Universidad de Los Andes

Facultad de Farmacia y Bioanálisis

Escuela de Bioanálisis
Cátedra de Parasitología

Práctica 2:
Diagnóstico coprológico
y coproparasitológico

Prof. Carolina González

Prof. Alejandra Blanco
 Amibiasis Giardiasis Criptosporidiosis

Blastocistosis Dientamoebosis Estrongiloidiasis

Ascariasis Trichuriasis Isosporiasis

¿ Cómo adquirimos las
parasitosis intestinales?
¿ qué síntomas se presentan en
estas infecciones parasitarias
 Diagnóstico certero de las
infecciones parasitarias intestinales
se establece mediante la detección
del agente causal en la muestra de
heces
 QUÉ ERRORES
COMETEMOS CON
FRECUENCIA
DR. AQUÍ ESTÁN LOS
RESULTADOS

QUÉ HAGO???
TOMA DE MUESTRA
Envase recolector

Tiempo transcurrido desde el momento

de la recolección
Máximo = 1 hora

•Recolectar en envase limpio

•Evitar la contaminación con orina y otros fluidos
•Rotular adecuadamente (nombre, edad, sexo)
TOMA DE MUESTRA Lo más adecuado sería:

Seriado/Concentrado

A 1 2 3

B 1 2 3

Fresca

Nº de
Parásitos

días
 El análisis debe ser realizado en su totalidad
por un Licenciado en Bioanálisis

Muestra fresca

Muestra fijada
(Seriado*)

1
Análisis
Macroscópico 2
Análisis
Químico/microscópico
3
Análisis
* Muestras de heces de tres (3) días diferentes Microscópico
 Análisis macroscópico

• Aspecto (homogéneo o heterogéneo)

• Consistencia (Escala de Bristol)
• Color
• Olor (fecal, fétido o fermento)
• Presencia de moco y sangre*
• Restos de alimentos*
• pH fecal (ácido, neutro o alcalino)

*: Presente (escasa, moderada o abundante cantidad) o ausente

ANÁLISIS MACROSCÓPICO
Cantidad

Tipo de
alimentación

Por día y en una sola deposición

(g/24 h)

Régimen cárnico 50 a 100 g

Régimen vegetariano 250 a 400 g
régimen mixto 100 a 200 g
ANÁLISIS MACROSCÓPICO Consistencia
Puré de guisantes FIEBRE TIFOIDEA

Agua de arroz CÓLERA

Mantequilla ESTEATORREA

Pegajosa-alquitranada MELENA

Restos alimenticios LIENTÉRICA

DISPEPSIA DE LA
Pastosa, espumosa
FERMENTACIÓN
Balcells-Gorina (1997). La Clínica y el Laboratorio
 HEATON Y LEWIS, 1997.

ANÁLISIS MACROSCÓPICO

Duras

Blandas

Pastosas

Líquidas
 Heces disentéricas Heces lientéricas

Heces líquida Heces pastosa Heces blanda

Bristol-7 Bristol-6 Bristol-5

ANÁLISIS MACROSCÓPICO Pacientes estreñidos

• Administrar laxantes salinos

Ejemplo: Sal de Epson

• Nunca administrar
Aceites
Leche Magnesia (forma cristales)
Polietilenglicol (forma cristales)
ANÁLISIS MACROSCÓPICO Color
Castaño
Dieta cárnica
oscuro

Dieta láctea
Amarillo
Diarreas de fermentación
canario
hidrocarbonada

Espinaca, Brócoli
Biliverdina
Verde
(Tránsito acelerado)
Diarreas infantiles

Estercobilina: Color a las heces Balcells-Gorina (1997). La Clínica y el Laboratorio

ANÁLISIS MACROSCÓPICO Color
Blanco
Ictericia obstructiva
grisáceo

Morcillas, espinacas,
Carbón, hierro, bismuto
Negro
Hemorragias digestivas
superiores

Remolacha
Rojo Hemorragias digestivas
inferiores

Balcells-Gorina (1997). La Clínica y el Laboratorio

ANÁLISIS MACROSCÓPICO Moco
Finamente dividido
y mezclado con las
Intestino delgado
heces,
apariencia brillante

Tiras y Gleras
Recubriendo el Colon Distal
Bolo fecal

Moco perlado Catarro

transparente alérgico

Balcells-Gorina (1997). La Clínica y el Laboratorio

ANÁLISIS MACROSCÓPICO Sangre
Hemorragias del tracto
Carmesí gastrointestinal
superior

Roja Colon Distal y recto

Causas en el RN:
.- Sangre materna deglutida (Apt-Downey)
.- Alergia a la proteína de la leche de vaca
.- Fisuras anales
.- Infecciones invasivas

Balcells-Gorina (1997). La Clínica y el Laboratorio

ANÁLISIS QUÍMICO pH

Neutro Normal (variar)

Dispepsia de la fermentación
Diarrea por intolerancia a la
Ácido lactosa (< 5)
Diarreas bacterianas y virales (<6)
Blastocistosis

Putrefacción
Moco
Alcalino
Parásitos
Bacterias invasivas

Balcells-Gorina (1997). La Clínica y el Laboratorio

 Determinación del pH fecal

Muestra de heces
fresca
1 gr de muestra
fecal Homogenizar Introducir una tira de pH.
+ Esperar 1 minuto y comparar
1 ml de solución con la escala de colores
salina
 Sangre Oculta
Hemoglobina
ANÁLISIS QUÍMICO
+ Color
+ H2O2 (3%)
Bencidina Verde-azulado
Guayacol

Peroxidasa (HEMO) cataliza la oxidación del guayacol a tetraguayacol

Desventajas

Dieta previa: 3 días

Alimentos de origen animal:
Carne, morcilla, chorizo, paté de hígado
Alimentos que contengas peroxidasa:
Rábanos, coliflor, pepinos
Terapias: Balcells-Gorina (1997). La
Hierro, Vitamina C, aspirina Clínica y el Laboratorio
 Sangre Oculta
HEMA-SCREEN®
ANÁLISIS QUÍMICO
Basado en la actividad Peroxidasa del
grupo HEMO
Tarjeta reactiva para determinación de sangre
oculta en heces
• Método: Guayacol
• Prueba rápida en 2 minutos
• Controles positivo y negativo integrados en
la tarjeta
Muestra positiva

Prueba de Guayacol:
papel utilizado tiene
un compuesto fenólico,
el ácido alfa-
guayacónico, que se
extrae de la resina de
la madera de los
árboles de Guayaco
Controles
ANÁLISIS QUÍMICO Sangre Oculta

Prueba para Hemoglobina

(Hb) humana en heces.
Ensayos
inmunocromatográficos
que emplean Ac.
iScreen™ Instant-View® Monoclonales anti-Hb
Immunochemical Fecal Prueba humana (Globina)
Occult Blood Test Inmunoquímica
fecal (PIF)

Fácil de usar (Especifica para Hg

No invasiva humana)
No requiere dieta previa No reacciona con
Especificidad: 98% componentes de la
Resultados en dieta
5-10 minutos
ANÁLISIS QUÍMICO Azúcares Reductores

Diarrea por deficiencia de DISACARIDASA

No pueden digerir la LACTOSA

Reacción de Benedict (1909): reducción del cobre

en medio alcalino → Color

Sulfato Óxido Azul-Verdoso

Cúprico Cuproso Naranja

Clinitest AMES Bayer; Cortesía del Dr. Javier Díaz

ANÁLISIS QUÍMICO Azúcares Reductores

Tabletas de Clinitest
Glucosa, fructosa, galactosa, lactosa (Disacárido)
Sacarosa: Heces+ 3 gotas HCl → Calor → Fructosa+Glucosa
Clinitest
Utilidad en análisis de Orina, pero puede ser
utilizado en heces líquidas o diluidas
(1 g heces + 2 ml de H2O)

Clinitest AMES Bayer; Cortesía del Dr. Javier Díaz

 PRECAUCIÓN

Las heces no deben

tener más
de 20´ de emitidas
Las tabletas de Clinitest (reactivo de Benedict anhidro)
1 pastillla + 15 gotas de heces (1g + 2 mL H2O mezclar)
ANÁLISIS QUÍMICO Clinitest HCL

Suspensión Negativo Positivo Positivo

fecal

Azúcares Reductores Test de Sacarosa

 Azucares Test de
Reductores Sacarosa
ANÁLISIS QUÍMICO-MICROCÓPICO

La observación microscópica de una muestra de heces

puede ser un buen screening para el estudio grosero
de la digestibilidad de los principios inmediatos:
Grasas, Proteínas e Hidratos de carbono

Balcells-Gorina (1997). La Clínica y el Laboratorio

García Luna y. López Gallardo. 2007
ANÁLISIS QUÍMICO-MICROCÓPICO Esteatorrea
SUDÁN III

Microscopio:

.- Grasas neutras: gotas de color naranja o rojo

.- Ácido grasos: escamas que se tiñen ligeramente o cristales en forma

de agujas largas y finas que no se tiñen

.- Jabones: cristales que no se tiñen

El calor hidroliza los ácidos grasos y jabones

Balcells-Gorina (1997). La Clínica y el Laboratorio

ANÁLISIS QUÍMICO-MICROCÓPICO Esteatorrea
Negativo

Positivo

Positivo Negativo
ANÁLISIS QUÍMICO-MICROCÓPICO
Esteatorrea
Bailenger-Faraggi:

Cristal Violeta 50 mg
Fuscina Básica 10 mg
Alcohol 96% 20 ml
Fenol 4 ml
H20 destilada c.s.p 100 ml

Microscopio:

Grasas neutras → Violeta oscuro

Ácido grasos → Rojo
Jabones → Amarillo

Grasas neutras : Insuficiencia pancreática

Ácido grasos : Alteración en la absorción, Intestino delgado
Jabones : Insuficiencia biliar, Alteración absorción

Castro y Paredes. Métodos de Laboratorio par ael Diagnóstico de Parasitosis intestinales: 2001
ANÁLISIS QUÍMICO-MICROCÓPICO Esteatocrito Ácido
Phuapradit (1981)
Técnica
.- Colocar 0,5 g de heces en un tubo de plástico. Diluir a 1/3 con H20 destilada
.- Mezclar durante 2 min a temperatura ambiente
.- Filtrar en doble gasa
.- Colocar 500 µl del filtrado en un tubo de vidrio y agregar 100 µl de Ácido
perclórico 5M
.- Mezclar en vórtex
.- Introducir por capilaridad la muestra en un capilar heparinizado de
microhematocrito
.- Sellar con plastilina
.- Centrifugar a 1200 rpm durante 15 min

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 Esteatocrito Ácido
Se diferencian cuatro fases:
FMF → Fase formada por Materia fecal
ANÁLISIS QUÍMICO

FA → Fase formada por agua (Intermedia) FG

FHF → Fase de Heces flotantes
FG → Fase formada por Grasa (sobrenadante)
FS → Fase sólida (FMF+FHF)
FHF

Se lee en un lector de hematocrito el % de

FASE GRASA (FG) respecto a la FASE FG+FS.
FA
Expresar el resultado en %:
ESTEATOCRITO (%) = FG/FG+FS * 100

Valores de referencia:
Normal= 0-2%
Dudoso= 2%-4% FMF
Patológico: > 4%

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ANÁLISIS QUÍMICO-MICROCÓPICO Creatorrea
Fibras musculares sin digerir
MD PD D

Mal digeridas(MD):
Bordes rectos, fragmentos estriados transversales y
longitudinales y color amarillento (aquilia gástrica)

Parcialmente digerida (PD):

Bordes redondeados, trozos más pequeños, estrías
longitudinales solamente (Insuficiencia pancreática)

Digerida (D)
Bordes redondos, sin estrías
 Creatorrea
(sin digerir)

Examen Directo
Solución Yodada
(400X)
 ►
►

►
Fibra muscular
(creatorrea)
►

► Fécula de almidón
(Amilorrea)
►
►

Examen Directo
Solución Yodada
(100X)
ANÁLISIS QUÍMICO-MICROCÓPICO Amilorrea
Es la presencia de células de fécula y almidón por insuficiencia
gástrica o pancreática (amilasa), tránsito acelerado

A B C

Con solución yodada los gránulos de almidón se tiñen

según el grado de digestión:
(A) No digeridos: azul oscuro o negro
(B) Parcialmente digeridos: rojo o rosa
(C) Digeridos: amarillos
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 Amilorrea
(parcialmente
digerida)

Examen Directo
Solución Yodada
(100X)
 Amilorrea
(Sin digerir) Creatorrea
(digerida)
Amilorrea
(digerida)

Creatorrea
(parcialmente
digerida)

Examen Directo
Solución Yodada
(100X)
ANÁLISIS QUÍMICO-MICROCÓPICO Pigmentos biliares
Prueba de Sublimación:
Investigar la presencia de bilirrubina y estercobilinógeno

Tubo de ensayo
Dilución de heces 5 ml
Sublimado (ClHg) 5 ml
Agitar e incubar a 37ºC durante 1-2 horas

Resultado:
Rojo → Estercobilina o estercobilinógeno
Verde → Bilirrubina
Blanco → Ausencia de pigmentos

Tránsito acelerado: Biliverdina, bilirrubina o estercobilina

Acólica: Obstrucción vía biliar por diversas causas (Ascaris
lumbricoides, Hepatitis, tumor de colédoco, etc.)
Acólica del RN: descartar atresia de vías biliares

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DIAGNÓSTICO COPROPARASITOLÓGICO Coprología
Diagnóstico Coproparasitológico
Realización de Examen de Heces Directo

(Examen Directo) en Fresco con Solución

Salina al 0,85% p/v y Solución Yodada

Visualización:
Trofozoítos y/o quistes de protozoos
Huevos y larvas de Helmintos
 Examen Directo
ANÁLISIS MICROSCÓPICO

Muestra de heces Solución Yodada y Salina Porta y cubre objetos Aplicadores de

(0,85% p/v) (22x22mm) madera
 Examen Directo
ANÁLISIS MICROSCÓPICO

Lectura de las
preparaciones

Solución Salina (0,85% p/v)

Movilidad de los trofozoítos de
Protozoarios (37ºC)
ANÁLISIS MICROSCÓPICO Examen Directo

NO CUANTIFICAR PARÁSITOS
Blastocystis spp.
No es una técnica estandarizada

NO CUANTIFICAR BACTERIAS
Lo correcto es sugerir un coprocultivo
 Microbiota bacteriana comensal
ANÁLISIS MICROSCÓPICO
>500
especies
¿ Qué elementos podemos encontrar en
una muestra de heces ?

•Parásitos
•Células blancas
•Eritrocitos
•Levaduras
•Cristales
•Artefactos
A C
A
B
C
B

A
B
E D
E D
B
C E

E C

Observación microscópica de una muestra de heces normales

A: Detritus fecal B: Fibra muscular digerida
C: Espiral vegetal D: Levaduras
E: Bacterias
A
C

C
E
A
A

B E D
D
B

Observación microscópica de una muestra de heces normales

A: Bacterias B: Glóbulos de grasa (grasas neutras)
C: Células epiteliales D: Fibra muscular digerida
E: Cristales de ácido grasos
 D
A

D
B

A
B

C E

B E
C

Observación microscópica de una muestra de heces normales

A: Levaduras B: Bacterias C: Fibra muscular PD
D: Detritus fecal E: Célula epitelial
A D

C
D A
A E

D
C A

Observación microscópica en una muestra de heces con moco

A: Moco B: Célula vegetal C: Fibra muscular PD
D: Fibra muscular D E: Cristales de ácidos grasos
A C
C
D
A
B

A A

C
D
B

A
D
B
D

D
A

Observación microscópica en una muestra de heces con moco y leucocitos

A: Leucocitos B: Moco C: Célula epitelial D: Bacterias
A

A
A

D
D E
A F
C
E

B G D
A
B
D

Observación microscópica en una muestra de heces con moco y sangre (disentería)

A: Glóbulos rojos B: Fécula de almidón C: Cristales de ácidos grasos
D: Leucocitos (M∅) E: Fibras muscular (PD) F: Espiral vegetal
G: Trofozoíto de Entamoeba histolytica
Células blancas
ANÁLISIS MICROSCÓPICO Macrófago

Trofozoíto de Entamoeba histolytica Macrófagos

30-60 µ
χ= 20 µ )
•Tamaño de 12-60 µ (χ
Núcleo grande puede ser
•Núcleo redondeado con irregular
cariosoma central (*)

•Eritrocitos incluidos Eritrocitos, fibras PMN

ANÁLISIS MICROSCÓPICO Leucocito polimorfonuclear

Quiste de Entamoeba histolytica Leucocito

30-60 µ
χ= 20 µ )
•Tamaño de 12-60 µ (χ
Núcleos grande puede ser
•Núcleos (1-4) redondeado con irregular
cariosoma central
Relación núcleo:citoplasma
(1:1)
ANÁLISIS MICROSCÓPICO Polimorfonucleares

E. histolytica / E. dispar Polimorfonuaclear

Tamaño: 12-60 µ (χ= 20 µ ) 14 µ

Núcleo segmentado
Núcleo redondeado
con cariosoma central hasta 4
Citoplasma granular
Citoplasma limpio, eritrocitos
ANÁLISIS MICROSCÓPICO Polimorfonucleares

Entamoeba histolytica
/ E. dispar Polimorfonucleares
ANÁLISIS MICROSCÓPICO Citología fecal

Frotis fecal teñido

con Giemsa

Recuento diferencial
 Leucocitos Fecales
ANÁLISIS MICROSCÓPICO

Azul de Metileno 1%
Cuantificar por campo
hasta contar 100 células

Orienta Infección por patógeno

Bacteriano Segmentados neutrófilos

Viral Mononucleares
 Leucocitos
ANÁLISIS MICROSCÓPICO
Normal: ausencia de leucocitos
Presencia de PMN inflamación intestinal
PMN + moco= invasión intestinal
Amibiasis intestinal
Shigelosis
Salmonelosis
Escherichia coli invasivas
Yersinia
Campilobacter
Enfermedad inflamatoria intestinal
Tumores

Parasitosis intestinal Botero-Restrepo 2005. 4ta edición

 ►

Macrófago (►)
Examen Directo con solución salina (400X)
 Macrófago*
►

►
Macrófago

Linfocito
mononuclear ►

Macrófago ►

Examen Directo con

solución yodada (400X)

*: emisión de seudópodo
 Moco

Moco
PMN ►

Moco

Examen Directo con

solución salina (400X)
Células epiteliales
ANÁLISIS MICROSCÓPICO Células epiteliales

Emite seudópodos, sin movimiento activo

Tricrómica de Gomori verde pálido

Núcleo pignótico, coloreado se diferencia bien

Entamoeba coli

►
Células
epiteliales

Examen Directo con azul de metileno (400X)

Detallar la relación núcleo:citoplasma del trofozoíto de Entamoeba coli (1:3)
y de la célula epitelial (1:1)
 Cristales

Oxalato de Calcio y
Charcot-Leyden
 Cristales de Charcot-Leyden
ANÁLISIS MICROSCÓPICO

Fibras de Piña

Protozoos y Helmintos que invaden tejido intestinal

Gastropatías eosinofílicas
Alergia intestinal a la proteína de leche de vaca
 ►

Examen Directo con

solución yodada
(100X)

Cristal de Charcot-Leyden (►)

 A B
Cristales de Charcot-Leyden en
Examen Directo con solución salina.
Estos cristales son los productos de
degradación de los eosinófilos y se pueden
encontrarse en las heces y esputo de
personas con infecciones parasitarias donde
hay invasión de tejidos o en personas con
reacciones alérgicas.
A: cristales de piña; B: cristales de kiwi
en Examen Directo con solución salina.
Estos cristales se pueden encontrar en las heces de
las personas que han ingerido estas frutas. El
aspecto alargado y delgado extremadamente de
estos cristales, no debería confundirse con cristales
de Charcot-Leyden.
http://www.dpd.cdc.gov/DPDx/HTML/ImageLibrary/A-F/Artifacts/body_Artifacts_il2.htm
ANÁLISIS MICROSCÓPICO Cristales de Oxalato de Calcio

Indican disminución de la acidez gástrica,

predispone a infecciones
 ►

Examen Directo
con solución
yodada (400X)

Cristal de Oxalato de Calcio

Levaduras
ANÁLISIS MICROSCÓPICO Levaduras

Normal
Aumentan en:
•Desequilibrio de microbiota bacteriana
•Terapia con antibióticos
•Uso de probióticos con levaduras (Sacharomyces boulardii)

Parasitosis intestinal Botero-Restrepo 2005. 4ta edición

ANÁLISIS MICROSCÓPICO Levaduras
Blastoconidias

Pseudohifas

PROBIOTICOS (FLORESTOR)
Sacharomyces boulardii
Levaduras (→→). Hifas
→)
En división (→
Diagnóstico coproparasitológico
Muestra fresca
Analizar antes de una hora de emitida
pueden deteriorarse los trofozoítos de
amibas

Es útil para realizar

Examen Macroscópico
Examen Químico
Cuantificación: Kato-Katz, Stoll, Beaver
Concentración: Kato, Flotación
Detección de Larvas en cultivo
Diagnóstico coproparasitológico
Fijación con Formalina 10%
Formaldehido (37% v/v)..........100 mL
H2O destilada..........................300 mL
Proporción
1 parte de heces
2 partes de formalina 10%

Los parásitos pueden durar años preservados

Diagnóstico coproparasitológico
Kit para coprodiagnóstico

Técnica de Graham
 Técnica de Concentración
Diagnóstico coproparasitológico por Sedimentación
de Ritchie

Diagnóstico coproparasitológico
Coloraciones Protozoarios
Tinciones en Fresco
• Solución de Yodo
•Solución de Eosina 1%
•Verde de Metilo acidificado
• Quensel
• Azul de Metileno regulado de Nair
• Tinta China
• Hematoxilina Cristal Violeta
• Merthiolate-Iodo-Formaldehido (M.I.F.)
• Tionina
• Bailenger-Faraggi
Diagnóstico coproparasitológico
Tinciones Permanentes
• Hematoxilina Férrica de Heidenhain
• Hematoxilina Férrica modificada por Pessoa
• Hematoxilina Férrica rápida
• Hematoxilina Férrica de Tompkins-Miller
• Hematoxilina Férrica – Ácido Fosfotúngstico
•Hematoxilina – Eosina
• Lawless
• Tricrómica de Gomori
• Tricrómica Wheatley
•Rárida de Noble
• Ziehl-Neelsen modificada
• Kinyoun
 RECORDAR

Cumplir las reglas de nomenclatura, los nombres de las

parásitos constan de género y especie.
Reporte de Resultados

Al escribir el género se utiliza la inicial en mayúscula y la

especie con minúscula, resaltado del texto (cursiva,
negritas o subrayado)
Ejm: Trichuris trichiura

De no ser posible describir la especie debe agregarse

spp. (sin cursiva) sí existen más de dos especies o sp. sí
son dos.
Ejm: Taenia sp. Cryptosporidium spp.

aLEJAndrA bLANco ≠ Alejandra Blanco

Artefactos
ANÁLISIS MICROSCÓPICO
Esporas