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MICROBIOLOGICOS
EN
CONTROL
DE
CALIDAD:
ASPECTOS
RELEVANTES
Temas:
• Ensayos
frecuentes:
Control
Microbiológico
(Limite
Microbiano),
Esterilidad,
Potencia
AnIbióIca,
Endotoxinas
Bacterianas
–
NormaIva
Fundamento
e
Interpretación
de
cada
ensayo.
• Manejo
de
Cepas
ATCC
• Cambios
recientes
en
USP
ó
BP
ó
en
las
BPL
de
la
OMS
para
ensayos
microbiológicos.
•
Infraestructura
requerida
para
reallizar
los
ensayos
microbiológicos
Areas,
Equipos,
personal-‐
Requerimientos
mínimos
para
implementar
los
ensayos
• Controles
ambientales
requeridos
en
las
áreas
microbiológicas
FUNDAMENTO
E
INTERPRETACIÓN
:
• Control
Microbiológico
(Limite
Microbiano),
•
Esterilidad,
• Potencia
AnIbióIca,
• Endotoxinas
Bacterianas
–
Fase Pre – analítica
Cepas
Control
Preparación
de medios y
diluyentes
Fase Analítica:
Promoción de
Crecimiento Validación
O Aptitud del
método de
prueba
Control
Microbiológico
o
Limite
Microbiano
Objetivo:
Permite determinar el número de bacterias mesófilas
(aerobias) y hongos que pueden desarrollarse en una
muestra así como determinar si en la misma se
encuentran microorganismos de riesgo para la Salud
(patógenos) como:
Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomona
aeruginosa , Salmonella yBacterias gram negativas
tolerantes a la bilis
Control
Microbiológico
-‐
FUNDAMENTO:
Mediante medios de cultivos óptimos se evalúa si la
muestra tiene gérmenes dentro de los límites establecidos
y que éstos no sean patógenos.
Medios de Cultivos:
Se debe evaluar que esten libres de gémenes, para lo
cual se les incuba por lo menos 48 horas y no debe
presentar crecimiento alguno.
Pseudomona Staphylococcus
aeruginosa aureus
CONTROL
MICROBIOLOGICO
102 UFC/g
(Máximo
• Recuento
microbiano
de
aceptable 200
aerobios
totales
UFC/g) Menor
de
10
UFC/g
10 1 UFC/g
(Máximo
• Recuento
combinado
de
de
aceptable 20
hongos
y
levaduras
UFC/g) Menor
de
10
UFC/g
• Determinación
de
patógenos:
Salmonella
sp
Ausente
en
1g
Ausente
en
1g
Pseudomona
aeruginosa
Ausente
en
1g
Ausente
en
1g
Staphylococcus
aureus
Ausente
en
1g
Ausente
en
1g
Escherichia
coli
Ausente
en
1g
Ausente
en
1g
Salmonella
sp
Ausente
en
10g
Ausente
en
10g
Dec
516-‐
Res
1482
Comunidad
Andina(Julio
2011)
-‐
CosméIcos
ÁREA DE APLICACIÓN Y
LÍMITES DE ACEPTABILIDAD
FASE ETARIA
Productos para uso en a. Recuento de microorganismos mesófilos
infantes (hasta 3 años) aerobios totales. Límite máximo 5 x 102 UFC/g ó
Productos para uso en ml.
área de ojos. b. Ausencia de Pseudomonas aeruginosa en 1 g ó
Productos que entran en ml.
contacto con las c. Ausencia de Staphylococcus aureus en
membranas mucosas. 1 g ó ml.
d. Ausencia de Escherichia coli en 1 g ó ml.
Demás productos a. Recuento de microorganismos mesófilos
cosméticos susceptibles aerobios totales. Límite máximo 5 x 103 UFC/g ó
de contaminación ml.
microbiológica. b. Ausencia de Pseudomonas aeruginosa en 1 g ó
ml.
c. Ausencia de Staphylococcus aureus en
1 g ó ml.
d. Ausencia de Escherichia coli en 1 g ó ml.
Productos a ser a. Ausencia de Candida albicans.
utilizados en los órganos
genitales externos
TÉCNICAS
Y
ESPECIFICACIONES
(NormaIva)
ENSAYO
MEDICAMENTO
DISPÓSITIVOS
COSMÉTICOS
MÉDICOS
PRODUCTOS
SANITARIOS
CONTROL
USP,
BP
-‐-‐-‐
DECISIÓN
516
MICROBIOLÓGICO
EUROPEA
Técnicas
RESOLUCION
(ANTES
LÍMITE
OTRAS
Propias
1482
(JULIO
MICROBIANO)
2011
ESTERILIDAD
USP,
BP
USP,
BP
-‐-‐-‐-‐-‐-‐-‐
EUROPEA,
OTRAS
EUROPEA
OTRAS
ENDOTOXINAS
USP,
BP
USP
-‐-‐-‐-‐-‐-‐-‐-‐
BACTERIANAS
EUROPEA
BP
OTRAS
OTRAS
POTENCIA
USP,
BP
-‐-‐-‐-‐-‐-‐-‐-‐-‐-‐-‐-‐-‐
-‐-‐-‐-‐-‐-‐-‐-‐-‐-‐-‐
ANTIBIÓTICA
EUROPEA
OTRAS
Esterilidad
Consiste en evaluar si la
muestra esta libre gérmenes
viables.
Para Antibióticos:
Beta-lactamasa ó Penicinilasa
PENASA
es
el
nombre
comercial,
enzima
que
degrada
la
estructura
de
los
anIbióIcos
conocidos
como
b-‐lactámicos.
Los
anIbióIcos
de
este
Ipo
son
hidrolizados
por
las
b-‐
lactamasas,
pierden
su
acIvidad
anImicrobiana
Especificación
y
forma
de
expresión
de
resultados
S3 M3 M2
S1
S2
S1 M1
Log de Dosis
Log de Dosis
Endotoxinas
Bacterianas
• Son
los
pirógenos
mas
toxigénicos.
• Es
facIble
cuanIficar
la
endotoxina
mediante
una
técnica
in
vitro
denominada
LAL
Valoración
microbiológica
-‐especificación
y
expresión
de
resultados
Ensayo
Especificación
Resultados
Valoración
90.0%
-‐110.0%
de
lo
95.2
de
lo
declarado
Microbiológica
declarado
Ejm
Forma
errada
Forma
adecuada
Primer
Ensayo
97.00
%
Primer
Ensayo
1.986771734
(97)
Segundo
Ensayo
99.00
%
Segundo
Ensayo
1.995635195
(99)
Promedio
98,00%
Promedio
1,991203465
97.995%
¿QUE SON LAS ENDOTOXINAS
BACTERIANAS?
LAL
y magnificación)
Fundamento:
• Las proteínas
coagulables del
lisado de
amebocitos de
Límulus gelifican
en presencia de
las endotoxinas
baterianas
FOTO: ASSOCIATES OF CAPE COD.
PRUEBA DE LIMITE
Y CUANTIFICACIÓN
Ejemplo: Sensibilidad Etiquetada (lambda) 0.25 EU/mL
MVD = 64
DILUCIONES DE LA MUESTRA D.I.= Dilución inicial
Tubos D.I. 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 Control
Negativo C.P.= Control positivo
1 + + + - - - - -
2 + + + - - - - -
C.P.1 + + + + + + + +
C.P.2 + + + + + + + +
Concentración de endotoxinas= λ x IE
λ = Sensibilidad del reactivo
IE= Inversa de la última dilución positiva
LIOFILO DE LA ATCC
Primer
Pasaje CEPAS
DE
RESERVA
Primer Primer
Primer Primer
Pasaje Primer Primer Pasaje
Pasaje Primer Primer Pasaje
Pasaje Pasaje Pasaje Pasaje
Segundo Pasaje
CEPAS
DE
TRABAJO
Segundo
Segundo Pasaje Pasaje
Las
cepas
se
uIlizan
en
Promoción de crecimiento de los
A
medios
C
Prueba de las Propiedades
indicadoras de los medios
D
Ensayos de Aptitud del método de prueba
Características
Medio de cultivo Microorganismo de prueba
C (-) C(+)
Equipamiento;
NO DEBE SER COMPARTIDO
AREAS
–IMPLEMENTACION:
Definir
hacer,
solo
para
lo
que
ha
espacio
suficiente
Control
Esterilidad
Potencia
LAL
Microbiológico
AnYbióYca
Preparación
de
X
X
X
…….
medios
Área
de
lavado
X
X
X
X
de
sucio
Área
de
lavado
X
X
X
x
de
limpio
Áreas
-‐-‐-‐-‐-‐-‐
x
…….
-‐-‐-‐-‐-‐-‐
clasificadas
Área
no
x
x
x
clasificada
Espacio
para
2
2
1
a
3
….,
Incubadoras
Validación de métodos de ensayo
Los métodos de ensayo estándares (farmacopeicos) se
consideran validados. Sin embargo, se necesita demostrar que
el método de ensayo es adecuado para su uso en la
recuperación de microorganismos en presencia del producto
específico.
Incubadora
común
1
1
1
para
medios
pH
metro
X
X
X
x
EN
EL
2011
SE
PÚBLICA
BPL
DE
LA
OMS
ESPCÍFICA
PARA
MICROBIOLOGÍA
Buenas
pracIcas
de
la
OMS
para
laboratorios
de
microbiología
farmacéuIca
WHO
TRS
961.
2011
7.
Instalaciones
Los
ensayos
microbiológicos,
si
fueran
realizados,
deben
ser
conducidos
en
una
unidad
del
laboratorio
diseñada
y
construida
apropiadamente.
Para
mayor
orientación
ver
el
proyecto
del
documento
de
trabajo
Guía
de
la
OMS
sobre
buenas
prác4cas
para
laboratorios
farmacéu4cos
de
microbiología
(referencia
QAS/09.297)
INSTALACIONES
• CONTROLES AMBIENTALES
CONTROLES AMBIENTALES