3.1.2. TÉCNICA DE ENZIMOINMUNOANÁLISIS HETEROGÉNEA (ELISA).

En la técnica ELISA, la actividad enzimática no se modifica si la enzima se encuentra lijada a la fracción

libre o a los complejos inmunes, ya que la enzima es activa tanto si se encuentra fijada a la fracción libre o a
los complejos. La formación de los complejos inmunes no inhibe la actividad de la enzima. En esta técnica, se
emplea principalmente un soporte sólido para la separación de los complejos de la fracción libre.

Técnica ELISA competitiva empleando antígenos marcados con la enzima.

Esta técnica ELISA consiste mezclar una cantidad conocida y suficiente de antígeno marcado con el
trazador con la muestra que contiene el antígeno problema. Esta mezcla se enfrenta a una cantidad conocida e
insuficiente de anticuerpo testigo que se encuentra fijado a un soporte sólido, de modo que se establece una
competencia entre los antígenos para forman complejos inmunes con los anticuerpos fijados al soporte sólido.
La fracción que no ha fijado al soporte sólido se elimina mediante lavados y se añade un sustrato que es
transformado por los complejos inmunes. Así, la concentración de la sustancia a investigar es inversamente
proporcional a la coloración medida.

Técnica ELISA competitiva empleando anticuerpos marcados con la enzima o de inhibición.

Esta técnica ELISA consiste mezclar una cantidad conocida e suficiente de antígeno testigo que se
encuentra fijado a un soporte sólido con la muestra que contiene el antígeno problema. Esta mezcla se enfrenta
a una cantidad conocida e insuficiente de anticuerpo testigo marcado con el trazador, de modo que se establece
una competencia entre los antígenos para forman complejos inmunes con los anticuerpos. La fracción que no
ha formado complejos se elimina por lavado y se añade un sustrato que es transformado por los complejos
inmunes. Así, la concentración de la sustancia a investigar es inversamente proporcional a la coloración
medida.
Técnica de inmunoensayos mediado por enzimas con anticuerpos acoplados a partículas (AMETIA).

En la técnica AMETIA, el antígeno testigo marcado con la enzima, además, está unido a una molécula de
biotina o vitamina B8 y en el soporte sólido se encuentra fijada una molécula de avidita. Las moléculas de
biotina y avidita únicamente se unen cuando el antígeno testigo marcado con la enzima se encuentra como
fracción libre.

La técnica AMETIA consiste mezclar una cantidad conocida e suficiente de antígeno testigo marcado con la
enzima y unido a la biotina, con la muestra que contiene el antígeno problema y con una cantidad conocida e
insuficiente de anticuerpo, de modo que se establece una competencia entre los antígenos para forman
complejos inmunes con los anticuerpos. La mezcla se enfrenta al soporte sólido que contiene la avidita y
únicamente se une la fracción libre de antígeno marcada con la enzima. La fracción que no ha formado
complejos se elimina por lavado y se añade un sustrato que es transformado por la enzima. Así, la
concentración de la sustancia a investigar es inversamente proporcional a la coloración medida.
Técnica ELISA no competitiva enzimoinmunométrica.

La técnica ELISA enzimoinmunométrica consiste mezclar una cantidad conocida y suficiente de anticuerpo
marcado con la enzima con la muestra que contiene el antígeno problema, formándose complejos inmunes y
quedando una fracción libre de anticuerpos marcados. Esta mezcla se enfrenta a una cantidad conocida y
suficiente de antígeno testigo que se encuentra fijado a un soporte sólido, de modo que se forman complejos
inmunes entre la fracción libre de anticuerpos marcados y los antígenos fijados al soporte sólido. La fracción
que no ha fijado al soporte se elimina por lavado y se añade un sustrato que es transformado por los complejos
inmunes. Así, la concentración de la sustancia a investigar es inversamente proporcional a la coloración
medida.

Técnica ELISA no competitiva tipo sándwich de anticuerpo.

Esta técnica ELISA consiste mezclar una cantidad conocida y suficiente de anticuerpo testigo que se
encuentra fijado a un soporte sólido con la muestra que contiene el antígeno problema, formándose complejos
inmunes. Posteriormente se añade una cantidad conocida y suficiente de anticuerpo marcado con la enzima y
dirigida contra el antígeno problema. La fracción que no ha fijado al soporte se elimina por lavado y se añade
un sustrato que es transformado por los complejos inmunes. Así, la concentración de la sustancia a investigar
es directamente proporcional a la coloración medida.

Técnica ELISA no competitiva tipo sándwich de antígeno.

Esta técnica ELISA consiste mezclar una cantidad conocida y suficiente de antígeno testigo que se
encuentra fijado a un soporte sólido con la muestra que contiene el anticuerpo problema, formándose
complejos inmunes. Posteriormente se añade una cantidad conocida y suficiente de anticuerpo marcado con la
enzima y dirigida contra el anticuerpo problema. La fracción que no ha fijado al soporte se elimina por lavado y
se añade un sustrato que es transformado por los complejos inmunes. Así, la concentración de la sustancia a
investigar es directamente proporcional a la coloración medida.