NMDA relación con el dolor neuropático y la excitoxicidad

Katherin Alejandra Gamboa Rodríguez.

El NMDA, y su relación con el dolor neuropático surge como consecuencia directa en el

sistema somatosensorial, ya sea en el sistema nervioso periférico o central. En este sentido
Vargas, 2018 plantea la evaluación de péptidos que generen procesos de neuroprotección
a partir de su acción en la subunidad Glun2B del receptor NMDA y su relación con el dolor
neuropático. A partir de lo anterior se plantea la evaluación de in vitro de péptidos sintéticos;
su secuencia es tomada de la corantoquina G, que se encuentra en un caracol marino,
esta es una neurotóxina su sitio de acción en el cerebro es la subunidad Glun2 del
glutamato tipo NMDAR (receptor del n-metil –aspartato), se pretende evaluar su posible
efecto sobre vías de señalización involucradas en los procesos de excitoxicidad por calcio,
y la relación que tienen las concentraciones de calcio con el dolor.

Es fundamental conocer que el ácido glutámico (Glu) es el principal neurotransmisor

excitatorio del sistema nervioso central (SNC). El Glu es un aminoácido tiene un grupo
amino, un grupo carboxilo y su radical es de carácter acido (diacido) no esencial que no
atraviesa la barrera hematoencefálica, se sintetiza en la mitocondria de la neurona a partir
de glucosa y varios precursores. El Glu después de sintetizarse se libera hacia el citoplasma
en donde se acumula en vesículas sinápticas por un proceso dependiente de Mg++/ATP.
La propagación del impulso nervioso hacia la terminal axónica, promueve la liberación de
Glu en la sinapsis a través de un mecanismo dependiente de la concentración intracelular
de Ca++, mediante un proceso de exocitosis para interactuar con sus receptores
específicos. (Flores, 2012), metabólicamente tiene muchas funciones.

Según Gascón, 2016 los procesos de excitotoxicidad son iniciados por la estimulación
excesiva de los receptores de glutamato tipo N-metil-D-aspartato (NMDAR). Esta familia de
receptores son, no obstante, muy importantes en la comunicación sináptica y, por tanto, en
la fisiología de sistema nervioso central (SNC). Entre los receptores para el neurotransmisor
excitatorio L-glutamato pueden distinguirse dos familias, según el mecanismo de
transmisión de la señal de activación, una es la familia de receptores metabotrópicos
(mGluRs) que están formados por proteínas con siete segmentos transmembrana
acoplados a proteínas G, que transducen la señal de unión del agonista al interior de la
célula a través de una cascada de señalización mediada por segundos mensajeros
intracelulares y la segunda familia son los receptores ionotrópicos (iGluRs) que son
canales iónicos acoplados a ligando. Tradicionalmente se han clasificado en tres subtipos,
atendiendo a su afinidad por distintos agonistas sintéticos y sus características
electrofisiológicas, como lo expone Vargas, 2018 son: Receptores de tipo α-amino-3-
hidroxi-5-metil-4-isoxazol propionato (AMPA), receptores de tipo kainato, y receptores de
tipo NMDA.

Sin embargo Qiang, 2013 afirma que los NMDAR son heterotetrámeros compuestos por
dos subunidades GluN1 (llamado NR1) más dos subunidades GluN2 (conocidas como NR2
codificado por cuatro genes diferentes GluN2A-D). NMDAR que contienen diferentes
subunidades GluN2A-D muestran distintas propiedades electrofisiológicas y farmacológicas
además de una distribución algo diferente y perfiles de expresión; en consecuencia Vargas,
2018 expone que el receptor tiene dos dominios extracelulares, un dominio que lo ancla a
la membrana y un dominio que lo comunica con el interior , el receptor funciona teniendo
cuatro subunidades (cuatro proteínas acopladas) , siempre debe haber una subunidad tipo
NR1 y esa subunidad cuenta con un amino terminal de interacción alosterica que puede
modificarse, tiene un sitio de unión a ligando, con el agonista llamado glicina o D-serina ,
además posee una parte transmembranal y un grupo carboxilo que va hacia el interior.
Recientemente Vyklicky et al, 2014 dio ha conocer que la D-serina ha sido descrita como la
principal Coagonista del receptor NMDA en las sinapsis mientras que la glicina es el
coagonista de los receptores NMDA extrasinápticos.

Siguiendo la relación con sistema nervioso central y periférico, el glutamato tiene un función
primordial como neurotransmisor, para que él se forme deben participar tres estructuras,
primeramente una neurona presináptica, una neurona postsináptica y una célula
acompañante, o célula glía. Comienza el proceso en la célula presinpatica que contiene
glutamina esta es similar al glutamato , la enzima glutaminasa puede hacer la
transformación y cambia ese aminoácido a glutamato (la enzima cambia el grupo amida a
un grupo carboxilo), luego sigue el proceso de transporte del glutamato por medio de
vesículas y su liberación a la hendidura o espacio extrasináptico, parte del glutamato que
es liberado en esta hendidura es tomado por diferentes proteínas, estas proteínas reciben
el nombre de receptores de glutamato, el glutamato que no es utilizado es decir el que
queda en la hendidura es tomado por la célula acompañante, ella lo atrapa, lo fusiona en
vesículas y hace la transformación contraria es decir lo va cambiar de glutamato a glutamina
por medio de la glutamina sintetasa (pasa el ácido carboxilo a grupo amida) y de nuevo lo
libera para que la neurona presináptica lo pueda tomar, por esto siempre las neuronas
necesitan una célula acompañante o chaperona en este caso célula glía.

László et al, 2016 afirma que los receptores NMDA están localizados en la hendidura
sináptica, así como en sitios extrasinápticos. El equilibrio entre sináptico y la activación
extrasináptica del receptor NMDA es de gran importancia para el correcto funcionamiento
neuronal del cerebro. La localización hipótesis de los receptores NMDA concibe que la
sináptica NMDA de los receptores, apoyan la supervivencia celular, mientras que
extrasináptica promueve la muerte celular. Se conoce que el iGluR-NMDA ha sido asociado,
y en muchos de los casos propuestos confirmado experimentalmente, como un actor
fundamental en una gran cantidad de procesos fisiológicos, farmacológicos, patológicos y
psiquiátricos. Juega un rol, particularmente importante en varias patologías
neuropsiquiátricas (Lareo , 2006).

En este caso se enfoca la relación entre el NMDAR y el dolor neuropático, se sabe que
afecta la fisiología de las células, iniciando desde el ganglio dorsal encontramos el canal
NMDA donde interactúa con las concentraciones de calcio, es de recordar que el calcio es
necesario en concentraciones fisiológicas adecuadas para que actué como un segundo
mensajero, sin embargo cuando él se activa en mayor concentración puede mandar
señalización de muerte celular (apoptosis). Para que el receptor funcione debe haberse
activado AMPA, este cambia la señal eléctrica de la membrana, la va desporalizar al
desporalizarla va permitir que se una glutamato con glicina, lo anterior conduce al
desplazamiento del Mg, de estos últimos receptores provocando por tanto, su activación
por el glutamato, incrementándose por ello la entrada de calcio al interior de las neuronas
del asta medular. Por otra parte, la despolarización mantenida de la membrana
postsináptica provoca por sí misma, la apertura de canales de calcio voltaje dependientes
existentes, lo cual acrecienta aún más el número de moléculas de este ión que alcanzarían
el interior de la célula nerviosa (Raimundo ,2011) lo que se traduce en muerte de la
neurona. Según Flores, 2012 la muerte neuronal inducida por una excesiva liberación de
Glu y sobreactivación de los receptores a Glu, se conoce como excitotoxicidad.
Curiosamente, la excitotoxicidad NMDAR parece ser dependiente de la subunidad, ya que
bloquean los antagonistas GluN2B selectivos, mientras que los antagonistas preferidos de
GluN2A se exacerban (Qiang, 2013).

Así las cosas Vargas, 2018 afirma que se realizaron estudios acerca de la corantoquina
G, a partir de este estudio se postularon cinco moléculas derivadas de la corantoquina G,
lo que permitió hacer una evaluación in vitro que demuestra que ciertas moléculas están
cambiando la conductancia y cinética del canal, lo anterior condujo a la evaluación de los
demás canales , por lo anterior se plantea la investigación enfocada en la evaluación in
vitro del efecto neuroprotector que tienen diferentes péptidos, a partir de su interacción con
la subunidad Glun2B del receptor NMDA, con el fin de llevar a término lo planteado se
propone, realizar la evaluación in vitro ya que permite conocer la posibilidad funcional del
fármaco o saber si definitivamente se debe cambiar de molécula.

Como primera medida se deben establecer los péptidos y hacer una evaluación por
bioinformática para conocer donde se puede realizar las uniones entre los aminoácidos de
cada péptido, teniendo en cuenta sus posibles mutaciones, otro de los objetivos es
establecer por bioquímica , análisis de inmunoquimica, o histoquímica, el efecto que
ejercen las corrientes de calcio a nivel celular. Un esquema metodológico acorde es iniciar
con un diseño en fase solida del péptido, lo que se traduce en establecer la estructura de
los aminoácidos, concretar los enlaces peptídicos para lograr la síntesis de péptidos; luego
se procede con la realización de los cultivos primarios de hipocampo, se continua con una
evaluación por electrofisiología, estableciendo los registros y análisis respectivos.
Finalizando esta primera parte es fundamental hacer los análisis de citotoxicidad. Como
complemento de las pruebas anteriores se prende realizar variables de influjo de calcio, por
medio de imágenes de calcio, análisis de cromatografía liquida (hlp), espectrometría de
masas y dicroísmo circular.

El hecho de que el receptor NMDA, por una parte cumpla un rol primordial en la
sensibilización central subyacente a los procesos de dolor crónico, y por otra, presente a lo
menos cuatro sitios de modulación susceptibles a ser bloqueados, lo convierte en un blanco
preferencial para ensayar distintos fármacos, con capacidad de actuar a distintos niveles
del receptor.

Bibliografía

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