Abstrak: Penyakit hawar selubung (SHB) yang disebabkan oleh Rhizoctonia solani adalah penyakit yang

penting secara ekonomi, menyebabkan kehilangan hasil yang signifikan. Dalam studi ini, kegiatan
mempromosikan pertumbuhan formulasi komersial bioagent, Bacillus subtilis MBI 600 (Integral®) dan
kompatibilitasnya dengan fungisida padi dievaluasi. Integral dievaluasi untuk promosi pertumbuhan padi
pada empat kultivar (Cocodrie, Catahoula, Neptune, dan Trenasse) dalam kondisi in vitro. Benih padi
yang diolah diinkubasi selama 7 hari, dan pucuk serta panjang akar diukur. Beras cv. Benih cocodrie
diperlakukan dengan strain MBI 600 pada berbagai konsentrasi dan diunggulkan dalam pot yang berisi
tanah lapangan di GH dalam desain blok lengkap acak. Perkecambahan dan panjang bibit diukur pada 7
dan 15 hari setelah tanam (DAS). Strain MBI 600 ditemukan untuk menghasilkan siderofor. Perlakuan
benih dengan Integral secara signifikan meningkatkan panjang tunas dan akar pada semua konsentrasi di
cvs. Cocodrie, Catahoula, dan Trenasse dalam kondisi in vitro. Panjang bidikan berkisar 39-42 mm pada
konsentrasi 2,20 x 109 cfu / ml di semua CV. Pada 2,20 x 109 cfu / ml, panjang akar berkisar 47-69 mm.
Panjang tunas dan akar dari benih kontrol masing-masing mencapai 20 mm. Perlakuan benih dengan
2,20 x 108 dan 2,20 x 109 cfu / ml secara signifikan meningkatkan munculnya bibit (81 hingga 89%)
dibandingkan dengan 2,20 x 106 dan 2,20 x 107 cfu / ml, dan kontrol (61%) dalam kondisi GH. Demikian
pula, perlakuan benih dengan 2,20 x 109 cfu / ml MBI 600 menghasilkan tunas dan panjang akar
tertinggi (masing-masing 335 dan 166 mm). Integral memiliki toleransi yang baik terhadap hexaconazole,
propikonazol, dan validamisin; toleransi sedang terhadap tricyclazole; dan toleransi yang buruk terhadap
benomyl dan mancozeb pada 1000 ppm. Integral menunjukkan kompatibilitas dengan carbendazim dan
azoxystrobin hingga 400 ppm. Secara keseluruhan, hasil kami menunjukkan bahwa Integral menghasilkan
siderofor, mempromosikan kemunculan dan pertumbuhan bibit padi, dan kompatibel dengan fungisida
padi. Kata kunci - Beras, Penyakit busuk daun, Rhizoctonia solani, biokontrol, Bacillus subtilis, promosi
pertumbuhan, kompatibilitas fungisida.

Padi adalah tanaman pangan pokok bagi
sebagian besar manusia. Namun, tingkat
produksi berkurang karena berbagai penyakit
jamur. Di antara penyakit-penyakit ini, penyakit
busuk daun (ShB) yang disebabkan oleh
Rhizoctonia solani Kuhn. adalah kendala
produksi utama yang menyebabkan kerugian
hasil yang signifikan di bawah lingkungan input
tinggi dan produksi tinggi di seluruh dunia [40].
Di beras yang tumbuh di wilayah AS di
Midsouth, ShB adalah penyakit yang paling
merusak pada beras [15, 23, 25]. Penggunaan
konvensional fungisida kimia untuk manajemen
KB memiliki efek negatif pada kesuburan tanah,
ekosistem, dan meningkatkan panen
biaya produksi [9]. Biokontrol ShB menggunakan
rhizobacteria pemacu pertumbuhan tanaman
(PGPR) menawarkan cara yang menjanjikan
untuk manajemen ShB. Strain PGPR diketahui
berkoloni dan bertahan hidup baik di rhizosfer
dan di phyllosphere [21]. Dalam penelitian
sebelumnya, penggunaan PGPR telah secara
signifikan meningkatkan pertumbuhan dan hasil
padi [27]. Aplikasi mereka mendorong
pertumbuhan tanaman dengan mekanisme
langsung dan tidak langsung. Promosi
pertumbuhan langsung adalah karena produksi
fitohormon, pelarutan fosfat [2, 20],
peningkatan penyerapan besi melalui produksi
siderofor [9, 16], dan
metabolit yang mudah menguap. Metode tidak langsung
dari promosi pertumbuhan tanaman adalah karena
antibiotik, HCN [12], persaingan untuk ruang dan nutrisi,
parasitisme atau lisis hifa patogen, penghambatan enzim
atau racun yang diproduksi patogen, dan melalui resistensi
sistemik yang diinduksi (ISR) [31].
Agar PGPR efektif dalam kondisi lapangan, kuncinya adalah
untuk mengkarakterisasi strain untuk pertumbuhan
tanaman dan fitur penekan penyakit. Selain itu,
pengetahuan tentang modus tindakan yang tepat sangat
penting untuk menyusun strategi manajemen penyakit
yang efektif [36]. Penelitian tentang manajemen SHB beras
melalui penggunaan sel segar [26, 47] atau formulasi
antagonis bakteri telah dicoba [10, 49, 19]. Munculnya
benih, promosi pertumbuhan tanaman dan peningkatan
hasil panen adalah atribut lain dari strain PGPR unggul
selain penindasan penyakit. Laporan sebelumnya
mengkonfirmasi peningkatan perkecambahan biji, panjang
bibit, dan produksi bahan kering akar dan pucuk benih padi
oleh PGPR [3].
penelitian ini adalah i) untuk mengkarakterisasi strain MBI
600 untuk sifat-sifat yang mendorong pertumbuhan, ii)
untuk menentukan pengaruhnya terhadap kemunculan
bibit dan pertumbuhan kultivar padi dalam kondisi in vitro
dan rumah kaca, dan iii) untuk mempelajari
kompatibilitasnya dengan fungisida di Nasi. Informasi yang
dikumpulkan dari studi ini akan berguna dalam menyusun
strategi manajemen terhadap ShB beras.
Produksi Asam Asetat Indol (IAA)
Bahan dan Metode Strain MBI 600 diambil dari
penyimpanan pada - 800 C,
Sumber kultivar padi dicairkan dan digunakan untuk
produksi IAA. Satu lingkaran penuh
Kultivar padi inokulum padi gabah dengan hasil tinggi,
konvensional dan panjang digoreskan ke TSA dan
diinkubasi selama 24 jam.

Cocodrie, Neptunus, Trenasse, dan Catahoula berkembang.

Koloni tunggal kemudian diinokulasi ke dalam 250 ml labu
Di negara-negara Asia, karena peningkatan penggunaan
varietas semi-kerdil, matang awal, dan hasil tinggi, kejadian di Rice Research Station, LSU AgCenter, Crowley, berisi TSB
SHB sering terjadi. Keseriusan ShB sering menjamin dan ditanam pada pengocok rotari selama 72 jam.
penggunaan fungisida kimia [45]. Saat ini, manajemen ShB
Louisiana, AS, diperoleh dan disimpan pada suhu 40 C
sebagian besar melalui penggunaan fungisida sistemik dan
sebelum suspensi bakteri cair disentrifugasi pada 3000
non-sistemik [33]. Fungisida yang biasa digunakan
melawan ShB termasuk Dithane M-45 [11], carbendazim menggunakan. rpm selama 30 menit. Kira-kira, 2 ml
[46], mancozeb [38], iprodione [18], dan triazole [44]. supernatan adalah
Fungisida lain seperti campuran carbendazim dan
mancozeb juga sangat efektif [34]. Di antara kelompok dicampur dengan 2 tetes asam ortofosfat dan 4 ml
fungisida baru, strobilurin sangat efektif baik dalam hal
kontrol KB dan peningkatan hasil gabah.

[5]. Aplikasi campuran fungisida dengan lebih dari satu

bahan teknis terhadap berbagai penyakit adalah praktik
umum dalam produksi beras [43].

Kompatibilitas galur PGPR dengan fungisida merupakan

langkah penting untuk penggunaannya dalam manajemen
KB. Dalam laporan sebelumnya, penggunaan
Pseudomonad dicampur dengan carbendazim dan / atau
jinggangmycin, mengurangi keparahan ShB di bawah
kondisi rumah kaca dan lapangan [22, 52]. Dalam
penelitian kami sebelumnya, Bacillus subtilis strain MBI
600 secara signifikan menekan pertumbuhan miselia,
perkecambahan sklerotial R. solani, dan mengurangi gejala
ShB pada beras dalam kondisi terkendali. Tujuan dari
Sumber dan produksi formulasi B. cair
Strain MBI 600 diperoleh dari
Pengumpulan strain Laboratorium Phytobacteriology,
Departemen Entomologi dan Patologi Tumbuhan,
Auburn University, AL, USA. Untuk studi laboratorium
dan rumah kaca, formulasi cair dari strain B. subtilis
MBI 600 diproduksi oleh Becker Underwood Inc., di
fasilitas fermentasi mereka yang berlokasi di Ames,
Iowa, AS. Produk fermentasi MBI 600 diberi label
Integral®. Produk mengandung minimal 2,2 x 1010
spora / ml. Produk ini dikemas dalam botol 500 ml
dan dikirim ke Departemen Entomologi dan Patologi
Tumbuhan, Auburn University, AL, AS untuk
melakukan penelitian.
Pemeriksaan kemurnian B. SUBTILIS strain MBI 600
dalam formulasi cairan berpemilik
Untuk memeriksa adanya kontaminasi silang,
inokulum dari botol Integral digoreskan ke pelat TSA
dan diperiksa untuk pertumbuhan dan kemurnian.
Prosedur ini dilakukan di Departemen Ilmu
Tumbuhan, Universitas Hyderabad, Andhra Pradesh,
India. Untuk mengkonfirmasi identitas strain MBI
600, teknik homologi urutan 16s rDNA digunakan.
DNA genom diisolasi dari strain yang dipulihkan dari
produk Integral dengan mengikuti prosedur standar
[1]. Kira-kira, 1409 bp dari 16S rDNA diamplifikasi
dengan reaksi rantai polimerase (PCR) menggunakan
primer-primer berikut: 8F (5'-AGA GTT TGA TCC TGG
CTC AG-3 ') dan 1492R (5'-ACG GCT ACC TTG TTA
CGA CTT-3 '). Amplikon yang dihasilkan diverifikasi
oleh elektroforesis gel agarosa. Setelah verifikasi
amplifikasi yang tepat, amplikon dimurnikan
menggunakan Qiagen Kit. Produk yang dimurnikan
diurutkan dan urutannya dibandingkan dengan
urutan yang diketahui dalam database menggunakan
BLAST (alat pencarian penyelarasan logis dasar).
Satu rangkaian penuh MBI 600 yang disimpan dalam
botol ditanam selama 48 jam pada 250 C dalam 20
ml kaldu kedelai tryptic steril (TSB) (Difco, Detroit,
Michigan, AS) pada alat pengocok reciprocating (80
rpm). Suspensi bakteri disentrifugasi selama 20
menit pada 10.000 x g. Pelet sel yang dihasilkan
kemudian dicuci dua kali dalam 0,1 M buffer fosfat
(PB) (pH 6,8), ditangguhkan kembali dalam TSB
diubah dengan 20% gliserol steril, dan disimpan
dalam botol pada -800 C sebelum digunakan. Botol
baru digunakan di setiap pengujian. Pengujian
karakterisasi strain MBI 600 untuk promosi
pertumbuhan dilakukan dengan memanfaatkan
fasilitas di Departemen Botani dan Bioteknologi
Terapan, Universitas Mysore, India.
Produksi Asam Asetat Indol (IAA)
Bahan dan Metode Strain MBI 600 diambil dari
penyimpanan pada - 800 C,
Sumber kultivar padi dicairkan dan digunakan untuk
produksi IAA. Satu lingkaran penuh
Kultivar padi inokulum padi gabah dengan hasil
tinggi, konvensional dan panjang digoreskan ke TSA
dan diinkubasi selama 24 jam.
Cocodrie, Neptunus, Trenasse, dan Catahoula
berkembang. Koloni tunggal kemudian diinokulasi ke
dalam 250 ml labu
di Rice Research Station, LSU AgCenter, Crowley,
berisi TSB dan ditanam pada pengocok rotari selama
72 jam.
Louisiana, AS, diperoleh dan disimpan pada suhu 40
C sebelum suspensi bakteri cair disentrifugasi pada
3000
menggunakan. rpm selama 30 menit. Kira-kira, 2 ml
supernatan adalah
dicampur dengan 2 tetes asam ortofosfat dan 4 ml
Pereaksi Salkowski (50 ml, 35% asam perklorat, 1 ml
0,5M larutan FeCl3). Produksi IAA dikonfirmasi
melalui indikasi warna seperti yang dijelaskan oleh
Brick et al. [7].
Pelarutan fosfat
diubah dengan glisin (4,4 g / lit). Secara bersamaan,
kertas saring direndam dalam asam pikrat 0,5% (b /
v) dalam 1% Na2CO3 ditempatkan di tutup atas pelat
Petri. Setelah inkubasi pada 280 C selama 4 hari,
perubahan warna diperiksa. Pengembangan warna
merah oranye di YEMA adalah karakteristik produksi
HCN. Cawan petri yang mengandung YEMA tanpa
strain MBI 600 berfungsi sebagai kontrol.

Untuk pengujian pelarutan fosfat, media yang

mengandung 2 g ekstrak ragi, 20 g glukosa, 2 g tri-
kalsium fosfat, 60 mg actidione, dan 15 g agar
dicampur dengan 1000 ml air, disesuaikan dengan pH
7, digunakan. Lingkaran inokulum galur MBI 600
beruntun diinokulasi di pusat cawan Petri yang
mengandung media yang dijelaskan di atas dan
diinkubasi pada 280 C selama 5 hari dan
pertumbuhan diamati. Koloni bakteri yang
membentuk zona bening dianggap sebagai pelarut
fosfat [37].
Produksi Selulase
Produksi selulase oleh strain MBI 600 dinilai dalam
medium M9 [28] diubah dengan ekstrak ragi (1,2 g /
L) dan selulosa (10 g L-1) dan congo red (0,02%).
Strain MBI 600 diinokulasi di pusat cawan Petri yang
mengandung media M9, dan diinkubasi selama satu
minggu pada 280 C. Lingkaran jernih di sekitar koloni
yang tumbuh aktif adalah tanda positif untuk
produksi selulosa [8].

Produksi siderofor
Produksi Kitinase

Uji Chrome azurol S (CAS) digunakan untuk

mendeteksi produksi siderofor oleh strain MBI 600. Kemampuan Chitinolytic dari strain MBI 600 dinilai
Komposisi agar CAS dibuat dengan mengikuti dengan melesat loopful dari kultur MBI 600 yang
prosedur standar [41]. Kultur murni MBI 600 berusia 48 jam pada agar air yang tergabung dengan
diinokulasi pada pelat agar CAS menggunakan tusuk 0,2% chloin koloidal [4]. Pelat diinkubasi pada suhu
gigi steril dan diinkubasi pada 280 C selama 2 minggu kamar selama 4 hari. Pengembangan zona hidrolitik
dalam gelap. Pengembangan zona oranye di sekitar (zona kliring)
pertumbuhan bakteri dianggap sebagai indikasi
produksi siderofor. Rujukan strain bakteri dengan
produksi siderofor yang diketahui digunakan sebagai
kontrol positif. Pelat CAS-agar tanpa regangan MBI
600 diinkubasi dalam kondisi yang sama seperti yang
dijelaskan di atas sebagai kontrol. Perubahan warna
di media CAS adalah indikasi produksi siderofor [9].

Produksi HCN

Produksi HCN oleh strain MBI 600 ditentukan oleh

metode modifikasi Miller dan Higgins [29]. Kultur
murni MBI 600 diluruskan ke cawan Petri yang
mengandung ekstrak ragi mannitol agar (YEMA) yang
sekitar koloni yang tumbuh aktif adalah tanda untuk dengan udara. Benih padi yang direndam dalam air
produksi kitinase [50]. suling steril disajikan sebagai kontrol. Pot plastik
berisi tanah lapang digunakan untuk menumbuhkan
bibit. Ada enam replikasi untuk setiap perlakuan,
Pengaruh B. SUBTILIS MBI 600 pada pertumbuhan satu pot per replikasi dan 15 biji disemaikan pada
bibit berbagai kultivar padi dalam kondisi IN VITRO jarak yang sama pada kedalaman 2 cm di setiap pot.
Pot yang disemai disusun di atas bangku di GH dalam
blok lengkap acak. Pot dipertahankan pada 26 ± 2 0C
dan RH 90%. Tingkat kemunculan bibit dicatat setiap
Benih padi dari cvs. Cocodrie, Catahoula, Neptunus
hari selama 7 hari. Panjang root dan shoot dan bobot
dan Trenasse, seperti dijelaskan di atas digunakan
root dan shoot dicatat pada 15 hari setelah tanam
untuk penelitian ini. Benih padi dari masing-masing
(DAS). Masing-masing bibit dipanen dan dicuci
kultivar disterilkan permukaannya dalam 2% natrium
dengan air ledeng dan dikeringkan dengan udara.
hipoklorit selama 10 menit dan kemudian dicuci dua
Tembak dan panjang akar dan bobot diukur.
kali dengan air suling steril dan dikeringkan dengan
udara. Dua gram benih beras permukaan disterilkan
dari masing-masing kultivar direndam selama 24 jam
dalam empat konsentrasi yang berbeda dari strain Kompatibilitas B. SUBTILIS strain MBI 600 ke
MBI 600 yang diproduksi dalam formulasi cair yang fungisida
disesuaikan dengan 2,20 x 106, 2,20 x 10 7, 2,20 x
108, dan 2,20 x 109 cfu / ml. Biji dikeringkan dengan
udara di dalam tudung aliran laminar. Benih dari Strain MBI 600 yang diproduksi dalam formulasi
masing-masing kultivar padi yang direndam dalam cairan komersial digunakan untuk studi
air suling steril berfungsi sebagai kontrol. Biji kering kompatibilitas. Itu
udara diinkubasi dalam gelas 250 ml steril yang
ditutup dengan aluminium foil untuk mencegah
hidrasi dan diinkubasi pada suhu kamar selama 7 prosedur yang dijelaskan oleh Shanmugam dan
hari. Perkembangan root dan shoot dimonitor setiap Narayanasamy [42] diimplementasikan. Fungisida
hari. Ada empat replikasi untuk setiap cv dan untuk seperti propikonazol (Tilt 250 EC), validamycin
setiap konsentrasi inokulum bakteri. Sepuluh bibit (Sheathmar 3L), benomyl (Benlate 50 WP),
dari masing-masing perlakuan replikasi diambil carbendazim (Bavistin 50
sampelnya untuk pucuk dan panjang akar. Panjang
akar diukur dari lokasi perkecambahan sampai ke
ujung akar utama, dan panjang pucuk diukur dari
lokasi perkecambahan ke ujung tertinggi dari pucuk
masing-masing bibit.

Efek dari B. SUBTILIS strain MBI 600 pada

kemunculan bibit dan pertumbuhan dalam kondisi
rumah kaca. Empat konsentrasi strain MBI 600 yang
diproduksi dalam formulasi cair digunakan untuk
mengevaluasi peningkatan kemunculan dan
pertumbuhan beras dalam kondisi rumah kaca.
Konsentrasi yang digunakan adalah 2,20 x 106, 2,20 x
107, 2,20 x 108 dan 2,20 x 109 cfu / ml. Satu CV
beras, Cocodrie, dievaluasi. Empat gram biji
direndam dalam konsentrasi yang berbeda secara
terpisah selama 24 jam dan kemudian dikeringkan
WP), tricyclazole (Beam 75 WP), mancozeb (80 WP),
azoxystrobin (Heritage 50% WDG) dan hexaconazole
Analisis statistik
(Danzole 5 EC) diperoleh dari produsen dan
digunakan untuk studi kompatibilitas. Berdasarkan
rekomendasi pabrikan, tarif 100, 200, 400, 600, 800,
dan 1000 ppm dipilih. Pelat agar nutrien (NA) diubah Data dianalisis menggunakan SAS 9.1.3 (SAS Institute
dengan konsentrasi fungisida disiapkan dengan Inc, Cary, NC, USA) dan cara perawatan dibedakan
pengenceran serial. Kultur segar MBI 600 diambil oleh perbedaan yang paling signifikan (LSD) pada P =
dari - 800 C freezer dan digoreskan pada pelat TSA. 0,05 menggunakan PROC-GLM.
Lingkaran kultur aktif diluruskan pada masing-masing
lempeng NA yang diamandemen dengan konsentrasi
fungisida yang sesuai dan diinkubasi selama 48 jam. Hasil
Ada lima replikasi untuk setiap fungisida dan
konsentrasi dan satu piring per replikasi. Untuk
mengukur kompatibilitas, pertumbuhan strain MBI Pemeriksaan kemurnian B. SUBTILIS strain MBI 600
600 pada media yang diubah fungisida dinilai sebagai dalam formulasi cairan berpemilik
+++ (Bagus); ++ (Sedang); + (Buruk); dan - (Tidak ada
pertumbuhan) dan dibandingkan dengan
pertumbuhan strain MBI 600 pada pelat NA
Analisis BLAST dari urutan 16s rDNA dari strain MBI
fungisida yang tidak diamandemen.
600 yang dihasilkan dari 1409 pasangan basa
mengkonfirmasi kemurnian dan identitas terhadap
identifikasi asli dari strain induk sebelum formulasi
Kompatibilitas strain MBI 600 dengan azoxystrobin dalam cairan.
dan carbendazim dinilai sesuai dengan prosedur
yang dijelaskan oleh Omar et al. [32] Kultur segar
strain MBI 600 diambil dari -800 C freezer dan
Produksi IAA, siderophores, selulase, kitinase, HCN
dioleskan pada pelat TSA. Koloni tunggal yang
dan pelarutan fosfat oleh strain MBI 600
dimurnikan digoreskan pada miring NA dan
diinkubasi selama 24 jam pada 300 C. Untuk ini, 10
mL air suling steril ditambahkan, dan kultur bakteri
diambil dari permukaan agar dengan loop plastik
steril. Suspensi bakteri dihomogenisasi oleh agitasi
menggunakan mixer vortex. YPG disterilkan (ekstrak
ragi 5 g, pepton bakteri 5 g, glukosa 20 g, 1000 ml
H2O, pH 6,8) media cair disiapkan dan ditempatkan
dalam 250 mL labu. Pada labu-labu ini, larutan stok
fungisida yang disiapkan dalam air suling steril pada
konsentrasi 0, 200, dan 400 ppm ditambahkan secara
terpisah untuk menghasilkan volume akhir 50 mL.
Fungisida yang diubah media YPG dalam labu
kemudian diinokulasi dengan 100μL inokulum
bakteri yang disiapkan seperti dijelaskan di atas dan
diinkubasi pada 300C pada 250 rpm. Labu diambil
sampelnya setiap 24 jam selama 72 jam dan jumlah
unit pembentuk koloni ditentukan pada NA
menggunakan pengenceran serial. Ada lima replikasi
untuk setiap konsentrasi fungisida. Media tanpa
fungisida berfungsi sebagai kontrol.
Strain MBI 600 positif untuk produksi siderofor dan
negatif untuk IAA, selulase, kitinase, HCN dan P
solubilisasi (Tabel 1).
Pengaruh B. SUBTILIS MBI 600 terhadap
pertumbuhan semai
berbagai kultivar padi dalam kondisi IN VITRO
Perlakuan benih dengan strain MBI 600 secara
signifikan
peningkatan panjang bidikan dibandingkan dengan
kontrol di cvs
Cocodrie, Catahoula, dan Trenasse (Tabel 2). Di a
konsentrasi 2,20 x 109 cfu / ml, panjang tunas
tertinggi di cvs Cocodrie, Catahoula, dan Neptunus.
Menembak
panjangnya tidak berbeda secara signifikan pada
2,20 x 109 dan
2,20 x 108 cfu / ml untuk cvs Trenasse. Demikian
pula, tembak
panjangnya tidak berbeda secara signifikan untuk cv.
Neptunus di
2,20 x 108 dan 2,20 x 107 cfu / ml strain MBI 600.
The
Panjang pucuk di semua cvs padi berkisar antara 39,1
hingga 41,5 mm
pada 2,20 x 109 cfu / ml, sedangkan di kontrol,
menembak
panjangnya berkisar antara 7,6 sampai 19,5 mm.
Perlakuan benih dengan MBI 600 pada 2,20 x109,
2,20 x 108, dan 2,20 x 107 cfu / ml secara signifikan
meningkatkan panjang akar di semua cvs padi di atas
kontrol (Tabel 3). Pada 2,20 x 109 cfu / ml, panjang
akar dalam varietas padi berkisar 47,5-69,5 mm
dibandingkan dengan kontrol benih (8,3 hingga 19,9
mm). Dengan meningkatnya konsentrasi MBI 600,
panjang akar juga meningkat di keempat cv beras.
Perkembangan akar dan akar mesokotil menonjol
pada semua cv padi pada 7 hari setelah inkubasi
pada 2,20 x 108 dan 2,20 x 109 cfu / ml (Gbr. 1).
Pengaruh B. SUBTILIS galur MBI 600 pada
kemunculan bibit dan pertumbuhan dalam kondisi
rumah kaca Perlakuan benih dengan semua
konsentrasi galur MBI 600 secara signifikan
meningkatkan kemunculan bibit di kontrol dalam
padi cv Cocodrie dari 5 hari setelah penyemaian
dalam kondisi rumah kaca (Tabel 4). Namun, dalam
perawatan benih dengan 2,20 x 108 dan 2,20 x 109
cfu / ml strain MBI 600, kemunculannya secara
signifikan lebih besar di atas kontrol dari hari ke 2
setelah penyemaian. Tingkat perkecambahan
tertinggi (89%) tercatat pada konsentrasi 2,20 x 109
cfu / ml strain MBI 600 pada 7 hari setelah
pembenihan (Gambar 2). Persentase perkecambahan
dalam kontrol adalah 61%.
Panjang tunas dan akar secara signifikan lebih lama
dalam perlakuan benih dengan strain MBI 600 pada
2,20 x 107, 2,20 x 108, dan 2,20 x 109 cfu / ml pada
kontrol (Tabel 5). Pada 2,20 x 109 cfu / ml tunas dan
panjang akar (Gambar 3 dan 4) adalah yang terbesar
(masing-masing 335 dan 166 mm) dibandingkan
kontrol (masing-masing 222 dan 73 mm). Bobot
pucuk dan akar secara signifikan lebih besar pada
konsentrasi 2,20 x 109 cfu / ml (0,23 dan 0,10g).
Bobot pucuk dan akar pada kontrol masing-masing
0,1 dan 0,04 g.
Kompatibilitas B. SUBTILIS strain MBI 600 ke
fungisida
Strain MBI 600 kompatibel dengan 1000 ppm
hexaconazole, propiconazole, dan validamycin
berdasarkan pertumbuhannya yang dinilai baik
(Tabel 6). Strain ini cukup kompatibel dengan
tricyclazole dan kurang kompatibel untuk benomyl
dan mancozeb pada 1000 ppm. Ketegangan telah
menunjukkan kompatibilitas yang baik hingga 400
ppm saat
tumbuh pada media YPG yang diubah dengan
carbendazim dan azoxystrobin. Strain ini memiliki
kompatibilitas yang baik dengan carbendazim
(Gambar 5) dan azoxystrobin (Gambar 6) pada 400
ppm. Pertumbuhan strain MBI 600 dalam media YPG
diubah dengan carbendazim dan azoxystrobin secara
individu pada 200 dan 400 ppm sama dengan kontrol
pada 72 jam setelah inkubasi (Gambar 5 dan Gambar
6).
Diskusi
Berbagai galur PGPR telah digunakan untuk
mengelola penyakit KB dan untuk meningkatkan
pertumbuhan semai dan hasil gabah [35, 48]. Sampai
saat ini, belum ada penelitian tentang mode aksi
galur PGPR tertentu yang digunakan terhadap KB
atau digunakan untuk meningkatkan pertumbuhan
semai padi atau hasil padi. Dalam penelitian kami
saat ini, strain MBI ditemukan positif untuk produksi
siderofor. Siderophores adalah senyawa chelating
besi berbobot molekul rendah yang diproduksi oleh
PGPR di tanah dan dikenal untuk menekan patogen
padi melalui antibiotik yang dimediasi siderophore
[9]. Di bawah kondisi kekurangan zat besi, B. subtilis
mengeluarkan siderofor katekolik yang disebut 2, 3-
hydroxybenzoyl glycine yang mirip dengan prekursor
Escherichia coli siderophore, enterobactin [14].
Rhizobakteria penghasil Siderophore telah
menunjukkan antagonisme yang kuat terhadap
beberapa jamur patogen padi seperti Alternaria sp.,
Fusarium oxysporum, Pyricularia oryzae dan
Sclerotium sp. [9]. Karena zat besi adalah faktor
pembatas dan sangat penting untuk pertumbuhan
mikroba [17], rhizobacteria mengembangkan strategi
untuk memperoleh zat besi. Studi sebelumnya
menunjukkan bahwa produksi siderophore adalah
faktor kunci untuk strain PGPR untuk mengendalikan
patogen tanaman seperti R. solani [30].
digunakan sebagai perawatan benih pada berbagai
kultivar padi. Peningkatan signifikan pertumbuhan
akar dan pucuk dikaitkan dengan produksi zat
pemacu pertumbuhan tertentu dan pelarutan unsur-
unsur seperti fosfor (Tabel 1). Namun, dalam
penelitian kami, strain MBI 600 tidak menghasilkan
IAA atau fosfor terlarut. Laporan sebelumnya
menunjukkan bahwa beberapa strain B. subtilis dan
B. amyloliquefaciens menghasilkan senyawa volatil
tertentu seperti 2-3, butanediol dan acetoin yang
merangsang pertumbuhan tanaman [39]. Produksi
giberelin dan sitokinin juga bertanggung jawab atas
dasar fisiologis promosi pertumbuhan benih padi.
Promosi pertumbuhan juga dapat disebabkan oleh
mekanisme tidak langsung seperti penghambatan
etilen melalui aktivitas ACC deaminase [13]. Oleh
karena itu penyelidikan lebih lanjut diperlukan dalam
arah ini untuk mengkarakterisasi strain MBI 600
untuk mengidentifikasi produksi zat pemacu
pertumbuhan spesifik yang terlibat dalam
merangsang perkecambahan benih dan promosi
pertumbuhan bibit padi.
Dalam penelitian kami, strain MBI 600 sangat toleran
terhadap
hexaconazole, propikonazol dan validamisin; cukup
toleran terhadap tricyclazole; dan kurang toleran
terhadap benomyl dan mancozeb pada 1000 ppm.
Strain MBI 600 menunjukkan toleransi yang baik
pada 400 ppm untuk carbendazim dan azoxystrobin.
Strain Bacillus sp (B-
Hak Cipta © 2011, Publikasi Bioinfo
Vijay Krishna Kumar K, dkk

Dalam studi ini, strain MBI 600 meningkatkan

kemunculan bibit dan pertumbuhan bibit di bawah
kondisi laboratorium dan rumah kaca ketika
44) kompatibel untuk carbendazim masing-masing
pada 500 dan 1000 ppm [22]. Strain 916 dari B.
Mempromosikan Pertumbuhan Rhizobacteria.
subtilis ditemukan berhasil menjajah sistem akar
Ensiklopedia Genetika. London: Academic Press.
tanpa

[3] Ashrafuzzaman M., Hossen F. A., M. Razi Ismail

setiap populasi menurun ketika dikombinasikan
M., Anamul Hoque Md., Zahurul Islam M.,
dengan Jinggangmycin sebelum aplikasi ke benih
Shahidullan S. M. dan Sariah Meon. (2009) Afr. J.
[52]. Kompatibilitas strain Bacillus spp. untuk
Biotechnol, 8, 1247-1252.
kelompok frobisida strobilurin juga dilaporkan. Juga,
aplikasi gabungan dari B. subtilis strain NJ-18 dengan
50% Kresoxim-metil, fungisida strobilurin sangat
efektif dalam menekan keparahan SHB beras dalam [4] Berger L. R. dan Reynolds D.M. (1958) Biochimica
kondisi lapangan et Biophysica Acta, 29, 522-534.

[51]. Penggunaan galur PGPR yang kompatibel [5] Biswas A. (2006) Environ Ecol, 24S, 518-520.
dengan fungisida bersama dengan fungisida
menawarkan kontrol yang lebih baik daripada galur
yang tidak kompatibel. Misalnya, integrasi Kodiak® [6] Brannen P. M dan Kenney D. S. (1997) J. Ind.
(Bacillus subtilis) dengan fungisida sebagai perlakuan Microbiol. Biotechnol, 19, 169-171.
benih secara signifikan mengendalikan benih dan
penyakit yang ditularkan melalui tanah dari kapas
dalam kondisi lapangan [6]. Umumnya, [7] Brick J. M., Bostock R. M. dan Silverstone S. E.
(1991) Appl Environ Microbiol, 57, 535-538.

Bakteri benih dengan konsentrasi inokulum yang

lebih tinggi menghasilkan hasil pertumbuhan yang [8] Cattelan A. J., Hartel P. G. dan Furhmann F. F.
lebih baik daripada konsentrasi inokulum yang lebih (1999) Tanah. Sci. Soc. Saya. J, 163, 1670-1680.
rendah pada semua CV beras yang diuji. Selain itu,
strain MBI 600 menunjukkan kompatibilitas dengan
sebagian besar fungisida yang biasa digunakan, yang
[9] Chaiharn M., Chunhaleuchanon S. dan Lumyong
merupakan karakteristik yang diinginkan dari strain
S. (2009) Dunia J Microbiol Biotechnol, 25, 1919-
PGPR. Oleh karena itu, penelitian yang dilaporkan di
1928.
sini menyarankan integrasi strain MBI 600 dengan
fungisida yang akan memiliki potensi komersial
untuk pengelolaan ShB beras di bawah kondisi
lapangan. [10] Commare R., Nandakumar R., Kandan A., Suresh
S., Bharathi M., Raguchander T. dan Samiyappan R.
(2002) Crop Prot, 21, 671-677.

Referensi

[11] Das S. R. dan Mishra B. (1990) Indian Phytopath,

43, 94-96.
[1] Ahemad M. dan Khan M. S. (2010) EurAsia J
Biosci, 4, 88-95.

[12] Dowling D. N. dan O 'Gara F. (1994) Trends

Biotechnol, 12, 133-141.
[2] Tanaman Antoun H. dan Kloepper J. W. (2001)
 [20] Katznelson H. dan Bose B. (1959) Can J
Microbiol, 5, 79-85.
[13] Glick B. R., Penrose D. M. dan Li J. P. (1998) J
Theor Biol, 190, 63-68.

[21] Krishnamurthy K. dan Gnanamanickam S. S.

(1998) Biol Control, 13, 158-165.

[22] Laha G. S. dan Venkataraman S. (2001) Indian

124
Phytopath, 54, 461-464.

Kegiatan pemacu pertumbuhan tanaman Bacillus [23] Lee F. N. dan Rush M. C. (1983) Plant Dis, 6, 829-
subtilis mbi 600 (Integral®) 832.

[24] Lorck H. (1948) Physiol. Plant, 1, 142-146.

[25] Marchetti M. A. (1983) Plant Dis, 67, 162-165.

[14] Grossman T. H., Tuckman M., Ellestad S. dan [26] Mew T. W. dan Rosales A. M. (1986)
Osburne M. S. (1993) J. Bacteriol, 175, 6203-6211. Phytopathol, 76, 1260-1264.

[15] Groth D. E. dan Lee F. N. (2002) Beras: Asal, [27] Mew T. W. dan Rosales A. M. (1992) Kontrol
sejarah, teknologi, dan produksi. W. E. Smith dan R. Biologis Penyakit Tumbuhan. E. S. Tjamos, G. C.
H. Dilday ed. John Wiley & Sons, Hoboken, NJ, 413- Papavizas, dan R. J. Cook, eds. Pers Pleno, New York,
416. AS, 113-123

[16] Gupta C. P., Dubey R. C. dan Maheshwari D. K. [28] Miller J. H. (1974) Eksperimen dalam molekul
(2002) Biol Fertil Tanah, 35, 399-405.

genetika. 2nd ed. Cold Spring Harbor Lab., Cold

[17] Gurinot M. L. (1994) Transportasi Besi Mikroba. Spring Harbor, NY.
Tinjauan Tahunan Mikrobiologi. London: Academic
Press.
[29] Miller R. L. dan Higgins V. J. (1970) Phytopathol,
60, 104-110.
[18] Izadyar M. dan Baradaran P. (1989) Int. Rice Res.
Catatan, 14, 25.
[30] Nagarajkumar M., Bhaskaran R. dan Velazhahan
R. (2004) Microbiol Res, 159, 73-81.
[19] Kanjanamaneesathian M., Pengnoo K. A. dan
Nilratana L. (1998) Aust. Plant Pathol, 27, 198-206.
[31] Nandakumar R., Babu S., Viswanathan R., P. S., Du P. V., Zhu D., Tang Q., Huang S., Lin X., Singh
Raguchander T. dan Samiyappan R. (2001) Soil Biol. H. M. dan Srivastava R. K. (2000) Plant Dis, 84, 341-
Biochem, 33, 603-612. 356.

[32] Omar I., O'Neill T. M. dan Rossall S. (2006) Plant [41] Schwyn B. dan Neilands J. B. (1987) Anal
Pathol, 55, 92-99. Biochem, 160, 47-56.

[33] Pal R., Chakrabarti K., Chakraborty A. dan [42] Shanmugam P. dan Narayanasamy M. (2009)
Chowdhury A. (2005) J Zhejiang Univ SCI 6B, 8, 756- The Internet Journal of Microbiology, 6, 211-219.
758.

[43] Stammler G., Itoh M., Hino I., Watanabe A.,

Kojima K., Motoyoshi M., Koch A. dan Haden

[34] Prasad P. S., Naik M. K. dan Nagaraju P. (2006) E. (2007) J. Pestic. Sci, 32, 10-15.
Proc. Natl. Sem. Di Perbatasan Baru. Pl. Patho. Pp.
139.
[44] Suryadi Y., Kadir T. S. dan Sukumandi. (1989) Int.
Rice Res. Catatan, 14, 35.
[35] Rabindran R. dan Vidhyasekaran P. (1996) Crop
Prot, 15, 715-721.
[45] Swamy H. N., Sannaulla S. dan Kumar D. M.
(2009) Karnataka Jurnal Ilmu Pertanian, 22, 448-449.
[36] Renwick A., Campbell R. dan Coe S. (1991) Plant
Pathol, 40, 524-532.
[46] Thangasamy T. A. dan Rangaswamy M. (1989)
Int. Rice Res. Catatan, 14, 24.
[37] Rosas S. B., Andres J. A., Rovera M. dan Correa
N. S. (2006) Biol Tanah. Biochem, 38, 3502-3505.
[47] Vasantha Devi T., Malarvizhi R., Sakthivel N. dan
Gnanamanickam S. S. (1989) Plant Soil, 119, 325-330.
[38] Roy A. K. dan Saikia V. N. (1976) Indian
Phytopath, 29, 354-356.
[48] Vidhyasekaran P. dan Muthamilan M. (1999)
Biocon. Sci. Technol, 9, 67-74.
[39] Ryu C. M., Farag M. A., Hu C. H., Reddy M. S.,
Wei H. X., Pare P. W. dan Kloepper J. W. (2003) PNAS,
100, 4927-4932. [49] Vijay Krishna Kumar K., Krishnam Raju S., Reddy
M. S., Kloepper J. W., Lawrence K. S., Groth D., Miller
M. E., Sudini H. dan Binghai Du. (2009) Jurnal
[40] Savary S., Willocquet L., Elazegui F. A., Teng Mikrobiologi Murni dan Terapan, 3, 485-488.
[50] Viswanathan R., Sundar A. R. dan Premkumari

M. S. (2003) Dunia J Microbiol Biotechnol, 19, 953-

959.

[51] Yang D., Wang B., Wang J., Chen Y. dan Zhou

M. (2009) Kontrol Biol, 51, 61-65.

[52] ZhiYi L. C., Feng Y. dan Fan L. (2003) Acta

Phytophylacica Sinica, 30, 429-434.