INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

Práctica: Precipitación, separación y punto isoeléctrico de proteínas
Integrantes: Cedillo Alcantara Jan Alexis y Loperena Chávez José Antonio.

Introducción
Sobrenadante + Presencia de
Las proteínas contienen una gran cantidad de grupos proteínas solubles
ácidos y grupos básicos, los cuales hacen que la Precipitado 1 + Presencia de
solubilidad de las proteínas dependa de la proteínas
concentración de sales disueltas, la constante precipitadas
isoeléctrica, pH y temperatura. Filtrado + Presencia de
proteínas
Las proteínas son solubles en agua debido a los grupos Precipitado 2 - Negativo por
radicales libres de los aminoácidos que al ionizarse ausencia de
establecen puentes de hidrogeno con las moléculas de proteínas
agua. Así cuando una proteína se solubiliza queda Tabla 1. Resultados de Sating-out
recubierta de una capa de moléculas de agua que
impide la unión con otras proteínas, provocando su
precipitación. Tabla 2. Precipitación por efecto del pH
La solubilidad de una proteína tiende a aumentar con el Tubo(mL) 1 2 3 4
nivel de concentración salina a lo cual se le conoce Clara de 3.0 3.0 3.0 3.0
como fenómeno Salting in que explica como cuando huevo
incrementamos la concentración salina en nuestra HCl 0.1 N 1.0 x x x
solución la solubilidad proteica incrementara. NaOH 0.1N 1.0 x x
Regulador de c x 1.0 -
Algunos solventes miscibles con el agua como la acetatos 0.1M
acetona o el etanol son buenos precipitantes de Agua x x x 1.0
proteínas debido a sus bajas constantes dieléctricas Observaciones + - + -
que reducen el poder de solvatación de las soluciones.

El punto isoeléctrico es el valor de pH en el cual la Tabla 3. Precipitación por modificación de la

carga neta de la proteína es cero y no migra en un constante dieléctrica
campo eléctrico. Tubo(mL) 1 2
Objetivos Clara de huevo 2.0 2.0

Analizar el efecto que produce la modificación de Etanol 1.0 x

factores fisicoquímicos sobre la solubilidad de las Agua x 1.0
proteínas. Observaciones Se observa No hay
precipitado precipitado
Determinar el punto isoeléctrico de la insulina, debido a su por su
basándose en sus propiedades de solubilidad a baja constante constante
diferentes valores de pH. dieléctrica. dieléctrica
más alta.

Tabla 4. Precipitación por metales pesados

Resultados Tubo (mL) 1 2 3 4 5
Biuret Interpretación Clara de 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
huevo
 HgCl2 0.25 x x x x

AgNO3 x 0.25 x x x
Pb(C2H3O2) x x 0.25 x x
NaCl x x x 0.25 x
Agua x x x x 0.25
Observaciones + + + - -

Discusión Conclusiones
La finalidad de la primera prueba es separar a las Las soluciones con proteínas ven afectada su
proteínas del huevo a partir del metodo Sating-out al solubilidad debido a factores como el cambio en su pH,
que se le agrego sulfato de amonio lo que provocó la el aumento de la concentración de sales o el cambio en
precipitación de las proteínas en el precipitado y la constante dieléctrica, disminuyendo o aumentando
sobrenadante lo cual se determino a partir de la prueba su solubilidad en soluciones con alto potencial iónico o
de Biuret, al filtrar se observó que las proteínas se dependiendo del tipo de solución en la que se encuentra
quedaron en el papel filtro ya que en el precipitado dos la proteína.
la prueba de Biuret fue negativa.
En la experiencia de precipitación por efecto del pH
pudimos observar que las proteínas cuando se Bibliografía
encuentran en una solución con un pH ácido tienden a
Macarulla J. (1994) “Bioquímica Humana, curso
precipitarse como fue el caso del HCl y el regulador de
básico” segunda edición. México. Reverte. 166-170pp
acetatos, mientras que si la solución está en un pH
básico comienzan a solubilizarse como sucedió con el Müller W. (2008) “Bioquímica, fundamentos para
NaOH y el agua en menos cantidad. Esto debido a el medicina y ciencias de la vida”. Mexico. Reverte. 106-
punto isoeléctrico de la clara de huevo 107pp
La modificación de la constante dieléctrica es una
constante que afecta la solubilidad de las proteínas,
cuando la solución de proteínas reduce su constante
dieléctrica haciendo que las proteínas se disuelvan
menos como lo hicieron en el experimento con el
etanol ya que los alcoholes y otras sustancias reducen
esta constante.
Por el contrario el experimento numero cuatro nos
permite observar como las proteínas precipitan por la
concentración de sales, como en este caso sales de
metales pesados. Por ello es que la precipitación de
proteínas dio positivo al adicionar a la clara de huevo
HgCl2, AgNO3, Pb(C2H3O2)