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Universidad Nacional Autónoma de México
Facultad de Estudios Superiores Zaragoza

Anteproyecto para la determinación de porcentaje de contenido de clorhidrato de
fenazopiridina en tabletas de 100 mg del lote 7E776 del fabricante MAVI por
espectrofotometría visible mediante curva estándar
Grupo: Laboratorio : L-402 Fecha de emisión: Página 1 de 26

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OBJETIVO:
Determinar el porcentaje de contenido de clorhidrato de fenazopiridina en tabletas de 100
mg del lote 7E776 del fabricante MAVI por espectrofotometría visible mediante curva
estándar.
HIPÓTESIS:
Contiene no menos del 95.0% y no más del 105.0% de la cantidad de C11H11N5HCL según
la Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos 11ª ed.
MARCO TEÓRICO:
Espectrofotometría
Fundamentos de la técnica:
La espectrofotometría es uno de los métodos de análisis más usados, y se basa en la

relación que existe entre la absorción de luz por parte de un compuesto y su concentración.
Cuando se hace incidir luz monocromática (de una sola longitud de onda) sobre un medio
homogéneo, una parte de la luz incidente es absorbida por el medio y otra transmitida,
como consecuencia de la intensidad del rayo de luz sea atenuada desde Po a P, siendo Po
la intensidad de la luz incidente y P la intensidad del rayo de luz transmitido. Dependiendo
del compuesto y el tipo de absorción a medir, la muestra puede estar en fase líquida, sólida
o gaseosa.
En las regiones visibles y ultravioleta del espectro electromagnético, la muestra es

generalmente disuelta para formar una solución.
Cada sustancia tiene su propio espectro de absorción, el cual es una curva que muestra la
cantidad de energía radiante absorbida, Absorbancia, por la sustancia en cada longitud de
onda del espectro electromagnético, es decir, a una determinada longitud de onda de la
energía radiante, cada sustancia absorbe una cantidad de radiación que es distinta a la que
absorbe otro compuesto (Fig. 1)
¿Qué es luz?
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Josefina Guadalupe Alma Delia Camarillo
Montserrat Cartagena Rivera
Contreras Fuentes Montesinos
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La luz consiste en pequeños paquetes de energía llamados fotones, que se propagan con
movimiento ondulatorio, del que cada onda consiste en desplazamientos eléctricos y
magnéticos además de que puede caracterizarse por las cantidades de onda, longitud y
energía. Tiene doble naturaleza corpuscular (porque la luz está constituida por pequeñas
partículas, llamados fotones) y de onda (porque viajan en las tres direcciones del espacio
con movimiento ondulatorio).
Las ondas de la luz constan de campos eléctricos y magnéticos que oscilan en planos
perpendiculares entre sí. La longitud de onda, λ, es la distancia entre las crestas
adyacentes (o dos valles) de dos ondas. La frecuencia, ν, es el número de oscilaciones
completas de una onda en un segundo, la unidad de frecuencia es el inverso de los
segundos, s-1. La relación entre frecuencia y longitud de onda es:
νλ = c
Donde c es la velocidad de la luz (2,998 x 108 m/s en el vacío).
En un medio distinto al vacío, la velocidad de la luz es c/n, donde n es el índice de

refracción de ese medio.
Respecto a los fotones cada uno transporta energía, E, dada por la relación entre energía y
frecuencia:
E = hν
Donde h es la constante de Planck (6,626 x 10-34 J*s)
Combinando las ecuaciones anteriores se tiene:
E= = hcṽ
Donde ṽ (= 1/λ) se llama número de onda.
La energía es inversamente proporcional al número de onda, la unidad de SI del número de

onda es el inverso del metro m-1.
Un ciclo de una onda es la parte más pequeña de una onda que se repite, y que consta de
un ciclo positivo y uno negativo. A un ciclo de onda también se le denomina forma de onda.
Los ciclos de todas las ondas empiezan en cero y terminan en cero. En el medio también
pasa por cero, y es cuando pasa de signo positivo a negativo.
Al tiempo que dura un ciclo se le denomina periodo, y es lo opuesto de la frecuencia, y se

mide en segundos por ciclo, aunque normalmente se sobreentiende el ciclo y se habla sólo
de los segundos (o una fracción de éstos, tal como milisegundos o microsegundos.)
Por lo tanto cuanto menor sea la longitud de onda y mayor sea la frecuencia, más
energética será la radiación y por tanto más peligrosa; cuanto mayor sea la longitud de onda
y menor sea la frecuencia, menos energética será la radiación y por tanto menos peligrosa.
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Radiación electromagnética y espectro electromagnético.
Las radiaciones electromagnéticas pueden definirse como aquellos procesos en los que se
emite energía bajo la forma de ondas o partículas materiales y pueden propagarse tanto a
través de un medio material como en el vacío. Se diferencian unas de otras en el valor de
su frecuencia. Cuanto mayor es la frecuencia de una radiación, mayor es su energía. Las
radiaciones electromagnéticas se clasifican mediante el espectro electromagnético de
frecuencias:
Las radiaciones de alta frecuencia (superior a 1017 Hz) son ionizantes y cuando
interaccionan con la materia producen la ionización de los átomos de la misma, es decir,
origina partículas con carga (iones). Las radiaciones no ionizantes, de menor energía, no
son capaces de ionizar la materia.
Estas regiones ordenadas de mayor a menor energía son:
 Rayos gamma (ϒ).

 Rayos x.
 Luz ultravioleta (UV).
 Espectro visible.
 Rayos infrarrojos (IR).
 Microondas.
 Ondas de televisión.
 Radiodifusión.
Figura 2: Espectro electromagnético.
Teoría de orbital molecular:
La teoría del orbital molecular dice que cuando dos átomos forman un enlace químico,
electrones de ambos átomos participan en el enlace y ocupan un nuevo orbital; un orbital
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molecular. Los orbitales atómicos de los átomos que se enlazan se combinan para formar
un orbital molecular de enlace de baja energía y un orbital molecular de antienlace de alta
energía. Los enlaces covalentes pueden ser σ (sigma) o π (pi). De acuerdo a la teoría del
orbital molecular, a cada orbital de enlace σ le corresponde un orbital de antienlace σ*; y
cada orbital de enlace π debe tener un orbital de antienlace π*. Los electrones de valencia
que nos participan en enlaces químicos, se les conoce como electrones de no enlace o
electrones n. La absorción de radiación ultravioleta visible promueve transiciones
electrónicas σ→σ*, n→π* y π→π*.
Figura 3: Diagrama de energía de orbitales moleculares.
Ley de Lambert:
Esta ley establece que cuando pasa luz monocromática por un medio homogéneo, la
disminución de la intensidad del haz de luz incidente es proporcional al espesor del medio,
lo que equivale a decir que la intensidad de la luz transmitida disminuye exponencialmente
al aumentar aritméticamente el espesor del medio absorbente.
Figura 4: Ley de Lambert
La siguiente relación matemática da cuenta de esta ley: P / P0 = e –kb

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Donde:
P0: Intensidad de la luz incidente P: Intensidad de la luz transmitida b: Espesor del medio
absorbente
k: Constante, cuyo valor depende de la naturaleza del soluto, de la longitud de onda de la

luz incidente, del espesor del medio absorbente y de la naturaleza del medio.
Ley de Beer:
La intensidad de un haz de luz monocromática disminuye exponencialmente al aumentar

aritméticamente la concentración de la sustancia absorbente, cuando este haz pasa a
través de un medio homogéneo.
Figura 5: Ley de Beer.
La relación matemática que da cuenta de esta ley es la siguiente: P / P0= e -k’c
Donde:
P0: Intensidad de la luz incidente P: Intensidad de la luz transmitida
C: Concentración de la solución
k: Constante, cuyo valor depende de la naturaleza del soluto, de la longitud de onda de la

luz incidente, de la concentración de la solución, y frecuentemente, de la naturaleza del
medio.
Ambas leyes se combinan en una sola, generando la Ley de Lambert-Beer
log P0 / P = a b c ó A=abc
A = log P0 / P = - log T
Donde:
a: Absortividad b: Longitud o espesor del medio (longitud de la cubeta)
c: Concentración de la solución P/Po= T: Transmitancia
Los términos absorbancia y transmitancia son definidos a continuación

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Transmitancia (T): Es la razón entre la luz monocromática transmitida (P) por una muestra y
la energía o luz incidente (P0) sobre ella. Tanto la energía radiante incidente como la
transmitida deben ser medidas a la misma longitud de onda.
T = P/P0 = 10-abc ó %T = 100 P /P0
Se acostumbra a considerar la transmitida como la razón de la luz transmitida por la

muestra y la luz transmitida por un estándar arbitrario. Este estándar puede ser el líquido
(solvente) en que esta disuelta la muestra, aire, blanco analítico (solución que contiene
todos los componentes de la solución problema menos la sustancia problema) u otra
sustancia elegida arbitrariamente.
Debido a que la transmitancia de este estándar no es necesariamente 100%, es necesario

especificar el estándar con el cual la muestra es comparada.
Absorbancia(A): Se define como la cantidad de energía radiante absorbida por una

sustancia pura o en solución. Matemáticamente, corresponde al logaritmo negativo de la
transmitancia, transmitancia expresada como fracción decimal %T, transmitancia expresada
como porcentaje.
A =- log T = 2- log %T
Pero.
T = P / P0 = 10-abc
Luego.
A = - log (P / P0) = - log 10-abc
A=abc
Esta ecuación indica que la absorbancia es una función lineal de la concentración, donde a
es una constante de proporcionalidad llamada absortividad. La magnitud de a depende de
las unidades de b y c. Si la concentración c está expresada en
moles por litro y la longitud de la cubeta b en centímetros, la constante a recibe el nombre

de absortividad molar (ξ). Luego
A=ξbc
Mediciones de transmitancia y absorbancia.
Las mediciones de absorbancia o transmitancia se hacen por comparación entre la
muestra problema y un estándar arbitrario o referencia. Como la referencia debe poseer un

porcentaje de transmitancia de 100%, esta es llamada referencia de 100%, o una
absorbancia de cero.
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Ley de aditividad de las absorbancias:
Cuando se encuentran en disolución varias especies capaces de absorber a la misma

longitud de onda, estás actúan independientes una de la otra y la absorbancia resultante es
la suma de la absorbancia que cada especie absorbente tiene por separado bajo las
mismas condiciones.
A= A1+ A2+A3…...An
Desviaciones a la ley de Lambert y Beer:
Las desviaciones a la ley de Beer pueden ser verdaderas o aparentes. Las desviaciones
verdaderas se presentan cuando la concentración de la especie absorbente es tan alta que
cambia el índice de refracción de la radiación absorbida. A estas concentraciones también
aumenta la integración entre especies absorbentes afectando la distribución de carga y
modificando el proceso de absorción. El intervalo de concentraciones en el que se puede
aplicar Esta técnica es aproximadamente 10-2 M a 10-7M. El límite inferior es la menor
concentración que se puede medir.
Las desviaciones aparentes pueden ser debidas a limitaciones del aparato y equilibrios
químicos en los que participa la especie absorbente.
Las desviaciones debidas al equipo son variaciones indeterminadas del mismo y pueden ser
causadas por:
a) Radiaciones desviadas dentro del aparato que alcanzan el detector.
b) Cambios en la sensibilidad del detector.
c) Fluctuaciones de voltaje que afectan la fuente de radiación y el sistema detector

amplificador.
Los aparatos de doble haz eliminan la mayor parte de las causas de desviación debidas al
azar.
Qué es un espectro de absorción y para qué sirve:
Un espectro de absorción es un gráfico que muestra como varía A (o ε) al variar la longitud

de onda. Como en cada nivel electrónico de una molécula están sobrepuestos estados
vibracionales y rotacionales una transición electrónica puede también involucrar un cambio
vibracional así como rotacional, resultando en ello que los espectros de absorción sean
continuos en vez de estar formados por líneas como es de esperarse.
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La parte de una molécula responsable de la absorción de la luz se llama cromóforo. Toda

sustancia que absorbe luz visible aparece coloreada cuando transmite o refleja la luz (la luz
blanca contiene todos los colores del espectro visible). La sustancia absorbe ciertas
longitudes de onda de la luz blanca, y nuestros ojos detectan las longitudes de onda que no
se absorben. El color observado se llama el complementario del color absorbido.
Error fotométrico:
El error relativo dC/c que se comete al hacer una determinación se concentración se debe a
la incertidumbre en la respuesta del detector, despejando C de la ley de Beer se tiene:
C= logT
Como el coeficiente de absortividad molar y la longitud del paso óptico son constantes, la
incertidumbre en la concentración se debe al error dT en la transmitancia medida.
Diferenciando la ecuación anterior y dividiendo entre c se obtiene:
La ecuación anterior se puede expresar como:
Esta ecuación permite calcular el error relativo que se comete al hacer determinación
espectrofotométrica si se conoce la incertidumbre dT.
Figura 6: Error fotométrico.
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Se observa que a valores altos de transmitancia el error relativo es grande, debido a que el
poder radiante del haz incidente y el haz transmitido son parecidos. A transmitancias bajas,
llegan muy pocas radiaciones al detector por lo que también es grande el error relativo.
La mejor exactitud y precisión se obtiene cuando la transmitancia de la muestra está

comprendida entre 0.2 y 0.65 (Cuando se hace una determinación espectrofotométrica, de
ser posible, deberá ajustarse la concentración y/o la longitud de paso óptico para mantener
la transmitancia dentro de este intervalo)
Características instrumentales del espectrofotómetro:
Un espectrofotómetro es un instrumento para medir la transmitancia o la absorbancia de

una muestra en función de una longitud de onda determinada; también se pueden realizar
las mediciones de una serie de muestras en una sola longitud de onda. Estos instrumentos
se pueden clasificar en manuales o de registro, de simple o doble haz. En la práctica, los
instrumentos de un solo haz, por lo general se operan en forma manual y los instrumentos
de doble haz poseen el registro automático de los espectros de absorción, pero también es
posible registrar un espectro con los de un solo haz.
Cuidados de un espectrofotómetro:
El espectrofotómetro se debe encender unos 15 minutos antes de utilizarlo, para evitar

fluctuación en las lecturas.
La celda se coloca en el espectrofotómetro haciendo coincidir la marca con la del aparato y

sin llenar más de 2/3 partes de su capacidad total.
No debe tocarse con los dedos la parte inferior de las celdas y éstas deben limpiarse con un
pañuelo tipo kleenex, antes de realizar la lectura.
Debe revisarse periódicamente el funcionamiento adecuado del espectrofotómetro con la

prueba de calibración con el rojo de cresol.
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Figura 7: Diseño de espectrofotómetro de haz sencillo (A) y de doble haz (B)
Características instrumentales:
El espectrofotómetro está constituido por una fuente de energía radiante que emite
radiaciones ultravioletas visibles, un selector de longitud de onda que permite seleccionar la
longitud de onda deseada, una celda para la disolución, un detector de radiación que
convierte la energía radiante en una señal eléctrica mediante un medidor o registrador
Fuente de radiación:
Se necesita una fuente estable de radiaciones electromagnéticas que emiten un espectro

continuo en todas las longitudes de onda de la región ultravioleta o visible. Se requiere
además que estas fuentes de radiación proporcionen un haz de radiación es que tenga la
suficiente potencia para ser detectada y medida fácilmente.
Lámparas de hidrógeno y deuterio son las fuentes más comunes de radiaciones ultravioleta.
Consta de un tubo de vidrio con una ventana de cuarzo. El tubo contiene hidrógeno o
deuterio a baja presión y un par de electrodos. Cuando se aplica un voltaje entre los dos
electrodos el gas se ioniza y se produce un haz de electrones que excitan los electrones de
otras moléculas del gas a niveles de mayor energía. Cuando los electrones regresan a sus
estados no excitados emiten radiaciones con energías características dan próximas unas de
otras que la radiación emitida adquiere la forma de un espectro continuo de radiaciones en
la región comprendida entre 180 y 350 nm, que corresponden a la región ultravioleta del
espectro electromagnético.
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La fuente de radiación visible más utilizada es la lámpara de tungsteno consta de un

filamento de este material contenido en un tubo de vidrio. El filamento se calienta a
aproximadamente 2400°C mediante el suministro de corriente directa originando, cuándo la
lámpara se enciende, que los electrones salten a niveles de mayor energía y al volver a su
estado basal emiten radiación continua en la región que corresponde a la región visible.
Selectores de longitud de onda:
En la deducción de la ley de Beer se asume que el haz de luz incidente debe ser
monocromático. La radiación electromagnética que proviene de la fuente luminosa es
policromática, es decir, es radiación continua dentro de un amplio intervalo de longitudes de
onda por lo que es necesario el empleo de un selector de longitud de onda que permita
aislar la radiación deseada su función es separar la banda de radiación deseada.
Su función es separar la banda de radiación deseada del conjunto de radiaciones que

corresponden a la región ultravioleta visible, para hacerla pasar a través de una celda de la
muestra. Con este fin se utilizan filtros prismas y rejillas de difracción.
El ancho de banda efectivo, está definido como el intervalo de longitudes de onda en el cual
la transmitancia es al menos la mitad del valor máximo.
Filtros:
Los filtros permiten obtener las bandas de radiación deseada eliminando las demás
radiaciones por fenómenos de absorción o de interferencia.
Los filtros de absorción desdoblan la radiación absorbiendo ciertas longitudes de onda y

permitiendo el paso de otras, están constituidos por placas de vidrio coloreadas o bien por
un colorante suspendido en gelatina y colocado entre placas de vidrio con los filtros de
absorción se pueden obtener anchos de banda efectivos de 20 a 50 nm.
Los filtros de interferencia se basan en el fenómeno de interferencia óptica para producir

bandas estrechas de radiación (10 nm), están constituidos por un dieléctrico (CaF2 o MgF2)
contenido entre dos películas metálicas semitransparentes revestidas en las superficies
interiores de dos placas de vidrio. Cuando un haz perpendicular de radiación incide en el
filtro una fracción atraviesa la primera capa y el resto se refleja. La porción que se pasa
experimenta una partición similar al incidir en la segunda placa película metálica.
Si la porción reflejada en la segunda interacción es de la misma longitud de onda que la luz

incidente, se refleja parcialmente en el lado interior y se refuerza el haz de luz, mientras que
la mayoría de las otras longitudes de onda al estar desfasadas se anulan. El reforzamiento
ocurre al sobreponerse ondas de radiación dispersada que se encuentran en fase, es decir
Viajando en la misma dirección y el mismo tiempo.
Si la luz dispersada está desfasada las ondas se anulan sufriendo una interferencia
destructiva.
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Prismas:
Por el fenómeno de refracción los prismas separan bandas pequeñas de radiaciones que
salen a diferentes ángulos dependiendo de su longitud de onda. El desdoblamiento de la
radiación se debe a la dispersión del haz de luz por la variación del índice de refracción
cuando se pasa de un medio a otro de diferente densidad.
El ancho de banda efectivo de la radiación emergente depende del poder dispersor del
prisma. Los prismas son de forma triangular y de material transparente a las radiaciones de
la región que van a ser utilizados. Para dirigir una radiación de una longitud de onda
determinada a la celda que contiene la muestra se gira el prisma.
Rejillas de difracción:
Tienen una superficie aluminizada altamente reflejante sobre la que se han grabado un gran
número de canales paralelos equidistantes llamados líneas (600-200 por cm).
Cuando se hace incidir un haz de luz sobre la rejilla cada uno de los canales actúa como
una nueva fuente de radiación, por la dispersión producida por difracción al incidir la
radiación electromagnética en un borde agudo o por la reflexión al chocar con la superficie
aluminizada. En algunos casos el resultado es el mismo, la rejilla separa un haz de
radiación en las radiaciones componentes que se reflejan o difractan a diferentes ángulos o
direcciones. Haciendo girar la rejilla se vuelve se puede dirigir a la banda de radiaciones
deseadas a través de la celda muestra.
La dispersión del haz de radiaciones en sus longitudes de onda componentes, se debe a la

interferencia entre la multitud de haces que puede ser constructiva o destructiva.
Los anchos de banda efectivos de la radiación que emerge del prisma o de la rejilla de
difracción varían entre 1 y 35 nm.
Para aislar una determinada longitud de onda de la radiación dispersada por el prisma o la
rejilla de difracción, se giran estos hasta que la radiación de la longitud de onda deseada
quede enfocada hacia la rendija de salida.
El ancho de la rendija de salida es uno de los factores que determinan el ancho de banda
de la radiación que sale del monocromador, así con las rendijas angostas se separan
bandas angostas. La rendija de salida está constituida por dos piezas de metal maquinadas
cuidadosamente para obtener bordes agudos exactamente paralelos entre sí y que se
encuentran en el mismo plano.
Celdas:
La radiación electromagnética que atraviesa la rendija de salida incide posteriormente en la

celda que contiene la disolución de la sustancia cuya absorbancia a transmitancia se desea
medir. Las celdas deben ser transparentes a la radiación a utilizar por lo que el material de
las mismas varía dependiendo de la región del espectro que se vaya a trabajar, así para la
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región ultravioleta se utilizan celdas de cuarzo o sílice, mientras que en la región visible se
emplean celdas de vidrio o plástico. La longitud de paso óptico varía de 1 a 10 cm.
Las celdas pueden ser pueden tener diferentes formas, siendo las rectangulares y las
cilíndricas las más utilizadas.
La calidad de los datos de absorbancia depende de la forma en que se usan y mantienen

las celdas. Huellas dactilares, grasa u otros depósitos alteran las características de
transmisión.
Las celdas deben lavarse con agua y una disolución de ácido nítrico caliente si requieren
mayor limpieza, No deben secarse en estufa o a la flama pues esto puede causar daño
físico o un cambio en la longitud del paso óptico.
Detectores:
Los detectores ultravioleta visible transforman la radiación electromagnética en una

corriente eléctrica susceptible de ser medida los detectores más empleados son los
fototubos y los tubos fotomultiplicadores.
Fototubos:
Consisten en un tubo de vidrio al vacío con una ventana de cuarzo (cuando se usa en la
región ultravioleta) conteniendo un cátodo semicilíndrico cubierto con una superficie
fotosensible y un ánodo metálico. Su funcionamiento se basa en un fenómeno fotoeléctrico
en el que los fotones golpean la superficie del cátodo desprendiendo electrones que son
colectados por el ánodo.
Una señal electromagnética es transformada en una corriente eléctrica que se puede medir
fácilmente. La corriente producida es pequeña por lo que se debe por lo que se debe por lo
que debe ser amplificada.
Tubos fotomultiplicadores:
Constan de un cátodo similar al fototubo, una serie de superficies electrón activas llamados
dínodo y un ánodo. Repiten varias veces el fenómeno descrito para un fototubo, los
electrones desprendidos al chocar los fotones sobre la superficie fotosensible (cátodo) son
acelerados hacia otras superficies fotosensibles (dínodos) desprendiéndose varias veces
más electrones hacia el segundo dínodo y así sucesivamente.
El resultado final es que de este modo la corriente eléctrica es amplificada por un factor del
orden de 106 haciendo más fácil su medición.
La corriente eléctrica que sale del detector puede ser transformada en una señal de
potencial (E=iR) haciéndola pasar por una resistencia este potencial de entrada Ee y se
amplifica mediante una serie de operaciones electrónicas complejas obteniéndose un
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potencial de salida Es linealmente proporcional y varias veces mayor que el de entrada el

factor de amplificación se conoce como ganancia del amplificador (K)
E´= kE
Medidor:
La señal eléctrica generada por el detector y ya amplificada finalmente pasa por el medidor
para ser evaluada con esta finalidad se utilizan amperímetros y voltímetros.
El espectrofotómetro de un haz requiere para mediciones de alta precisión componentes de

alta calidad en la fuente, el detector y el amplificador.
Los parámetros de la calibración no deben fluctuar entre el tiempo del ajuste al 100% de
transmitancia con el blanco y la determinación de la transmitancia de la muestra no es
posible no es posible adaptarle un registrador porque necesitan calibrarse para cada
longitud de onda.
Calibración:
Una vez seleccionada la longitud de onda óptima (generalmente la de máxima absorción),

con el haz de luz bloqueado (obturador cerrado al paso de la radiación) se ajusta a 0% de
transmitancia. Usando una disolución blanco se ajusta el medidor a que de una lectura de
100% de transmitancia (P0 =100).
Realizados estos ajustes es posible efectuar la medición de una muestra.
Espectrofotómetro de doble haz:
En los instrumentos de doble haz el haz de radiación se divide antes de llegar a la celda de
muestra un as se dirige a través de la celda de referencia o blanco y el otro a través de la
muestra los dos haces son comparados continua o alternativamente muchas veces en un
segundo. Las fluctuaciones de la intensidad de la fuente la respuesta del detector y la
ganancia del amplificador son compensadas observando la diferencia de señal entre el
blanco y la muestra en estos equipos se utilizan medidores de punto nulo.
En la determinación de punto nulo se emplea un potenciómetro como fuente de potencial

variable Ev el potencial variable se opone al potencial de salida.
Espectrofotómetro con arreglo de diodos.
Poseen un sistema óptico nuevo e introduce en el concepto de la integración total del

espectrofotómetro, microprocesador de control y procesamiento de datos comparados con
espectrofotómetros convencionales, permiten obtener los datos espectrales
simultáneamente por no tener partes mecánicas móviles. Por lo anterior el beneficio más
obvio de su uso es la velocidad además de otras ventajas.
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Como consecuencia los espectrofotómetros, con arreglo de diodos pueden no sólo

reemplazar a los instrumentos convencionales en la mayor parte de las aplicaciones, sino
que las ventajas claramente lo hacen superiores en la mayor parte de los casos.
El arreglo de diodos consiste en una serie de detectores (fotodiodos) colocados uno junto a
otro sobre un cristal de silicio.
Cada diodo tiene un capacitor y es conectado por un interruptor de estado sólido a una línea
de salida común.
Inicialmente se cargan los capacitores a un nivel específico cuando los fotones penetran el
silicio se generan electrones libres que descargan los capacitores. Los capacitores son
recargados a intervalos regulares que representan el período de medición para cada ciclo
de barrido. La cantidad de carga necesaria para recargar los capacitores representa el
número de fotones detectados por cada diodo y es proporcional a la intensidad de radiación
electromagnética incidente. Midiendo la variación de la intensidad de radiación sobre todo el
intervalo de longitudes de onda se obtiene el espectro de absorción.
En el espectrofotómetro de arreglo de diodos las radiaciones electromagnéticas de la fuente

pasan a través de la muestra y son enfocadas a la rendija de entrada de un policromador. El
policromador dispersa la radiación es hacia un arreglo de diodos cada diodo mide una
banda estrecha del espectro ultravioleta visible
El policromador dispersa las radiaciones hacia un arreglo de diodos. Cada diodo mide una
banda estrecha del espectro ultravioleta visible el ancho de banda detectado por cada diodo
Se relaciona al tamaño de la rendija de entrada del policromador y el tamaño del diodo es

equivalente a la rendija de salida de un monocromador el policromador rendija de entrada y
rendija holográfica y el arreglo de diodos están fijos en una unidad que se conoce como
espectrógrafo.
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MÉTODO OFICIAL
Figura 8. Valoración de clorhidrato de fenazopiridina según la FEUM 11va ed. México; 1862,
1863.
CÁLCULOS:
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MÉTODO PROPUESTO:
 Preparación de solución patrón de clorhidrato de fenazopiridina para la
curva estándar
Tomar un papel glassine de aproximadamente 10x10 cm, doblarlo en forma de cucurucho
tomando una esquina y colocándola en la parte central del papel realizar la misma acción
con la esquina contraria a la ocupada al principio; colocar el papel sobre una balanza
analítica limpia previamente nivelada, esto significa posicionar la burbuja en el centro del
círculo (en la mayoría de las balanzas está situada en la parte de atrás) moviendo hacia la
izquierda o derecha los tornillos de ajuste según sea necesario, abriendo las puertas
laterales de la balanza se introduce el papel. Una vez situado el papel glassine en la
balanza se cierran las puertas y se procede a tarar la balanza, presionando el botón central
del instrumento, realizado esto se procede a abrir las puertas laterales nuevamente para
pesar el estándar 0.010 g; se toma el frasco del estándar con la mano izquierda a lado de la
puerta y con la mano derecha se toma una espátula de acero inoxidable de 15 cm de largo
situándose en la compuerta del lado correspondiente, para tomar la muestra se introduce un
poco tanto el frasco de la muestra como la espátula a la balanza analítica, con la espátula
se toma una mínima cantidad del estándar dejándolo caer poco a poco sobre el papel,
realizando esta acción hasta que en la pantalla digital aparezca una cantidad lo más
próxima al peso deseado. Llegado a este punto se sacan de la balanza el frasco con el
estándar y la espátula colocándolas a un lado, una vez realizado esto se cierran las puertas
esperando solo a que en la pantalla no haya cambios en la lectura del peso, cuando ocurra
esto se toma nota del peso en la bitácora.
En un matraz volumétrico de 10 mL, etiquetado como “disolución estándar 1”,colocar
aproximadamente 3 mL de agua inyectable con una piseta de 250 mL, una vez colocada el
agua se añade con precaución el estándar pesado previamente, evitando que es polvo se
caiga; añadido el patrón se agita un poco el matraz hasta disolverlo, cuando se haya
disuelto por completo el matraz es llevado a su marca de aforo con agua inyectable provista
de la piseta esto debe dar como resultado que el menisco de la disolución quede a la par de
la línea de aforo para que sea correcta la preparación de la disolución. Realizado esto se
coloca el tapón del matraz, procediéndose a agitar suavemente dando vuelta dos veces al
matraz mientras se sostiene la tapa. Este matraz se vuelve a destapar para tomar una
alícuota de 1 mL, la alícuota se debe tomar con una pipeta volumétrica de 1 mL a esta se le
introduce en la parte superior una propipeta, la cual se le debe expulsar el aire
presionándola y oprimiendo el círculo con la letra S, realizado lo anterior se introduce la
punta de la pipeta en el matraz volumétrico ya dentro del matraz se vuelve a presionar el
círculo con la letra S de la propipeta ocasionando que parte de la disolución ascienda por la
pipeta, se deja de apretar cuando el menisco del líquido está a la altura de la línea marcada
como aforo en la pipeta, este volumen tomado se traspasa a un matraz volumétrico de 50
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mL, etiquetándose como “disolución estándar 2”, colocando la pipeta dentro del cuello del
matraz y apretando en la propipeta la letra E, una vez expulsada toda la disolución de la
pipeta esta se retira; nuevamente el matraz es llevado a su marca de aforo con la piseta de
250 ml que contiene agua inyectable, procurando tener cuidado de llegar exactamente a la
línea indicada en el matraz; realizado esto se tapa el matraz con su tapón y nuevamente se
dan dos inversiones al matraz sujetando el tapón para homogeneizar la disolución. De esta
última disolución se tomaran tres alícuotas correspondientes a 2, 5 y 8 mL; esto se realizará
con pipetas volumétricas de 2,5 y 8 mL respectivamente, siguiendo el siguiente
procedimiento: colocar en la pipeta volumétrica de 2 mL la propipeta asegurándose de
expulsar el aire en su interior como se mencionó anteriormente, realizado esto se quita el
tapón del matraz e inmediatamente se introduce la pipeta hasta una tercera parte del
matraz, introducida la pipeta en la disolución se procede a succionar esta con la propipeta,
presionando la letra S, hasta que el menisco del líquido llegue a la línea de aforo, realizada
esta acción la pipeta se extrae del matraz (volviendo a colocar su tapón) y se introduce en
un matraz volumétrico de 25 mL, etiquetado como “disolución estándar concentración 1”,
estando dentro de dicho matraz el líquido es expulsado oprimiendo la letra E de la
propipeta, realizado lo anterior se retira la pipeta, después con la piseta de 250 mL provista
de agua inyectable se lleva a la marca de aforo adicionando el agua con el cuidado de llegar
exactamente a la línea de aforo el menisco de la disolución, hecho esto último se tapa el
matraz con su tapón y se realiza la misma operación de dos inversiones para homogeneizar
sujetando el tapón. Se sigues este mismo procedimiento para las alícuotas
correspondientes a 5 y 8 mL, pero tomándolas con la pipeta correspondiente según el
volumen requerido; al matraz donde se introducirá la alícuota de 5 mL se deberá etiquetar
como “disolución estándar concentración 2” mientras que a donde se introducirá la alícuota
de 8 mL deberá ser etiquetado como “disolución estándar concentración 3”. Esto para llegar
a las concentraciones de 1.776 μg/mL (alícuota de 2 mL), 4.44 μg/mL (alícuota de 5 mL) y
7.104 μg/mL (alícuota de 8 mL).
 Preparación de disolución para la muestra de Clorhidrato de fenazopiridina
tabletas de 100 mg
Tomar un papel glassine de aproximadamente 15x15 cm, doblarlo en forma de cucurucho
tomando una esquina y colocándola en la parte central del papel realizar la misma acción
con la esquina contraria a la ocupada al principio; colocar el papel sobre una balanza
analítica limpia previamente nivelada, esto significa posicionar la burbuja en el centro del
círculo (en la mayoría de las balanzas está situada en la parte de atrás) moviendo hacia la
izquierda o derecha los tornillos de ajuste según sea necesario, abriendo las puertas
laterales de la balanza se introduce el papel. Una vez situado el papel glassine en la
balanza se cierran las puertas y se procede a tarar la balanza, presionando el botón central
del instrumento, realizado esto se procede a abrir las puertas laterales nuevamente para
pesar; con una espátula de acero inoxidable de 15 cm de longitud se introducen y colocan
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sobre el papel glassine 5 tabletas de clorhidrato de fenazopiridina de 100 mg, realizado esto
se extrae la espátula para cerrar las puertas, se toma nota en la bitácora del peso reportado
por la pantalla digital de la balanza analítica cuando esta deje de tener fluctuaciones.
Al terminar lo anterior se realizan los cálculos necesarios para determinar la cantidad de
polvo de tabletas (excipiente y principio activo) a utilizar para ser pesados; teóricamente la
cantidad de fármaco que se requiere pesar son 10 mg, las tabletas previamente pesadas se
colocaran en un mortero chico para ser pulverizadas con el pistilo, cuando se tenga
pulverizadas las patillas se pesaran en la balanza analítica la cantidad necesaria para
obtener los 10 mg de principio activo (seguir procedimiento inicial para doblado de papel,
nivelación y tarar la balanza según lo mencionando anteriormente para pesar las tabletas),
ya teniendo el papel dentro de la balanza se procederá a pesar el polvo de tabletas, con una
mano se tomará el mortero y con la otra una espátula de acero inoxidable de 15 cm de
longitud, esto en las puertas laterales de la balanza, se irá añadiendo poco a poco con la
espátula el polvo de tabletas sobre el papel glassine hasta llegar a la cantidad aproximada
del peso requerido, teniendo esto se vuelven a cerrar las puertas laterales y se espera a
que el peso en la pantalla digital deje de sufrir variaciones, anotando en la bitácora el peso
obtenido.
Posteriormente se transfiere el polvo pesado a un matraz volumétrico de 10 mL rotulado
como “muestra problema disolución 1”, una vez colocado el polvo de tabletas en el matraz
se añade una mínima cantidad de agua inyectable con una piseta de 250 mL para
disolverlo, ya disuelto se agrega nuevamente agua inyectable hasta que se llegue el
menisco de la disolución a la marca de aforo, se coloca el tapón al matraz y se realizan dos
inversiones suaves para homogeneizar la solución sujetando el tapón del matraz al realizar
la acción. Este matraz se vuelve a destapar para tomar una alícuota de 1 mL, la alícuota se
debe tomar con una pipeta volumétrica de 1 mL a esta se le introduce en la parte superior
una propipeta, la cual se le debe expulsar el aire presionándola y oprimiendo el círculo con
la letra S, realizado lo anterior se introduce la punta de la pipeta en el matraz volumétrico
una vez dentro del matraz se vuelve a presionar el círculo con la letra S de la propipeta
ocasionando que parte de la disolución ascienda por la pipeta, se deja de apretar cuando el
menisco del líquido esté a la altura de la línea marcada como aforo en la pipeta, este
volumen tomado se traspasa a un matraz volumétrico de 50 mL, etiquetado como “muestra
problema dilución 1”, colocando la pipeta dentro del cuello del matraz y apretando en la
propipeta la letra E, una vez expulsada toda la disolución de la pipeta esta se retira;
nuevamente el matraz es llevado a su marca de aforo con la piseta de 250 ml que contiene
agua inyectable, procurando tener cuidado de llegar exactamente a la línea indicada en el
matraz; realizado esto se tapa el matraz con su tapón y nuevamente se dan dos inversiones
al matraz sujetando el tapón para homogeneizar la disolución. De esta última disolución se
tomará una alícuota de 5 mL; esto se realizará con pipeta volumétrica de 5 mL; colocar en la
pipeta volumétrica de 5 mL la propipeta asegurándose de expulsar el aire en su interior
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como se mencionó anteriormente, realizado esto se quita el tapón del matraz e

inmediatamente se introduce la pipeta hasta una tercera parte del matraz, introducida la
pipeta en la disolución se procede a succionar esta con la propipeta, presionando la letra S,
hasta que el menisco del líquido llegue a la línea de aforo, realizada esta acción la pipeta se
extrae del matraz (volviendo a colocar su tapón) y se introduce en un matraz volumétrico de
25 mL, etiquetado como “muestra problema disolución final”, estando dentro de dicho
matraz el líquido es expulsado oprimiendo la letra E de la propipeta, realizado lo anterior se
retira la pipeta, después con la piseta de 250 mL provista de agua inyectable se lleva a la
marca de aforo adicionando el agua con el cuidado de llegar exactamente a la línea de
aforo el menisco de la disolución, hecho esto último se tapa el matraz con su tapón y se
realiza la misma operación de dos inversiones para homogeneizar sujetando el tapón.
 Lectura en el espectrofotómetro de las muestras patrón y la muestra
problema.
El espectrofotómetro será conectado y encendido 15 min antes de su uso, una vez
encendido se selecciona la longitud de onda a la cual se va a trabajar esto es a 426 nm,
esta longitud de onda se selecciona presionando los botones que tienen una flecha ya sea
hacia arriba o hacia abajo dependiendo en qué longitud se encuentre el instrumento en ese
momento. Para la calibración se tomará un blanco, este blanco será de agua inyectable (al
ser el disolvente utilizado), tomar una alícuota de 3 mL de agua inyectable con una pipeta
volumétrica de 3 mL, introducir en la parte superior de la pipeta una propipeta, expulsar el
aire presente en esta, introducir la pipeta al agua inyectable, la cual será colocada en un
vaso de precipitados de 25 mL etiquetado como “agua inyectable”, succionar con la
propipeta el agua hasta llegar a la marca de aforo (como se menciona anteriormente) y
posteriormente se expulsara esta alícuota en una celda de espectrofotómetro, la celda se
introducirá al espectrofotómetro abriendo la puerta donde se colocan las muestras y
procurando que la celda quede posicionada correctamente (depende del tipo de
espectrofotómetro), una vez introducida la celda con la muestra se cierra la compuerta y se
calibra a 0 absorbancia 100% transmitancia, si se obtiene un dato distinto a cero tomar nota
en la bitácora para realizar ajustes posteriores en los cálculos, realizado esto se procede a
sacar la celda para tomar lectura de las soluciones estándar y la muestra problema. Se
realizará el mismo procedimiento para las tres disoluciones estándar y la muestra, tomando
alícuotas de 3 mL para colocarlas en la celda y se deberá de tomar nota de cada lectura
realizada a las muestras, las soluciones estándar servirán para realizar la curva estándar y
la concentración de la muestra será obtenida mediante interpolación en dicha curva.
MATERIAL:
 1 propipeta
 4 matraces volumétricos de 25 mL
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 1 espatula de acero inoxidable de 15 cm de longitud
 2 pipetas volumétricas de 1 mL
 1 pipeta volumétrica de 2 mL
 1 pipeta volumétrica de 8 mL
 2 pipetas volumétricas de 5 mL
 Papel glassine
 1 piseta de 250 mL
 1 celda para espectrofotómetro
Instrumentos:
 Balanza analítica
 Espectrofotómetro
Reactivos:
 Agua inyectable
 Clorhidrato de fenazopiridina tabletas de 100 mg
PROPIEDADES:
 Agua inyectable:
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figura 9) propiedades fisicas, quimicas y toxicologicas, hoja de seguridad CTR Scientific.
 Clorhidrato de fenazopiridina
Figura 10) propiedades físicas, químicas y toxicológicas, hoja de seguridad Alfa Aesar.
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DIAGRAMA DE FLUJO:
Para preparar solución estándar Colocar el patrón pesado en un Tomar una alícuota
pesar 10 mg del patrón en la matraz volumétrico de 10mL y de 1mL, con pipeta
balanza analítica. llevar a aforo con agua inyectable volumétrica y
trasferir a un
matraz aforado de
50mL y aforar con
Del último matraz tomar una agua inyectable.
alícuota de 2mL con pipeta
volumétrica y colocarla en un
matraz aforado de 25mL, llevar a
la marca de aforo con agua
inyectable. (Concentración 1.776
Leer en el espectrofotómetro a μg/mL).
426 nm, calibrándolo con un
blanco (agua inyectable) de
volumen 3mL medidos con pipeta Realizar la misma operación pero
volumétrica. tomando alícuotas de 5 y 8 mL, con
Tomar alícuotas de 3 mL de cada pipetas volumétricas (del matraz que
matraz de las últimas diluciones, se llevo a un volumen de 50 mL),
colocarlas en la celda, introducir llevándolas a matraces volumétricos
al espectrofotómetro y leer cada de 25 mL y aforando.
muestra. (Concentraciones 4.44 μg/mL y
7.104 μg/mL respectivamente).
Para la muestra pesar aprox. Tomar una alícuota Tomar una alícuota de 5 mL del
10mg de principio activo de las de 1mL con pipeta último matraz con pipeta
tabletas en la balanza analítica; volumétrica, volumetría y colocarla en un
transferirlos a un matraz pasarlo a un matraz volumétrico de 25mL,
volumétrico de 10mL y aforar con matraz volumétrico aforar con agua inyectable.
agua destilada. de 50 mL, aforar
con agua
inyectable.
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BIBLIOGRAFÍA:
Fischer Robert B. Compendio Análisis Químico Cuantitativo. 1ª ed. Filadelfia: Nueva

Editorial Interamericana; 1981.
Schenk George H. Química Analítica Cuantitativa Principios y Aplicaciones a las Ciencias

de la Vida. 1ª ed. USA: Compañía Editorial Continental; 1984
Day R.A. Química Analítica Cuantitativa. 5ª ed. Nueva Delhi: Prentice Hall Hispanoamerica;
1989.
Harris Daniel C. Análisis Químico Cuantitativo. 6ª ed. Nueva York; Editorial Reverté; 2007.
Secretaría de Salud, Comisión permanente de la Farmacopea de los Estados Unidos

Mexicanos. Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos (FEUM) 10 ed. México; 2011.
Alfa Aesar. Ficha de datos de seguridad; 22/10/2007 [consultado: 05/02/2019]. Disponible

en: https://www.alfa.com/es/content/msds/spanish/B21886.pdf
CTR Scientific. Hoja de seguridad. Monterrey; febrero 2018 [consultado: 05/02/2019].

Disponible en: https://www.ctr.com.mx/pdfcert/MSDS%20AGUA%20DESTILADA.pdf
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Facultad de Estudios Superiores Zaragoza

Grupo: Laboratorio : L-402 Fecha de emisión: Página 1 de 26

La espectrofotometría es uno de los métodos de análisis más usados, y se basa en la

En las regiones visibles y ultravioleta del espectro electromagnético, la muestra es

Grupo: Laboratorio : L-402 Fecha de emisión: Página 2 de 26

Donde c es la velocidad de la luz (2,998 x 108 m/s en el vacío).

En un medio distinto al vacío, la velocidad de la luz es c/n, donde n es el índice de

Donde h es la constante de Planck (6,626 x 10-34 J*s)

Combinando las ecuaciones anteriores se tiene:

Donde ṽ (= 1/λ) se llama número de onda.

La energía es inversamente proporcional al número de onda, la unidad de SI del número de

Al tiempo que dura un ciclo se le denomina periodo, y es lo opuesto de la frecuencia, y se

Grupo: Laboratorio : L-402 Fecha de emisión: Página 3 de 26

Radiación electromagnética y espectro electromagnético.

Estas regiones ordenadas de mayor a menor energía son:

 Rayos gamma (ϒ).

Figura 2: Espectro electromagnético.

Teoría de orbital molecular:

Grupo: Laboratorio : L-402 Fecha de emisión: Página 4 de 26

Figura 3: Diagrama de energía de orbitales moleculares.

Figura 4: Ley de Lambert

La siguiente relación matemática da cuenta de esta ley: P / P0 = e –kb

Grupo: Laboratorio : L-402 Fecha de emisión: Página 5 de 26

k: Constante, cuyo valor depende de la naturaleza del soluto, de la longitud de onda de la

La intensidad de un haz de luz monocromática disminuye exponencialmente al aumentar

Figura 5: Ley de Beer.

La relación matemática que da cuenta de esta ley es la siguiente: P / P0= e -k’c

P0: Intensidad de la luz incidente P: Intensidad de la luz transmitida

k: Constante, cuyo valor depende de la naturaleza del soluto, de la longitud de onda de la

Ambas leyes se combinan en una sola, generando la Ley de Lambert-Beer

a: Absortividad b: Longitud o espesor del medio (longitud de la cubeta)

c: Concentración de la solución P/Po= T: Transmitancia

Los términos absorbancia y transmitancia son definidos a continuación

Grupo: Laboratorio : L-402 Fecha de emisión: Página 6 de 26

T = P/P0 = 10-abc ó %T = 100 P /P0

Se acostumbra a considerar la transmitida como la razón de la luz transmitida por la

Debido a que la transmitancia de este estándar no es necesariamente 100%, es necesario

Absorbancia(A): Se define como la cantidad de energía radiante absorbida por una

A = - log (P / P0) = - log 10-abc

moles por litro y la longitud de la cubeta b en centímetros, la constante a recibe el nombre

Mediciones de transmitancia y absorbancia.

Las mediciones de absorbancia o transmitancia se hacen por comparación entre la

muestra problema y un estándar arbitrario o referencia. Como la referencia debe poseer un

Grupo: Laboratorio : L-402 Fecha de emisión: Página 7 de 26

Ley de aditividad de las absorbancias:

Cuando se encuentran en disolución varias especies capaces de absorber a la misma

Desviaciones a la ley de Lambert y Beer:

a) Radiaciones desviadas dentro del aparato que alcanzan el detector.

b) Cambios en la sensibilidad del detector.

c) Fluctuaciones de voltaje que afectan la fuente de radiación y el sistema detector

Qué es un espectro de absorción y para qué sirve:

Un espectro de absorción es un gráfico que muestra como varía A (o ε) al variar la longitud

Grupo: Laboratorio : L-402 Fecha de emisión: Página 8 de 26

La parte de una molécula responsable de la absorción de la luz se llama cromóforo. Toda

La ecuación anterior se puede expresar como:

Figura 6: Error fotométrico.

Grupo: Laboratorio : L-402 Fecha de emisión: Página 9 de 26

La mejor exactitud y precisión se obtiene cuando la transmitancia de la muestra está

Características instrumentales del espectrofotómetro:

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El espectrofotómetro se debe encender unos 15 minutos antes de utilizarlo, para evitar

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