INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA
“DR. GUILLERMO CARVAJAL SANDOVAL”

LABORATORIO DE SISTEMAS DE
CONTROL DE CALIDAD

QUÍMICO BACTERIÓLOGO PARASITÓLOGO

PRÁCTICA 8

EFECTO Y VERIFICACIÓN DE LA TEMPERATURA

EN LOS RESULTADOS

PROFESORES:
COLIN TOVAR MARIA DEL CARMEN MERCEDES
HERNÁNDEZ OLICÓN AURA PATRICIA
LANDIN CAUDILLO DAVID ALEJANDRO
MARTINEZ REYES CINTHYA SALIMAH

ALUMNO:

GRUPO 5QV1
SECCIÓN 04

FECHA DE ENTREGA
INTRODUCCIÓN

Las enzimas son catalizadores biológicos que disminuyen la energía de activación de

las reacciones que catalizan, de forma que se aceleran sustancialmente la tasa de
reacción. La temperatura desempeña un papel importante en el control de la velocidad
de las reacciones enzimáticas. La velocidad de una reacción catalizada
enzimáticamente aumenta al aumentar la temperatura. Este incremento se debe a que
aumenta el número de moléculas ricas en energía que pueden pasar la barrera
energética de estado de transición, para formar a los productos.

Por cada 10ºC de incremento, la velocidad de reacción se duplica. Las reacciones

catalizadas por enzimas siguen esta ley general. Sin embargo, al ser proteínas, a partir
de cierta temperatura, se empiezan a desnaturalizar por el calor. La temperatura a la
cual la actividad catalítica es máxima se llama temperatura óptima. Por encima de esta
temperatura, el aumento de velocidad de la reacción debido a la temperatura es
contrarrestado por la pérdida de actividad catalítica debida a la desnaturalización
térmica, es decir, la pérdida de la estructura tridimensional de las enzimas y la actividad
enzimática decrece rápidamente hasta anularse.

OBJETIVOS

 Determinar el efecto del cambio de temperatura en una determinación enzimática

sobre los resultados en un proceso analítico del laboratorio clínico a través del
cálculo del Q10.
 Determinar si los equipos influyen en la determinación y en dado caso cual seria
mejor para su uso un automatizado o semi-automatizado.

Fundamento

El efecto de la temperatura sobre los diferentes sistemas se puede cuantificar

calculando el coeficiente térmico (Q10) de un proceso. El Q10 es la medida de la tasa
de variación de sistemas químicos o biológicos como consecuencia del incremento de
10 °C de la temperatura.

Este coeficiente define la relación que existe entre la velocidad de un proceso, o de una
reacción, a una temperatura dada, y la velocidad del mismo proceso ante un cambio de
temperatura de 10ºC. Q10 es una cantidad sin unidades, ya que es el factor que
expresa la variación de una tasa, y es una manera útil de expresar la dependencia de la
temperatura que tiene un proceso determinado. Para sistemas biológicos, el valor del
Q10 se encuentra generalmente entre 2 y 3. Esto significa que la velocidad del proceso
se duplica y si es de 3 se triplica.

Es muy importante determinar la actividad enzimática a determinada temperatura ya

que errores de 1ºC en el control de la temperatura de reacción pueden ocasionar
errores de hasta el 10% en el cálculo de actividad de algunas enzima y gracias al
cálculo de Q10 se puede determinar esta variación en la actividad enzimática.
MÉTODO
Verificación y
efecto de la
temperatura en
los resultados.

Preparar dos tubos con

1.25 mL del sustrato

37°C Pre-incubar 25°C

los dos
tubos.
Agregar 20 L de suero Agregar 20 L de suero
y mezclar y mezclar
adecuadamente Calentar adecuadamente
espectrofotómetro
por 15 minutos y
ajustar a cero al
aire

Tomar lecturas cada Tomar lecturas cada

minuto por 3 minutos a minuto por 3 minutos a
405 nm 405 nm

Hacer por duplicado el Hacer por duplicado el

proceso y anotar los proceso y anotar los
datos. datos.

Calcular el Q10 e
interpretar los
resultados.
BITÁCORA DE RESULTADOS
Actividad: Verificación y efecto de la temperatura en Fecha: 17 de
los resultados octubre de 2018
Resultados y observaciones.
Tabla 1. Tratamiento de los datos para el cálculo de Q 10 tratamiento a 25ºC y
37ºC.
Equipo 02 Equipo c

Tiempo A A A A
A A
(minutos) 25ºC Acumulada 37ºC Acumulada
1 0.443 0.553
2 0.530 0.087 0.087 0.705 0.152 0.152
3 0.617 0.087 0.174 0.862 0.157 0.309
4 0.705 0.088 0.262 1.018 0.156 0.465
5 0.794 0.089 0.351 1.175 0.157 0.622

A promedio: 0.0880 A promedio: 0.1555

Gráfica. 1 Incrementos acumulados de absorbencia con respecto al tiempo

Tabla 2. Determinación de la actividad enzimática y %V.
Temperatura 25°C Temperatura 37°C

Actividad Actividad
% %
Equipo Enzimática, Equipo Enzimática,
Varianza Varianza
(UI/L) (UI/L)
1 235 -4.47 a 349 -17.9
2 243 -1.22 b 444 4.47
3 121 -50.8 c 429 0.94
4 283 15.0 d 430 1.18

Cálculos para la actividad enzimática.

𝑈𝐼 𝑈𝐼
25 °C . 𝐴𝑐𝑡𝑖𝑣𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑒𝑛𝑧𝑖𝑚á𝑡𝑖𝑐𝑎 = 0.0880 ∗ 2760 = 243
𝐿 𝐿
𝑈𝐼 𝑈𝐼
37° C . 𝐴𝑐𝑡𝑖𝑣𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑒𝑛𝑧𝑖𝑚á𝑡𝑖𝑐𝑎 = 0.1555 ∗ 2760 = 429
𝐿 𝐿

Cálculos para %V
𝐴𝑐𝑡. 𝑒𝑛𝑧. 𝑐𝑎𝑙𝑐𝑢𝑙𝑎𝑑𝑎 − 𝑉𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑣𝑒𝑟𝑑𝑎𝑑𝑒𝑟𝑜
%𝑉 = × 100
𝑉𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑣𝑒𝑟𝑑𝑎𝑑𝑒𝑟𝑜

243 − 246
%𝑉°25𝐶 = × 100 = −1.22%
246
429 − 425
%𝑉°37𝐶 = × 100 = 0.94%
425
Tabla 3. Determinación de Q12 y %Error/°C.
Q12 %Error/°C Q12 %Error/°C

1a 1.48 4.00 3a 2.88 15.7

1b 1.90 7.50 3b 3.67 22.25
1c 1.83 6.92 3c 3.55 21.25
1d 1.83 6.92 3d 3.55 21.25
2a 1.44 3.67 4a 1.23 1.92
 2b 1.83 6.92 4b 1.57 4.75
2c 1.77 6.42 4c 1.52 4.33
2d 1.77 6.42 4d 1.52 4.33

Cálculo del Q10 para 1a

∆𝜀 37°𝐶
𝑄12 =
∆𝜀 25°𝐶

349 𝑈𝐼/𝐿
𝑄12 = = 1.48
235 𝑈𝐼/𝐿

Cálculo del %Ɛ/°C de error.

Q12 – 1 = a
b= a (100%)
b→12°C
c→1°C
c= %Ɛ/°C
a b C= %Ɛ/°C

Q12 =349/235=1.49-1= 0.49(100)= 49 C=(12)/(49)= 4.08

0.49

Identificación de los errores que se pueden cometer si no se mantiene la

temperatura controlada en las mediciones.
Se pueden reportar valores incorrectos en las mediciones de la actividad
enzimática.
Se puede llegar a temperaturas de desnaturalización de la enzima.
Acciones correctivas.
Realizar mantenimiento a los equipos para su correcto funcionamiento
verificando que la temperatura se mantiene en los niveles deseados sin
 influencia del ambiente u otras fuentes.
Conocer la temperatura optima de trabajo para la determinación requerida.
De ser posible utilizar equipos recientes en los que no se requiera ajuste manual
de la temperatura.

DISCUSIÓN
En la tabla no. 1 se observa que las absorbencias presentan precisión entre ellas, esto
indica que se realizó un buen pipeteo tanto al preparar nuestro tubo problema, esto más
adelante se reflejará en nuestro coeficiente de variación y en porcentaje de error.
En la tabla no. 2 observamos la media de la diferencia de las absorbencias, multiplicada
por el factor (4760UI / L), esto nos permite identificar cuantas UI / L contiene nuestro
tubo problema (a 25°C), tanto a 25°C como a 37°C podemos observar una similitud
entre todas las absorbencias obtenidas observamos también qué al aumentar la
temperatura, aumentan las unidades.
En la tabla no. 3 observamos que todos cumplimos con el principio del Q12, esto quiere
decir que todos (al aumentar 12°C la temperatura), la velocidad de nuestra reacción se
duplica aproximadamente (presentando resultados de 1.7 y 1.8). En esta tabla, también
observamos el porcentaje de error. De acuerdo con el TEA se permite un 10% de error
en este tipo de estudios, esto quiere decir que aproximadamente tanto el equipo como
el analista tienen un % de error para el manejo de enzimas y de sustratos menor al
10%, esto es importante ya que este tipo de determinaciones se requieren realizar con
mucho cuidado, porque si afectamos alguna característica de la reacción (como la
temperatura, el p H, la concentración de enzima o de sustrato etc) tendremos datos
erróneos y por consiguiente se dará un mal diagnóstico al paciente. En el caso del
trabajo realizado en el laboratorio se tomaron los datos para su análisis del equipo 02
(25°C) y equipo c (37°C) ya que dichos equipos contaron con los errores mas bajos y
permisibles a comparación de los demás equipos que rebasaron este porciento de
error.
En la gráfica 1 se observa las absorbancias acumuladas, reiterando la precisión entre
los datos obtenidos inicialmente por el equipo 02 y c. Se observa que un aumento
pequeño en la temperatura de reacción (1ºC) nos brinda valores diferentes que pueden
tener una diferencia de hasta un 12% y si se llega a una temperatura muy elevada la
enzima puede llegar a desnaturalizarse disminuyendo la actividad enzimática
drásticamente. Se obtienen datos erróneos y conducirían a tratamientos erróneos para
el paciente por lo cual es muy importante hacer una determinación adecuada con los
mejores resultados posibles ya que la vida del paciente puede depender de estos
resultados.
CONCLUSIONES

 A partir de Q12, comprobamos que por cada 12°C que aumentemos la

temperatura, se duplicará la velocidad de la reacción.
 El sustrato utilizado cumple con lo que el proveedor nos ofrece.
 El equipo utilizado presenta linealidad
 La técnica de manejo de la micropipeta fue adecuada
 Es fundamental realizar la reacción enzimática en condiciones óptimas para
obtener resultados confiables y de calidad.

PREGUNTAS EXTRA
1.- Función de ALP
La fosfatasa alcalina es útil para detectar enfermedades óseas o hepáticas.
Cuando existe daño hepático, las células lesionadas liberan cantidades importantes de
fosfatasa alcalina hacia la sangre. Por este motivo, esta prueba a menudo se utiliza
para detectar obstrucciones de los conductos biliares, ya que la fosfatasa alcalina se
encuentra a concentraciones elevadas en los márgenes de las células que limitan los
conductos. Si existe obstrucción de uno o varios conductos, por ejemplo debido a la
presencia de un tumor, a menudo la concentración de fosfatasa alcalina en sangre está
elevada.
Cualquier situación que repercuta sobre el crecimiento óseo o genere un aumento de la
actividad de las células óseas puede hacer aumentar los niveles de fosfatasa alcalina
en sangre. La determinación de fosfatasa alcalina puede por ejemplo utilizarse para
detectar cánceres que se han extendido hacia el hueso, o también para diagnosticar la
enfermedad de Paget; en esta enfermedad en la que los huesos se deforman, así como
en los déficits de vitamina D, la fosfatasa alcalina puede ser útil para monitorizar el
tratamiento.
Si existe un aumento de fosfatasa alcalina pero no resulta claro si el origen de este
aumento es hepático u óseo, la determinación de las isoenzimas de la fosfatasa alcalina
puede ser de utilidad; también pueden determinarse con esta finalidad la GGT o la 5'-
nucleotidasa. Estas dos últimas enzimas aumentan en las enfermedades hepáticas
pero no en las óseas.

2.- Valor de referencia de ALP

Los valores de fosfatasa alcalina se consiguen por medio de una prueba de sangre
ordinaria y para una persona adulta el rango más normal oscila entre 30 y 140 unidades
internacionales por litro.
 Valores normales de Fosfatasa alcalina

Temperatura Mujeres Hombres

25 °C 40-190 U/l 50-190 U/l
30 °C 49-232 U/l 61-232 U/l
37 °C 64-306 U/l 80-306 U/l

REFERENCIAS.
 Efecto de la temperatura en la actividad enzimática. Bioquímica y biología
molecular en línea. (2003) Disponible en:
http://laguna.fmedic.unam.mx/~evazquez/0403/velocidad%20reaccion%20enzim
atica3.html Consulta (23/10/2018)

 Enzimas. Cinética enzimática. (2018). Disponible en:

http://www.ehu.eus/biomoleculas/enzimas/enz3.htm Consulta (23/10/2018)

 Wikipedia La enciclopedia libre, Fosfatasa alcalina. (2018). Disponible en:

https://es.wikipedia.org/wiki/Fosfatasa_alcalina Consulta (23/10/2018)

 LAB TESTS ONLINE, Fosfatasa alcalina, (2017). Disponible en:

https://www.labtestsonline.es/tests/fosfatasa-alcalina. Consulta (23/10/2018)