Pontificia Universidad Católica de Chile

Facultad de Ciencias Biológicas

Departamento de Biología Celular y Molecular
Curso: Histología BIO307
Profesora: Dra. Cecilia Koenig

Análisis de los Estudios de

Toxicidad Pulmonar Causada
Por Exposición a Sílice Coloidal y la
Dependencia de los Cambios Patológicos en
Ratones por el Tamaño de las Partículas

Jaime Riquelme S.
Introducción

En el desarrollo de la vida en nuestro planeta, muchos organismos

desarrollaron complejas vías metabólicas, siendo una gran gama de estos
dependiente del oxigeno, el cual se encuentra disuelto en nuestro medio
ambiente. En el caso del hombre este ha desarrollado un complejo mecanismo,
llamado sistema respiratorio, que requiere de la entrada de un volumen de los
gases ambientales hacia el interior de su cuerpo, por medio de conductos que
desembocan en los saco alveolares dentro de los pulmones, donde se realiza
la “absorción de oxigeno” a la sangre.
En condiciones normales, nuestro organismo es capaz de enfrentar la
inhalación de sustancias levemente nociva para el organismo, como la
introducción de polvo dentro de los pulmones. Pero con el desarrollo de la
tecnología e irrupción del hombre en el ecosistema, se han puesto en
suspensión una serie de partículas no nativas del aire, para las cuales el
sistema de defensa no esta preparado para enfrentar, siendo estas a inmediato
o largo plazo muy toxicas.
Estas partículas dependiendo el tipo, el tamaño y el tiempo de
exposición que tenga la victima, pueden provocar un sinnúmero de patologías,
por lo tanto el estudio de los efectos que estas pueden provocar pueden darnos
el método mas adecuado para combatir esos efectos.
En el presente trabajo se estudia puntualmente los efectos tóxicos que
provoca en ratones la sílice coloidal de diferentes tamaños de partículas, finas
(213 nm) y ultra finas (14 nm), y en diferentes tiempos luego de la exposición,
para determinar así el grado de daño que esas pueden realizar
comparativamente.
La sílice coloidal, es una forma amorfa de la sílice, también llamada
sílice gel, se caracteriza por ser inerte y no poseer una estructura molecular
con aristas sino una forma esférica, por lo tanto su interacción dentro del
pulmón es debido en general a su tamaño como agente extraño dentro ellos,
sin mediar una toxicidad química que aumente la afección que estas pueden
realizar.

Figura 1: Partículas Sílice coloidal,

A) Ultra finas (escala de barra: 50 nm)
B) Finas (escala de barra 480 nm)
Especificaciones del estudio.
Se realizo el estudio en ratones femeninos los cuales fueron expuestos a
50 ul de solución acuosa de 3 mg de partículas finas y partículas ultra finas de
sílice coloidal en agua purificada mili-Q, por medio de instilación intratraqueal.
Mientras que a los ratones controles solo se les administro 50 ul de agua
purificada mili-Q. Estos fueron seleccionado para su estudio luego de distintos
periodos de tiempo luego de la exposición (0.5, 1, 2, 6, 12 y 24 horas).
De estos se extrajo tejido pulmonar y de vasos linfáticos, los cuales se
analizaron utilizando técnicas de inmunohistoquímica para laminina y estudios
con microscopio de luz y electrónico.

Resultados y Discusión.

En los estudios se observo en los tejidos que en ambos casos, la

exposición a partículas causaba gran daño pulmonar incluso la muerte de los
ratones, provocando disnea, edema, congestión y hemorragia pulmonar, siendo
en las partículas ultra finas más severas estas consecuencias.
Esto debido al déficit de oxigeno que provoco una respuesta en los
quimioreceptores de los cuerpos neuroendocrino, lo que desencadena una
respuesta en la frecuencia respiratoria, que posiblemente termino en una
insuficiencia que provoco la muerte de alguno de ellos.

Al observar al microscopio de luz, se pudo constatar de una serie de

lesiones, que según el tejido y el tiempo, avanzan en gravedad.
A los 30 minutos se observa en la Figura 2a y 2b, como presenta ruptura
y congestión severa en los sacos alveolares, siendo mas intensa en las
expuesta a partículas ultra finas.

Figura 2: Daño en tejido pulmonar

observado por microscopio de luz
 A y C afectados por partículas ultra finas, B y D Afectada por partículas finas.
En los bronquíolos respiratorio y terminal, a las 2 horas ya se observa
una disminución en el volumen de las células de ese epitelio, siendo mas
notorio en el afectado con partículas ultrafinas. (Figura 2c y 2d)
Luego de ya 12 horas se observa como se ha producido muerte celular o
necrosis en las células epiteliales del bronquiolo, separándose de este en una
forma de descamación, en el caso con partículas finas, la descamación se
observo solo parcialmente. (Figura 3e y 3f)
Finalmente a las 24 horas se observa como el cuerpo realiza los últimos
esfuerzos por combatir las partículas extrañas, realizando una invasión
neutrofilica masiva a través de los vasos sanguíneos, una reacción extrema ya
que no solo serán destruidas las partículas sino junto con el parte del tejido vital
del pulmón formando cicatrices que no sanaran ni desaparecerán nunca.
(Figura 3g y 3h)
A pesar de poseer estas células una capa protectora de surfactante,
partículas logran entrar al citoplasma, generando una reacción de degradación
dentro de esta, la cual no logra llevar a cabo con éxito, colapsando los sistemas
de vesículas lisosomales, terminando en la muerte celular.

Figura 3: Daño en tejido pulmonar observado por microscopio de luz

E y G afectados por partículas ultra finas, F y H Afectada por partículas finas

Otro estudio que se realizo a las 24 horas, muestra uno de los

componentes de la lamina basal, la laminina, por medio de una
inmunohistoquimica, esto nos ayuda a determinar el lugar exacto de este, en la
imagen la cual por si sola no muestra un contraste para esa molécula.
De esta manera se observo como en los casos donde se afecto con
partículas de sílice, la laminina, la cual señala la lamina basal, comienza a ser
discontinua, la cual en condiciones normales se muestra como una línea que
describe y permanece continua en todas las paredes alveolares. (Figura 4)
Esto debido a la destrucción del material extracelular por consecuencia
de los agentes degradantes de las mismas células las cuales al colapsar su
contenido endocitado, vierten ese contenido a los alrededores, provocando un
colapso estructural.

Figura 4: Inmunohistoquimica para laminina en tejido alveolar.

A Control, B Partículas ultra finas, C, Partículas finas.

En estudios bajo el microscopio electrónico se pudo constatar la

magnitud de la agresión de las partículas en las células, observando cambios
severos en la estructuración de esta, con organelos deformados, acumulación
de partículas dentro y fuera de la célula, destrucción de células y disociación de
estas de la lamina basal, y la destrucción de esta misma. (figura 5)
Esto es debido a las propias reacciones de defensa de las células, las
cuales tratan de rechazar, acciones como la de los macrófagos, células claras y
lisosomas secundarios, solo termina en el volcamiento en los tejidos de todos
los componentes degradante, ya que estos no pueden eliminar a las partículas,
destruyéndose el tejido, el cual muere y se desprende.
Figura 5: Observación por microscopio electrónico de daño en tejido pulmonar.
Conclusión

Luego de las pruebas irrefutables se puede concluir como ambas

partículas provocan severos daños en el tejido pulmonar a gran escala en sus
componentes, generando respuestas violentas y destructivas, las cuales son
mas severas en los individuos expuestos a las partículas ultra finas,
demostrando la relación entre menor tamaño y mayor daño.
Esto es producto principalmente a que estas partículas de menor
tamaño, pueden tener una mayor área de cobertura o de contacto con la
superficie, creando un mayor efecto inductivo en ella, ya que estas se pueden
reunir una tras otra formando cúmulos o agregados. También aumentan sus
efectos agresor al ser capaces de adentrarse dentro de la célula e invadir
citoplasma, conllevando las ya mencionadas reacciones.
Es así como se demostrado el efecto agresor partículas de menor
tamaño, las cuales al contrario de lo que se podría pensar, son mas toxicas que
las de mayor. Estudios como este dan un paso más en la búsqueda de
evidencia que permita generar conciencia entre todos quienes a diario
contaminan el aire que respiramos, para si generar nuevas políticas y normas,
que regulen el quehacer de cada uno de nosotros, para evitar que día a día la
calidad del aire disminuya, junto con este preciado recurso natural que
simboliza la vida.