ESPECTROFOTOMETRÍA ULTRAVIOLETA Y PH DE MUESTRA DE VAINILLINA

1
Eduardo Rodríguez: 20152150024, 2Sandra Milena Hurtado Bocarejo 20152150031, 3Yuly Andrea
Pirazan 4Jonnathan Valvuena Diaz 20161150016
3
Giovanna Granados.
Universidad Distrital Francisco José de Caldas
1,2
Estudiante Análisis Químico Instrumental, 3Profesora

RESUMEN: Se realizó el siguiente informe con el objetivo de cuantificar una muestra de

vainillina por medio de espectrofotometría UV y analizar el efecto del pH por medio del
espectro de absorción de una muestra de vainillina. Para ello se hizo una curva de calibración
de la vainillina permitiendo reflejar sus puntos máximos que ayudaran a realizar los diferentes
procedimientos de los análisis. Se logró identificar durante la práctica que a partir de los datos
que se tomaron con respecto al máximo encontrado donde se realiza una curva de ringbom en
la cual nos indica el rango de menor error fotoeléctrico. Por último se identifica el cambio del
pH puede ocasionar diferentes efectos en las curvas.

PALABRAS CLAVES: pH, Absorción, Curva De Ringbom, Espectrofotometría UV.

ABSTRACT: He was the next report in order to quantify a sample of vanillin by UV

spectrophotometry and analyze the effect of pH by means of the absorption spectrum of a
sample of vanillin. This became a calibration curve of the vanillin allowing reflect their
maximum points that would help perform various analyses. You were identified during that
practice from the facts that were taken regarding found maximum where is a curve of ringbom
which tells us the lesser photoelectric error range. Finally identifies the change in pH can cause
different effects on the curves.

KEYWORDS: pH, Absorption, UV Spectrophotometry, Ringbom Curve.

INTRODUCCIÓN: presentes en el compuesto. Debido a ello, la

1.1ESPECTROMETRÍA ULTRAVIOLETA
La espectroscopía UV-Vis está basada en el
proceso de absorción de la radiación
ultravioleta-visible (radiación con longitud de
onda comprendida entre los 160 y 780 nm)
por una molécula. La absorción de esta
radiación causa la promoción de un electrón a
un estado excitado. Los electrones que se
excitan al absorber radiación de esta
frecuencia son los electrones de enlace de las
moléculas, por lo que los picos de absorción
se pueden correlacionar con los distintos tipos
de enlace
espectroscopía UV-Vis se utiliza para la
identificación de los grupos funcionales
presentes en una molécula. Las bandas que
aparecen en un espectro UV-Vis son anchas
debido a la superposición de transiciones
vibracionales y electrónicas.
1.1.1 Ley de Beer-Lambert
Dependiendo del tipo de enlace que
consideremos como cromóforo la excitación
electrónica que puede observarse es:
Absorbancia = ε·l·c
Dónde: ε = Coeficiente de extinción molar, es En este caso es utilizado el espectrómetro
una constante relacionada con el área de Shimadzu UV 1800
incidencia del cromóforo y la probabilidad de LONGITUD DE ONDA: 190 nm-1100 nm
que produzca la absorción. ABSORBANCIA: -4.0- 4.0
l = recorrido en cm de la radiación a través de SISTEMA ÓPTICO: Doble haz con ancho
la muestra de banda de 1 nm.
c = concentración de la muestra en
moles/litro
Consideraremos que cuando ε es inferior a
10000 esa absorción se debe a una transición
electrónica prohibida por las reglas de
selección.

Cuando la radiación incide sobre una

sustancia no toda ella se ve afectada por la
misma; al átomo o conjunto de átomos que
absorben radiación se le denominaba
cromóforo. En las moléculas existen también
átomos o grupos de átomos que no absorben
radiación, pero hacen que se modifique
alguna de las características de la absorción
del cromóforo, se denominaban a tales grupos
auxocromos.
Los espectros de absorción se miden
mediante un instrumento denominado
espectrómetro.
Estos instrumentos constan de una fuente de
luz “blanca” caracterizada por un espectro de
emisión continuo en un intervalo amplio de
longitudes de onda (en nuestro caso 325 nm-
900 nm) y de un monocromador que actúa
como filtro óptico transmitiendo un haz de
luz de longitud de onda fija λ e intensidad I0.
Este haz de luz penetra en la cubeta de
análisis donde se encuentra la muestra. Un
detector sensible a la luz mide la intensidad
del haz a la salida If.
Imagen 2. Espectrofotómetro Shimadzu UV 1800
En las tomas de absorción de las muestras
que se analizan hay una gran cantidad de
factores que originan variaciones en los
valores de λmax y εM, entre los que se
incluye el pH, la polaridad del solvente o
moléculas vecinas y la orientación de los
cromóforos vecinos; y cada uno afecta de
forma particular. Por ejemplo, variaciones
originadas por cambios de pH son debidas al
efecto de éste sobre la ionización del
compuesto.
METODOLOGIA:
Cuantificación De La Vainillina
(Espectrofotometría Uv)
Se agregó 5 ml de agua destilada en un
embudo de decantación, y de igual manera
0.5 mL de esencia. Se agregó 5 mL de
cloroformo y se agitó suavemente, se repitió
la extracción con 2.5 mL. Permitiéndose que
se separaran las dos capas y se posterior a
esto se dreno la capa orgánica en un
erlenmeyer.

Imagen 1. Componentes de un espectrofotómetro. Tomado de:

https://www.upo.es/depa/webdex/quimfis/docencia/quimbiotec/
FQpractica4.pdf
Se repitió el proceso de extracción de la Segunda parte:
solución acuosa dos veces más con porciones Blanco: solución de NaOH 0.1M
de 5 mL de cloroformo y se combinó todos
los extractos orgánicos en el erlenmeyer. Longitud onda: 340 y 380nm
Solución patrón de vainillina en NaOH 0.1 M
Se transfirió la capa orgánica al embudo de (20 mg/mL).
decantación y se agregó cuidadosamente 15
mL de NaOH 0.1 M agitando. Se llevó a cabo
la separación de la capa acuosa y colóquela
en un balón aforado de 50 mL. Extrayéndose
dos veces más la capa orgánica con porciones
de 15 mL de NaOH 0.1M. Se transfirió las
soluciones acuosas extraídas al balón aforado
y completando a volumen con NaOH 0.1M.
Se tomó una alícuota de 0.5 mL de esta Tabla 2. Absorbancia de diluciones a partir de
solución y diluyendo a 25 mL con NaOH solución patrón de vainillina
0.1M en balón aforado.

En la segunda parte de esta sesión, a partir de

una solución patrón de vainillina en NaOH
0.1 M (20 g/mL), se preparó diluciones de
concentración 1, 2, 3, 4, y 5 g/mL de vainilla
en balones aforados de 10 mL con NaOH 0.1
M.

RESULTADOS Y ANALISIS DE Gráfico 2. Curva de calibración de diluciones crecientes de

muestra patrón de vainillina
RESULTADOS

CONCENTRACIÓN
ABSORBANCIA (ug/mL)
0,161 20
0,101 10
0,087 5
0,065 4
0,056 3
Gráfico 1. Espectro de solución de vainillina preparada 0,042 2
0,025 0
Se obtiene una longitud de onda máximo en ‘‘Tabla # 1 – Absorbancias vs Concentración
346 nm con una absorbancia de 0.5855. Se Vainillina Longitud De Onda 380 ’’
observa que a una longitud de onda de 220
nm no se realiza la lectura de absorbancia,
debido a que en esta toma se genera un ruido
en el espectro.
 valor aceptado al contener como ingrediente
sabor artificial perteneciendo a la
clasificación 3 con un contenido menor de
1% p/p de vainillina.

VAINILLINA (4-HYDROXY-3-
METHOXYBENZALDEHYDE)

Molecular Formula: C8H8O3

Molecular Weight: 152.149 g/mol

‘‘Curva De Calibración De Diluciones Crecientes

De Muestra Patrón De Vainillina’’

Cálculo de épsilon en muestra de vainillina

y = mx + b
y = 0,1923x + 0,1442
m= pendiente o absortividad molar E
E: 0,1923 cm-1 M-1
Cálculo de la concentración de la muestra
problema: Gráfico 3. Espectro de vainillina en metanol según teoría

0,470 − (0,1442) Según la literatura se presenta una

𝐶= absorbancia máxima a 345 nm cuando la
(0,1923)(1)
vainillina se encuentra en un solvente como
𝐶 = 1.69 µ𝑔/𝑚𝐿
el metanol.
2.3.2. COMPARACIÓN DE TEÓRICA
Clasificación de contenido de vainillina
VS. EXPERIMENTAL
Categoría Extractos de vainilla natural (1,7 – 2,3)%
Se determinó cuantitativamente el contenido 1 vainillina)
de vainillina contenida en la esencia sabor a Categoría Productos de vainilla- vainillina saborizante
vainilla de la marca Levapan, mediante un 2 natural artificial ( 1,0 -1,7)%
proceso de extracción liquido –líquido que Categoría Saborizantes de vainillina artificial (< 1)%
3
implica trasferir un soluto de la fase de un
primer solvente a la fase de un segundo
solvente teniendo presente que los dos sean
inmiscibles entre sí; para este procedimiento
se emplearon cloroformo e hidróxido de
sodio.

De acuerdo al proceso de extracción realizado

se obtuvo un contenido de vainillina
determinado el equipo Shimadzu de 0,68 Gráfico 4. Vainillina en NaOH según teoría. Tomado de:
udlap Universidad de las Américas Puebla de México
%p/p resultado que se encuentra dentro de un
Gráfico 5. Espectro de solución preparada de vainillina en
NAOH
Se observa según espectros tanto teórico
como experimental, que se tiene una longitud
de onda máxima de 346 nm (experimental) y
350 nm aproximadamente (teórico) que se
muestra en un solvente básico en este caso el
NaOH, se identifica que un porcentaje de
error en la longitud onda que es igual a 1,14%
2.3.3. BARRIDO DE LA VAINILLINA
Gráfico 6. Espectro de vainillina en NAOH 0.1M (O.5 ug/ml).
Con respecto al espectro realizado en medio
básico (NAOH 0.1 M)
Tabla 3. Desviación estándar de las absorbancias tomadas
correspondientes a las concentraciones.
A partir de la desviación estándar se tiene que
el mayor dato se encuentra en la
concentración máxima tomada, es decir se
encuentra mayor dispersión en
concentraciones altas.
2.3.4 CURVA DE RINGBOM
Gráfico 7. Curva de Ringbom de muestra de vainillina.
Se observa según la curva de Ringbom que
cuando la absortancia se acerca a cero y a 1,
es decir cuando las concentraciones son bajas
y altas los ejes se aproximan asintóticamente,
la pendiente se aproxima a cero y el error
relativo a la concentración tiende a infinito.
Esto se da, debido a que a concentraciones
bajas la concentración no se puede diferenciar
de otra más baja, y en concentraciones altas,
el soluto deja de ser soluto para ser solvente
es decir, el método no permite una
transmitancia efectiva.
CONCLUSIONES: ● Curva de vainillina en NaOH Abs vs
Longitud de onda. Universidad de las
● Por medio de la curva de Ringbom y Américas Puebla de México
la curva TWYMAN-LOTHIAN, se (UDLAP)
obtiene un rango de mayor linealidad
de 20-60%T (0.69-0.22 A) y el punto ● Curva de vainillina en metanol Abs
de inflexión (menor error vs Longitud de onda.
fotométrico) se encuentra en espectrabase.com
35.39%T (0.4511 A).

● Por la linealidad las gráficas de

Ringbom, permite una visualización
directa del rango donde es menor el
error fotométrico, y se utiliza la curva
de Twyman Lothian para confirmar
el rango donde es menor el error
fotométrico y el error relativo a la
concentración.

● A partir de la espectrofotometría
ultravioleta se logra identificar la
concentración de la vainillina por ml
y la absorbancia promedio que esta
tiene la cual es 0.58, ya que la gráfica
arrojada por el equipo Shimadzu
permite identificar un máximo de la
curva de la vainillina permitiendo
realizar el experimento 2 a diferentes
concentraciones pero con el máximo
de absorbancia el cual fue de 346 nm

5. BIBLIOGRAFÍA

● Universidad de Alicante.
Espectroscopia ultravioleta visible.
https://sstti.ua.es/es/instrumentacion-
cientifica/unidad-de-rayos-x-de-
monocristal-y-espectroscopias-
vibracional-y-optica/espectroscopia-
ultravioleta-visible.html (accessed
May 2018).