Reagensi i pribor:

Fehlingov reagens se sastoji iz dva rasvora:

- Fehling I rastvor ( dobije se rastvaranjem 69,3 g CuSO4 · 5H2O u 1000 ml destilovane
vode),
- Fehling II rastvor (dobije se rastvaranjem 346g KnaC 4H4O6 · 2H2O U 300 ml
destilovane vode. Ovom ratsvoru dodaje se postepeno iz mješanje rastvor NaOH (100
g NaOH u 500 ml destilovane vode) i na kraju dopuni destilovanom vodom do 1000
ml),
- rastvor glukoze (riboze, maltoze, saharoze i laktoze) konc. 50 g/l,
- stalak za epruvete
- graduirane pipete,
- vodeno kupatilo,
- špiritna lampa
Postupak rada:
U epruvetu uspite jednake dijelove rastvora Fehling I i Fehling II (po 2 ml), promiješati i
zagrijte do ključanja. Ako ratsvor poslije toga ostane bistar i plav, dodajte mu nekoliko ml
uzorka i ponovo zagrijte do ključanja. Pojava crvene boje bakar(I)-oksida znak je da je u
ratsvoru orisutan reducirajući šećer.
Rastvor saharoze ne pokazuje pozitivnu reakciju na Fehlinga. Međutim, ako prethodno tretira
sa HCl gdje hidrolizira, pokazuje pozitivnu Fehlingovu reakciju.
U ratsvor saharoze dodajte nekoliko kapi koncentrovane HCl i ovako zakiseljen ratsvor
zagrijavajte 5 minuta na vodenom kupatilu na teperaturi 70°C i zatim izvedite Fehlingovu
probu. Ona će biti pozitivna.

IZVESTI NYLANDEROVU REAKCIJU

Ova reakcija je identična Fehlingovoj, samo što se umjesto bakra uzima bizmut. Bizmut se iz
Bi3+¨redukuje u elementrani bizmut, a glukoza se oksidira u glukonsku kiselinu, odnosno Na-
glukonat. Reakcija je pozitivna ako se izdvoji crni talog elementarnog bizmuta.

reakcijaaa
Reagensi i pribor:
- Nylanderov reagens: rastvoriti uz zagrijavanje na ključavom vodenom kupatilu, 2g
Bi(OH)2NO3 i 4g K-Na-tartarata u 100 ml 10% rastvora NaOH. Ohladiti i profiltrirati.
- ratvor reducirajućeg šećera konc. 50g/l
- stalak sa epruvetama,
-graduirane pipete,
-vodeno kupatilo
Postupak:
U epruvetu stavite 2ml Nylanderovog reagensa i dodajte 2-4 ml ispitivanog rastvora.
Izmješajte i zagrijavajte 5 minuta u ključaloj vodi. Nastajanje crnog taloga metalnog bizmuta
dokaz je pozitivnog testa na reducirajuće ugljikohidrate.
Nylanderova reakcija je nepodesna za dokazivanje šećera u ratsvorima u kojima su prisutni
proteini. Naime pri ključanju u baznoj sredini bizmut reaguje sa hidrogensulfidom, koji se
izdvaja iz tioaminokiselina i nastaje mrka boja bizmut-sulfida.

3. Izvesti reakciju nastajanja srebrenog ogledala (Reakcija sa Tolensovim reagensom)

Rastvor reducirajućeg šećera redukuje amonijačni rastvor oksida srebra do elementarnog
srebra.
Reakcija

Reagensi i pribor:
- rastvor srebro-nitrata konc. 50 g/l,
- 10% rastvor amonij-hidroksida,
- rastvor šećera konc. 50g/l (glukoza, fruktoza, saharoza, maltoza),
- stalak sa epruvetama,
- graduirane pipete,
- vodeno kupatilo,
- termometar
).
Postupak:
U četiri epruvete pripremite Tolensov reagens tako što ćete na 1 ml rastvora AgNO 3 pazljivo
dodavati kapaljkom kap po kap razblaženi ratsvor amonijaka, mućkajući poslije svake dodane
kapi. Stvara se smeđi talog, koji se ratsvara u višku amonijaka. Rastvor amonijaka se mora
pažljivo dodavati, tačno dok se ne rastvori nastali talog (ne smije se dodavati višak, jer
reakcija neće uspjeti). Na ovako svježe pripremljen reagens dodajte 2 do 4 ml rastvora koji se
ispituje, staviti epruvetu u vodeno kupatilo i zagrijano na 40 do 50 °C. Poslije nekoliko
minuta na zidovima epruveta u koje ste dodali rasvor glukoze, fruktoze i maltoze se stvara
sloj metalnog srebra u vidu ogledala. Na zidovima epruvete u koju ste dodali rasvor saharoze
nije se pojavilo srebreno ogledalo.

Razlikovanje ketoza od aldoza

6. Seliwanoffov test za ketoze
Ova reakcija služi za identifikaciju ketoza od aldoza. Zasniva se na svojstvu ketoheksoza da
pri kuhanju sa razblaženom HCl daju hidroksimetil-furfural koji sa rezorcinom daje
kondenzacioni proizvod crvene boje. Ovu reakciju osim fruktoze daju sorbitol, ketotrioza,
ketotetroza, formoza, oksiglukonska kiselina.
Reagensi i pribor:
-Seliwanoffov reagens: Rastvoriti 0,25g rezorcina u smjesi od 5 ml koncentrovane HCl i 5 ml
destilovane vode. Reagens se uvijek svježe pripremi.
- rastvor glukoze u fruktoze (c=0,1 mol/dm3),
- stalak sa epruvetama,
- graduirane pipete,
- vodeno kupatilo,

Postupak

Na 3 ml Seliwanoffova reagensa dodajte 3 ml uzorka koji se ispituje. Epruvete sa

mješavinom šećera i reagensa zagrijavajte u vodenom kupatilu 60 sekundi. Ukoliko je u
uzorku ketoza, javlja se crvenkasto obojenje.

Reakcija na polisaharide
7. Izvesti reakciju na skrob

Skrob spada u polisaharide pa nema slobodnih poluacetalnih OH grupa jer su iskorištene pri
nastajanju glukozidnih veza između glukoze u molekuli skorba. Zbog toga ne posjeduje
redukciona svojstva. Hidrolizom skroba hloridnom kiselinom oslobađa se glukoza i
redukcione probe na hidrolizat skroba su pozitivne. U hladnoj vodi skrob je nerastvorljiv, a u
vreloj daje koloidni ratsvor na koji izvodimo reakciju adsorpcije i taloženje solima lakih
metala. Ako se dodaje Lugolov rastvor, na graničnoj površini između vode kao rastvarača i
koloidnih čestica skroba odvija se adsorpcija joda u obliku trijod-jona. Plava boja skrobno-
jodne reakcije se gubi zagrijavanjem (jer se pod uticajem temperature trijod-jon razlaže na
pojedinačne jone), a pri hlađenju ponovo se pojavi plava boja. Skrob se iz koloidnog rastvora
taloži kad dođe do zasićenja tog rastvora kristalnim natrij-hloridom. Talog se dodavanjem
vode rastvara, jer koloidni ratsvor skroba spada u hidrofilne koloide.

Reagensi i pribor
-skrob u prahu
-destilovana voda
- Fehlingov rastvor I i II,
-koncetrovaan HCl,
-Lugolov rastvor,
- špiritna grijalica,
-stalak sa epruvetama,
-čaša,
-pipete,
-laboratorijska kašika,
-kapaljka,
-stalak sa metalnim prstenom,
-azbestna mrežica.

Praktičan rad:

Pripremanje kolidnog rastvora skroba

Razmutite oko pola kašikice rastvora skroba u peruveti sa 10 ml destilovane vode i smjesu uz
miješanje ulijte u čašu sa 30 ml vrele vode.
Izvesti Fehlingovu reakciju na koloidni rastvor skroba
Fehlingovu reakciju na skrob izvedite po proceduri opisanoj u zadatku 2. i konstatujte da je
reakcija negativna.
Izvesti skrobno-jodnu reakciju
Na oko 10 ml koloidnog rastvora skroba dodajte 1-2 kapi Lugolovog rastvora. Nastaje plava
bpja skrobno-jodne reakcije koja se gubi zagrijavanjem rastvora, a hlađenjem se ponovo
pojavljuje.

Izvesti sukcesivnu hidrolizu skroba hloridnom kiselinom

U desetak epruveta uspite po 10 ml destilovane vode i dodajte po 3 kapi Lugolovog ratsvora.
U čašu uspite oko 20 ml koloidnog rastvora skroba i dodajte 2 kapi koncentrovane hloridne
kiseline. Ključanjem koloidnog rastvora skroba uz prisustvo hloridne kiseline dolazi do
postupne hidrolize skroba preko: amilodekstrina, eritrodekstrina, flavodekstrina,
ahromodekstrina, maltrodekstrina, maltoze do glukoze. Postupnu hidrolizu skorba možete
pratiti ako u intervalima od 3 minute prenosite po nekoliko kapi hidrolizata skroba u pojedine
epruvete sa Lugolovim rastvorom. U prvih nekoliko epruveta pojavit će se plava, odnosno
ljubičasta boja koja nastaje reakcijom nehidroliziranog skroba, odnosno amilodekstrina sa
Lugolovim rastvorom. U sljedećih nekoliko epruveta javlja se crvena boja koja potiče od
eritrodekstrina, žuto-narandžasta – od flavodekstrina, a u posljednjim epruvetama pojavit će
se žućkasta boja koja potiče od Lugolovog rastvora, jer ovaj rastvor ne reaguje sa
ahromodekstrinom, maltodekstrinima, maltozom i glukozom.
Po završetku hidrolize skroba izvediteFehlingovu reakciju, koja će biti pozitivna što znači da
je hidroliza izvršena.
Taloženje skroba iz njegovog koloidnog rastvora solima lakih metala
Na 2-3 ml koloidnog rastvora skroba dodajte kristalnog NaCl do punog zasićenja i
konstatujte pojavu bijelog taloga. Talog skroba podijelite u dva dijela. Jednom dijelu dodajte
destilovane vode i konstatujte da se talog skroba rastvara, što znači da kolidni ratsvor skroba
spada u hidrofilne koloide.