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La fase estacionaria puede ser un sólido o un líquido que se queda fijo en la misma
posición. La fase móvil puede ser un líquido o un gas que corre a través de una
superficie y de la fase estacionaria. Las sustancias que están en un sistema de
cromatografía interaccionan tanto con la fase estacionaria como con la fase móvil. La
naturaleza de estas interacciones depende de las propiedades de las sustancias así
como también de la composición de la fase estacionaria.
La rapidez con que viaja una sustancia a través del sistema de cromatografía depende
directamente de la interacción relativa entre las sustancias y las fases móvil y
estacionaria. En el caso de una mezcla, si cada componente interacciona diferente con
la fase móvil y la fase estacionaria, cada uno de ellos se moverá diferente.
Cromatografía de capa fina: basa en el principio del reparto entre dos fases. En
general, una cromatografía se realiza permitiendo que la mezcla de moléculas que se
desea separar (muestra) interaccione con un medio que se denomina fase
estacionaria. Un segundo medio la fase móvil que es inmiscible con la fase
estacionaria se hace fluir a través de ésta para eluír a las moléculas en la muestra.
Debido a que las distintas moléculas en la muestra presentan diferente coeficiente, la
fase móvil a los distintos componentes con diferente eficiencia, de modo que aquellos
que en la fase móvil serán eluídos más rápido que los que sean preferencialmente
solubles en la fase estacionaria.
Introducción
Significa "Escribir en Colores“.
Los componentes de una mezcla pueden presentar una tendencia diferente a
permanecer en cualquiera de las fases involucradas.
Es la separación de dos o más compuestos químicos en un medio
Conceptos generales
Cromatografía plana: La fase estacionaria se sitúa sobre una placa plana o sobre
un papel.
Las principales técnicas son:
− Cromatografía en papel
− Cromatografía en capa fina
Cromatografía en columna: La fase estacionaria se sitúa dentro de una columna.
Según el fluido empleado como fase móvil se distinguen:
− Cromatografía de líquidos
− Cromatografía de gases
− Cromatografía de fluidos supercríticos
Aspectos históricos de los distintos tipos de cromatografía
Cromatografía en papel
Funcionamiento
En unas condiciones determinadas serán retenidas en la columna las muestras
que tengan una carga complementaria a la de la matriz de la gel, siendo eluidas
las restantes.
Para eluir las muestras retenidas se puede variar la carga iónica del solvente o su
pH de forma que se alcance el punto isoeléctrico de la muestra de interés o el de la
matriz, neutralizando de este modo la fuerza que retiene a la muestra en la
columna.
Aspectos históricos de los distintos tipos de cromatografía
Cromatografía de gel-filtración
− Fodin y Porath en 1958 descubren que usando como fase estacionaria geles
se puede separar polímeros sintéticos de alto peso molecular.
Cromatografía de afinidad.
− Porath en 1967 utiliza un péptido o proteína unida covalentemente a un ligando
y la utiliza para la separación de moléculas proteicas.
Cromatografía de gas.
− Es una de las técnicas más utilizadas e importantes.
− Ha revolucionado el campo de la química analítica.
Cromatografía de exclusión
o La cromatografía de exclusión molecular o de filtración en gel, separa las
muestras en base a su tamaño.
o La matriz de la columna esta formada por un polímero entrecruzado con poros
de tamaños determinados.
o Las muestras de mayor tamaño migran a lo largo de la columna con mayor
velocidad que las de tamaño pequeño.
o Las muestras de menor tamaño, entran en los poros y se mueven a lo largo de
la columna lentamente porque tienen que atravesar los laberintos que se
encuentran en el interior de las bolas de polímero en su marcha a lo largo de la
columna.
o Hay diferentes tamaños de partícula para un gel:
− a menor tamaño mayor resolución y menor gasto en la columna.
o Esta técnica se emplea en la separación de proteínas de alimentos,
determinación de glucosa y fructosa en zumos de fruta, etc.
Características de las matrices
Deben ser estables.
Tener bajo contenido en grupos iónicos.
Uniformidad de poro y tamaño.
Los compuestos utilizados pueden ser derivados de:
Dextranos (Sephadex)
Agarosa (Sepharosa)
Acrilamidas (Biogel P)
Esferas de vidrio
Cromatografía de afinidad
Cromatograma correspondiente a una cromatografía liquida en fase reversa para compuestos fenólicos
• Fase móvil es la fase que se mueve en una dirección definida. Puede ser un
líquido (cromatografía de líquidos o CEC). un gas (cromatografía de gases) o
un fluido supercrítico (cromatografía de fluidos supercríticos). La fase móvil
consiste en la muestra que está siendo separada/analizada y el disolvente, que
se mueven por el interior de la columna. En el caso de la cromatografía líquida
de alta resolución, HPLC, la fase móvil es un disolvente no-polar como el
hexano (fase normal) o bien algún disolvente polar (cromatografía de fase
reversa) y la muestra que va a ser separada.. La fase móvil se mueve a través
de la columna de cromatografía (fase estacionaria) de forma que la muestra
interacciona con la fase estacionaria y se separa.
• Cromatografía preparativa se usa para purificar suficiente cantidad de
sustancia para un uso posterior, más que para análisis.
• Tiempo de retención es el tiempo característico que tarda un analito particular
en pasar a través del sistema (desde la columna de entrada hasta el detector)
bajo las condiciones fijadas.
• Muestra es la materia que va a hacer analizada en la cromatografía. Puede
consistir en un simple componente o una mezcla de varios. Cuando la mezcla
es tratada en el curso del análisis, la fase o fases que contienen los analitos de
interés es llamada igualmente muestra mientras el resto de sustancias cuya
separación no resulta de interés es llamada residuo.
• Soluto es cada uno de los componentes de la muestra que va a ser separado.
• Disolvente es toda sustancia capaz de solubilizar a otra,y especialmente la
fase líquidamóvil en cromatografía de líquidos.
• Fase estacionaria es la sustancia que está fija en una posición en el
procedimiento de la cromatografía. Un ejemplo es la capa de silica en la
cromatografía en capa fina.