SEGUNDO TRABAJO PRÁCTICO

Influencia del pH sobre la actividad de la α-amilasa

Con respecto a la influencia del pH del medio en la actividad enzimática de la α-amilasa,
podemos decir que a pH extremos (es decir, muy ácidos o muy básicos) la enzima no
funciona, o al menos disminuye notablemente su actividad. Aparición del efecto acromático
en el tubo de ensayo con un pH salival de 6,8. Sin embargo, en el tubo de ensayo con un pH
5 (más ácido), no encontró cambios (es decir, no hubo efecto acromático) en 10 minutos de
reacción. Algo parecido ocurrió con el tubo de ensayo con pH 8 (más básico) no hubo efecto
acromático en la reacción. Todas las enzimas tienen un pH óptimo, en donde tienen mayor
actividad, y a medida que se alejan de ese pH (para ambos lados) disminuyen su actividad.
Esto se debe a que algunos restos aminoacídicos de las enzimas (en el caso de que sean
proteínas) tienen cargas y pueden ser los responsables tanto de mantener la estructura
tridimensional de la proteína como de interaccionar con el sustrato. El pH del medio (es decir,
la presencia de iones H+ u
OH-) puede modificar las cargas de estos aminoácidos y de este modo incluso desnaturalizar
a la enzima. Su pH óptimo es 7.
 MATERIALES

3 TUBOS DE ENSAYO PIPETAS SALIVA

ALMIDON DISOLUCION AL
BUFFER pH: 5, 6.8 Y 8 TERMOSTATO A 37°C 1% EN CLORURO DE SODIO
AL 3%

REACTIVO LUGOL
Marcha Experimental

1.

En cada tubo de
ensayo colocar 3 ml
de saliva diluida.

2.

En el tubo de ensayo
número 1 con saliva se
añade 3ml de solución
amortiguadora pH 5

3.

En el tubo de ensayo 2 se
agrega 3 ml de solución
amortiguadora pH 6,8.
4.

En el tubo de ensayo 3 se
coloca 3 ml de solución
amortiguadora pH 8,0

5.

En cada tubo de ensayo

se añade 5 ml de la
disolución de almidón y
¡¡AGITAR!!

6.

Incubar los tubos

de ensayo a 37⁰C
durante 10 minutos
 7.

Luego se añade 1 gota

de reactivo de Lugol en
cada tubo de ensayo

Resumen de componentes en cada tubo de ensayo

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3
Saliva 3 ml 3 ml 3 ml
Amortiguador 3 ml (pH 5) 3 ml (pH 6,8) 3 ml (pH 8)
Almidón 5 ml 5 ml 5 ml
Temperatura 37⁰C 37⁰C 37⁰C
Lugol 1 gota 1 gota 1 gota
RESULTADOS

En solución acuosa, el yodo y el almidón forman un complejo

azul-violáceo con gran especificidad y sensibilidad. La maltosa y
la glucosa no reaccionan con el yodo.

La hidrólisis del almidón se demuestra bien por la desaparición

del color azul en presencia del reactivo de Lugol.