HAL.

92
Genetic Materials :
Properties and Replication

Genes were first detected and analyzed by mendel, and subssequently many other scientists, by
following their patterns of transmission from generation to generation (Chapter 2). These studies,
while greatly elucidating the nature of inheritance in living organisms, provided no insight into
the structure or molecular composition of genes.

Subsequent studies established the precise correlation between the patterns of transmission of
genes from generation to generation (segregation and independent assortment) and the behavior
of chromosomes during sexual reproduction, specifically the reduction division of meiosis and
fertilization (Chapter 3). These and related experiments provided strong early evidence that
genes are usually located on chromosomes. thus, in posing questions about the chemical basis of
heredity, scientists began by probing the biochemical composition of chromosomes.

Whatever its chemical composition, it was clear even in Mendel's time that the genetic material
had to fulfill two key requirements.

1. The genotype function or replication. The genetic material must be capable of storing genetic
information and transmiting this information faithfully from parents to progeny, generation after
generation (although, as we will see in chapter 11, the genetic material does undergo occasional
heritable changes called mutations).
2. The phenotype function or gene expressions. The genetic material must control the
development of the phenotype of the organism, be it a virus, a bacterium, a plant, or an animal
such as a human being. That is, the genetic material must dictate the growth and differentiation
of the organism from the single-celled zygote to the mature adult. To control this complex
process, the genetic material must not only express itself accurately, but each gene must act at
the proper time and place to guarantee that the liver is made up of liver cells, the nervous system
of nerve cells, and so on (see Chapters 10 and 15).

chromosomes are composed of two types of large organic molecules (macromolecules) called
proteins and nucleic acids. The nucleic acids are of two types : deoxyribonucleic acid (DNA)
and ribonucleic acid (RNA). For many years, there was considerable disagreement among
scientists as to which of these three macromolecules carries the genetic information. During the
1940s and early 1950s, several elegant experiments were carried out that clearly established that
the genetic information resides in the nucleic acids rather than in proteins. More specifically,
these experiments showed that the genetic information resides in the nucleic acids rather than in
proteins. More specifically, these experiments showed that the genetic information resides in
DNA. (In a few simple viruses, however, RNA carries the genetic information; these particular
viruses contain no DNA).

Bahan Genetik:
Properti dan Replikasi

Gen pertama kali terdeteksi dan dianalisis dengan mendel, dan selanjutnya banyak ilmuwan lain,
dengan mengikuti pola penularannya dari generasi ke generasi (Bab 2). Studi-studi ini, sementara
sangat menjelaskan sifat pewarisan pada organisme hidup, tidak memberikan wawasan tentang
struktur atau komposisi molekul gen.

studi-studi berikutnya menetapkan korelasi yang tepat antara pola-pola penularan gen dari
generasi ke generasi (segregasi dan bermacam-macam independen) dan perilaku kromosom
selama reproduksi seksual, khususnya divisi pengurangan meiosis dan fertilisasi (Bab 3).
Eksperimen ini dan yang terkait memberikan bukti awal yang kuat bahwa gen biasanya terletak
pada kromosom. dengan demikian, dalam mengajukan pertanyaan tentang dasar kimia
keturunan, para ilmuwan mulai dengan menyelidiki komposisi biokimia kromosom.

Apa pun komposisi kimianya, jelas bahkan pada zaman Mendel bahwa materi genetik harus
memenuhi dua persyaratan utama.

1. Fungsi atau replikasi genotipe. Materi genetik harus mampu menyimpan informasi genetik dan
mentransmisikan informasi ini dengan setia dari orang tua kepada keturunan, dari generasi ke
generasi (walaupun, seperti yang akan kita lihat di Bab 11, materi genetik sesekali mengalami
perubahan yang diwariskan yang disebut mutasi).
2. Fungsi fenotip atau ekspresi gen. Bahan genetik harus mengendalikan perkembangan fenotipe
organisme, baik itu virus, bakteri, tanaman, atau hewan seperti manusia. Artinya, materi genetik
harus menentukan pertumbuhan dan diferensiasi organisme dari zigot sel tunggal hingga dewasa
dewasa. Untuk mengendalikan proses yang kompleks ini, materi genetik tidak hanya harus
mengekspresikan diri secara akurat, tetapi setiap gen harus bertindak pada waktu dan tempat
yang tepat untuk menjamin bahwa hati terdiri dari sel-sel hati, sistem saraf sel-sel saraf, dan
sebagainya ( lihat Bab 10 dan 15).
kromosom terdiri dari dua jenis molekul organik besar (makromolekul) yang disebut protein dan
asam nukleat. Asam nukleat terdiri dari dua jenis: asam deoksiribonukleat (DNA) dan asam
ribonukleat (RNA). Selama bertahun-tahun, ada banyak perbedaan pendapat di antara para
ilmuwan mengenai mana dari ketiga makromolekul ini yang membawa informasi genetik.
Selama 1940-an dan awal 1950-an, beberapa percobaan elegan dilakukan yang dengan jelas
menetapkan bahwa informasi genetik berada di asam nukleat daripada dalam protein. Lebih
khusus, percobaan ini menunjukkan bahwa informasi genetik berada di asam nukleat daripada di
protein. Lebih khusus, percobaan ini menunjukkan bahwa informasi genetik berada di dalam
DNA. (Dalam beberapa virus sederhana, RNA membawa informasi genetik; virus khusus ini
tidak mengandung DNA).

DNA, THE GENETIC MATERIAL

Several lines of indirect evidence have long suggested that DNA contains the genetic
information of living organism. most important, results obtained using several differents
experimental procedurs showed that most of the DNA is located in the chromosomes, whereas
RNA and proteins are also abundant in the cytoplasm. Moreover, a precise correlation
exists between the amount of DNA per cell and the number of sets of chromosomes per cell. that
is, most somatic cells of diploid organisms, for example, contain exactly twice the amount of
DNA as the haploid germ cells or gametes of the same species. Finally, the molecular
composition of the DNA in all of the different cells of an organism is the same (with rare
exceptions), whereas the composition of RNA and proteins varies both qualitatively and
quantitatively from one cell type to another. Althought these correlations strongly suggest that
DNA is the genetic material, they by no means prove it. Fortunately, direct evidence has
established that the genetic information is encoded in DNA.

Transformation in Pneumococcus

The first direct evidence showing that the genetic material is DNA rather than protein or RNA
was published by O. T. Avery, C. M. Macleod, and M. McCarty in 1944. They demonstrated that
the component of the cell responsible for the phenomenom of transformation in the bacterium
Diplococcus pneumoniae (pneumococcus) is DNA. Transformation is a mode of recombination
(exchange or transfer of genetic information between organisms or from one organism to
another) occuring in several, but not all, species of bacteria. It does not involve direct contact
between the bacterial cells or mediation by any vector such as a virus (See Chapter 8, pp. 206-
208).
The phenomenom of transformation was discovered by Frederick Griffith in 1928. it should be
emphasized that although Griffith's experiments demonstrated the occurrence of transformation
in pneumococcus and thus set the stage for the work of Avery, MacLeod, and McCarty, they
provided no evidence that DNA was involved in any way.

Pneumococci, like all other living organisms, exhibit genetic variability that can be recognized
by the existence of different phenotypes (Table 5.1). The two phenotypic characteristics of
importance in Griffith's demonstration of transformation were (1) the presence or absence of a
surrounding polysaccharide (complex sugar polymer) capsule and (2) the type of capsule, that is,
the specific molecular composition of the polysaccharides present in the capsules. When grown
on appropriate media (such as blood agar) in petri dishes, pneumococci with a capsule form
large, smooth colonies and are thus designated Type S.

DNA, BAHAN GENETIK

Beberapa baris bukti tidak langsung telah lama menyatakan bahwa DNA mengandung informasi
genetik organisme hidup. yang paling penting, hasil yang diperoleh dengan menggunakan
beberapa prosedur eksperimental yang berbeda menunjukkan bahwa sebagian besar DNA
terletak di kromosom, sedangkan RNA dan protein juga berlimpah di sitoplasma. Apalagi
korelasi yang tepat
ada antara jumlah DNA per sel dan jumlah set kromosom per sel. yaitu, sebagian besar sel
somatik dari organisme diploid, misalnya, mengandung tepat dua kali jumlah DNA sebagai sel
kuman haploid atau gamet dari spesies yang sama. Akhirnya, komposisi molekul DNA di semua
sel yang berbeda dari suatu organisme adalah sama (dengan pengecualian langka), sedangkan
komposisi RNA dan protein bervariasi baik secara kualitatif maupun kuantitatif dari satu jenis
sel ke yang lain. Meskipun korelasi ini sangat menunjukkan bahwa DNA adalah bahan genetik,
mereka tidak membuktikannya. Untungnya, bukti langsung telah menetapkan bahwa informasi
genetik dikodekan dalam DNA.

Transformasi dalam Pneumococcus

Bukti langsung pertama yang menunjukkan bahwa bahan genetik adalah DNA daripada protein
atau RNA diterbitkan oleh OT Avery, CM Macleod, dan M. McCarty pada tahun 1944. Mereka
menunjukkan bahwa komponen sel bertanggung jawab atas fenomenom transformasi di dalam
bakteri Diplococcus pneumoniae (pneumococcus) adalah DNA. Transformasi adalah cara
rekombinasi (pertukaran atau transfer informasi genetik antar organisme atau dari satu organisme
ke organisme lain) yang terjadi pada beberapa, tetapi tidak semua, spesies bakteri. Ini tidak
melibatkan kontak langsung antara sel-sel bakteri atau mediasi oleh vektor seperti virus (Lihat
Bab 8, hal. 206-208).

Fenomena transformasi ditemukan oleh Frederick Griffith pada tahun 1928. Harus ditekankan
bahwa meskipun percobaan Griffith menunjukkan terjadinya transformasi pada pneumococcus
dan dengan demikian mengatur panggung untuk karya Avery, MacLeod, dan McCarty, mereka
tidak memberikan bukti bahwa DNA benar-benar ada. terlibat dengan cara apa pun.

Pneumokokus, seperti semua organisme hidup lainnya, menunjukkan variabilitas genetik yang
dapat dikenali dengan adanya berbagai fenotipe (Tabel 5.1). Dua karakteristik fenotipik penting
dalam demonstrasi transformasi Griffith adalah (1) ada atau tidaknya kapsul polisakarida
(polimer gula kompleks) di sekitarnya dan (2) jenis kapsul, yaitu, komposisi molekul spesifik
dari polisakarida yang ada di kapsul. Ketika ditanam pada media yang sesuai (seperti agar darah)
dalam cawan petri, pneumokokus dengan kapsul membentuk koloni besar dan halus dan
karenanya disebut Tipe S.

HAL 93
such encapsulated pneumococci are quite pathogenic to most mammals (e.g., causing pneumonia
in humans). These virulent (disease causing ) Type S pneumococcal mutate to a non virulent (or
nonpathogenic) form that has no polysaccharide capsule (at a frequency of about one cell in
10*7). such nonencapsulated, nonvirulent pneumococci form small, rough-surfaced colonies
when grown on blood agar medium and are thus designated Type R (Table 5.1). (The
polysaccharide capsule is required for virulence since it protects the bacterial cell against
phagocytosis by leukocytes.) When a capsule is present, it may be of several different antigenic
types (Type II, III, etc.), depending on the specific molecular composition of the polysaccharides
and, of course, ultimately on the genotype of the cell.

The different capsule types can be identified imunologically. If Type II cells are injected into the
blooodstream of rabbits, the immune system of the rabbits will produce antibodies (a specific set
of large proteins whose function is to protect the organism against foreign substances such as
macromolecules, viruses, and bacteria; see Chapter 16) that react specifically with Type II cells.
Such Type II antibodies will agglutinate Type II pneunococcu, and vice versa.

Griffith's unexpected discovery was that if he injected heat-killed Type IIIS pneumococci
(virulent when alive) plus live Type IIR pneumococci (nonvirulent) into mice, many of the mice
succumbed to pneumonia, and live Type IIS cells were recovered from the carcasses (Fig. 5.1).
When mice were injected with heat-killed Type IIS pneumococci alone (Figure . 5.1, top), none
of the mice died. The observed virulence was therefore not due to a few Type IIS cells that
survived the heat treatment. it is critical to note that the live virulent pneuumococci recovered
from the carcasses were of polysaccharide Type III, since it is known that nonencapsulated Type
R cells can mutate back to virulent encapsulated Type S cells. When such a mutation occurs in a
Type IIR cell, however, the resulting cell will be Type IIS, not Type IIIS. Thus, the ''
transformation '' of nonvirulent Type IIR cells to virulent Type IIIS cells cannot be explained by
mutation, rather some component of the dead Type IIIS cells (the ''transforming principle'') must
convert living Type IIR cells to Type IIIS.

Subsequent experiments showed that the phenomenon-described by Griffith, now called

transformation, was not mediated in any way by a living host. The same phenomenon occurred
in the test tube when live Type IIR cells were grown in the presence of dead Type IIIS cells or
extracts of Type IIIS cells. Since it was clearly shown that the new phenotype, Type IIIS, was
hereditary, that is, was due to a permanent inherited change in the genotype of the cells, the
demonstration of transformation neatly set the stage for determining the chemical basis of
heredity in pneumococcus. what remained was to determine what component of the cell extract
was responsible for transformation.

Proof That the '' Transforming Principle'' Is DNA

The ''transforming principle'' was shown to be DNA in 1994 when Avery, MacLeod, and
McCarty published the results of a set of extensive and laborious experiments. They showed that
if bighly purified DNA from Type IIIS pneumococci was present with Type IIR pneumococci,
.some of the pmeumococci were transformed to Type IIS (fig. 5.2). But how could one be sure
that the DNA was really pure? Proving the complete purity of any macromolecular substance is
extremely difficult. Maybe the DNA preparation contained a few molecules of protein and these
contaminating proteins were responsible for the observed transformation.

pneumokokus enkapsulasi seperti itu cukup patogen bagi sebagian besar mamalia (mis.,
menyebabkan pneumonia pada manusia). Virus pneumokokus (penyebab penyakit) tipe S ini
bermutasi menjadi bentuk non-virulen (atau non-patogenik) yang tidak memiliki kapsul
polisakarida (pada frekuensi sekitar satu sel dalam 10 * 7). pneumokokus nonvirulen seperti itu
membentuk koloni kecil, dengan permukaan kasar ketika tumbuh pada media agar darah dan
karenanya disebut Tipe R (Tabel 5.1). (Kapsul polisakarida diperlukan untuk virulensi karena
melindungi sel bakteri terhadap fagositosis oleh leukosit.) Ketika kapsul hadir, itu mungkin dari
beberapa jenis antigenik yang berbeda (Tipe II, III, dll.), Tergantung pada komposisi molekul
spesifik polisakarida dan, tentu saja, pada akhirnya pada genotipe sel.
Berbagai jenis kapsul dapat diidentifikasi secara imunologis. Jika sel Tipe II disuntikkan ke
dalam aliran kelinci, sistem kekebalan kelinci akan menghasilkan antibodi (seperangkat protein
besar tertentu yang fungsinya untuk melindungi organisme terhadap zat asing seperti
makromolekul, virus, dan bakteri; lihat Bab 16 ) yang bereaksi secara spesifik dengan sel Tipe II.
Antibodi tipe II seperti itu akan menggumpalkan pneunococcu tipe II, dan sebaliknya.

Penemuan Griffith yang tak terduga adalah bahwa jika ia menyuntikkan pneumokokus Tipe IIIS
yang terbunuh secara panas (ganas saat hidup) ditambah pneumokokus Tipe IIR (nonvirulen)
yang hidup ke tikus, banyak tikus yang meninggal karena pneumonia, dan sel-sel Tipe IIS hidup
dipulihkan dari bangkai (Gbr. 5.1). Ketika tikus disuntik dengan pneumokokus Tipe IIS yang
terbunuh dengan panas saja (Gambar 5.1, atas), tidak ada tikus yang mati. Virulensi yang diamati
karena itu bukan karena beberapa sel tipe IIS yang selamat dari perlakuan panas. Sangat penting
untuk dicatat bahwa pneuumococci yang hidup secara virulen yang dipulihkan dari bangkainya
berasal dari Polisakarida Tipe III, karena diketahui bahwa sel-sel Tipe R yang tidak
dienkapsulasi dapat bermutasi kembali ke sel-sel Type S yang dienkapsulasi dengan virulen.
Ketika mutasi seperti itu terjadi dalam sel Tipe IIR, sel yang dihasilkan adalah Tipe IIS, bukan
Tipe IIIS. Dengan demikian, 'transformasi' dari sel-sel Type IIR nonvirulent menjadi sel-sel
Type IIIS tidak dapat dijelaskan dengan mutasi, melainkan beberapa komponen dari sel-sel Type
IIIS yang mati ('' prinsip transformasi '') harus mengubah sel-sel Type IIR yang hidup menjadi
Type IIIS.

Eksperimen selanjutnya menunjukkan bahwa fenomena yang dijelaskan oleh Griffith, yang
sekarang disebut transformasi, tidak dimediasi dengan cara apa pun oleh tuan rumah yang hidup.
Fenomena yang sama terjadi pada tabung reaksi ketika sel Tipe IIR hidup ditanam di hadapan sel
Tipe IIIS mati atau ekstrak sel Tipe IIIS. Karena jelas ditunjukkan bahwa fenotipe baru, Tipe
IIIS, adalah turun temurun, yaitu, disebabkan oleh perubahan genotipe sel yang diwariskan
secara permanen, demonstrasi transformasi secara rapi mengatur panggung untuk menentukan
dasar kimiawi faktor keturunan dalam pneumococcus. . yang tersisa adalah menentukan
komponen ekstrak sel apa yang bertanggung jawab untuk transformasi.

Bukti Bahwa "Prinsip Transformasi" Adalah DNA

'' Prinsip transformasi '' terbukti DNA pada tahun 1994 ketika Avery, MacLeod, dan McCarty
menerbitkan hasil dari serangkaian eksperimen yang luas dan melelahkan. Mereka menunjukkan
bahwa jika DNA murni yang dimurnikan dari pneumokokus Tipe IIIS hadir dengan
pneumokokus Tipe IIR, beberapa pmeumokokus ditransformasikan menjadi Tipe IIS (gambar
5.2). Tetapi bagaimana orang bisa yakin bahwa DNA itu benar-benar murni? Membuktikan
kemurnian lengkap dari setiap zat makromolekul sangat sulit. Mungkin persiapan DNA
mengandung beberapa molekul protein dan protein yang terkontaminasi ini bertanggung jawab
untuk transformasi yang diamati.

HAL 94
the most definitive experiments in Avery, MacLeod, and McCarty's ''proof'' that DNA was the
transforming principle involved the use of enzymes (proteins that catalyze specific metabolic
reactions) that degrade DNA, RNA, or protein. in separate experiments, highly purified DNA
from Type IIIS cells was treated with (1) deoxyribonuclease (''DNase,'' which degrades DNA),
(2) ribonuclease (''RNase,'' which degrades RNA), or (3) proteases (which degrade proteins) and
then tested for its ability to transform Type IIR cells to Type IIIS. only DNase had any effect on
the transforming activity of the DNA preparation; it totally eliminated all transforming activity
(Fig. 5.2).

Although the molecular mechanism by which transformation occurred remained to be worked

out in subsequent investigations, the results obtained by Avery and coworkers cleary established
that the genetic information in pneumococcus was present in DNA. We now know that the
segment of the DNA in the chromosome of pneumococcus that carries the genetic information
specifying the synthesis of a Type III capsule is physically integrated into the chromosome of the
Type IIR recipient cell by a specific recombination process occuring during transformation (See
Chapter 8).

The''Hershey-Chase Experiment''

Additional direct evidence indicating that DNA is the genetic material was published in 1952 by
A. D. Hershey (1969 Nobel Prize Winner) and M. Chase. These experiments showed that the
genetic information of a particular bacterial virus (bacteriophage T2) was present in DNA. Their
results, although probably less definitive than the results of Avery, Macleod, and Mc-Carty, had
a great impact on the acceptance by scientists of DNA as the genetic material. This large impact
undoubtedly wass the result of the elegant simplicity of the so-called ''Hershey-Chase
experiment.''

Viruses are the smallest living organisms; they are living at least in the sense that their
reproduction is controlles by genetic information stored in nucleic acids via the same processes
as in cellular organisms. Viruses, however, are acellular obligate parasites that can reproduce
only in appropriate host cells. Their reproduction is totally dependent on the metabolic
machinery (ribosomes, energy-generating systems, etc.) of the host. Viruses have been extremely
useful in studying many genetic processes bacause of their simple structure and chemical
composition (many contain only proteins and nucleic acids) and their very rapid reproduction
(15-20 minutes for some bacterial viruses under optimal conditions).

Bacteriophage T2, which infects the common colon bacillus Escherichia coli, is composed of
about 50 percent DNA and about 50 percent protein (Fig. 5.3). Experiments prior to 1952 had
shown that all bacteriophage T2 reproduction takes place within E. coli cells. Therefore, when
Hershey and Chase showed that the DNA of the virus particle entered the cell, whereas most of
the protein of the virus remained adsorbed to the outside of the cell, this strongly implied that the
genetic information necessary for viral reproduction was present in DNA. The basis for the
Hershey-Chase experiment is that DNA contains phosphorus but no sulfur, whereas proteins
contain sulfur but no phosphorus. Thus, Hershey and Chasse were able to specifically label either
(1) the phage DNA by growth in a medium containing the radioactive isotope, 31P, or (2) the
phage protein coats by growth in a medium containing radioactive sulfur, 35S, in place of the
normal isotope, 32S (Fig. 5.3). When T2 phage particles labeled with 35S were mixed with E.
coli cells for a few minutes and were then subjected to shearing forces by placing the infected
cells in a Waring blender, it was found that most of the radioactivity (and thus the proteins) could
be removed from the cells without affecting progeny phage production. When T2 phage in which
the DNA was labeled with 32P werer used, however, essentially all the radioactivity was found
inside the cells, that is, it was not subject to removal by shearing in a blender. The sheared-off
phage coats were separated from the infected cells by low-speed centrifugation which pellets
(sediments) cells while leaving phage particles suspended. These results indicated that the DNA
of the virus enters the host cell, whereas the protein coat remains outside the cell.

eksperimen paling definitif dalam 'bukti' 'Avery, MacLeod, dan McCarty bahwa DNA adalah
prinsip transformasi yang melibatkan penggunaan enzim (protein yang mengkatalisasi reaksi
metabolik spesifik) yang menurunkan DNA, RNA, atau protein. dalam percobaan terpisah, DNA
yang sangat murni dari sel Tipe IIIS diperlakukan dengan (1) deoksiribonuklease ('DNase,' 'yang
mendegradasi DNA), (2) ribonuklease (' 'RNase,' 'yang mendegradasi RNA), atau (3) protease
(yang mendegradasi protein) dan kemudian diuji kemampuannya untuk mengubah sel Tipe IIR
menjadi Tipe IIIS. hanya DNase yang memiliki efek pada aktivitas transformasi persiapan DNA;
itu benar-benar menghilangkan semua aktivitas transformasi (Gbr. 5.2).

Meskipun mekanisme molekuler dimana transformasi terjadi tetap harus dikerjakan dalam
penyelidikan selanjutnya, hasil yang diperoleh oleh Avery dan rekan kerja menetapkan bahwa
informasi genetik dalam pneumococcus hadir dalam DNA. Kita sekarang tahu bahwa segmen
DNA dalam kromosom pneumococcus yang membawa informasi genetik yang menentukan
sintesis kapsul Tipe III secara fisik terintegrasi ke dalam kromosom sel penerima Tipe IIR oleh
proses rekombinasi khusus yang terjadi selama transformasi (Lihat Bab 8).
'' Eksperimen Chershey-Chase ''

Bukti langsung tambahan yang menunjukkan bahwa DNA adalah bahan genetik diterbitkan pada
tahun 1952 oleh A. D. Hershey (Pemenang Hadiah Nobel 1969) dan M. Chase. Percobaan ini
menunjukkan bahwa informasi genetik dari virus bakteri tertentu (bacteriophage T2) hadir dalam
DNA. Hasil mereka, walaupun mungkin kurang pasti dari pada hasil Avery, Macleod, dan Mc-
Carty, memiliki dampak besar pada penerimaan oleh para ilmuwan DNA sebagai bahan genetik.
Dampak besar ini tidak diragukan lagi adalah hasil dari kesederhanaan yang elegan dari apa yang
disebut '' percobaan Hershey-Chase. ''

Virus adalah organisme hidup terkecil; mereka hidup setidaknya dalam arti bahwa reproduksi
mereka dikendalikan oleh informasi genetik yang disimpan dalam asam nukleat melalui proses
yang sama seperti pada organisme seluler. Namun, virus adalah parasit obligat aselular yang
hanya dapat bereproduksi dalam sel inang yang sesuai. Reproduksi mereka sepenuhnya
bergantung pada mesin metabolisme (ribosom, sistem penghasil energi, dll) dari inang. Virus
telah sangat berguna dalam mempelajari banyak proses genetik karena struktur sederhana dan
komposisi kimianya (banyak mengandung hanya protein dan asam nukleat) dan reproduksi
mereka yang sangat cepat (15-20 menit untuk beberapa virus bakteri dalam kondisi optimal).

Bacteriophage T2, yang menginfeksi basil kolon yang umum, Escherichia coli, terdiri dari
sekitar 50 persen DNA dan sekitar 50 persen protein (Gbr. 5.3). Eksperimen sebelum 1952 telah
menunjukkan bahwa semua reproduksi bakteriofag T2 terjadi di dalam sel E. coli. Karena itu,
ketika Hershey dan Chase menunjukkan bahwa DNA partikel virus memasuki sel, sedangkan
sebagian besar protein virus tetap teradsorpsi ke bagian luar sel, ini sangat menyiratkan bahwa
informasi genetik yang diperlukan untuk reproduksi virus ada dalam DNA. . Dasar dari
percobaan Hershey-Chase adalah bahwa DNA mengandung fosfor tetapi tidak ada sulfur,
sedangkan protein mengandung sulfur tetapi tidak ada fosfor. Dengan demikian, Hershey dan
Chasse dapat secara khusus memberi label baik (1) DNA fag dengan pertumbuhan dalam media
yang mengandung isotop radioaktif, 31P, atau (2) mantel protein fag dengan pertumbuhan dalam
media yang mengandung sulfur radioaktif, 35S, pada tempatnya isotop normal, 32S (Gbr. 5.3).
Ketika partikel fag T2 berlabel 35S dicampur dengan sel E.coli selama beberapa menit dan
kemudian dikenakan kekuatan geser dengan menempatkan sel yang terinfeksi dalam blender
Waring, ditemukan bahwa sebagian besar radioaktivitas (dan dengan demikian protein) dapat
dihapus dari sel tanpa mempengaruhi produksi fag progeni. Ketika fag T2 di mana DNA diberi
label dengan 32P werer digunakan, bagaimanapun, pada dasarnya semua radioaktivitas
ditemukan di dalam sel, yaitu, itu tidak dapat dihilangkan dengan menggeser blender. Mantel fag
yang dicukur dipisahkan dari sel yang terinfeksi oleh sentrifugasi berkecepatan rendah yang
membuat pelet (sedimen) sel sambil meninggalkan partikel fag tersuspensi. Hasil ini
menunjukkan bahwa DNA virus memasuki sel inang, sedangkan mantel protein tetap berada di
luar sel.

HAL 96
Since progeny viruses are produced inside the cell, Hershey and Chase's results indicated that the
genetic information directing the synthesis of both the DNA molecules and the protein coats of
the progeny viruses must be present in the parental DNA. Moreover, the progeny particles were
shown to contain some of the 32P, but none of the 35S of the parental phage.

However, the Hershey-Chase experiment did not provide unambiguous proof that the genetic
material of phage T2 is DNA. A significant amount of 35S (and thus protein) was found to be
injected into the host cells with the DNA. Thus, one could always argue that this small fraction
of the phage proteins contained the genetic information. More recently, however, it has been
possible to develop conditions in which protoplasts (cells with the walls removed) of E. coli can
be infected with pure phage DNA. Normal infective progeny phage are produced in these
experiments, called transfection experiments, proving that the genetic material of such bacterial
viruses is DNA.

Karena virus progeni diproduksi di dalam sel, hasil Hershey dan Chase menunjukkan bahwa
informasi genetik yang mengarahkan sintesis molekul DNA dan mantel protein dari progeni
virus harus ada dalam DNA induk. Selain itu, partikel progeni terbukti mengandung sebagian
32P, tetapi tidak ada 35S fag induk.

Namun, percobaan Hershey-Chase tidak memberikan bukti jelas bahwa materi genetik fag T2
adalah DNA. Sejumlah besar 35S (dan dengan demikian protein) ditemukan disuntikkan ke
dalam sel inang dengan DNA. Jadi, kita selalu dapat berargumentasi bahwa fraksi kecil protein
fag ini mengandung informasi genetik. Baru-baru ini, bagaimanapun, telah dimungkinkan untuk
mengembangkan kondisi di mana protoplas (sel-sel dengan dinding dihilangkan) dari E. coli
dapat terinfeksi dengan DNA fag murni. Fag progeni infektif normal diproduksi dalam
percobaan ini, yang disebut eksperimen transfeksi, membuktikan bahwa bahan genetik virus
bakteri tersebut adalah DNA.
RNA as Genetic Material in Small Viruses

As more and more viruses were identified and studied, it became clear that many of them contain
RNA and proteins, but no DNA. In all cases studied to date, it is clear that these ''RNA viruses''
store their genetic information in nucleic acids rather than in proteins just like all other
organism, although in these viruses the nucleic acid in RNA. One of the first experiments that
established RNA as the genetic material in RNA viruses was the so-called reconstitution
experiment of H. Fraenkel-Conrat and B. Singer, published in 1957. Fraenkel-Conrat and
Singer's simple, but definitive, experiment was done with tobacco mosaic virus (TMV), a small
virus composed of a single molecule of RNA encapsulated in a protein coat. Different strains of
TMV can be identified on the basis of differences in the chemical composition of their protein
coats.

By using the appropriate chemical treatments, one can separate the protein coats of TMV from
the RNA. Moreover, this process is reversible; by mixing the proteins and the RNA under
appropriate conditions, ''reconsitution'' will occur, yielding complete, infective TMV particles.
Fraenkel-Conrat and Singer took two different strains of TMV, separated the RNAs from the
protein coats, and reconsituted ''mixed'' viruses by mixing the proteins of one strain with the
RNA of the second strain, and vice versa. When these mixed viruses were used to infect tobacco
leaves, the progeny viruses produced were always found to be phenotypically and genotypically
identical to the parent strain from which the RNA had been obtained (Fig. 5.4). Thus, the genetic
information of TMV is stored in RNA, not in protein.

The genetic information of all living organisms, except the RNA viruses, is stored in DNA.
What, then, is the structure of DNA, and in what form is the genetic information stored? What
features of the structure of DNA allow for the transmission of genetic information from
generation to generation ?

Nucleic acids, first called ''nuclein'' because they were isolated from cell nuclei by F. Miescher in
1869, are macromolecules composed of repeating subunits calles nucleotides. Each nucleotide is
composed of (1) a phosphate group, (2) a five-carbon sugar (or pentose), and (3) a cyclic
nitrogen-containing compound called a base (Fig. 5.5). In DNA, the sugar is 2-deoxyribose (thus
the name deoxyribonucleic acid); in RNA, the sugar is ribose (thus ribonucleic acid). These are
four different bases commonly found in DNA: adenine, guanine, thymine, and cytosine. RNA
also usually contains adenine, guanine, and cytosine, but has a different base, uracil, in place of
thymine.

RNA sebagai Bahan Genetik pada Virus Kecil

Semakin banyak virus diidentifikasi dan dipelajari, menjadi jelas bahwa banyak dari mereka
mengandung RNA dan protein, tetapi tidak ada DNA. Dalam semua kasus yang diteliti hingga
saat ini, jelas bahwa '' virus RNA '' ini menyimpan informasi genetik mereka dalam asam nukleat
daripada dalam protein seperti halnya semua organisme lain, meskipun dalam virus ini asam
nukleat dalam RNA. Salah satu percobaan pertama yang menetapkan RNA sebagai bahan
genetik dalam virus RNA adalah apa yang disebut percobaan rekonstitusi dari H. Fraenkel-
Conrat dan B. Singer, yang diterbitkan pada tahun 1957. Eksperimen Fraenkel-Conrat dan Singer
yang sederhana, tetapi definitif, dilakukan dengan tembakau mosaik virus (TMV), virus kecil
yang terdiri dari molekul tunggal RNA yang dienkapsulasi dalam mantel protein. Strain TMV
yang berbeda dapat diidentifikasi berdasarkan perbedaan komposisi kimia dari mantel
proteinnya.

Dengan menggunakan perawatan kimia yang tepat, seseorang dapat memisahkan mantel protein
TMV dari RNA. Selain itu, proses ini bersifat reversibel; dengan mencampurkan protein dan
RNA di bawah kondisi yang tepat, '' rekonsiliasi '' akan terjadi, menghasilkan partikel TMV
infektif lengkap. Fraenkel-Conrat dan Singer mengambil dua jenis TMV yang berbeda,
memisahkan RNA dari mantel protein, dan mengkompensasi virus “campuran” dengan
mencampurkan protein dari satu galur dengan RNA dari galur kedua, dan sebaliknya. Ketika
virus campuran ini digunakan untuk menginfeksi daun tembakau, virus progeni yang dihasilkan
selalu ditemukan secara fenotip dan genotip identik dengan strain induk dari mana RNA telah
diperoleh (Gambar 5.4). Dengan demikian, informasi genetik TMV disimpan dalam RNA, bukan
dalam protein.

Informasi genetik semua organisme hidup, kecuali virus RNA, disimpan dalam DNA. Lalu, apa
struktur DNA, dan dalam bentuk apa informasi genetik disimpan? Apa ciri-ciri struktur DNA
yang memungkinkan transmisi informasi genetik dari generasi ke generasi?

Asam nukleat, pertama kali disebut 'nuklein' 'karena diisolasi dari inti sel oleh F. Miescher pada
tahun 1869, adalah makromolekul yang terdiri dari subunit berulang yang disebut nukleotida.
Setiap nukleotida terdiri dari (1) gugus fosfat, (2) gula lima karbon (atau pentosa), dan (3)
senyawa yang mengandung nitrogen siklik yang disebut basa (Gbr. 5.5). Dalam DNA, gula
adalah 2-deoksiribosa (demikian nama asam deoksiribonukleat); dalam RNA, gula adalah ribosa
(asam ribonukleat). Ini adalah empat basa berbeda yang biasa ditemukan dalam DNA: adenin,
guanin, timin, dan sitosin. RNA juga biasanya mengandung adenin, guanin, dan sitosin, tetapi
memiliki basa yang berbeda, urasil, sebagai pengganti timin.