Validación de métodos

de ensayo
 Validación

verificación de que los requisitos especificados son adecuados

para un uso determinado

Ejemplo: Un procedimiento de medición ordinariamente usado

para la medición de la concentración de nitrógeno en agua
puede ser validado para la medición de la concentración de
nitrógeno en suero humano
 Norma ISO 5725

Utiliza los términos veracidad y precisión para describir la

exactitud de un método de medición:

Veracidad: se refiere al grado de acuerdo entre el valor

medio de un número grande de resultados de un ensayo
y el valor de referencia verdadero o aceptado
Precisión: se refiere al grado de acuerdo entre resultados
de un ensayo
 Protocolo para el diseño, conducción e interpretación
de estudios colaborativos
Pure & Appl. Chem., Vol. 78, N° 1, 145–196, 2006
THE INTERNATIONAL HARMONIZED PROTOCOL FOR THE
PROFICIENCY TESTING OF ANALYTICAL CHEMISTRY
LABORATORIES
(IUPAC Technical Report)
La organización de estos ensayos requiere mucho trabajo y deben
realizarse solamente con métodos que han sido previamente
estudiados
Consideraciones preliminares:
estimación preliminar de la precisión
desvío del método
recuperación
aplicabilidad
interferencias
comparación con otros métodos
procedimiento de calibración
descripción
cifras significativas
número de laboratorios
Disponibilidad de un material de referencia
Intervalo de niveles que se encuentran en la práctica
Disponibilidad de materiales que lo representen
Número de réplicas
Envío de una muestra a los laboratorios antes de la oficial
Número de laboratorios
Información que se debe enviar
Información que se debe requerir además de los datos
 Material de referencia

material suficientemente homogéneo y estable del cual

una o más propiedades han sido suficientemente bien
establecidas para ser usado para la calibración de un
aparato, evaluación de un método de medición o asignar
valores a materiales
 Ejemplos de material de referencia

Relacionados con magnitudes

agua de pureza declarada, cuya viscosidad dinámica se usa
para la calibración de viscosímetros
suero humano sin un valor de magnitud asignado para la
concentración del colesterol inherente, usado solamente
como un material para el control de la precisión de la
medida
tejido de pescado con una fracción de masa declarada de
dioxina, usada como calibrador
 Ejemplos de material de referencia

Relacionados con propiedades cualitativas:

carta de colores que indica uno o más colores especificados
compuesto de DNA con una secuencia especificada de ácido
nucleico
orina con androstenediona
material de referencia acompañado por los documentos emitidos
por una autoridad, con referencia a procedimientos válidos para
obtener un valor de la propiedad especificada con incertidumbre
y trazabilidad
Ejemplo: suero humano con valor de la magnitud asignado
para la concentración de colesterol con su incertidumbre
de medida declarada en su respectivo certificado, para
usarse como calibrador o como material para el control de
la veracidad de la medida
 Proveedores de Materiales de Referencia

National Institute of Bureau of Analyzed Samples

Standards and Technologies

Institute for Reference Materials American Society of

and Measurements Testing and Materials
(Unión Europea)
 Trazabilidad

propiedad de un resultado de medición por la cual el resultado

puede ser relacionado a una referencia establecida mediante
una cadena ininterrumpida y documentada de calibraciones,
cada una de las cuales contribuye a la incertidumbre de
medida
Trazabilidad en análisis químicos

Errores sistemáticos
pretratamiento de
muestra
interferencias
efecto matriz
 Datos discordantes

En un conjunto de observaciones pueden encontrarse valores de

la medición anormalmente altos o bajos que no concuerden con
el resto de los datos
Posibles causas por las cuales aparecen:
mal funcionamiento del método
error de cálculo
error al transcribir los datos
pérdida o contaminación

Cuando aparece un dato sospechoso, puede someterse a una

prueba para saber si realmente lo es y si debe ser rechazado
Parámetros
 Exactitud

Grado de concordancia entre el resultado de una medición

y el valor de referencia aceptado

Establecer contrastes de hipótesis correspondiente a una

distribución muestral con respecto a un valor límite o
certificado

n
t n 1  x   0
s
 Exactitud

Muestra / Patrón analizado programa interlaboratorio:

 Exactitud

Relación entre coeficientes de variación y concentración de

analito en interlaboratorios (Ecuación de Horwitz)
 Exactitud

Porcentaje de desviación estándar relativa (RSD%)

Similar a la reproducibilidad pero ahora utilizado para

validar exactitud a través de un interlaboratorio
 Exactitud

Método de adiciones y estudio de recuperación

Se adiciona analito puro de concentración conocida a

muestra real sin analito (disolución matriz blanco) o
con concentración previamente determinada

Mismo proceso de pretratamiento de muestra

Análisis y cálculo de recuperación de analito sobre el adicionado

 Exactitud
Relación entre concentración de analito y % recuperación
(AOAC)
 Exactitud
Comparación con un método de referencia

Método de referencia Establecer contrastes

reconocido  1, s 1 de hipótesis con
valores de análisis

2, s2 H0 Exactitud validada

Método a validar
 Linealidad

Calcular la función que relaciona concentración analito y respuesta de

método
 Criterios de linealidad

coeficiente de correlación r > 0,998 (r2 > 0,996)

% RSD factores de respuesta de concentraciones de

calibración < 5%
Homocedasticidad de residuos (varianza constante)
Incluir valores de confianza para b (pendiente) y a (ordenada
en el origen)



x

x

x
 Precisión

Comparación estadística de las dispersiones (s) en

condiciones de repetitividad y/o reproducibilidad

Preciso, sesgado

Impreciso, insesgado

Impreciso, sesgado

Preciso, insesgado
 Precisión

Condiciones de repetibilidad

Precisión obtenida en la que los resultados de una medición

se obtienen:
mismo método
mismo operador
mismo instrumento/equipo de medida
en un corto intervalo de tiempo (mismo día)
 Precisión

Condiciones de reproducibilidad

Precisión obtenida en la que los resultados de una medición

se obtienen
mismo método
misma muestra
diferentes operadores
diferentes equipos de medida
intervalo de tiempo > 24 horas
si es posible, diferentes laboratorios
 Precisión

Repetibilidad Reproducibilidad
Instrumento No cambiar Cambiar
Accesorios No cambiar Cambiar
Operadores No cambiar Cambiar
Matriz muestras Cambiar Cambiar
Concentración Cambiar Cambiar
Lote de reactivos No cambiar Cambiar
Condiciones ambientales No cambiar Cambiar
Laboratorios No cambiar Cambiar/ No cambiar
 Precisión

Al menos 5 medidas a 2 o 3 concentraciones diferentes del

rango de trabajo

Calcular el % RSD

Precisión describe errores aleatorios

Sesgo: describe errores sistemáticos

Exactitud incorpora ambos tipos de error

 Precisión

Valores aceptables de precisión en función de la

concentración para reproducibilidad

Ecuación de Horwitz

Para condiciones de repetibilidad se acepta:

 Precisión

Ecuación de Horwitz
 Selectividad

El grado por el cual un método puede determinar un analito

en particular dentro de una mezcla compleja sin ser
interferido por otros componentes de la mezcla

Las pruebas para asegurar la selectividad dependen de:

matriz muestra
técnica utilizada
información (relevante que verifique la selectividad del
método)
 Selectividad
Análisis de muestra y MRC Análisis de muestras conteniendo
por el método a validar y varias interferencias sospechadas
otros métodos independientes en la presencia del analito de
interés

¿Se identifica irrefutablemente ¿Las interferencias inhiben

la señal de analito? o incrementan la detección
¿Se ve interferido por otros o cuantificación?
componentes?

Señal de analito identificada y

comprobada libre de interferencias
 Intervalo/rango de trabajo

Intervalo de concentración en el que puede obtenerse una

exactitud y precisión adecuadas al objetivo del método

Se determina a partir de estudios de:

linealidad
homocedasticidad
precisión y exactitud
 Intervalo/rango de trabajo

Con todos estos datos se define el rango de aplicación del

método:

concentración mínima suele coincidir con LOD y LOQ

concentración máxima en función de linealidad,

homocedasticidad y datos de precisión y exactitud
Límite de detección (LOD)

yLOD = yblanco + 3 sblanco

 Límite de cuantificación (LOQ)

se define:
yLOQ = yblanco + 10 sblanco

para obtener yblanco:

se puede tomar el valor a (ordenada en el origen) de la
calibración
se puede medir 10 veces un disolución blanco y realizar el
promedio de la señal
 Incertidumbre

Estimación que caracteriza un intervalo de valores en el que

se sitúa con una alta probabilidad el valor verdadero de la
magnitud medida

Se deben evaluar todas las fuentes de incertidumbre posibles

de etapas que influyen en la medida última

Todo contribuye a aumentar el error de la medida

Propagación de errores
Incertidumbre
 Robustez

Medida de la capacidad del método de permanecer inalterado

debido a pequeñas (pero deliberadas) variaciones en los
parámetros indicando su fiabilidad durante su uso normal

Identificar las condiciones y variables del método que

puedan tener un efecto significativo en la medida

Test de robustez de Youden-Steiner