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SECRETARIA DE COMERCIO
FOMENTO INDUSTRIAL
NORMA MEXICANA
NMX-K-601-1987
NMX-K-601-1987
PREFACIO
NMX-K-601-1987
INDICE
CAPITULO
2 REFERENCIAS
3 DEFINICIONES
4 CLASIFICACION
5 ESPECIFICACIONES
6 MUESTREO
7 METODOS DE PRUEBA
9 ALMACENAMIENTO
10 BIBLIOGRAFIA
NMX-K-601-1987
Esta Norma Mexicana establece las especificaciones mínimas de calidad que deben cumplir
los productos líquidos con poder germicida, controlado a la dilución apropiada para su uso,
que se aplica a todos los productos fabricados para uso industrial, con el propósito de
limpiar y (sanitizar) superficies que no son dañadas por el vehículo del producto y que se
expenden en forma líquida sin importar el tamaño o forma del envase.
2 REFERENCIAS
3 DEFINICIONES
Producto cuyo objeto principal es limpiar y destruir o controlar los microorganismos, sin
perjudicar la superficie tratada o producir efectos dañinos en los humanos o animales
domésticos; para lograr lo anterior, debe contener detergentes y desinfectantes formulados
apropiadamente para lograr la máxima eficiencia sanitizante.
4 CLASIFICACION
Los productos objeto de esta norma se clasifican en un solo grado de calidad con tres
diferentes tipos en función de la composición química del germicida.
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5 ESPECIFICACIONES
El producto objeto de esta norma debe cumplir las siguientes especificaciones a la dilución
recomendada:
Tabla 1
Nota.- Los compuestos surfactantes que formen parte del limpiador germicida deben ser
compuestos biodegradables. Los productos germicidas basados en cuaternario de amonio
no deben contener detergentes aniónicos o surfactantes de sodio y los derivados del fenol
no deben contener detergentes catiónicos.
6 MUESTREO
6.1 Cuando se requiera el muestreo del producto, éste podrá ser establecido de
común acuerdo entre productor y comprador, recomendándose el uso de la Norma
Mexicana NMX-Z-12 (véase capítulo 2), aplicando un nivel de inspección I y un nivel de
calidad aceptable de 4% (tabla I A y II A).
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7 METODOS DE PRUEBA
Esta prueba es aplicable a desinfectantes miscibles con agua que no presenten efectos
bacteriostáticos y que no sean afectados por cualquiera de los tres medios de subcultivo
especificados.
7.1.2 Definición
Puede definirse el coeficiente fenólico como el número que expresa la relación entre la
eficacia germicida de un producto y la eficacia del fenol en idénticas circunstancias.
7.1.3.1 Reactivos
a) Medios de cultivo
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Solución A
Solución B
Disolver 3.0 g de NaCl, 0.2 g de KCl. 0.1 de MgSO4 . 7H2O, 1.5 g de KH2PO4, 4 g de
Na2HPO4, 0.01 g de tiamina, 0.01 g de niacinamida en HCl, en 500 cm3 de agua destilada.
Disolver 1.5% de bacto - agar (difco) en caldo nutritivo o en caldo sintético y ajustar el pH
de 7.2 a 7.4 (hasta vire azul verde, con azul de bromotimol); colocar 10 cm3 de agar
nutritivo por tubo; taparlos con algodón o tapones de acero inoxidable; esterilizar en
autoclave por 20 min a 394 K (121°C). Inclinar los tubos estériles y dejarlos enfriar.
b) Medios de subcultivo
Usar b-1, b-2 ó b-3, cualquiera da resultados bajos (se puede utilizar productos
deshidratados fabricados conforme a las especificaciones citadas).
Productos oxidantes y productos formulados con compuestos tóxicos que contengan algún
metal pesado como mercurio (Hg) dan resultados bajos en b-2; productos que contengan
surfactantes catiónicos, generalmente dan resultados bajos en b-3.
Mezclar 0.5 g de L - cistina, 0.75 g de agar, 2.5 g de NaCl, 5.5 g de glucosa, 0.5 g de
extracto de levadura hidrosoluble y 15.0 de digerido pancreático de caseína en 1 dm3 de
agua destilada. Calentar en baño de agua hasta disolver; agregar 0.5 g de tioglicolato de
sodio ó 0.3 cm3 de ácido tioglicólico y ajustar con NaOH (1 N) a pH de 7.1 ± 0.2.
Recalentar sin hervir; si es necesario, filtrar a través de papel filtro húmedo y agregar 1.0
cm3 de solución al 0.1% de resazurina de sodio recién preparada. Transferir cantidades de
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c) Organismos de prueba
Fenol
Salmonella Typhosa.
1 - 90 +ó- +ó- -
1 - 100 + + +ó-
Staphylococus aureus
1 - 60 +ó- +ó- -
1 - 70 + + +
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7.1.3.2 Aparatos
Asa de platino o nicromel con el extremo encorvado ligeramente para formar un anillo de 4
mm de diámetro interno, con una porción recta de 3.5 a 7.5 cm de largo.
La parte superior de las pipetas debe obturarse ligeramente con algodón y colocarlas en
recipientes metálicos cerrados.
Baño de agua
Debe estar construido en forma tal que conserve constante la temperatura, por lo menos el
tiempo que dure la prueba. La cubierta debe tener los orificios lo suficientemente distantes
para permitir la fácil introducción de los tubos de prueba.
Gradilla
Matraces volumétricos
7.1.3.3 Procedimiento
Preparar en matraz volumétrico una solución al 1% del germicida líquido a probar. De esta
solución, preparar en matraces aforados las diluciones de prueba convenientes, según la
idea que se tenga de la potencia del producto. (El rango de diluciones debe cubrir los
límites de muerte en los períodos de 5 a 15 min y al mismo tiempo proporcionar un margen
de seguridad).
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Para trabajos rápidos de rutina y que los productos a prueba no sean volátiles, se pueden
preparar las diluciones directamente en los tubos de ensaye.
Etiquetar los tubos con la dilución correspondiente.
Agregar 0.5 cm3 del cultivo de prueba con intervalos de tiempo necesario e igual al que se
va a emplear entre las resiembras de los subcultivos. (Es decir, empleando 10 diluciones las
cuales se inoculan con intervalos de 30s, se necesitan 4.5 min, quedando un intervalo de 30
s antes de hacer la primera resiembra a los tubos de subcultivo).
El microorganismo se agrega con una pipeta graduada de 5 cm3 la cual contenga suficiente
cultivo para poder inocular los tubos de una sola vez.
Para inocular los tubos, estos deben sostenerse en posición inclinada, después de sacarlos
del baño de agua; el cultivo debe añadirse sin que la punta de la pipeta toque la superficie
del desinfectante. La punta de la pipeta debe dejarse descansar contra la pared del tubo,
justamente encima de la superficie del líquido. Después de agregar el cultivo, agitar
suavemente los tubos para asegurar la distribución de las bacterias y se regresan al baño de
agua.
A los 5 min de haber sido inoculado el primer tubo, se trasvasa un asa de la mezcla de
dilución y cultivo al primer tubo de subcultivo. Para facilitar esta operación, es aconsejable
doblar el asa ligeramente para que al sacar ésta del tubo, el plano sea paralelo a la superficie
del líquido. A los 30 segundos se transfiere un asa del segundo tubo al correspondiente tubo
de subcultivo y así sucesivamente con el resto de las diluciones.
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7.1.3.4 Cálculos
La prueba es satisfactoria sólo cuando el cultivo de prueba, presente las siguientes lecturas
en el control de fenol.
Fenol
Salmonella typhosa
1 - 90 +ó- +ó- -
1 - 100 + + +ó-
Staphylococus aureus
1 - 60 +ó- +ó- -
1 - 70 + + +
Para evitar una seguridad ficticia, se calcula el coeficiente fenólico con 0.1 de
aproximación.
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7.2.1 Objetivo
La muestra se mezcla o agita con una cama de resina de intercambio iónico la cual remueve
todos los componentes iónicos de la muestra.
Equipo de filtración.
Etanol 100%.
Isopropanol 90%.
Metanol 90%.
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7.2.3 Procedimiento
Lavar con porciones de 100 cm3 de agua destilada y decantar hasta que el agua decantada
sea incolora. Mezclar vigorosamente con agitador magnético por 5 min.
Lavar con dos porciones de 50 cm3 de solvente (90% isopropanol y 10% metanol) y
decantar.
Tomar con pipeta 0.25 cm3 de solvente y colocar en un vaso de 100 cm3 agregar 20 cm3 de
agua destilada, 20 cm3 de indicador y 15 cm3 de cloroformo.
Si la capa inferior no tiene color se regresa la muestra al matraz y se agita por 10 min, se
repiten los pasos anteriores (desde la adición del solvente).
b) Filtrar con papel filtro de poro medio en un embudo de cristal, se recibe el filtrado en un
vaso de precipitado.
Lavar el matraz con tres porciones de 50 cm3 de solvente y pasar a través del filtro.
Enjuagar el filtro Buchner o la superficie expuesta del papel filtro con una piseta con
solvente en vacío.
Transferir el filtrado del matraz de vacío a un vaso de 250 cm3 cuya masa sea conocida
(M1) si se utilizó el Buchner para filtración. Evaporar 10 cm3 y agregar 10 cm3 de etanol
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para apresurar la eliminación de agua. Secar en una estufa por 15 min a 378 ± 2 K (105 ±
2°C).
7.2.4 Cálculos
M2 - M 1
% ácidos grasos = x 100
Masa de la muestra
Donde:
7.3.1.1 Sin importar el método que se aplique para determinar, tanto surfactantes
aniónicos como catiónicos, es necesario contar con soluciones aniónicas y/o catiónicas de
normalidad conocida.
Este método es aplicable a los alquil sulfatos, alquil éter y alquil bencen sulfonatos sólidos
o líquidos.
Cuando la relación de TS/LAS es menor de 0.8, la relación XS/LAS es menor de 0.13 ó los
surfactantes son de cadenas cortas, no son titulables por este método.
Nota.-
TS = Toluén sulfonato
XS = Xilén sulfonato
7.3.1.2 Principio
El indicador catiónico forma una sal con el surfactante aniónico que queda disuelto en el
cloruro de metileno impartiéndole una coloración rosa, mientras que el indicador aniónico
permanece disuelto en la fase acuosa. La primera gota en exceso de la solución valorada de
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hyamina formará con el indicador aniónico una sal compleja coloreada, que cambiará el
color rosa de la capa de cloruro de metileno a gris. Un exceso de solución de hyamina está
indicado por un color azul en la fase orgánica.
Balanza analítica.
Bureta de 25 cm3.
Matraz Erlenmeyer de 250 cm3 con tapón esmerilado.
Matraz volumétrico de 250, 500 y 1000 cm3.
Pipetas de 10, 20 ó 25 cm3.
Probeta graduada de 50 cm3.
Solución de hyamina 1622, 0.004 N (7.3.1.4).
Solución de bromuro de dimidium.
Solución de azul ácido (disulphine azul VN 150).
Solución indicadora de azul de bromotimol (1 g de indicador en 500 cm3 de alcohol al
50%).
Solución indicadora de diclorofluoreceína (100 mg de indicador en 100 cm3 de alcohol al
70%).
Alcohol isopropílico.
Acido acético.
Solución AgNO3 (0.1 N).
Solución indicadora ácida.
Cloruro de metileno (reactivo analítico).
Cloroformo (reactivo analítico).
Solución de H2SO4 (1:4).
Solución indicadora de fenolftaleína.
Solución H2SO4 IN.
Solución NaOH IN.
Etanol.
En un matraz Erlenmeyer de 250 cm3 colocar con pipeta volumétrica 20 cm3 de la solución
y 20 cm3 de alcohol isopropílico. Si es necesario neutralizar con ácido acético (1:9) con
adición de una gota de azul de bromotimol (pH a 6). Adicionar 10 gotas de solución
indicadora de diclorofluoresceína y titular con solución AgNO3 0.1 N; evitar la luz solar;
justo antes del final de la valoración se forma un precipitado, que en el punto final de la
reacción adquiere color rojo.
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7.3.1.4.2 Cálculos:
VxN
N' =
V'
Donde:
El agua destilada para preparar la solución aniónica debe ser hervida sobre todo si el
surfactante es biodegradable. Renovar la solución mensualmente.
En un matraz volumétrico de 500 cm3, colocar 200 cm3 de agua destilada, 20 cm3 de
solución indicadora de bromuro de dimidium, azul ácido 1 y 20 cm3 de solución de H2SO4
(1:4), mezclar y aforar con agua destilada.
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7.3.1.5 Procedimiento
Determinar la masa con exactitud de ± 0.001 g de una muestra que contenga alrededor de
un miliequivalente del surfactante aniónico y diluirlo con 100 cm3 de agua destilada.
Adicionar 3 gotas de solución indicadora de fenolftaleína y ajustar con solución NaOH 1 N
o H2SO4 1 N a vire rosa.
Mezclar perfectamente.
Colocar en un matraz Erlenmeyer de 250 cm3 con tapón esmerilado, 20 cm3 de la solución
problema, agregar 20 cm3 de agua destilada, 10 cm3 de solución indicadora ácida y 15 cm3
de cloruro de metileno o cloroformo. Valorar con solución de hyamina 1622 (0.004 N)
tapar el matraz después de cada adición y agitar vigorosamente. El final de la reacción
estará indicado cuando la capa de cloruro de metileno cambie de rosa a gris.
7.3.1.6 Cálculos
Donde:
M = Masa de la muestra.
7.3.2.1 Procedimiento
Tomar 8.0 ± 0.001 g de muestra y transferirla a un matraz volumétrico de 250 cm3 con agua
destilada, aforar y mezclar perfectamente. Colocar con pipeta en un matraz Erlenmeyer de
250 cm3 con tapón esmerilado, 10 cm3 de la solución muestra, 10 cm3 de solución aniónica
0.004 N, 20 cm3 de solución indicadora ácida y 15 cm3 de cloruro de metileno.
Valorar con solución de hyamina 0.004 N y el final de la reacción estará indicado cuando la
capa de cloruro de metileno cambie de rosa a gris.
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7.3.2.2 Cálculos
Donde:
M = Masa de la muestra.
Método del azul de metileno (Método alternativo). Este método se basa en la propiedad del
azul de metileno de ser soluble en cloruro de metileno o cloroformo cuando se encuentra en
presencia de tensoactivos aniónicos (alquil sulfonatos, alquil sulfatos, alquil glicerol
sulfonatos, alquil éter sulfonato), así como en fase acuosa en presencia de tensoactivos
catiónicos.
Interferencias: La presencia de cloro libre, gran cantidad de cloruro de sodio materiales
fuertemente alcalinos o abrasivos insolubles.
Bureta de 25 cm3.
Probeta de 100 cm3 con tapón esmerilado.
Matraces volumétricos de 1000, 500 y 250 cm3.
Pipetas de 25, 20 y 5 cm3.
Solución catiónica 0.004 N (7.3.1.4).
Solución aniónica 0.004 N (7.3.1.4).
Solución primaria A.
Solución de azul de metileno.
Solución reguladora de verde de bromocresol.
Solución mezcla de alcohol isopropílico y cloroformo.
Azul de metileno.
Verde de bromocresol.
Sulfato de sodio.
Acido sulfúrico concentrado.
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Cloruro de sodio.
Fostato hidrogenado de sodio (Na2HPO4 . 12H2O).
Fosfato de sodio hidratado (Na3PO4 . 12 H2O).
Cloroformo.
Alcohol isopropílico.
Disolver 0.05 g de azul de metileno, 50.0 g de sulfato de sodio, 12.5 g de ácido sulfúrico
concentrado a 1000 cm3 de agua destilada.
7.4.3.1 Procedimiento
Una alícuota de 25 cm3 de la solución primaria A (7.4.2.1) diluir a 250 cm3 (solución B).
En una probeta graduada de 100 cm3 y con tapón esmerilado, colocar 20 cm3 de solución B;
agregar 20 cm3 de solución de azul de metileno (7.4.2.2) y 20 cm3 de cloroformo. Tapar y
agitar. El color azul debe aparecer en la capa inferior de cloroformo. Con una bureta
adicionar solución catiónica 0.004 N; después de cada adición tapar y agitar. Las primeras
adiciones pueden ser volúmenes de 2 cm3 pero una vez que el indicador empieza a emigrar
a la capa superior acuosa, las adiciones deben reducirse a volúmenes de 0.5 cm3 y después a
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gotas hasta que la intensidad en las dos capas sea igual. Hacer el procedimiento por
duplicado.
7.4.3.2 Cálculos
Donde:
20 = Alícuota.
250 = Aforo.
7.4.4.1 Procedimiento
En una probeta de 100 cm3 graduada y con tapón esmerilado, colocar una alícuota de 20
cm3 de la solución B, 30 cm3 de solución mezcla de cloroformo y alcohol isopropílico y 20
cm3 de solución reguladora de verde de bromo cresol, tapar y agitar. El color permanece en
la capa superior. Continuar el procedimiento como se indica en 7.4.3.1.
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7.4.4.3 Cálculos
Donde:
250 = Aforo.
20 = Alícuota.
7.4.4.4 Cálculos
Jabón como SO3 % = Total de tensoactivo aniónico (SO3) % - tensoactivo aniónico (SO3)%
7.4.5.1 Procedimiento
En una probeta graduada de 100 cm3 y con tapón esmerilado colocar 20 cm3 de solución B,
20 cm3 de cloroformo y 20 cm3 de solución de azul de metileno, tapar y agitar.
7.4.5.2 Cálculos
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Donde:
0.080 = Miliequivalente.
V = cm de solución aniónica.
250 = Aforo.
20 = Alícuota.
Cada envase del producto debe llevar una etiqueta o impresión permanente, visible con los
siguientes datos:
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Deben anotarse los datos necesarios de (8.1.1) para identificar el producto y todos aquellos
otros que se juzguen convenientes, tales como las precauciones que deben tenerse en el
manejo y uso de los embalajes.
8.2 Envase
8.3 Embalaje
Para el embalaje del producto objeto de esta norma, se deben usar cajas de cartón o
envolturas de algún otro material apropiado que tenga la debida resistencia y que ofrezcan
la protección adecuada a los envases para impedir su deterioro exterior a la vez faciliten su
manejo en el almacenamiento y distribución de los mismos, sin exponer a las personas que
los manipulen.
9 ALMACENAMIENTO
El producto terminado debe almacenarse en locales que reúnan los requisitos sanitarios y
que no altere su calidad.
10 BIBLIOGRAFIA
Esta norma no concuerda con ninguna norma internacional por no haber sobre el tema.
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