articulos UTILIZACION DE LOS HONGOS DE LA PUDRICION BLANCA EN LA BIODEGRADACION DE CONTAMINANTES ORGANICOS Wilzon sone’, Manricio Arias’, Dora Patricia Restrepo y Fernando. Cardona Escuela de Procesos y Energia, Facultad de Minas, Universidad Nacional de Colombia, ‘Sede Medellin, Carrera 80 ##65-228 M+ 207, Facultad de Ciencias, Universidad Nacional de Colombia, Sede Medellin sFacultad de Arquitectura, Universidad Nacional de Colombia, Sede Medellin ‘email Ifeardon@unalmed edu.co” dprestre@unalmed edu.co! Palabras clave: Hongos de In pudrici6n blanca, enzimas lignolttieas,biorremedacién, contaminantes organics. Resumen Este articulo se revisen aspectos generales de Ia degradacién enzimética de la lignina y del papel de los hhongos de la pudricién blanca en dicho proceso. Adem, se discute el potencial de estos hongos para la Aestoxificacion y aprovechamiento de algunos residuos agvicoles y su uso en la biorremediacién de suclos contaminados con hidrocarburos arométicos policilicos, pesticidas y otros contaminates, BIODEGRADACION DEL COMPLEJO LIGNINA- (CELULOSA-HEMICELULOSA, 1a lignina-celulosa-hemicelulosa constituye la parte fundamental de Ia pared celular de las plantas y de algunos sustratos lignocelulésicos derivados de la agricultura. La lignina es un complejo que por hidrélisis| gen cumarilco, coniferilico y sinapilieo, y forme parte de los rboles provee Ia rigidex y Ia dureza caracteristicas de In madera sus precursores, los alcoholes fenélicos tallos de cereales y pastos lignificados y en los La lignina es un polimero natural com peso molecular de hasta 100 KDa 0 mls (Kastner 2000) y puede conformar 11 50% del complejo lignocelulésico de los Arboles. Es el compuesto aromitico més abundante, y después de la celulosa, es el compuesto orgénico més abundante del planeta, Debido a su estructura la lignina es altamence resistente y constituye una barrera al ataque microbiano. En general, solo los hongos de Ia pudricién blanca son cficientes degradadores de lignina (Griffin 1994). La celulosn es uno de los compuestos mis abundantes de la naturaleza, es el constituyente principal de las paredes celulares de la mayorfa de las plantas Puede estar presente en un estado relativamente puro Keywords: White-rot fungi, ligninolytic enzymes, Dioremediation, organopollutants Abstract “This review addresses lignin biodegradation and the role of the white rot fungi in this process, Furthermore the potential application of these fungi to improve the lise of some agricultural bioproduets as well as their use im soil bioremediation for mineralization of aromatic hydrocarbons, pesticides and other pollutants is also analyzed, ‘como en la celulosa dela planta de algodén, © en estrecha asociacién con muchos otros compuestos tales como las hemicclulosas y ligninas de la madera y, en general, de las fibras que forman parte de la pared celular de las plantas. Las hemiceluloss forman uno de los principales constitutivos de Tas eélulas vegetales y son_polisacéridos de la pared celular. Se distinguen dos tipo de polisacéridos en la hemicelulosas, unos con grupos Acido urénico (hemicelulosas potiurénicas) y ot¥os que no contienen caracteristicamente unidades de Acido urdnico, aunque pueden presentar algunos grupos carboxilicos en esa forma (eelulosan: hemicelulosas ha sido elucidada completamente solo en unos pocos casos (Gascoigne y Gascoigne 1960) El rompimiento de In celulosa y sus compuestos La composicién quimica de las ciadas 86 resliza en Ia naturalers por hidrélisis catalizada por cenrimas como las celulasas. Se considera que los hongos de Ia pudricién blanca son indiscutiblemente los mejores legradadores de lignina; degradan la madera mediante un ataque simultineo de la lignina y el complejo ccelulosa/hemicelulosa © degradando selectivamente mil lignina que polisacaridos (Kuhed y col, 1997). El hongo modelo para Ta degradacién de la lignina es Phanerochaete chryeonporium segiin Kirk (1984), pero también ya han sido 8 BioTecnologia Vol. 9 No. 1muy estudiadas otras especies como Phlebia radiata y Plenrotus eryngii(Akthar y eol, 1997; Hatalkka, 2001). Los hongos de la pudricion blanea son. Basidiomycetes, pertenecen a 1a division de los ‘Fumyeetes, y se caracterizan por producir sus esporas de forigen sexual sobre estructuras en forma de lava, denomninadas basidios. Estos hongos reciben ese nombre debido a que destignifiean la madera, degradando proferentemente a Ia lignina de la madera, por lo eual el sustrato queda de color claro y debido a la presencia del micclio blanco caracteristico de estos hongos, la madera termina de color blanco y con wn olor agradable Entre los hongos de la pudricién blanea hay géneros comestibles como Pleurotus y Lentinula edodes (shiitake), siendo también medicinales al igual que Ganoderma ¥ ‘Trametes, Yos cuales se pueden cultivar en sustratos lignocelulésieos. Algunas de las principales especies de hhongos de In pudricién blanca, son en orden alfabético: Bjerkandera adusta, Calocybe indica, Ceriporiopss sp (Poria), Criptopors volvetus, Daedaleopsis sp Rekinodontivm Linctorium, Ganoderma spp, Grifola frondosa, Heterobasiiam anosum, Hypholoma capnoides, Inonotus obliquas, pes actus, Kuelneromycer rmutabilis, Lentinula — edodes, Nematoloma frowardii, Oxiporus sp, Punellus mits, Phanerochacte chrysosporinon, Phellinus weir, P. ini Phlebia radiata, “Pholiota nameko, Pholiota squarrosa Pyenoporus cianabarinus, Pleurotus ostrautus, Plewrotus pulmonarius otras especies, Pobporns spp, Ryideporus sp, Stereum hiventon, Trometes: hirentus, Trametes versicolor (Coriolus), Trichaptum abictioun, Tricholomepsis ruilane 9 Tyromyers sp. A partir de ta década del 90 se comienza a documentar ampliamente que los hongas de la pudriei6n blanca son capaees de degradar una variedad de compuestos orginicos recalcitrantes como por ejemplo lignina, hidrocarburos policfclicos, compuestos clotinados entre otros, mediante Ia accién de varias enzimas lignoliticas, arométicos EL SISTEMA DE ENZIMAS LIGNOL{TICAS DE, LOS HONGOS DE LA PUDRICION BLANCA, Las tres enzimas extracelulares que participan en la degradacin de la lignina y que se conocen cominmente ‘come enzimas madifieadoras de lignina son: la ‘munganeso peroxidasa, la lignina peroxidasa y la Iaeasa articulos ‘La manganeso peroxidass (MMP, EC. 1.11,1.18) fae descubierta en 1984 y luego deserita por Gleen y Gold (1985). Su peso molecular varia de 98 a 62 KDa, Por ejemplo en Nematoloma frowardii, a manganeso peroxidasa es de +4 kDa; y su punto isoeléctrico varia entre (pH de 3 a 7}; pero usualmente alrededor de wn pl entre 3 y 4 Hofriehter 2002), En Nematoloma frosoardit 1 punto isoeléctrico es de 3.8 (Schneegass y col, 1997). La enzima la producen exclusivamente algunos Basidiomycetes es una peroxidasa extracelular que contiene el grupo hemo y requiere My*® en el sustrato, para oxidarlo a My’, que a su vez oxida anillos fendlicas a radicales fenoxil (Moilanen y col, 1996) Fl My"? resultante es altamente :=. vo y forma complejos con Acidos orgénicos quelantes como el oxalico @ el milico (Kishi y col, 1994), producidas por los hongos (Galkin y col, 1998), Con la ayuda de estos quelantes, los iones de (M,'® se estabilizan y se difimden en el sustrato, El sistema manganeso peroxidasa posee vn potencial redox: Inferior al de la lignina peroxidasa y oxida en forma preferencial los sustratos fendlicos (Vares 1996), El ciclo catalitico de esta enzima se inicia com la tunién de HO; a le enzima férvica reactiva, El H,O. es producida por el hongo usando otras envimas como glioxal oxidasa o aril alcohol oxidasa o por la MuP, durante la oxidacién de glutatién, NADPH y cide hidroximaleieo (Paszynski y col, 1985). El rompimiento del enlace oxfgeno-onigeno requiere de la cransferencia de dos clectrones del grupo hemo, lo cual da como resultado que el hierro del hemo quede activada (Fe) formando un complejo con I sustancia portadora del manganeso donador arrancéndole un, electrén, Como consecueneia se forma un ién My"? altamente reactivo en el complejo, capaz a su ver de oxidar otro ién Ma*. Se cierra asf el ciclo y la capacidad oxidativa de una molécula de HO, resulta en la formacién de 2 moléculas de agua y dos My" quelados que también a su turno, son eapaces de oxidar varios fenoles monoméricos y dimévicos, lo mismo {que dcidos earboxilicos, tioles y deidos grasos insaturados formando radicales. También se ha demostrado que el manganeso My? quelado adecuadamente es eapaz de oxidar compuestes modelos de lignina en ausencia de la enzima (Kishi y col. 199% Wariishi y col, 19 Hoftichter 2002; Forrester y col, 1988), La enzima MnP se ha usado i wiro en sistemas Tires de células y ha demostrado su eapacidad para degradar lignina’ (Hofrichter_y Fakoussa 2001), BioTecnologia Vol. 9 No.1 9cloroligninas (Lackner y col, 1991), compuestos de lignina’ sintética (Wariishi y col. 1991) sustancias Inimicas de coke, sustancias hiimieas sintetivadas a partir de slorofenoles, compuestos arométicos nitrogenados y cal, nilén, hidrocarburos aromiticos polictelieos, agentes de guerra que contienen arsénico (Fritsche y col, 2000) Por otra lado, Ia lignina peroxidasa (LiP, EC 1.11.14) es una peroxidasa extracelular que contiene un grupo hemo y es dependiente de 11.0., tiene un potencial redox iousualmente alto y un pH 6ptimo bajo (Gold y Alic 1893), muestra poca especificidad hacia Tos sustratos y degrada una variedad de ligninas y otros compuestos (Barr y Aust 1994). Fue descubierta un poco antes que Ia MnP. Oxida preferiblemente anillos_aromiticos metoxilados sin un grupo fendlico libre, tl como el compuesto modelo dimetoxibenceno (Kersten y col, 1990). El rampimiento de los enlaces entre los Cay CB (Cos carbonos mis cereanos al anillo) es catalizado preferenter fenélicos (Kuhad y col, 1997). Las ligninasas oxidan los sustratos por pasos de oxidacion de un clectrén con Ia formacién de un radical eatibnieo intermediario, lente en modelos de lignina en compuestas no Por iiltimo, la laeasa (Lac, EC 110.32) es una fenoloxidasa que contiene cobre y no requiere H,O., pero ‘emplea oxigeno molecular {Thurston 1994). La enzima es producida por las plantas, mohos y algunas levadoras, y también por bacterias, No se ha encontrado en Phaverochacte chrysosporium (Kirk y Farrell 1987), El peso molecular de las lncasas de los Basidiomycetes varia entre 50 ¥ 70 KDa, siendo un poco més pequeno que el de las plantas (Yaropolov y col, 1992) y el punto isoeléetrico se encuentra en el rango de pl de 9 a 4 (Ifatakka 1994), Como en el caso de la MnP, Ia lacasa prefiere los compuestos de lignina con un grupo fenélico libre © igualmente forma radicales fenoxil que reducen el foxigeno a agua durante Ta oxidacién de sustratos fendticos creande un radical libre, el eual puede ser ligado un radical eatiénico de un carbone central formada en una reaccién de Ia enzima MnP (Kersten y col, 1990). ‘También es capaz, en presencia de intermediarios deseables como ABTS (2, 2’azinobis [Setilbenzotiazolina- ‘-sulfanato]) o HBT (hidroxibenzotriazol), de hidrolizar compuestos no fendlicos y alcohol de veratrilico (Collins xy Dobson 1997). articulos BIODEGRADACION POR HONGOS DE LA PUDRICION BLANCA DE COMPUESTOS: ORGANICOS DE ORIGEN AGRICOLA E INDUSTRIAL, Cominmente los procesos de biorremestiacién disponibles @ nivel comercial utilizan bacterias, Sin embargo, recientemente se han res \gunas pruchas {que utilizan los hongos de la pudricién blanea en procesos de biorremediacién de sustancias —recaleitrantes, ‘Comparades con las bacteria, los hongos de Ta pudrieién bblanca tienen la ventaja de poder oxidar una mayor diversidad de compuestos, como por ejemplo los hidrocarburos arométicos policiclicos (HAP) de alto peso ‘molecular. La naturaleza extracelular de las enzimas ‘maodificadoras de lignina y los intermediarios de bajo peso molecular pueden mejorar la disponibilidad de los ‘contaminantes para los hongor de la pudricién blanca en situaciones donde las bacterias con no tienen acceso a los contaminantes. Lad eataholismo de los contaminantes entre las baeterias y los hhongos de la pudrieién blanea es que las bacterias utiizan, sustancias orgénicas contaminantes como fuentes de fenergia y de earbono y/o nitrégeno, mientras que los hongos de Ia pudricién blanca oxidan el sustrato uitlizando Ins envimas modificadoras de lignina, sin obtener una ganancia neta de energia. Por lo anterior para el metabolismo primario los hongos necesitan una fuente de C y N adicional. Por ultimo, la desventaja que tienen tos hongos de Ta pudricién blanca respecto a Tas Dacterias es que presentan un metabolismo aerobio obligado, mientras que las bacterias pueden transformar ciertoscontaminantes bajo condiciones aerdbieas, ica y microserofilicas, A continuacion se presenta una revisién de varios tipos de compuestos ferencia ms importante en el orginicos recaleitrantes que pueden ser biodegradados por los hongos de la pudricién blanca. Residuos agricolas Muchos desechos agricalas como In pulpa de café caseatilla de algodén, easearilla de arro7, eapacho de cova, pastos lignificades, tamo de cereales, cortezas de arboles, easearas de frutos, entre otros, son complejos lignocelulésicos que por su diffeil biodegradabilided tienen poco valor nutritive para animales y son poco cficientes para ser utilizados coma abonos, Por To que se convierten en fuentes contaminantes det ambiente y en su mayorfa son quemados para poderlos incorporar al suelo Mediante e1 empleo de los hongos de La pudricién blanca se logra una mayor biodegradabilidad de estos desechos 10 BioTecnologia Vol. 9 No. 1