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Definicion: es una técnica de laboratorio que consta de un gel o una solución que contiene
nutrientes necesarios para permitir, en condiciones favorables de pH y T, el crecimiento de virus,
MO, células, tejidos vegetales e incluso pequeñas plantas.
Constituyentes
Fuentes de energía:
Organicos: carbohidratos, proteínas, polisacáridos, grasas, etc.
Inorganicos: amonio, nitritos, azufre, etc.
Luz
Componentes estructurales celulares:
Componentes principales: C, H, O, S, P, K, Mg, Ca, Fe, Na.
Elementos trazas: Co, Md, Cu, Mn.
Factores de crecimiento: se llama asi a cualquier compuesto organico que un
microorganismo requiere como precursor o constituyente de su material organico celular,
pero que no puede sintetizarlo a partir de sus fuentes de carbono mas simples, por lo que
se le debe proporcionar como nutriente. Ejemplos: AA, purinas, pirimidinas y vitaminas.
Agua
Líquidos: usualmente se los denomina caldos ya que contienen los nutrientes disueltos en agua.
Permiten obtener suspensiones con un elevado numero de MO. Pueden ser con solidos en
suspensión como en la fermentación vínica o sin solidos en suspensión como la glucosa y sales
solubles.
Solidos: se pueden preparar a partir de medios liquidos a los cuales se les añaden agentes
solidificantes como agar, geleatina o silica gel. Se usan con frecuencia en el aislamiento y
mantenimiento de los MO en el laboratorio.
Medios naturales o complejos: están constituidos por sustancias complejas de origen animal o
vegetal y usualmente se complementan con el añadido de minerales y otras sustancias. No se
conocen todos lo componentes del medio de cultivo, ni las cantidades exactas en que están
presentes. Ejemplo: melaza de azúcar, extracto de carne, etc
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Condiciones ambientales que afectan el crecimiento de los MO
Temperatura: cada MO tiene una temperatura optima en la cual su crecimiento es mas rápido; una
temperatura minima por debajo de la cual no crece y una temperatura máxima por encima de la
cual el crecimiento no es posible, estas tres temperaturas se denominan temperaturas cardinales y
son características de cada microorganismo.
pH: la acidez o alcalinidad de un medio de cultivo se expresa por su pH. Para la mayoría de las
bacterias, el pH optimo sera entre 6,5 y 7,5 aun cuando algunas pocas especies pueden crecer en
los extremos del rango del pH. Las levaduras y los mohos pueden crecer a valores de pH mas bajos.
Preparación
La base para su elaboración es un medio deshidratado, un medio que esta en polvo el cual hay que
disolverlo en agua y esterilizar.
4. Retirar del calor y colocar un tapon hecho de algodón envuelto en grasas. El tapon debe quedar
fijo pero no apretado.
1. Métodos físicos:
a. Calor húmedo: autoclave: es un recipiente de presión metálico de paredes gruesas con un cierre
hermético que permite trabajar a alta presión para realizar una esterilización con vapor de agua.
La presión elevada permite que el agua alcance temperaturas superiores a los 100°C.
c. Rayos UV
d. Filtracion
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2. Metodos qcos:
a. Hipoclorito de sodio
b. Alcohol etílico
c. Cloruro de benzalconio
Inoculación es ubicar algo que crecerá y se reproducirá. Los MO que se utilizan en la inoculación
se llaman inoculo.
Sanitizacion: Tratamiento para disminuir la cuenta microbiana y así mantener los niveles
de salud pública. Esto solo se puede hacer sobre objetos inanimados
Biorreactores
Grado de reducción: son los equivalentes en un Cmol de compuesto que son transferidos al
oxigeno en una reacción de oxidación, sujeto a determinados grados de referencia (CO2, agua y
compuesto nitrogenado)
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Configuraciones
COLUMNA DE BURBUJEO
Relacion de altura/diámetro de 4 a 6.
El aire es insuflado mediante un difusor o plato perforado.
El mezclado es resultado de la corriente de aire dentro del biorreactor.
La transferencia de O2 y el mezclado depende del flujo de aire y las características
reologicas del medio.
Hay que controlar la velocidad de flujo para evitar flujos heterogéneos.
AIR LIFT
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Sistemas de cultivo
Batch
Ventajas Desventajas
Es mas simple y rápido No es posible controlar
Puede adaptarse a diferentes tipos de Puede presentarse inhibición por sustrato
Biorreactores
Permite el calculo de parámetros Alta demanda de O2
estequiometricos en forma rápida y sencilla
Es útil para comparar diferentes medios de cultivo Dificultad para estimar velocidades volumétricas
Batch alimentado
Ventajas Desventajas
Mayor productividad que el sistema batch Requiere de un reservorio esteril y una bomba
Menor inhibición por sustratos No es adaptable a cualquier configuración de
biorreactor
No se limita por oxigeno si el patch previo no No se puede estimar fácilmente los qi
se limito
Evita metabolismos de sobreflujo Esta limitado por los volúmenes del biorreactor
Tiempos muertos entre procesos
Cultivo continuo
Ventajas Desventajas
Puedo controlar externamente la en un valor Requiere de un reservorio esteril y una bomba
deseado
Se puede utilizar para estudiar el metabolismo Todas las operaciones de upstream y downstream
microbiano deben operar en conrinuo
Permite estudiar el efecto de las condiciones de Se puede contaminar con mayor facilidad
cultivo en la fisiología celular
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Alimentos
Son las sustancias nutritivas, sólidas o líquidas, que sirven para cumplir con las funciones vitales de
los seres vivos.
Origen animal: son los alimentos que provienen de los animales. Como por ejemplo: las
carnes, embutidos, huevo, leche y sus derivados.
Origen vegetal: son los alimentos que provienen de las plantas. Como por ejemplo: las
verduras, frutas, el aceite, etc.
Origen mineral: estos alimentos provienen de la naturaleza; y son el agua y la sal.
Energéticos: son los alimentos que nos proporcionan energía para poder
desarrollar diferentes actividades como correr saltar, estudiar, etc. Lo encontramos en las
grasas, harina, azúcar como el pan, fideos arroz, dulces, cereales, chocolates, mantequilla,
aceite, maní, etc.
Constructores: son aquellos alimentos que nos ayudan a fortalecer nuestros huesos y
músculos. Entre estos alimentos tenemos el huevo, la leche, legumbres, trigo, lenteja, soya
y queso, etc.
Protectores: protegen nuestro cuerpo y lo mantienen siempre listo para funcionar. Son
alimentos protectores por excelencia las frutas, los cereales y las verduras porque
contienen vitaminas y minerales en mayor cantidad.
Alimentos fermentados:
Son aquellos en los que intervienen microorganismos durante su proceso de elaboración. Aquellos
microorganismos de interés son las levaduras, las bacterias y los mohos. Sus beneficios son los
siguientes:
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Alimento contaminado: es el que de forma accidental contiene microorganismos (bacterias o
virus), parásitos, sustancias químicas o radiactivas u objetos extraños (restos de huesos, metales).
Ninguna de estas circunstancias altera el alimento de forma significativa, presentando un olor,
color y sabor totalmente normales; esto posibilita su consumo, pudiendo provocar daños o
enfermedades en el consumidor.
Alimento nocivo: es el que nos provoca algún tipo de efecto negativo, ya sea de forma inmediata o
tras ingestas repetidas. Algunos alimentos sólo son nocivos para determinados grupos de
personas, por ejemplo: alimentos con gluten a los que padecen celiaquía. [Hilando con el párrafo
anterior, para un alérgico a las avellanas, un plato “contaminado”con ese fruto seco se convierte
de inocuo a nocivo]
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Probióticos- L. bulgaricus y S. thermophilus.
Los cultivos conocidos como probióticos son bacterias beneficiosas que residen naturalmente en el
tracto digestivo. Éstos mejoran la función intestinal, promueven la buena digestión y mejoran las
defensas naturales del organismo.
Kéfir
Es una leche fermentada artesanal de originaria de la región del Cáucaso euroasiático. El Kefir
es un Alimento descripto en el Código Alimentario Argentino. Popular en países del este
europeo y también es industrializado en países occidentales. En la Argentina algunas familias
continúan la tradición de elaborar este producto artesanalmente. Los gránulos de Kéfir son el
fermento propio del kéfir, los cuales tienen pocos milímetros a unos dos o tres centímetros de
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diámetro. Su matriz está compuesta por proteínas y por polisacáridos. Posee un complejo
sistema microbiológico en asociación simbiótica. Su microbiota está formado por lactobacilos,
lactococos y levaduras
Características
• Preservación
• Alta acidez/bajo pH (vino)
• Etanol (todas bebidas alcohólicas)
• Sulfitos (vino)
Vino: bebida proveniente de la fermentación alcohólica de los azúcares del jugo de uva por acción
de levaduras y, en ciertos casos, por bacterias lácticas.
• Vinos naturales
• Secos
• Ligeramente dulces
• Espumantes
• Vinos para postres y aperitivos
• Vino con flavor especial (e.g. Vermut)
• Jerez
• Vinos dulces
Proceso de producción: aplastar las uvas para obtener el jugo llamado “Mosto”. Agregado de SO 2
(depende del vino) el cual es un agente anti-browning (inhibe el crecimiento de organismos
indeseables). Fermentación: inocular con cultivo activo de levaduras (1-5%) e incubar a 70-85oC.
Estacionar/Añejar/Filtrar/Embotellar.
Cerveza: es el extracto fermentado de los granos de cereales, principalmente cebada, que han
sufrido un proceso de "malteado".
Características principales
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• Formación de espuma blanca al servirse
Las materias primas en la fabricación de cerveza son: malta, lúpulo, agua y levadura. La cebada se
transforma en malta por:
Obtención de cerveza a partir de los cereales malteados: molienda del cereal malteado, adición de
agua y macerado, obtención por filtración del jugo al que se añade el lúpulo, fermentación por
adición de levadura, filtración y almacenamiento en frío.
Las levaduras añadidas producen la transformación de los azúcares del mosto en alcohol, con
producción de CO2. Dura entre 2-5 días a una temperatura comprendida entre 10-20º C.
Fermentación secundaria
Bebidas destiladas
1. Donde la materia prima va a influir en las características organolépticas del producto final:
whisky, ron, brandy...
2. Consisten en un alcohol sometido a un proceso para darle un determinado sabor: ginebra,
vodka, anis..
Whisky: es una bebida alcohólica destilada preparada a partir del extracto de cereales
fermentados y generalmente envejecido en barrica de roble antes de embotellarlo. La
fermentación se lleva a cabo mediante la inoculación de levaduras, Saccharomyces cerevisiae, que
fermentan la masa a 20-30º C durante 2-3 días para dar una concentración en etanol del 6-9%.
Después se produce la destilación para aumentar el contenido en alcohol del producto.
Ron: proviene de la destilación del jugo de caña de la azúcar o melaza previamente fermentado.
Generalmente la materia prima se pasteuriza, se diluye hasta una concentración de azúcares del
12-20%, se ajusta el pH a 4 con ácido sulfúrico y se añade fosfato o sulfato amónico como fuente
de nitrógeno para las levaduras. La fermentación se lleva a cabo a 20-30 ºC durante 2 días para
rones con sabor ligero y aprox. 12 días para rones con sabor más acusado. En algunos casos en el
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proceso de fermentación se incluyen levaduras osmotolerantes como Schizosaccharomuces
pombe y especies de Clostridium, productoras de ácido butírico.
• Sólidos
Tratamiento biológico
• Líquidos
• Gaseosos
M.O.
Residuo
Qué hacer?
• Mejora del proceso para minimizar residuos (Tecnologías limpias). Reemplazo de métodos
químicos de producción por biológicos.
• Aprovechamiento (separación): A) Como tal si tiene mercado (i.e.: flavonoides de aguas de
lavado de industria juguera, proteínas obtenidas por ultrafiltración de suero de queso). B)
Como sustrato (vinaza).
• Tratamiento para eliminar.
Tratamiento
Primario: operaciones físicas (sedimentación para sólidos insolubles, i.e. arena) y flotación
(grasas).
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Secundario: tratamientos biológicos para eliminar materia orgánica (m.o. naturales y/o
inoculados para bajar tiempo de arranque).
Terciario: eliminación de iones (N y P) y m.o.
Barros activados
biomasa
Es necesaria una gran superficie, se excava y apisona la tierra. La profundidad será cerca de 1 m y
la superficie puede ser de 2 a 4 ha. El efluente se lleva hasta la mitad por un caño para que los
sólidos no se depositen cerca de la orilla. Algunas lagunas se dividen en unidades menores y
operan en serie. El tiempo de retención es de 20 a 30 días. El agua purificada puede ser vertida a
un río, o no tener efluente ya que el nivel se mantiene constante por evaporación o infiltración.
Consisten en un lecho formado por un medio sumamente permeable al que se adhieren los
microorganismos y a través del cual percola el agua residual. El medio filtrante suele estar formado
por piedras (en ocasiones se emplean escorias) o diferentes materiales plásticos de relleno. En el
caso de filtros percoladores con medio filtrante de piedra, el diámetro de las piedras oscila entre
2,5 y 10 cm. La profundidad del lecho varía en cada diseño, pero suele situarse entre 0,9 y 2,5 m.
Los filtros de piedra suelen ser circulares, y el agua residual se distribuye por la parte superior del
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filtro mediante un distribuidor rotatorio. La materia orgánica presente en el agua residual se
degrada por la acción de la población de microorganismos adherida al medio. La materia orgánica
del líquido es absorbida en la película biológica, en cuyas capas externas (0,1 a 0,2 mm) se degrada
bajo la acción de los microorganismos aerobios. Cuando los microorganismos crecen, aumenta el
espesor de la película, y el oxígeno se consume antes de que pueda penetrar en todo el espesor de
la película. Por lo tanto, en la proximidad de la superficie del medio se crea un ambiente
anaerobio. La DBO es la demanda bioquímica de oxígeno que tiene un agua. Es la cantidad de
oxígeno que los microorganismos, especialmente bacterias (aeróbicas o anaeróbicas), hongos y
plancton, consumen durante la degradación de las sustancias orgánicas contenidas en la muestra.
Se utiliza para medir el grado de contaminación y se expresa en mgO2/l. La DBO es un proceso
biológico y por lo tanto es delicado y requiere mucho tiempo. Como el proceso de descomposición
depende de la temperatura, se realiza a 20ºC durante 5 días de manera estándar, denominándose
DBO5.
Por otra parte, la DQO es la demanda química de oxígeno del agua. Es la cantidad de oxígeno
necesaria para oxidar la materia orgánica por medios químicos y convertirla en CO2 y H2O. Se
expresa también en mgO2/l Cuanto mayor es la DQO, más contaminada está el agua. La DQO es
una prueba que solo toma alrededor de tres horas, por lo que los resultados se pueden tener en
mucho menor tiempo que lo que requiere una prueba de DBO. La DQO en aguas industriales
puede situarse entre 50 y 2.000 mgO2/l, aunque puede llegar a 5.000 según el tipo de industria.
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Mecanismos geneticos: acidos nucleicos
Los acidos nucleicos son :
Funciones:
B. Acido fosfórico
C. Bases nitrogenadas. Son compuestos heterocíclicos de C y N. Son de dos tipos:
Bases púricas: derivadas de la purina (adenina, guanina)
Bases pirímidinicas: derivadas de la pirimidina ( citosina, timina, uracilo).
La unión de una pentosa y una base nitrogenada constituye un NUCLEÓSIDO. Se establece un enlace N-glucosídico
entre el carbono 1 de la pentosa y el nitrógeno 9 si la base es púrica o 1 si es pimidínica.
La unión entre un nucleósido y un ácido fosfórico constituye un NUCLEÓTIDO. Se establece un enlace fosfodiéster
entre el carbono 5 de la pentosa y un H del acido fosfórico.
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Para el caso del ADN los enlaces fosfodiéster, o sea las desoxirribosas con los Pi, forman un plano en modo de cinta,
conformadas en doble hélice, unidos perpendicularmente a las Timinas, Adenosinas Citosinas, Guaninas; lo que lo
asemeja a los escalones de una escalera caracol.
Cada escalon de la escalera, esta formado por una secuencia de hemi-escalones, esto es una base nitrogenada de
cada lado de los planos conformados por los PO4H2- y las pentosas.
Las bases se unen por puentes de H en las secuencias A-T, o T-A y C-G o G-C.
Mensajero: actua como molde y transporta la información genética para la síntesis de las proteínas.
Presenta codones, grupo de 3 nucleoticos.
Transporta la secuencia copiada del ADN abierto, en sus series aminoacídicas, hacia el ribosoma para su
trasuccion y que este sintetice la proteína que establecen los aminoácidos de la hebra del ADN.
De transferencia: transporta los aminoácidos hacia los ribosomas para la síntesis proteica, esta en el
citoplasma, contiene anticodones.
Ribosómico: Recibe la información genética; traduce las proteínas. Se ubica en el ribosoma ( organela donde
se sintetizan las proteínas).
Heteronuclear: es el precursor de los ARN.
Codón de inicio de la traducción: es una secuencia del ARN de tres nucleoticos (es decir, un codón), que indica a la
maquinaria celular el lugar de la cadena en el que comienza la traducción del ARN mensajero.
El ADN se encuentra codificado en el triplete TAC. El ARN mensajero queda como AUG.
1. El ADN se copia a ARN en un proceso que se llama transcripción ( se copia una molecula de ADN a una
molecula de ARN).
2. Estas moléculas luego van a ser leidas por una maquina que se llama ribosoma, en un proceso llamado
traducción.
3. Este proceso convierte la información genética contenida en el ADN en información obtenida en una
secuencia de aminoácidos de una proteína.
Permite:
Las bases nitrogenadas forman un nucleo hidrófobo dentro de la doble hélice y los azucares y los grupos fosfato,
en sus formas anionicas, conforman la capa exterior hidrofilica.
Las técnica de PCR es la amplificación de la cadena complementaria de ADN por síntesis y se basa en los puntos 1
y 2 de la trasmisión genética.
Durante la replicación la molecula de ADN se desenrolla y cada cadena se convierte en un molde para la síntesis
de una cadena complementaria nueva.
Cada cadena complementaria nueva es una molecula hija y es una copia exacta de la molecula madre.
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Secuencias:
El ADN polimerasa une por puentes de H (3 para C=G y 2 para A=T) a las bases complementarias de la
nueva hebra de crecimiento.
Hay distintas formas de ADN polimerasa pero la que une es la ADN polimerasa III desde 5’ hacia 3’.
La otra hebra 3’5’ es la hebra retrasada y el ADN polimerasa sintetiza en tramos.
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}
Principios de la PCR
Tecnica basal:
1. Permite replicar (amplificar) genes de interés biológico entre miles de millones de moléculas de ADN sin
necesidad de purificar previamente.
2. Es una alternativa efectiva para la clonación bacteriana.
3. Los genes replicados pueden ser millones en tan solo cuestión de horas.
Pasos
1- Se incorpora en tubo portamuestras las muestras de ADN que contiene la secuencia target y se la T a 35°C.
2- Se inicia el primer ciclo aumentando la T a 95°C para romper los puentes de H de las hebras. Desnaturalización
del ADN.
3- Luego se baja la T a 60°C para que se unan los primers específicos a cada una de las cadenas complementarias,
3´- 5´y 5´- 3´.
4- Los primers hacen de molde para que la taq polimerasa sintetice ADN desde el extremo 3´ usando los
nucleótidos libres a una de T a 72°C.
5- La polimerasa solo amplificará esa región del gen porque los primers son específicos.
6- En el primer ciclo, la polimerasa continua hasta que se descarrila, habiendo formado dos cadenas doble hélice
a partir de una.
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I) Desnaturalización a 95°C.
8- De esta forma se obtienen 4 cadenas con un extremo 3´ mas largo y dos cadenas target.
9- En el 3er ciclo se repiten nuevamente los 3 pasos del punto 7 y la cantidad de moléculas de los target
aumentaran exponencialmente.
10- En el 4to ciclo se obtienen 8 moléculas target y 8 moléculas con un extremo 3´mas largo.
Al finalizar el 5 to ciclo se obtendrán 22 moléculas blanco y solo 10 moléculas con extremo 3´ mas largo.
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