Bioensayo de Toxicidad en Artemia salina

Introducción

El ensayo con Artemia salina es un método que permite determinar citoxicidad en la larva de
ectocrústaceo que es altamente sensible a una gran variedad de sustancias químicas. La toxicidad
se expresa como CL50 (concentración letal 50).

Día 1

a) Se prepara agua de mar según las instrucciones del envase (3,6 gramos de sal de mar
comercial en 100 ml de agua destilada). Se filtra.
b) Se colocan aproximadamente 50 mg de huevos de Artemia salina en un Erlenmeyer con
350 ml de agua de mar. Se colocan en un lugar con luz (artificial o natural). Se le coloca
una bomba de oxigeno con burbujeo lento.

Día 2

a) Se transfiere la mayor cantidad de nauplios vivos a un Erlenmeyer con agua de mar fresca.
b) Se pesan 20 mg de muestra.

Día 3

a) A partir del efluente, se preparan diluciones de 1000, 100 y 10 ppm, transfiriendo a cada
vial 500, 50 y 5 ul respectivamente de acuerdo a la concentración usado para la
cianuración. Son 3 viales por cada concentración (9 en total). Se hace un control por
muestra. Si la muestra es apolar debe agregarse al control 50 ul de DMSO.
b) Los nauplios están listos para el ensayo.
A cada vial se le agregan 10 nauplios (30 nauplios por dilución) y la dilución del extracto
requerida. Luego, se agrega agua de mar hasta completar 5 ml por vial. A cada vial se le
agrega, además, una gota de suspensión de levadura (3 mg de levadura seca se disuelven
en 5 ml de agua de mar) como alimento.

Nota: Los nauplios pueden ser utilizados entre 48-72 horas después que se ha iniciado la
incubación, sin embargo, luego de 72 horas debe ser descartados.

Día 4

a) Después de 24 horas, se cuenta y anota el número de sobrevivientes en cada dilución.

b) Se analizan los datos con el programa de computadora Finney (DOS) o QBasic para
determinar valores CL50. Los valores de CL50 menores de 1000 son considerados activos.

Cantidad de extracto requerida 100 mg.

Referencias bibliográficas

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Hatching Success of Brine Shrimp (Artemia franciscana). Arch Environ Contam Toxicol. 51: 580.

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Ruiz-González LE, Vázquez-Zea JA, Vega-Villasante F, Guzmán-Dávalos L., Guerrero-Galván SR

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