Bolerin Micolagico Vol. 3No.2 135— 138 1987 ACCION ANTIMICOTICA DE EXTRACTOS DE ALLIUM SATIVUM Rubén Garefa, Silvi Departamento de Farmacol RESUMEN Se realiz6 un estudio fitomicrobiolégico con extractos de Allium sativum {ajo}. Se identificd en el extracto el principio activo alicina. Se estudid Su accion antimicotica frente a varias cepas de Asper- sillus furnigatus, Candida albicans y diversos derma tofitos. También se eomparé Ia activided antimicética de estos extractos con diversos farmacos antimied eos de uso clinico. INTRODUCCION El Allium sativum (ajo) es una planta pertene- ciente # la familia de las Liliaceae, con flores blancas, que en la raiz forma un bulbo blanco, redondo, compuesto de varias partes o dientes ovalados de olor marcada y de sabor picante Entre los muchos usos medicinales que ha tenido @ lo largo de la historia, se encuentran los que derivan de sus efectos cardiovasculares, de su accién anticancerigena y de sus propiedades anti- bacterianas y antifiingicas (Bolton S. 1982, Lazo W. 1983), El principio activo de A. sativum al cual se le auribuyen las propiedades antibacterianas v antifiin- gicas se ha denominado “alicina” (Cavallito C_ y wiley J. 1944), Esta sustancia no se encuentra come tal en Ja planta, sino que se forma al destruir ef bulbo. Su precursor es la aliina. la que se trans. forma en alicina mediante la accion de la enzima alinasa, Se ha descrito en la literatura que la alicina es activa “in vitro” frente 2 vanas especies pertene cientes al género Aspergillus (Yamada y Azuma, 1977), Estas mismas especies de Aspergillus, prin palmente A. fumigatus y tambien, aunque con Erazo, Igor Lemus, Rafael Donoso. ela, Facultad de Ciencias Quimicas macéuticas, Universidad de Chile. Hilda Pivet. Hospital San José. Waldo Lazo. Departamento de Ciencias Ecolégicas. Facultad de Ciencias. Universidad de Chile. Luis Ferrada Departamento de Microbiologia. Facultad de Medicina Sede Norte. Universidad de Chile. SUMMARY LAntimicotie activity of Ailtum sativum extracts) By a phyto-microbiological study of Allium sativam (garlic! it was obtained an antimycotic factor named allicin whose activity against Asper illus fumigatus, Candida albicans and several derma tophytes wes investigated, The antimycotic activity of these extracts vas also compared with several antinveotie drugs of blinieal use. con menor frecuencia, A flavus, A. niger, A. nidulans, pueden ser patdgenos para él hombre (Yarzabal ¥ col. 1974) y ocasionar micosis amadas asper- gilosis. Entre ellas esta la “aspergilosis pulmonar” que es una micosis generalmente oportunista. La frecuencia de la enfermedad es dificil de precisar. En material de autopsias se ha infarmado de una frecuencia de 0.7 @ 5.8 o/o en pacientes con neo- plasias y alrededor de 3 o/o en pacientes transplan- fados con inmunosupresién (Oddé "y Gonzélez, 1984) Las allemativas terapéuticas actuales para el tratamiento de esta patologia son escasas y no siem- pre efectivas, . Consideramos importante iniciar el estudio fioquimico, miicrobiolégico y farmacolégico en A. sativum disponible en nuestro mercado y proyec. tar sus resultados futuros a modelos experimentales para su posible aplicacién clinica en le aspergilosis pulmonar. MATERIALES Y METODOS Fitoquimica A partir de un homogenizado de los bulbos 135iii onijnuicética de esiractos de Allicrn somtimes Garvie Yeu escoy de este planta (Esquema N° 1}, se obtuvo ractos usando los métodos deseritos en I lite uta (Cavallito y Bailey, 1944: Tansey v Appleton, ¥ Bulmer, 1978), La estabihcad de estos extractos fue determina cs mediante la vanacion de RF que expenmentaban » La eromiograiia en capa fina a través del tiempo yen le disminucion de la actividad antifingica n vitro" de los mismos, La purificacion de los extractos fue reulizada anrovechando las diferencias de solubilidad de las sustancias que lo componen, mediante el tratamiento con sisiemas de solventes de diferente polaridad exuno/ agua y cloroformo/agua). separacién de las sustancias activas del extracto purificado (extracto activo) fue realizada yr el sistema de cromatografia preparativa en capa fina de gel de silice (cloroformofacetato de etilo 9-1), que presenta ventajas cn relacién al uempe del proceso y, por ende, una menor descom- posicién de los componentes actives en relacion 4 otros procesos similares (columna cromatogrifica). MICROBIOLOGIA Evaluacion de Ja accién antifiingica de extzac- tos de A. sativem “in vitro” 1. Extracto: Una porcién del extracto activo de pH 6-7 se suspendié en una solucién de carboximetiléelulosa al J 0/0, Esta suspensién de concentraeion conocida, se diluyé en forme udecuada para ser utilizada en Jos ensayos de sensibilidad 2, Microorganismos de prueba: Copas aisladas de muestras clinicas tomadas on Giferentes pacientes del Hospital San José Aspergillus fumigatus. spersillus niger Candids albicans. ohyton mentagrophytes Trichophyton rubrum. Microsnnrum canis Microsporum gy pseum 3 ‘odo de Invculacton: 41 los estucios preliminares se utilizé el méto- do dz cifusion ex medio s6lide, mediante e] sixeme de aiseos de papel de 6 mm de diametro con 0.1 y estudio. Estos di con extractes de alicina dilute 001-0. coda placa de Pe 1 macul atus. Las placa: C durante 48 horas. abibite 2 di ma (CEMA) medio liquide. Se utilizaron tubos que contenian, aproximadamenie, 3 ml de caldo maltasado y dife rentes coneentraciones de alicina inciuidsy en el extract. Cade tubo se sembré con 0,05 ml de sus- pension de esporas (1.5 x 10° esporas/ml) y luego Jue ineubado a 37° C. El resultado se evaluo « las 48 horas y los tubos fueron colocados nuevamente en Is camara a 37° C para estudiar la estabilidad del extracto. Los dermatofitos fueron incubudos a 25° € durante § dias. Los demas hongos se aneubaron a 379 € durante 48 horas. Todos los farmucos fueron disueltos en dimetil: formamida (DMF), a raz6n de $ ml por cada 20 mg del firmaco y luego suspendidos en volimenes adecuados de una solucién de carboximetlcelulosa al 1 ofo. EV tubo control de ager Sahouraud contenia DMF a 05 o/o. Los resultados fueron evaluados mediante observaciones macroscépicas cuando existio duda de la identidad del desarrollo (contaminacién), Firmacos utilizados en los estudios comparativo: Anfotericina B, Clotrimazol, Diyodohidroxiqu noting, Ketocenazol, Nistatina, Tolnaftato, Griseo- fulvina, Tédos estos firmaces fueron disueltos en di-metil-formamida al 0.5a/o. RESULTADOS Accidn antimicotica del extracto de alicina, Mediante el procedi fitoguimica de Materiales y Métodos, se Jogro separar la sustancia activa de este extracto e identificarla en base a andlisis espectrofotemétrico como alicins 2 deserita en A. setivam. Al pusme uempo se podo detesminar que el extracto cloroférmico estable y presenta Je y (CM ene dermatofiios existe de A-sativam que las :irnucus antimiccwzados en el estudio comparativo E] extracte de A sativum presenté buena es durante Ig ancubacién a 37° C, comparada con la anfotericina By la nistatina que, fueron Jos farmacos menos estabies de los que se ineluyeron, ste estudio, A) analizar los valores expuestos en Ia Tabla 1 observa gue las CIM cel extracto frente a las tabilid as Giersas especies de Aspergillus estudiadas son seme. Janies a Jas de tos farmacos antimicéticos usados Las CIM de ketoconazol, aungue algo elevadas, encuentran dentro de los rangos descritos por Heel y col. La inclusion de le diyodohidroxiguinotina en los estudios comparativos, aunque generalmente nose Ja describe como un férmaco antimicotico de uso sistémico, se debe 4 que ella ha sido utilizada en el tratamiento de la aspersilosis pulmonar (Hors. field y col, 1977), La Gimetilformamids utilizada para_disolver Jos farmacos no interfiere en los resultados obtenidos, ye que si bien esta presenta accion fungistdtica, lo antimicéuice de exiractos de Alluim totum — R Garcia evi hace a concentraciones del 5 o/o © mas (Kitt 1967). fu nuestros ensuyos Ia concentracién final ce DMF fue sempre inferior al 1 o/o, CONCLUSIONES 1. Mediante méiodos fitoquimicos se aislaron tes sustancias de naturaleza alquiluiosulfinate (R S-S-R) @ partir de un extracte cloroférmico active de la especie A. sativum. Una de las sustancies acti- vas coresponde a la alicina, producto ya deserito bn esta especie, 2. Se demostré 1a accién antifiingica del extrec- to. Se compard dicha actividad con la de férmacos antimicéticos de uso clinico, frente a diferentes especies de hongos; encontriindose que el extracio activo presentaba una conceniracién inhibitoria minima antifiingica semejante 2 la de tos firmacos de uso clinico, ESTUDIO COMPARATIVO DE LA ACCION ANTIFUNGICA DE ALLIUM SATIVUM Y LOS PRINCIPALES FARMACOS ANTIMICOTICOS TABLA 1 FARMACO Y HONGO AL AT Ci DY KC NT A. fumigatus SM 10-15 1015 05-1% 5-10 5-10 A. fumigatus 110 Re CeeCeOne OG 51g 10 A. fumigatus 360 20.30 10-20 10:20 10:20 A. niger 106 1020 10.20 $-10 1530-2030 C. albicans 410 5080 01-05 1-5 300500 10-20 5-10 TABLA 2 FARMACO aL ct KC NT TN GF 0.0801 1-5 1-5 0.01-0.05 T. rubrum 305, 001-005 1-5 5 M. canis MC 001-005 }-s 0.01-0.08 M.cvpseum 201 001-005 3 0.01-0.05 1 AL: Extracto de Allium K€: Retoconazol AT. Anfotericine B NY CL: Clotrin: TN Yoduhidrexiquinotina CF blas corresponden a las lor de retina que esuin e: oncentraciones inhibiterias mi Grseofuiving (CIM) dos CIM =