“AÑO DEL DIÁLOGO Y LA RECONCILIACIÓN NACIONAL”

UNIVERSIDAD NACIONAL “HERMILIO VALDIZÁN”

“FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS
E.P.DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL
CURSO: BIOQUÍMICA AGROINDUSTRIAL
Duran Simon, Luz Mery; Ochoa Malpartida, Christian; Santillan Asto, Enzo; Vara
Arratea, Cinthya Stefanie ; Villanueva Trujillo, Carlos.

PRÁCTICA N° 2: PURIFICACIÓN PARCIAL Y EVALUACIÓN DE α – AMILASA DE GRANOS

GERMINADOS

I. INTRODUCCIÓN.
Esta enzima está ampliamente distribuida en la naturaleza; hidroliza uniones a-1,4 glucosídicas en amilosa, amilopectina. y
glucógeno. Su nombre deriva de Ia configuración a-D de los azúcares que son el producto final de su accionar sobre el
almidón. Las propiedades cinéticas y el patrón de hidrólisis de la enzima dependen del organismo que la haya sintetizado,
sin embargo. todas las a-amilasas son endoamilasas y por ello degradan rápidamente el almidón. [ CITATION Mau98 \l
10250 ]

Las alfa amilasas son las enzimas más estudiadas e importantes en el campo biotecnológico e industrial; ya que han
reemplazado por completo la hidrólisis química del almidón. Estas enzimas son imprescindibles en la elaboración de
productos alimenticios, combustibles, medicamentos y detergentes con la finalidad de optimizar procesos y conservar el
medio ambiente. La α-amilasa puede ser purificada de diferentes organismos como plantas, animales, hongos y bacterias;
actualmente un gran número de α-amilasa bacteriana en especial del género Bacillus están disponibles comercialmente y
son las más utilizadas en las industrias. [ CITATION Mel13 \l 10250 ]

II. OBJETIVOS
 Evaluación y determinación de azúcares reductores en el almidón de maíz y enzima de maíz.

III. MATERIALES Y MÉTODOS

a. MATERIALES
 Balanza analítica
 Estufa
 Phmetro
 Centrifuga refrigerada
 Vasos de precipitados
 Matraces de Erlenmeyer
 Agitador magnético
 Espectrómetro UV/Vis
 Maiz Germinado 20gr

b. MÉTODOS
 Teniendo 20 gr de maíz germinado, llegamos a licuar junto con 100ml de buffer pH 6.82, cuyo buffer compuesto de
NaH2PO4.H2O, Na2HPO4.12H2O y NaCl. Fig. 1
 Procediendo con la muestra se llevó a filtrar, y a continuación a centrifugar en 24 micro tubos con 1,5ml en cada una de
estas a 4°C por 10 min. Fig. 2 y 3
 Tras haber transcurrido el tiempo mencionado se procedió llevar a baño maría por 5 min a 70°C, lo que a continuación se
volvió a centrifugar en 12 tubos de ensayo, 3 de almidón, 3 de enzima puro, 3 de almidon y 3 de enzima diluido. Fig. 4 y 5
 Se colocó los tubos en micro tubos y se centrifugo, para luego volverlos en los tubos con 0.25ml de líquido centrifugado,
0.25ml de agua destilada y 2ml de reactivo DNS amarillo, se llevó los tubos en baño maría a 50°C por 5 min. Fig. 6, 7 y 8
 Finalmente se dejó enfriar y se añadió 2ml de agua destilada en cada tubo y a continuación se llevó las muestras en el
Espectrómetro UV/Vis para determinar su absorbancia. Fig. 9 y 10

IV. RESULTADOS Y DISCUSIONES.

Tabla 1. Determinación de la absorbancia en almidón de maíz

PUR 1.420 A DILUID 0.128 A

O 1.418 A O 0.209 A
- 0.093 A - 0.094 A
Tabla 2. Determinación de 0.085 A 0.125 A la absorbancia en enzima
soluble + 0.87 A + 0.123 A
0.59 A 0.208 A
PUR 1.094 A DILUIDO 0.161 A
O 1.099 A 0.163 A
- 0.090 A - 0.389 A
0.091 A 0.099 A
+ 0.0857 A + 0.134 A
0.770 A 0.135 A
Tabla 3. Resta del blanco 0.097 A con el almidón de maíz

PURO 1.420 A – 0.097 1.323 A DILUIDO 0.128 A – 0.097 0.031 A

A
1.418 A – 0.097 1.321 A 0.209 A – 0.097 0.112 A
- 0.093 A - 0.097 -0.004 - 0.094 A – 0.097 -0.003 A
A
0.085 A – 0.097 -0.012 0.125 A – 0.097 0.028 A
A
+ 0.87 A – 0.097 0.773 A + 0.123 A – 0.097 0.026 A
0.59 A – 0.097 0.493 A 0.208 A – 0.097 0.111 A

Tabla 4. Resta del blanco 0.097 A con la Enzima soluble

PURO 1.099 A – 0.097 A 1.002 A DILUIDO 0.163 A – 0.097 A 0.066 A
0.090 A – 0.097 A -0.09A 0.389 A– 0.097 A 0.292 A
- 0.091 A – 0.097 A -0.006A - 0.099 A – 0.097 A 0.002 A
Según 0.085 A – 0.097 A -0.012A 0.134 A – 0.097 A 0.037 A [ CITATION
Mba95 \l 10250 ] + 0.770 A – 0.097 A 0.673A
+ 0.135 A– 0.097 A 0.038 A nos indica Que
1.099 A – 0.097 A 1.002A 0.163 A – 0.097 A 0.066 A
con el método DNS podremos
determinar azucares reductores equivalentes a la glucosa, y para hallar se debe utilizar blancos apropiados, donde una
unidad de α – AMILASA es la cantidad de enzima que libera la glucosa.

Según [CITATION 13Re \l 10250 ] nos dice que Se puede apreciar que las semillas germinadas de 36 horas son las que
presentan mayor valor de actividad específica, La actividad enzimática se incrementa significativamente a las 36 horas de
germinación con 95% de confiabilidad.

Nuestra tabla 1 Indica que el almidón puro (1.420 A) tiene un nivel de absorbancia más que las diferentes concentraciones o
diluciones.

La tabla 2 nos indica que la enzima soluble diluida (1.094 A) pura contiene más absorbancia.

V. CONCLUSIONES.

Se logró determinar los diferentes azucares reductores en el almidón, así como en la enzima, determinando la
absorbancia donde se concluye que el almidón de maíz puro en las diferentes muestras contiene más azucares
reductores cambiando de color de un amarrillo a naranja oscuro.

VI. RECOMENDACIONES.

Usar diferentes tipos de granos para poder determinar los azúcares, además de poder comparar el nivel de absorbancia
de cada uno de ellos.
 VII. REFERENCIAS.

Gómez, M. B. (2013). Purificación Parcial y Caracterización de Alfa Amilasa de granos germinados de Chenopodium quinoa
(Quinua). Revista ECIPerú, 51-57.

Mba, B. N. (1995). Production of raw starch digesting amylase by Aspergillus niger grown on native starch sources. Science
of food and agriculture, 31.

Nasanovsky M, G. R. (2003). Lechería. EEUU: Fondo Educativo Interamericano.

Terebiznik, M. R. (1998). α-amilasa de Aspergillus: estudios de producción por fermentación en sustrato sólido, purificación
y estabilización. Buenos Aires.

VIII. ANEXOS

Fig.1 Maiz germinado con 100ml de

Fig.2 Microtubos
buffer

Fig.3 Centrifugado a 4°C x 10min Fig.4 Centrifugado en 12 tubos de

ensayo
Fig.7 12 tubos con 6 diluciones
tanto enzimas como almidón y 6 Fig.10
Fig.6 Centrifugado
Determinación
con el reactivo
de
Fig.5
Fig.9Diluciones
Enfriado de
enlos
12 12
tubos
tubos Fig.8 Tubos en baño maría a 50°C
puros de las mismas absorbancia
DNS amarillo