Jenis Praktikum : Pembuatan Media

Tujuan : Mempelajari cara pembuatan media dan syarat-syarat yang dibutuhkan oleh suatu media
untuk pertumbuhan mikroba.

Timbang media NA (Oxoid) Serbuk media dimasukkan Tambahkan aquades dan aduk
dan NB (Oxoid) sesuai secara hati-hati ke dalam sampai merata dengan batang
prosedur di kemasan < 1 > Erlenmeyer pengaduk

Sebelum diautoklaf, tuangkan Panaskan dengan hati-hati

Tutup tabung reaksi dan
erlemeyer dengan penutup
tabung atau kapas
media NA dengan volume menggunakan
tertentu menggunakan pipet penangas/elemen pemanas
volume : 5 ml ke dalam tabung sampai media tercampur
reaksi untuk NA miring, 10 ml
homogen (warna kuning
ke dalam tabung reaksi untuk
NA tegak, dan sisanya diamkan jernih) < 2 >
dalam erlemeyer yang nantinya
akan digunakan untuk NA
dalam cawan petri

Sterilkan seluruh media dalam

Sebelum diautoklaf,tuangkan Tutup tabung reaksi penutup tabung reaksi tersebut dengan
NB ke dalam tabung reaksi tabung atau kapas menggunakan autoklaf selama 15
menit, tekanan 1 atm suhu 121oC

Setelah diautoklaf : media

Media NB dibiarkan
mendingin.
Seluruh media akan
digunakan pada praktikum
selanjutnya.
Media sisa NA tuangkan
dalam cawan petri secara
aspetis dan biarkan
memadat.
NA 10 ml dalam tabung
reaksi diletakkan tegak pada
rak tabung dan biarkan
memadat, media NA 5 ml
inkubasikan miring dan
biarkan memadat.

CATATAN : ALAT & BAHAN :

1. Media Nutrien Agar (NA) (Oxoid)
< 1 > Buatlah 50 ml media NA untuk setiap kelompok 2. Media Nutrien Broth (NB) (Oxoid)
kecil praktikum dan 50 ml media NB untuk satu 3. Aquades
golongan praktikum. 4. Alat alat gelas meliputi :cawan petri
< 2 > Pada saat pemanasan jangan sampai terbentuk Tabung reaksi Batang pengaduk, pipet
buih berlebihan sampai meluap. volume, Erlenmeyer.
5. Autoklaf
6. Penangas air
Jenis Praktikum : Teknik-teknik aseptis
Tujuan : Mempelajari teknik teknik pemindahan mikroba secara aseptis.

Siapkan media NA dan NB Longgarkankan tutup Pegang tabung reaksi yang

< 1 > Pemindahan kultur tabung/kapas dari masing- mengandung kultur murni
mikroba dilakukan satu masing tabung reaksi yang bakteri di tangan kiri.
persatu untuk masing-masing berisi media (jangan di
media. lepaskan!).

Bakar mulut tabung reaksi,
masukkan jarum ose dan
ambil 1 ose biakan bakteri.
Pegang ose menggunakan ibu jari
dan jari telunjuk, gunakan jari
kelingking untuk membuka tutup
tabung reaksi.
(tutup tabung reaksi tetap
dipegang seperti posisi semula)
Pegang jarum ose pada tangan
kanan dan bakar di atas nyala
lampu bunsen hingga kawat
memijar. < 2 >

Ambillah tabung reaksi yang Inokulasikan biakan bakteri

Bakar kembali mulut akan diinokulasi dengan tangan pada tabung reaksi inokulasi
tabung reaksi dan tutup kiri, dengan cara yang sama dengan cara goresan zigzag
buka tutup tabung reaksi, dan pada permukaan NA miring.
tabung reaksi kembali. bakar mulut tabung reaksi

Lakukan dengan cara yang sama

untuk media nutrien cair/NB Beri label : tanggal percobaan, Bakar mulut tabung reaksi dan
menggunakan jarum ose dan nama bakteri, teknik tutup tabung reaksi kembali,
media agar tegak secara tusukan pemindahan dan nama kemudian bakar ose.
tegak lurus menggunakan jarum
kelompok.
inokulasi.

ALAT & BAHAN :

Inkubasikan selama 24 jam 1. Media NA miring dalam tabung reaksi
pada suhu kamar dan amati 2. Media NA tegak dalam tabung reaksi
pertumbuhannya. 3. Media NB dalam tabung reaksi
4. Jarum ose
5. Jarum inokulasi
6. Kultur murni bakteri Streptococus pyogenes,
Staphylococus aureus, Pseudomonasaeruginosa,
Escherichia coli dan Bacillus subtilis
CATATAN :
7. Vortex mixer
< 1 > Media NA miring, media NA tegak dan media NB 8. Alkohol 70%/Lysol
< 2 > Pemanasan jarum ose dilakukan dari pangkal ke ujung 9. Lampu Bunsen
sampai memijar, sebelum digunakan kawat didinginkan 10. Microbial Safety Cabinet
beberapa saat kira kira sekitar 30 detik!
Jenis Praktikum : Teknik Isolasi dan Inokulasi kultur mikroba
Tujuan : Mempelajari teknik-teknik isolasi dan penanaman mikroba.
A. Metode Spread Plate
Buatlah pengenceran 10-1 –
10-2 dari kultur murni bakteri
dengan larutan pengencer
Setelah permukaan agar mengering,
selanjutnya inkubasikan secara
terbalik pada suhu 370 C selama 24
jam pada suhu kamar dan amati
pertumbuhannya.
B. Metode Streak Plate
Panaskan jarum ose hingga
memijar di atas bunsen,
kemudian dinginkan.
Setiap kali menggoreskan ose
untuk kuadran berikutnya,
pijarkan ose terlebih dahulu
dan biarkan dingin.
Inkubasikan secara terbalik
pada suhu 370 C selama 24
jam dan amati
pertumbuhannya
Ambil tabung reaksi yang Pindahkan 0,1 ml kultur
mengandung kultur murni bakteri secara aseptis ke
bakteri, buka dan bakar leher permukaan media NA dalam
tabung. cawan petri.
Tebarkan/sebarkan kultur Bakar spreader yang
bakteri dengan spreader secara sebelumnya telah dicelupkan
merata dan biarkan sampai dalam alkohol, biarkan dingin
permukaan agar mongering
selama 10 menit
Gunakan ose yang telah dingin
untuk menggores pada Sebelum pengoresan pastikan
permukaan media agar dalam bahwa media NA telah
cawan petri. Ose yang terlalu mongering secara sempurna.
panas dapat menyebabkan kultur
bakteri mati.
Ose disentuhkan pada permukaan Ambil 1 ose kultur murni bakteri
media agar dalam cawan petri, dan goreskan pada permukaan
sewaktu menggores ose dibiarkan media agar dimulai pada satu
meluncur di atas permukaan agar. ujung. Lakukan teknik pengoresan
Jangan mengores terlalu keras dengan teknik kuadran.
sehingga dapat mengores agar.
ALAT & BAHAN :
1. Spreader/batang bengkok
2. Lampu Bunsen
3. Media NA dalam cawan petri
4. Kultur murni bakteri
5. Larutan pengencer (BPW atau NaCl fisiologis 0,9%)
6. Alkohol 70%
7. Jarum ose
8. Mikropipet
9. Tabung reaksi
C. Metode Pour Plate

Dinginkan media NA dalam Pindahkan 1 ml kultur murni

tabung reaksi sampai suhu ± Buka tutup tabung yang bakteri ke dalam tabung reaksi
45 - 500C (cirinya : terasa mengandung kultur murni yang mengandung NA secara
hangat di kulit). bakteri, dan bakar leher botol. aseptis

Setelah agar memadat Bakar leher tabung di atas

diinkubasi terbalik pada suhu Goyangkan perlahan-lahan bunsen, dan tuangkan media
370 C selama 24 jam. untuk mencampur kultur NA yang telah mengandung
Inkubasi terbalik dilakukan bakteri dengan NA sampai kultur murni bakteri ke dalam
setelah agar memadat. homogen. < 1 > cawan petri.

CATATAN :
Amati pertumbuhannya
< 1 > Penggoyangan petri jangan terlalu kuat. Pada saat penuangan
media, petri bisa diletakkan dalam radius maksimal 20 cm dari
sumber api (zona steril)
 Lembar pengamatan pembuatan media dan teknik aseptis

Media Pengamatan Keterangan

Sebelum Inokulasi Setelah Inokulasi
NA Tegak

NA Miring

NA cawan petri

NB
 Lembar Pengamatan Metode Inokulasi

Metode Inokulasi Gambar Hasil Keterangan

Spread Plate

Streak Plate (Kuadran)

Pour Plate
 JURNAL SEMENTARA

PRAKTIKUNM MIKROBIOLOGI DAN VIROLOGI

“TEKNIK TEKNIK DASAR MIKROBIOLOGI”

I KETUT ASTIKA FEBRI WIRANTAWAN

NIM: 172200060

B2A

JURUSAN FARMASI KLINIS

INSTITUT ILMU KESEHATAN MEDIKA PERSADA

2018