie. La
combinación de la disposición de cromosomas similar a una anafase polarizada con el
posicionamiento radial que resulta de las interacciones de la envoltura nuclear limita la
posición de un gen dado en dos dimensiones, una axial y una radial, de modo que se
encuentra dentro de una región toroidal del núcleo.
Boveri mostró que la disposición y la orientación de los cromosomas en los núcleos de
escisión temprana de Ascaris se mantuvieron durante la interfase, de modo que cuando los
cromosomas condensaron durante la profase estaban en la misma disposición como se ve
en la telofase anterior. Como resultado, los cromosomas en las células hermanas
terminaron dispuestos en configuraciones de imagen especular. Los estudios de Boveri
sugirieron que los cromosomas no se mueven largas distancias en el núcleo durante la
interfase (difusión restringida).
2) Movimiento de la cromatina
La cromatina experimenta un movimiento Browniano extenso impulsado térmicamente. La
condensación de heterocromatina puede conducir el movimiento de la cromatina en la
interfase, pero aparte de esta situación inusual, la mayoría del movimiento de la cromatina
en interfase probablemente se produce por difusión. Sin embargo, la difusión de la
cromatina interfásica está restringida, lo que implica que los cromosomas están físicamente
anclados dentro del núcleo. Esta restricción sobre la difusión es el resultado de las
interacciones entre la cromatina y los elementos estructurales dentro del núcleo, como los
poros nucleares o la lámina nuclear.
Un estudio reciente ha ampliado el análisis del movimiento de la cromatina en interfase a
diferentes escalas de tiempo. El hecho de que la cromatina se restrinja de forma más
efectiva y mejor ordenada en una escala de tiempo corto, y se vuelva mucho menos
restrictiva y más desordenada en una escala de tiempo larga, sugiere que la organización
nuclear tendrá sus efectos más dramáticos durante el desarrollo cuando las células aún se
están dividiendo y en las poblaciones de células madres, y pueden ser menos relevantes
para las células diferenciadas terminalmente.
La difusión de los loci asociados con la envoltura nuclear era significativamente más
limitada que otros loci. Chubb y colaboradores demostraron que los loci asociados a la
envoltura nuclear se difundían con prácticamente la misma constante de difusión que otros
loci, pero dentro de una región de confinamiento con un radio mucho más pequeño.

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Consecuencias funcionales de la organización nuclear dinámica

Regulación génica
En principio, la proximidad a la envoltura nuclear podría tener un efecto positivo o negativo
sobre la expresión génica. Un efecto positivo es respaldado por el hecho de que la
cromatina periférica, cerca de la envoltura nuclear, parece más accesible a las nucleasas, lo
que implica que la cromatina asociada a la envoltura nuclear podría ser más
transcripcionalmente activa. Dado el papel de los complejos de poro nuclear en la
exportación de moléculas de ARNm, se propuso que los genes altamente expresados
podrían asociarse con complejos de poros para facilitar la exportación de su ARNm.
El principal argumento en contra de un papel para la envoltura nuclear en la transcripción
dirigida a través del reclutamiento de genes es simplemente que los genes activamente
expresados no se encuentran, en general, asociados con la envoltura nuclear.
Por lo tanto, las interacciones cromatina-envoltura nuclear probablemente no desempeñan
un papel positivo en la transcripción, la exportación de transcripción o la localización. Por el
contrario, se sabe desde hace mucho tiempo que la heterocromatina transcripcionalmente
silenciosa se asocia con la envoltura nuclear. Los estudios de posición cromosómica han
encontrado que los cromosomas ricos en genes generalmente se localizan en el interior
nuclear, mientras que los cromosomas pobres en genes con niveles generales más bajos
de transcripción tienen más probabilidades de estar asociados con la envoltura nuclear. La
cara interna de la envoltura nuclear forma un ambiente represivo para la transcripción.
Cuando la transcripción se activa en un sitio marcado de cromatina, ese sitio se mueve
desde una ubicación periférica cerca de la envoltura al interior nuclear, sugiriendo de nuevo
que la transcripción y la ubicación de la envoltura nuclear podrían ser incompatibles.
Otra forma en que el orden nuclear podría afectar la expresión génica es creando barrios
heterocromáticos silenciados dentro del núcleo. La heterocromatina se autoasocia en
grandes conglomerados, y cuando los genes se silencian, cambian su posición en el núcleo
para asociarse con grupos de heterocromatina. Cuando el emparejamiento homólogo
somático se usó para mover físicamente un gen eucromático al clúster de heterocromatina,
el gen se silenció, aparentemente debido tanto a una influencia indirecta del vecindario
heterocromático como a una influencia directa de las interacciones de la heterocromatina
que flanquea la copia homóloga del gen. En contraste, los reordenamientos cromosómicos
que impiden la capacidad de un gen para localizarse en el grupo de heterocromatina evitan
que sea silenciado. Estos resultados sugieren que para que un gen sea silenciado, debe
someterse a movimientos de largo alcance en el núcleo, por lo tanto, el grado de restricción
en la difusión de la cromatina puede influir directamente en la susceptibilidad de un gen
para silenciarse.

Interacciones entre loci

El orden nuclear también afecta las interacciones intercromosómicas, como la
recombinación y la reparación de roturas de ADN de doble cadena, así como las
interacciones de transvección entre un potenciador en un cromosoma y un promotor en otro
cromosoma. Si dos loci interactúan físicamente, deben estar ubicados en el mismo lugar en
el núcleo. Sin embargo, debido a la organización nuclear no aleatoria, no todos los pares de
loci tendrán la misma probabilidad de interactuar.
La difusión restringida de la cromatina interfásica, junto con la organización nuclear no
aleatoria, parece suficiente para explicar tanto la especificidad del sitio como la cinética de
las interacciones entre loci homólogos en interfase.
Otro conjunto importante de datos se refiere a reordenamientos cromosómicos implicados
en el desarrollo de leucemia y otros cánceres. Hay ciertos reordenamientos cromosómicos
que se producen con una frecuencia extremadamente alta, por ejemplo la reorganización
entre los loci RET y H4, que están en el mismo cromosoma pero separados por 30 Mb. Se
encuentra una inversión con puntos de corte en RET y H4 en muchos casos de cáncer de
tiroides inducido por radiación. RET y H4 se encontraron no aleatoriamente juntos en las

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células interfásicas normales, sugiriendo de nuevo que es la proximidad espacial de estos

loci lo que les permite recombinarse tan frecuentemente.
Estos resultados sugieren un principio general: debido a la organización nuclear no
aleatoria, ciertos loci estarán juntos de manera no aleatoria en el núcleo. La difusión
restringida les permitirá muchas oportunidades de interactuar sin permitir que se separen, lo
que favorece su interacción. Por el contrario, si dos loci comienzan muy separados en el
núcleo, entonces la restricción sobre la difusión impedirá en gran medida, o incluso impedirá
por completo, su interacción. Por lo tanto, la organización nuclear puede de hecho ser uno
de los factores críticos para determinar si dos loci pueden interactuar dentro del núcleo.

Conclusión
La posición de los loci cromosómicos en el núcleo desempeña claramente un papel
importante en la regulación génica, los fenómenos genéticos dependientes del
emparejamiento y la distribución de los puntos de corte en los reordenamientos
cromosómicos. Para comprender con mayor detalle la base molecular y las implicaciones
funcionales de la arquitectura nuclear, debemos identificar los sitios en los que se restringe
la difusión de la cromatina y descubrir los determinantes de la secuencia de ADN, así como
los elementos proteicos que proporcionan la restricción.

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