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UVM México Escuela de Ciencias de la Salud

Vicerrectoría Ciencias de la Salud


______________________________

Dirección Nacional de Tecnologías


Educativas en Salud

Manual de prácticas
Institucionales de la Escuela
de Ciencias de la Salud
— 2016 —
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Formato Institucional de Prácticas Explícitas de


Fundamentos Biológicos.

-----PROCESOS METABÓLICOS -----

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Presentación

Escuela de Ciencias de la Salud Lic. en NUTRICIÓN

ASIGNATURA: PROCESOS METABÓLICOS

CLAVE: 80L665 CRÉDITOS 10 HORAS TOTALES 8


TOTALES:

TIPO DE SEMESTRAL CICLO: TERCER HORAS CON 6


CICLO: SEMESTRE DOCENTE

ÁREA CURRICULAR: Fundamentos biológicos HORAS DE 4


PRÁCTICA

Observaciones: HORAS DE 2
APRENDIZAJE
INDEPENDIENTE

Aspectos Curriculares
1.- OBJETIVO GENERAL DE LA ASIGNATURA:

El estudiante aplicará las diversas técnicas del estudio de procesos bioquímicos mediante el uso de
las principales rutas metabólicas y las bases para describir los mecanismos fundamentales.

2.- OBJETIVO, PROPÓSITO O COMPETENCIA VINCULADA A LA PRÁCTICA:


Reafirmar la información analizada en clase respecto a las diferentes vías metabólicas que actúan
de forma concertada para el adecuado funcionamiento de un organismo.
Con fundamento en los conocimientos previamente adquiridos sobre estructura y función de
biomoléculas celulares, conocer y aplicar herramientas metodológicas que les permitan extraer,
separar, e identificar carbohidratos, proteínas, lípidos y ácidos nucleicos.
Apreciar el delicado balance en las condiciones necesarias para que las enzimas involucradas en
las vías metabólicas funcionen eficientemente, y reconocer aquellos factores causantes de una
alteración en su actividad.
Integrar la información mecanística de las diferentes vías metabólicas en el funcionamiento de un
organismo en condiciones fisiológicas y reconocer las vías que pueden estar alteradas en ciertas
condiciones patológicas.

Competencias transversales genéricas


Capacidad de análisis y síntesis
Capacidad de organizar y planificar
Capacidad de aprender
Adquisición de conocimientos
Capacidad de adaptación a nuevas situaciones
Habilidades para trabajar en equipo
Habilidades elementales en informática
Capacidad de generar nuevas ideas
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Inquietud por la calidad


Conocimiento de la terminología básica de la Bioquímica

Competencias específicas
Saber:
1. Véase contenidos de la asignatura
2. Fundamentos de las principales rutas metabólicas.
3. Conocimiento de los métodos de extracción e identificación de macromoléculas.

Saber hacer:
1. Aplicación de procedimientos experimentales enfocados a la extracción e identificación de
macromoléculas.
2. Habilidad en la preparación de soluciones.
3. Capacidad de realizar modificaciones en los procedimientos experimentales, de manera que,
ante la carencia de algún reactivo, material o equipo, el estudiante pueda proponer alternativas
viables que aseguren el desarrollo de la práctica, cumpliendo los objetivos propuestos.

Ser:
1. Capacidad de utilización y reconocimiento del método científico
2. Capacidad y habilidad para resolver problemas

3.- CONTENIDOS:

Practica 1. Introducción al laboratorio de Bioquímica………………………………………………..5


Practica 2. Reacciones de carbohidratos (metabolismo)………………………………………………7
Practica 3. Producción de ácido pirúvico durante la fermentación de la glucosa por la levadura y su
identificación………………………………………………………………………………………………...9
Practica 4. Extracción de glucógeno…………………………………………………………………….11
Practica 5. Estudio del bombeo de protones por levaduras…………………………………………..14
Practica 6. Digestión enzimática de grasas……………………………………………………………..16
Practica 7. Extracción de lípidos a partir de yema de huevo………………………………………….19
Practica 8. Detección de colesterol………………………………………………………………………22
Practica 9. Determinación de la actividad de Fosfatasa Alcalina……….…………………………….25
Practica 10. Análisis cuantitativo de enzimas…………………………………………………………...27
Practica 11. Obtención de caseína a partir de leche…………………………………………………...30
Practica 12. Reacciones de identificación de aminoácidos y proteínas……………………………...32
Practica 13. Cromatografía de aminoácidos…………………………………………………………….35
Practica 14. Extracción de DNA a partir de levadura…………………………………………………..37
Practica 15. Determinación de Calcio en leche…………………………………………………………40
Practica 16. Integración Metabólica………………………………………………………………………43

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Práctica Número: 1 Duración (mins/horas): 1 sesión de 3 h

Nombre de la Asignatura Procesos metabólicos

Unidad de Contenido ENCUADRE.

Nombre de la Práctica Introducción al laboratorio de bioquímica

Competencia asociada a la El estudiante:


práctica. a) Conoce detalladamente el Reglamento de los Laboratorios Multidisciplinarios.
b) Analiza las medidas de bioseguridad básicas aplicables a un laboratorio tipo II.
c) Conoce detalladamente la programación de prácticas a realizar durante el
semestre, así como las reglas internas para el trabajo de laboratorio de
Bioquímica.

Materiales

De la Institución/Docente: Para el Alumno(s):

Material: Bitácora de trabajo


NO REQUERIDO
Investigación previa

Equipo:
NO REQUERIDO

Sustancias:
NO REQUERIDAS

Actividades

Para el Docente/Facilitador: Para el Alumno(s):

BRIEFING INICIAL (20 MINUTOS) 1. El alumno deberá revisar minuciosamente el


1. Presentación e ingreso al laboratorio reglamento para el trabajo en los laboratorios de
2. Diagrama de bloques ciencias de la salud.
3. Socialización del propósito de Aprendizaje y/o
2. El alumno deberá hacer un recorrido rápido por los
examen rápido
laboratorios de manera que ubique la localización de
PREPARACIÓN INICIAL (15 MINUTOS) salidas de emergencia, extintores, regaderas de
1. El docente solicita a los auxiliares de emergencia, botiquín de primeros auxilios y lavaojos.
laboratorio con 1 semana de anticipación sus 3. El alumno analizará las medidas de bioseguridad
materiales contenidas en el Manual de Bioseguridad en el
2. El docente verifica que el alumno ingresó su laboratorio (OMS), enfocándose en aquellas
solicitud de materiales con los auxiliares de
aplicables a un laboratorio tipo II, así como al manejo
laboratorio con mínimo 24 h de anticipación
3. El docente verifica que los auxiliares de de sustancias químicas peligrosas.
laboratorio entreguen el material a los alumnos 4. El alumno revisará la programación de prácticas del
contra vale de solicitud y credencial del semestre, se informará sobre las reglas internas para
responsable del equipo, posterior al briefing el trabajo en el laboratorio de Bioquímica y conocerá
4. El docente verifica que el alumno revise que las formas de evaluación propuestas por el docente.
cuenta con el 100% de los materiales solicitados 5. Limpieza y orden del laboratorio
5. El docente verifica que el alumno tenga el área
de trabajo limpia y despejada

EJECUCIÓN DE LA PRÁCTICA
1. Lleva los tiempos y ayuda a los alumnos a
llevar la cronología.
2. Provee Feedback descriptivo durante la
práctica.
3. Resuelve dudas durante la ejecución.
4. Promueve el buen Comportamiento del equipo
durante la ejecución de la práctica
5. Verifica la Entrega de material limpio y
completo.
6. Utiliza un Modelo de FACILITADOR NO
INSTRUCCIONAL.

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7. Llenado de bitácora electrónica:


https://goo.gl/forms/Ep16K5pZtsuutiRE3

DEBRIEFING (10 MINUTOS)


1. Recapitula con los alumnos los hechos
ocurridos.
2. Promueve la reflexión, discusión y resolución
de dudas.
3. Verifica si se cumplió el propósito de
aprendizaje.

Aprendizaje Auto-dirigido (Independiente):

Antes de la práctica:
a) Lectura de la práctica.
b) Investigar: reglamento para uso de los laboratorios de Ciencias de la Salud (disponible en el portal de UVM).
c) Investigar: Manual de Bioseguridad en el laboratorio (OMS)

Después de la práctica:
a) Conocer detalladamente el reglamento de trabajo en el laboratorio, medidas de protección generales, ubicar
salidas de emergencia, extintores, regaderas de emergencia, lavaojos y botiquín de primeros auxilios.
b) Conocer las indicaciones básicas respecto al manejo de RPBI y para el manejo de sustancias químicas
peligrosas.
c) Conocer la programación de prácticas a realizar durante el semestre, las formas de evaluación y reglas
internas de trabajo en el laboratorio.

Método de Evaluación

De la Práctica Del Aprendizaje Independiente

Participación en discusión y análisis grupal 20% Examen rápido sobre la investigación previa (40%)
Reporte de práctica 40% (Resumen del manual de
Bioseguridad de la OMS enfocado a medidas de
seguridad en un laboratorio tipo II y manejo de sustancias
químicas peligrosas).

Referencias y Bibliografía Recomendada


Organización Mundial de la Salud. (2005). Manual de Bioseguridad en el Laboratorio.
UVM. Reglamento para el trabajo en los laboratorios de Ciencias de la Salud.
http://www.universidaduvm.mx/normatividad/reglamentos/Reg_laboratorios_CS_(reg-lic-012-1)est.pdf

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Práctica Número: 2 Duración (mins/horas): 1 sesión de 3 h

Nombre de la Asignatura Procesos metabólicos

Unidad de Contenido 3. Metabolismo de los hidratos de carbono

Nombre de la Práctica REACCIONES DE CARBOHIDRATOS (METABOLISMO)

Competencia asociada a la El estudiante:


práctica. Identifica las características bioquímicas y químicas de los azucares y su
participación oxido - reducción en algunos alimentos y como pueden afectar el
metabolismo

Materiales

De la Institución/Docente: Para el Alumno(s):

Material: Bitácora de trabajo


5 matraces aforados de 10 mL
2 matraces aforados de 25 mL Equipo de seguridad (Guantes desechables,
1 matraz aforado de 50 mL cubrebocas)
1 matraz aforado de 100 mL
5 pipetas graduadas de 5 mL Investigación previa
36 tubos de ensayo
5 vasos de precipitados de 10 mL El estudiante debe llevar al laboratorio el
2 vasos de precipitados de 50 mL siguiente material:
4 vasos de precipitados de 100 mL
3 vasos de precipitados de 250 mL 1 sobre de canderel
1 gradilla 1 lata de refresco de dieta sin colorante
10 pipetas Pasteur 1 lata de refresco normal sin colorante
3 espátulas 1 lata de jugo manzana
2 propipetas Azúcar de mesa (5 g)

Equipo:
Placa calefactora
Balanza analítica
Balanza digital o granataria
Baño María

Sustancias:
Glucosa (0.5 g)
Fructosa (0.5 g)
Manosa (0.5 g)
Sacarosa (0.5g)
Sulfato de cobre (5.23 g)
Tartrato de sodio y potasio (17.5 g)
Hidróxido de sodio (5 g)
Citrato de potasio (17.3 g)
Carbonato de sodio anhidro (10 g)
Agua destilada

Actividades

Para el Docente/Facilitador: Para el Alumno(s):

BRIEFING INICIAL (20 MINUTOS) Preparación de muestras:


1. Presentación e ingreso al laboratorio 1. Preparación de solución de glucosa al 5% (p/v) (10 mL)
2. Diagrama de bloques 2. Preparación de solución de fructosa al 5% (p/v) (10 mL)
3. Socialización del propósito de 3. Preparación de solución de manosa al 5% (p/v) (10 mL)
Aprendizaje y/o examen rápido
4. Preparación de solución de sacarosa al 5% (p/v) (10 mL)
PREPARACIÓN INICIAL (15 MINUTOS) 5. Preparación de solución de Canderel al 1% (p/v) (25 mL)
1. El docente solicita a los auxiliares de 6. Preparación de solución de azúcar de mesa al 5% (p/v) (25
laboratorio con 1 semana de anticipación mL)
sus materiales

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2. El docente verifica que el alumno ingresó Preparación de Reactivos


su solicitud de materiales con los Reactivo de Fehling
auxiliares de laboratorio con mínimo 24 h
de anticipación  Solución A: 3.5 g de CuSO4 en agua y aforara a 50 ml
3. El docente verifica que los auxiliares de  Solución B: 17.5 g de Tartrato de Sodio y Potasio y 5g
laboratorio entreguen el material a los de NaOH en agua y aforar a 50ml
alumnos contra vale de solicitud y
credencial del responsable del equipo,
Reactivo de Benedict
posterior al briefing
4. El docente verifica que el alumno revise
En 60 ml de agua disolver 17.3g de citrato de sodio y 10g de
que cuenta con el 100% de los materiales
Na2CO3 anhidro. Esta mezcla se
solicitados
añade lentamente y agitando una solución previamente
5. El docente verifica que el alumno tenga el
preparada de 1.73g de CuSO4
área de trabajo limpia y despejada
pentahidratado en 15mL de agua. La solución final se afora a
100mL
EJECUCIÓN DE LA PRÁCTICA
Procedimiento Experimental Prueba de Fehling
1. Lleva los tiempos y ayuda a los alumnos
1. Numera una serie de nueve tubos por duplicado
a llevar la cronología.
2. Provee Feedback descriptivo durante la 2. Adiciona a cada tubo las cantidades indicadas en la
práctica. siguiente tabla:
3. Resuelve dudas durante la ejecución.
4. Promueve el buen Comportamiento del Tubos 1 2 3 4 5 6 7 8 9
equipo durante la ejecución de la práctica Sol. A
1 1 1 1 1 1 1 1 1
5. Verifica la Entrega de material limpio y mL
completo. Sol. B
6. Utiliza un Modelo de FACILITADOR NO 1 1 1 1 1 1 1 1 1
mL
INSTRUCCIONAL. Glucosa 3 - - - - - - - -
7. Llenado de bitácora electrónica: Fructosa 3 - - - - - - -
https://goo.gl/forms/Ep16K5pZtsuutiRE3 Manosa 3 - - - - - -
Sacarosa 3 - - - - -
DEBRIEFING (10 MINUTOS) Jugo
1. Recapitula con los alumnos los hechos 10 - - - -
Manzana
ocurridos. RF N 10 - - -
2. Promueve la reflexión, discusión y RF dieta 10 - -
resolución de dudas.
Canderel 10 -
3. Verifica si se cumplió el propósito de
Azúcar 10
aprendizaje.
3. Calienta los tubos en baño María, a ebullición durante
5 minutos y dejar a enfriar a temperatura ambiente.
4. La formación de un precipitado rojo y la decoloración
de la solución indica prueba positiva para azúcar
reductor.

Procedimiento para la Prueba de Benedict


1. Prepara por duplicado una serie de nueve tubos por
duplicado y numera consecutivamente cada uno de los
tubos.
2. Añade las soluciones como se indican en la tabla
siguiente:

Tubos 1 2 3 4 5 6 7 8 9
Sol. Benedict mL 1 1 1 1 1 1 1 1 1
Glucosa 5 - - - - - - - -
Fructosa 5 - - - - - - -
Manosa 5 - - - - - -
Sacarosa 5 - - - - -
Jugo Manzana 10 - - - -
RF N 10 - - -
RF dieta 10 - -
Canderel 10 -
Azúcar 10

3. Calienta los tubos en baño María, a ebullición durante


5 minutos y dejar a enfriar a temperatura ambiente.

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4. La presencia de un precipitado cuya coloración varía


desde amarillo hasta rojo y con decoloración de la
solución indica prueba positiva.
5. Limpieza y entrega de materiales.

Aprendizaje Auto-dirigido (Independiente):

Antes de la práctica:
a) Lectura de la práctica
b) ¿Qué es un azúcar reductor?
c) Describe las dos pruebas más comunes para determinar azucares reductores.
d) Describe las reacciones de las dos pruebas descritas en el inciso anterior (c).
e) Dibuja las estructuras de los principales monosacáridos con actividad bioquímica en el ser humano.
f) Describe las reacciones de oxidación de los monosacáridos.

Después de la práctica:
a) Elabora un cuadro con cada una de las características observadas en cada una de las reacciones: color,
formación del precipitado etc.
 Compara los resultados e indica que tipo de azucares son la glucosa, la fructosa, la manosa y
sacarosa
 Los alimentos probados contenían azucares reductores, explica.
 Las determinaciones de esta práctica son cuantitativas o cualitativas ¿por qué?
 Mencione la similitud en su composición que presentan el reactivo de Fehling y el reactivo de
Benedict
 ¿Qué efecto tiene en el organismo la presencia de azucares reductores en los alimentos?

b) Describe las rutas metabólicas activadas después del consumo de los diferentes tipos de alimentos.

Método de Evaluación

De la Práctica Del Aprendizaje Independiente

Investigación previa 20% Examen rápido sobre la investigación previa (40%)


Reporte de práctica 40% (véase anexo 1)

Referencias y Bibliografía Recomendada


Morales R. A. (2012) Manual del laboratorio de Bioquímica UVM Campus Coyoacán
Nelson DL, Cox MM. (2005) Lehninger Principles of Biochemistry. Fourth edition. WH Freeman.
Kaplan LA, Pesce AJ. (2002). Química clínica. Teoría, análisis y correlación. 3ª ed. Ed. Pesce Kaplan publicaciones.

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Práctica Número: 3 Duración (mins/horas): 1 sesión de 3 h

Nombre de la Asignatura Procesos metabólicos

Unidad de Contenido 3. Metabolismo de los hidratos de carbono

Nombre de la Práctica PRODUCCIÓN DE ÁCIDO PIRÚVICO DURANTE LA FERMENTACIÓN DE LA


GLUCOSA POR LA LEVADURA.

Competencia asociada a El estudiante:


la práctica. a) Demuestra la formación de ácido pirúvico durante la fermentación de la
glucosa por la levadura.
b) identifica el ácido pirúvico producido a partir de glucosa.

Materiales

De la Institución/Docente: Para el Alumno(s):

Material: Bitácora de trabajo


18 tubos de ensayo de 18x150
6 tubos de ensayo de 13x100 Equipo de seguridad (Guantes desechables,
1 gradilla. cubrebocas, lentes de seguridad)
1 pinzas para tubo de ensayo.
5 matraces Erlenmeyer de 50 ml. Investigación previa
1 agitador de vidrio.
2 vasos de precipitados de 100 ml. Levadura (5 gr/equipo)
4 vasos de precipitados de 50 ml.
4 pipetas serológicas de 5 ml.
3 pipetas serológicas de 1 ml.
1 probeta de 50 ml.
1 probeta de 25 ml.
2 propipetas.
1 barra magnética.
1 espátula.
4 pisetas con agua destilada, extrán, benzal, alcohol.
Jabón para manos.
Pipeta Pasteur desechable.
Charola para pesar.

Equipo:
 Parrilla con agitación
 Centrífuga
 Agitador Vortex
 Baño maría
 Balanza digital

Sustancias:

10 ml NaOH 0.1 N
10 ml Acido tricloroacético al 10%
10 ml Nitroprusiato de Sodio al 0.5%
0.5 gr Sulfato de amonio sólido.
10 ml 2,4-dinitrofenil-hidracina al 0.1% en HCl 2N
5 ml Hidróxido de amonio concentrado.
10 ml Soluciones de glucosa al 0.5, 1.0 y 2.0%
10 ml Suspensión de levadura al 5% en Na2HPO4 (213 mg/100 ml)
y KH2PO4 (90 mg/100 ml) (18 hrs de fermentación antes de
su utilización).
Agua destilada.

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Actividades

Para el Docente/Facilitador: Para el Alumno(s):

BRIEFING INICIAL (20 MINUTOS) I. FORMACIÓN DE PIRUVATO.


1. Presentación e ingreso al laboratorio 1. Marcar dos series de 3 tubos de 18x150 y adicionar 3
2. Diagrama de bloques ml. de las soluciones de glucosa a las diferentes
3. Socialización del propósito de Aprendizaje y/o concentraciones (0.5, 1.0 y 2.0 %) a ambas series.
examen rápido 2. A una de las series agregar 3 ml de suspensión de
levadura con fosfatos de sodio (marcar como A).A la otra
PREPARACIÓN INICIAL (15 MINUTOS) serie agregar 3 ml de la suspensión de levadura con
1. El docente solicita a los auxiliares de fosfatos de potasio (marcar como B).
laboratorio con 1 semana de anticipación sus 3. Colocar todos los tubos en baño maría a 37ºC por 30
materiales minutos. Posteriormente añadir a cada tubo 1 ml. de
2. El docente verifica que el alumno ingresó su Ácido tricloroacético al 10%. Mezclar vigorosamente y
solicitud de materiales con los auxiliares de centrifugar a 2500 rpm por 10 minutos. A partir de cada
laboratorio con mínimo 24 h de anticipación tubo separar 2 alícuotas de 1 ml de sobrenadante en
3. El docente verifica que los auxiliares de tubos nuevos y reservar para las pruebas de identificación
laboratorio entreguen el material a los alumnos del piruvato. El precipitado se desecha.
contra vale de solicitud y credencial del
responsable del equipo, posterior al briefing II. IDENTIFICACIÓN DEL PIRUVATO.
4. El docente verifica que el alumno revise que 1. REACCIÓN CON NITROPRUSIATO DE SODIO.
cuenta con el 100% de los materiales solicitados Tomar una de las alícuotas del paso anterior . Adicionar
5. El docente verifica que el alumno tenga el área 0.5 gr de sulfato de amonio sólido y agitar. Agregar dos
de trabajo limpia y despejada gotas de nitroprusiato de sodio y mezclar vigorosamente.
Depositar lentamente por la pared interna del tubo unas
EJECUCIÓN DE LA PRÁCTICA gotas de Hidróxido de amonio concentrado de manera
1. Lleva los tiempos y ayuda a los alumnos a que se estratifique. NO MEZCLAR. La formación de un
llevar la cronología. anillo azul ó verde en la interfase indica prueba positiva.
2. Provee Feedback descriptivo durante la Repetir el procedimiento con las alícuotas de ambas
práctica. series.
3. Resuelve dudas durante la ejecución. 2. REACCIÓN CON 2,4-DINITROFENIL-HIDRACINA.
4. Promueve el buen Comportamiento del equipo Tomar la segunda alícuota reservada en la parte I y
durante la ejecución de la práctica adicionar 1 ml. de 2,4-dinitrofenil-hidracina, agitar y
5. Verifica la Entrega de material limpio y separar la mitad de la mezcla formada en un tubo nuevo
completo. de 13x100. Agregar 1 ml de NaOH 0.1 N. La aparición de
6. Utiliza un Modelo de FACILITADOR NO un color rojo indica prueba positiva. Repetir el
INSTRUCCIONAL. procedimiento con las alícuotas de ambas series.
7. Llenado de bitácora electrónica:
https://goo.gl/forms/Ep16K5pZtsuutiRE3 Limpieza y entrega de materiales
Limpieza y orden del laboratorio
DEBRIEFING (10 MINUTOS)
1. Recapitula con los alumnos los hechos
ocurridos.
2. Promueve la reflexión, discusión y resolución
de dudas.
3. Verifica si se cumplió el propósito de
aprendizaje.

Aprendizaje Auto-dirigido (Independiente):

Antes de la práctica:
a) Lectura de la práctica.
b) Investigar: Glucólisis, destinos del piruvato.
c) Investigar: fundamento de las pruebas de identificación del piruvato.

Después de la práctica:
a) Comparar la coloración e intensidad obtenida en ambas pruebas de identificación de piruvato.
Discutir las diferencias en función de las concentraciones de glucosa y la solución de fosfatos
utilizada para la suspensión de levadura.
Método de Evaluación

De la Práctica Del Aprendizaje Independiente

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Investigación previa 20% Examen rápido sobre la investigación previa (40%)


Reporte de práctica 40% (véase anexo 1)

Referencias y Bibliografía Recomendada


Nelson DL, Cox MM. (2005) Lehninger Principles of Biochemistry. Fourth edition. WH Freeman.
Feduchi E, Blasco I, Romero CS, Yáñez E. (2011) Bioquímica. Conceptos esenciales. Primera edición. Editorial
Médica Panamericana. Madrid.

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Práctica Número: 4 Duración (mins/horas): 1 sesión de 3 h

Nombre de la Asignatura Procesos metabólicos

Unidad de Contenido 3. Metabolismo de los hidratos de carbono

Nombre de la Práctica EXTRACCIÓN DE GLUCÓGENO

Competencia asociada a El estudiante:


la práctica. a) Describe el papel del glucógeno en el almacenamiento de energía.
b) Aísla el glucógeno a partir de hígado de res y posteriormente identifica las
moléculas de glucosa resultantes de su hidrólisis mediante pruebas
colorimétricas.

Materiales

De la Institución/Docente: Para el Alumno(s):

Material: Bitácora de trabajo


8 tubos de ensayo de 13x100
1 gradilla. Equipo de seguridad (Guantes desechables,
1 pinzas para tubo de ensayo. cubrebocas, lentes de seguridad)
1 mechero
2 matraces Erlenmeyer de 25 ml. Investigación previa
2 matraces volumétricos de 25 ml.
1 agitador de vidrio. Hígado de res (3 gr por equipo).
1 vaso de precipitado de 100 ml.
3 vasos de precipitados de 50 ml.
4 pipetas serológicas de 5 ml.
4 pipetas serológica de 1 ml.
2 probetas de 50 ml.
2 probetas de 25 ml.
2 propipetas.
1 espátula.
4 pisetas con agua destilada, extrán, benzal, alcohol.
Jabón para manos.
Papel filtro.
Papel indicador.
Pipeta pasteur desechable.
Charola para pesar.

Equipo:
 Centrífuga
 Agitador Vortex
 Baño maría
 Balanza digital

Sustancias:
5 ml KOH al 30%
1 ml Na2SO4 al 15%
10 ml Etanol al 96%
2 ml H2SO4 5 N.
5 ml NaOH 5 N
0.5 ml Fenolftaleína
1 ml Reactivo de Benedict.
Agua destilada.
Hielo.

Actividades

Para el Docente/Facilitador: Para el Alumno(s):

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UVM México Escuela de Ciencias de la Salud

BRIEFING INICIAL (20 MINUTOS) I. Extracción del glucógeno de una muestra hepática
1. Presentación e ingreso al laboratorio de hígado de res.
2. Diagrama de bloques 1. Pesar aproximadamente 1.5 g de hígado de res.
3. Socialización del propósito de Aprendizaje y/o Realizar la extracción por duplicado.
examen rápido 2. Introducir los fragmentos de hígado en dos tubos de
ensayo. Añadir a cada tubo 2 ml de KOH al 30%.
PREPARACIÓN INICIAL (15 MINUTOS) Incubar los tubos en un baño de agua hirviendo
1. El docente solicita a los auxiliares de laboratorio durante 15 minutos con agitación ocasional, hasta la
con 1 semana de anticipación sus materiales completa digestión del tejido (que no queden partículas
2. El docente verifica que el alumno ingresó su en suspensión).
solicitud de materiales con los auxiliares de laboratorio 3. Centrifugar 5 minutos a 3000 rpm para eliminar los
con mínimo 24 h de anticipación restos de tejido no digerido.
3. El docente verifica que los auxiliares de laboratorio 4. Pasar cuidadosamente los sobrenadantes (con una
entreguen el material a los alumnos contra vale de pipeta o por decantación) a dos tubos previamente
solicitud y credencial del responsable del equipo, pesados, a los que se les añaden 0.2 ml de Na2SO4 al
posterior al briefing 15%, y 4 ml de alcohol etílico. Agitar cuidadosamente
4. El docente verifica que el alumno revise que cuenta la mezcla para poner en contacto a todos los
con el 100% de los materiales solicitados componentes. Dejar reposar en hielo 15-20 minutos,
5. El docente verifica que el alumno tenga el área de para provocar la precipitación del glucógeno extraído.
trabajo limpia y despejada 5. Centrifugar 5 minutos a 3000 r.p.m. para sedimentar el
glucógeno. Desechar con sumo cuidado el
EJECUCIÓN DE LA PRÁCTICA sobrenadante y retener el precipitado o sedimento de
1. Lleva los tiempos y ayuda a los alumnos a llevar la color marrón-blanco, puesto que esto es el glucógeno.
cronología. Nota. La purificación completa del glucógeno
2. Provee Feedback descriptivo durante la práctica. implicaría tres o cuatro precipitaciones alcohólicas y
3. Resuelve dudas durante la ejecución. una precipitación ácida, pero en esta práctica haremos
4. Promueve el buen Comportamiento del equipo sólo una precipitación alcohólica.
durante la ejecución de la práctica 6. Secar cuidadosamente con papel de filtro y pesar el
5. Verifica la Entrega de material limpio y completo. precipitado de glucógeno de cada tubo. Anotar el
6. Utiliza un Modelo de FACILITADOR NO resultado.
INSTRUCCIONAL.
7. Llenado de bitácora electrónica: II. Hidrólisis ácida del sedimento de glucógeno
https://goo.gl/forms/Ep16K5pZtsuutiRE3 1. Al sedimento de glucógeno obtenido en el tubo, se le
añade 1 ml de H2SO4 5N para proceder a su hidrólisis
DEBRIEFING (10 MINUTOS) ácida y para ello se calienta la disolución
1. Recapitula con los alumnos los hechos ocurridos. cuidadosamente a 100°C durante 45 minutos.
2. Promueve la reflexión, discusión y resolución de Nota. Como el ácido puede saltar en la ebullición, es
dudas. conveniente poner en la parte superior del tubo papel
3. Verifica si se cumplió el propósito de aprendizaje. filtro enrollado, para que absorba el ácido y evitar
riesgos. Tener en cuenta que en este tratamiento es
donde se está obteniendo la glucosa que después se
puede valorar, por lo cual no conviene perder muestra.
2. Completar a 2 ml con agua destilada y añadir 2-3 gotas
de fenolftaleína para que actúe de indicador en la
posterior neutralización.
3. Añadir gota a gota NaOH 5N y agitar bien hasta que se
obtenga un pH 8 o superior. Se debe comprobar el pH
de la muestra con papel indicador.
4. Anotar el volumen de la disolución, hidrolizado de
glucógeno, puesto que es la disolución problema
donde se va a comprobar la presencia de glucosa
proveniente del glucógeno extraído.

III. Medida cualitativa del contenido de glucosa


1. Se colocan dos tubos de ensayo en la gradilla en los
que se introduce 0.5 ml del hidrolizado de glucógeno
de cada muestra.
2. Se añade a cada uno 0.5 ml de reactivo de Benedict.
3. Observar y anotar lo que ocurre en cada tubo.
4. Limpieza y entrega de materiales.
5. Limpieza y orden en el laboratorio.

Aprendizaje Auto-dirigido (Independiente):

Antes de la práctica:
a) Lectura de la práctica

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b) Investigar: Gluconeogénesis, glucogenólisis, regulación del metabolismo del glucógeno, función


del KOH al 30 %.

c) Investigar: fundamento de la prueba de Benedict.

Después de la práctica:
a) Reportar la eficiencia de la extracción de glucógeno a través de la identificación de la glucosa.
Método de Evaluación

De la Práctica Del Aprendizaje Independiente

Investigación previa 20% Examen rápido sobre la investigación previa (40%)


Reporte de práctica 40% (véase anexo 1)

Referencias y Bibliografía Recomendada


Nelson DL, Cox MM. (2005) Lehninger Principles of Biochemistry. Fourth edition. WH Freeman.
Manzoul, SM, Mohammed, H. (2010). Bioquímica. Editorial El Manual Moderno. México.

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UVM México Escuela de Ciencias de la Salud

Práctica Número: 5 Duración (mins/horas): 1 sesión de 3 h

Nombre de la Asignatura Procesos metabólicos

Unidad de Contenido 3. Metabolismo de los hidratos de carbono

Nombre de la Práctica ESTUDIO DEL BOMBEO DE PROTONES POR LEVADURAS

Competencia asociada a El estudiante:


la práctica. a) Relaciona el consumo de glucosa con los cambios de pH producidos por la
levadura.
b) Analiza las vías por las cuales la glucosa genera los cambios de pH.
c) Interpreta el efecto de los inhibidores y los desacoplantes sobre la salida de
protones.

Materiales

De la Institución/Docente: Para el Alumno(s):

Material: Bitácora de trabajo


3 vasos de precipitados de 100 ml.
1 vaso de precipitado de 50 ml. Equipo de seguridad (Guantes desechables,
3 pipetas serológicas de 5 ml. cubrebocas, lentes de seguridad)
2 pipetas serológicas de 1 ml.
1 probeta de 50 ml. Investigación previa
1 probetas de 25 ml.
2 propipetas. Levadura (Saccharomyces cerevisiae) (4
1 espátula. gr/equipo)
4 pisetas con agua destilada, extrán, benzal, alcohol.
Jabón para manos.
Charola para pesar.

Equipo:
 Potenciómetro
 Balanza digital

Sustancias:

20 ml Glucosa al 10% (para una concentración final de 1%)


20 ml Solución de levadura 200 mg/ml.
1 ml Dinitrifenol 40 mmol/l en etanol.
1 ml Azida de sodio 400 mmol/l
Agua destilada.

Actividades

Para el Docente/Facilitador: Para el Alumno(s):

BRIEFING INICIAL (20 MINUTOS) EXPERIMENTO 1 (CONTROL).


1. Presentación e ingreso al laboratorio 1. Diluír 5 ml de la levadura con 40 ml de agua
2. Diagrama de bloques destilada.
3. Socialización del propósito de Aprendizaje y/o 2. Determinar el pH de la solución y repetir la medición
examen rápido
dos veces más con intervalos de 3 minutos para
PREPARACIÓN INICIAL (15 MINUTOS) obtener la línea basal.
1. El docente solicita a los auxiliares de laboratorio 3. Adicionar 5 ml. de glucosa al 10%, agitar y medir el
con 1 semana de anticipación sus materiales pH.
2. El docente verifica que el alumno ingresó su 4. Determinar el pH de la solución cada 5 minutos 4
solicitud de materiales con los auxiliares de laboratorio veces, y luego cada 10 minutos 2 veces más.
con mínimo 24 h de anticipación
3. El docente verifica que los auxiliares de laboratorio EXPERIMENTO 2 (DINITROFENOL).
entreguen el material a los alumnos contra vale de 1. Diluír 5 ml. de la levadura con 40 ml de agua
solicitud y credencial del responsable del equipo,
destilada.
posterior al briefing

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UVM México Escuela de Ciencias de la Salud

4. El docente verifica que el alumno revise que cuenta 2. Añadir por decantación (no pipetear) 0.2 ml de la
con el 100% de los materiales solicitados solución de dinitrofenol 40 mmol/l, concentración final
5. El docente verifica que el alumno tenga el área de de 200 μmol/l.
trabajo limpia y despejada
3. Determinar el pH de la solución y repetir la medición
EJECUCIÓN DE LA PRÁCTICA dos veces más con intervalos de 3 minutos para
1. Lleva los tiempos y ayuda a los alumnos a llevar la obtener la línea basal.
cronología. 4. Esperar 5 minutos.
2. Provee Feedback descriptivo durante la práctica. 5. Repetir los pasos 3 y 4 del experimento control.
3. Resuelve dudas durante la ejecución.
4. Promueve el buen Comportamiento del equipo EXPERIMENTO 3 (AZIDA).
durante la ejecución de la práctica 1. Diluír 5 ml. de la levadura con 40 ml de agua
5. Verifica la Entrega de material limpio y completo. destilada.
6. Utiliza un Modelo de FACILITADOR NO
2. Añadir por decantación (no pipetear) 0.5 ml de la
INSTRUCCIONAL.
7. Llenado de bitácora electrónica: solución de azida de sodio 400 mmol/l, concentración
https://goo.gl/forms/Ep16K5pZtsuutiRE3 final de 5 mmol/l.
3. Determinar el pH de la solución y repetir la medición
DEBRIEFING (10 MINUTOS) dos veces más con intervalos de 3 minutos para
1. Recapitula con los alumnos los hechos ocurridos. obtener la línea basal.
2. Promueve la reflexión, discusión y resolución de 4. Esperar 5 minutos.
dudas.
5. Repetir los pasos 3 y 4 del experimento control.
3. Verifica si se cumplió el propósito de aprendizaje.
6. Limpieza y entrega de materiales.
7. Limpieza y orden del laboratorio.

Aprendizaje Auto-dirigido (Independiente):

Antes de la práctica:
a) Lectura de la práctica.
b) Investigar: Fuentes de carbono de las levaduras. Vías metabólicas para el catabolismo de
carbohidratos. Glucólisis. Fosforilación oxidativa.
c) Investigar: Productos finales del catabolismo de carbohidratos en levaduras. Inhibidores de la
cadena respiratoria de los sitios I, II y III.Mecanismo de protonóforos para desacoplar la
fosforilación oxidativa.

Después de la práctica:
a) Hacer una gráfica de cada uno de los experimentos; utilizar los valores de las lecturas de pH
contra tiempo.
b) Analizar el significado de los cambios de pH en el experimento control, con dinitrofenol como
desacoplante y con azida de sodio
c) Hacer una relación de las vías que producen estos cambios, considerando que las
levadurasposeen una ATPasa de protones en la membrana mitocondrial que se encarga de
sintetizar ATP y que tienen otra ATPasa de protones en la membrana plasmática cuya función es
similar a la bomba de Na/K en las células de mamíferos.
Método de Evaluación

De la Práctica Del Aprendizaje Independiente

Investigación previa 20% Examen rápido sobre la investigación previa (40%)


Reporte de práctica 40% (véase anexo 1)

Referencias y Bibliografía Recomendada


Nelson DL, Cox MM. (2005) Lehninger Principles of Biochemistry. Fourth edition. WH Freeman.
Feduchi E, Blasco I, Romero CS, Yáñez E. (2011) Bioquímica. Conceptos esenciales. Primera edición. Editorial
Médica Panamericana. Madrid.

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Práctica Número: 6 Duración (mins/horas): 1 sesión de 3 h

Nombre de la Asignatura Procesos metabólicos

Unidad de Contenido 5. Metabolismo de lípidos

Nombre de la Práctica DIGESTIÓN ENZIMÁTICA DE GRASAS

Competencia asociada a El estudiante:


la práctica. c) Observar la eficiencia en la digestión de lípidos de la leche con enzimas
pancreáticas sometidas a calentamiento.
d) Comprender la importancia de las sales biliares en el proceso de digestión
enzimática de grasas..

Materiales

De la Institución/Docente: Para el Alumno(s):

Material: Bitácora de trabajo


8 tubos de ensayo de 18x150
1 gradilla. Equipo de seguridad (Guantes desechables,
1 mortero con pistilo. cubrebocas, lentes de seguridad)
1 matraz erlenmeyer de 25 ml.
1 agitador de vidrio. Investigación previa
2 vasos de precipitados de 50 ml.
1 vaso de precipitados de 25 ml. Material suficiente para todo el grupo:
1 matraz volumétrico de 25 ml.
1 pipetas serológicas de 10 ml.  1 caja de ESPAVEN ENZIMÁTICO
1 pipetas serológicas de 5 ml. (Laboratorios Valeant), medicamento de
1 pipetas serológicas de 2 ml. venta libre.
1 pipetas serológicas de 1 ml.
1 probeta de 25 ml.  100 mL de leche entera
1 probeta de 50 ml.  100 ml de aceite vegetal
2 propipetas.
4 pisetas con agua destilada, extrán, benzal, alcohol.
Jabón para manos.

Equipo:
Agitador vortex
Potenciómetro
Baño maría.

Sustancias:

20 ml Pancreatina al 1%
1 ml Na2CO3 al 10%.
25 ml NaOH 0.1 N.
Agua destilada.

Actividades

Para el Docente/Facilitador: Para el Alumno(s):

BRIEFING INICIAL (20 MINUTOS) 1. Digestión de grasa de la leche con lipasa


1. Presentación e ingreso al laboratorio pancreática.
2. Diagrama de bloques
3. Socialización del propósito de Aprendizaje y/o
examen rápido A 10 mL de leche agregar 10 gotas de fenolftaleína y 2
gotas de carbonato de sodio. Revisar pH. Dividir la leche
PREPARACIÓN INICIAL (15 MINUTOS) en porciones iguales y transferir a 2 tubos de ensayo.
1. El docente solicita a los auxiliares de laboratorio Añadir a un tubo con leche 1.5 mL de solución hervida de
con 1 semana de anticipación sus materiales pancreatina y a otro 1.5 mL de solución no hervida de
pancreatina. Mezclar cada uno de los tubos

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2. El docente verifica que el alumno ingresó su vigorosamente. Limpiar el exterior de los tubos para no
solicitud de materiales con los auxiliares de laboratorio introducir leche al baño maría. Colocar los tubos en baño
con mínimo 24 h de anticipación maría a 40 °C. Mezclar los tubos cada 20 minutos y
3. El docente verifica que los auxiliares de laboratorio anotar cualquier cambio de color y olor.
entreguen el material a los alumnos contra vale de
solicitud y credencial del responsable del equipo, 2. Efecto de las sales biliares en la acción de la lipasa.
posterior al briefing
4. El docente verifica que el alumno revise que cuenta Preparar un juego de cuatro digestiones (tubos 1 a 4) y
con el 100% de los materiales solicitados dos controles (tubos 5 y 6) en tubos de ensayo de la
5. El docente verifica que el alumno tenga el área de siguiente manera, añadiendo la solución de pancreatina
trabajo limpia y despejada. hasta el final:

EJECUCIÓN DE LA PRÁCTICA TUBO ACEITE AGUA PASTILLA PANCREA


1. Lleva los tiempos y ayuda a los alumnos a llevar la VEGETAL (ml) DE TINA (ml)
cronología. (ml) ESPAVEN
2. Provee Feedback descriptivo durante la práctica. MOLIDA
3. Resuelve dudas durante la ejecución. 1 0.25 2.25 0 2.5
4. Promueve el buen Comportamiento del equipo 2 0.25 2.25 0 2.5
durante la ejecución de la práctica 3 0.25 1.75 1 2.5
5. Verifica la Entrega de material limpio y completo. 4 0.25 1.75 1 2.5
6. Utiliza un Modelo de FACILITADOR NO 5 0 2.5 0 2.5 C par
INSTRUCCIONAL. 6 0 2 1 2.5 C par
7. Llenado de bitácora electrónica:
https://goo.gl/forms/Ep16K5pZtsuutiRE3
Mezclar vigorosamente cada tubo, colocarlos por el mismo
DEBRIEFING (10 MINUTOS) periodo de tiempo en baño maría a 40 °C e incubar a esa
1. Recapitula con los alumnos los hechos ocurridos. temperatura durante 1 hora. Mezclar los tubos
2. Promueve la reflexión, discusión y resolución de vigorosamente cada 15 minutos. Después de incubados,
dudas. añadir 10 gotas de fenolftaleína y titular con una solución
3. Verifica si se cumplió el propósito de aprendizaje. de NaOH 0.1 N hasta que la mezcla llegue a un color rosa
que se desvanece después de unos 30 segundos. Anote
los volúmenes de NaOH utilizados. Calcule los ácidos
grasos producidos con y sin sales biliares (Espaven).
Limpieza y entrega de materiales.
Limpieza y orden del laboratorio.

Aprendizaje Auto-dirigido (Independiente):

Antes de la práctica:
1. Lectura de la práctica.
2. Investigar: : hidrólisis de triglicéridos, lipasa, sales biliares.
3. Investigar: solución, suspensión, emulsión.
4. Investigar la relación previamente establecida para la actividad lipásica en función de los ml de
NaOH 0.1 N gastados en la segunda parte de la práctica..

Después de la práctica:
a) Compara la eficiencia de digestión de lípidos de la leche con pancreatina normal y sometida a
calentamiento.

b) Calcular la cantidad de ácidos grasos producidos con y sin sales biliares, utilizando la relación
arriba mencionada.

Método de Evaluación

De la Práctica Del Aprendizaje Independiente

Investigación previa 20% Examen rápido sobre la investigación previa (40%)


Reporte de práctica 40% (véase anexo 1)

Referencias y Bibliografía Recomendada


Nelson DL, Cox MM. (2005) Lehninger Principles of Biochemistry. Fourth edition. WH Freeman.
Strong FM, Koch GH. (1981). Biochemistry Laboratory Manual. Third Edition. McGraw-Hill

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Práctica Número: 7 Duración (mins/horas): 1 sesión de 3 h

Nombre de la Asignatura Procesos metabólicos

Unidad de Contenido 5. Metabolismo de lípidos

Nombre de la Práctica EXTRACCIÓN DE LÍPIDOS DE LA YEMA DE HUEVO

Competencia asociada a El estudiante:


la práctica. a) Comprender las características estructurales y funcionales de los lípidos
contenidos en la yema de huevo.
b) Obtener las diferentes fracciones lipídicas de la yema de huevo en base a sus
diferencias en solubilidad.

Materiales

De la Institución/Docente: Para el Alumno(s):

Material: Bitácora de trabajo


4 tubos de ensayo de 18x150
1 gradilla. Equipo de seguridad (Guantes desechables,
1 embudo Buchner. cubrebocas, lentes de seguridad)
1 matraz kitasato de 500 ml.
1 agitador de vidrio. Investigación previa
4 vasos de precipitados de 400 ml.
1 vasos de precipitados de 50 ml. 2 huevos por equipo.
2 pipetas serológicas de 10 ml.
2 pipetas serológicas de 5 ml.
1 probeta de 100 ml.
2 probetas de 50 ml.
2 propipetas.
1 barra magnética.
1 espátula.
4 pisetas con agua destilada, extrán, benzal, alcohol.
Jabón para manos.
Papel filtro.
Charola para pesar.

Equipo:
 Parrilla con agitación
 Bomba de vacío
 Agitador Vortex

Sustancias:

25 ml Acetona
2 ml Anhídrido acético
8 ml Cloroformo
80 ml Etanol al 96
100 ml Éter etílico.
3.5 ml H2SO4 concentrado.
30 ml Solución alcohólica de KOH al 5.6 %.
Agua destilada.

Actividades

Para el Docente/Facilitador: Para el Alumno(s):

BRIEFING INICIAL (20 MINUTOS) 1.- Pesar un vaso de precipitados de 400 ml


1. Presentación e ingreso al laboratorio completamente limpio y seco.
2. Diagrama de bloques 2.-Romper cuidadosamente dos huevos, y transferir las
3. Socialización del propósito de Aprendizaje y/o yemas al vaso de precipitados. Pesar nuevamente y
examen rápido determinar el peso de las yemas de huevo.

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3.-Adicionar 70 ml de etanol y 35 ml de éter, agitar


PREPARACIÓN INICIAL (15 MINUTOS) continuamente durante 10
1. El docente solicita a los auxiliares de laboratorio minutos para extraer todos los lípidos.
con 1 semana de anticipación sus materiales 4.-Filtrar la suspensión a través de una gasa adaptada a
2. El docente verifica que el alumno ingresó su un embudo de filtración, recogiendo el filtrado en un vaso
solicitud de materiales con los auxiliares de laboratorio de precipitados de 400 ml bien seco, LEJOS DE TODA
con mínimo 24 h de anticipación FLAMA.
3. El docente verifica que los auxiliares de laboratorio 5.-Filtrar nuevamente el filtrado en un embudo de filtración
entreguen el material a los alumnos contra vale de cubierto con papel filtro humedecido previamente con
solicitud y credencial del responsable del equipo, etanol.
posterior al briefing 6.- Evaporar el filtrado hasta casi sequedad utilizando una
4. El docente verifica que el alumno revise que cuenta base magnética con agitación. Se obtendrá una
con el 100% de los materiales solicitados suspensión pastosa amarillenta.
5. El docente verifica que el alumno tenga el área de 7.-Enfriar el vaso al chorro de agua, procurando que no
trabajo limpia y despejada. caigan gotas de agua sobre el residuo.
8.-Una vez enfriado el vaso, resuspender el residuo en 10
EJECUCIÓN DE LA PRÁCTICA ml de éter.
1. Lleva los tiempos y ayuda a los alumnos a llevar la 9.-Adicionar 30 ml de acetona agitando continuamente la
cronología. solución. El precipitado que se forma son las LECITINAS.
2. Provee Feedback descriptivo durante la práctica. 10.-Filtrar recogiendo el filtrado en un vaso limpio y seco.
3. Resuelve dudas durante la ejecución. El precipitado obtenido se pesa y se registra su peso en la
4. Promueve el buen Comportamiento del equipo tabla de resultados.
durante la ejecución de la práctica 11.-Evaporar el filtrado hasta obtener una pasta viscosa de
5. Verifica la Entrega de material limpio y completo. color café amarillento, utilizar para ello la parrilla eléctrica
6. Utiliza un Modelo de FACILITADOR NO con agitación constante.
INSTRUCCIONAL. 12.-Enfriar el vaso de precipitados al chorro de agua.
7. Llenado de bitácora electrónica: 13.-Añadir al residuo 30 ml de solución alcohólica de
https://goo.gl/forms/Ep16K5pZtsuutiRE3 hidróxido de potasio, y agitar para resuspenderlo
homogeneamente.
DEBRIEFING (10 MINUTOS) 14.-Calientar la solución durante 5 minutos, con agitación
1. Recapitula con los alumnos los hechos ocurridos. constante.
2. Promueve la reflexión, discusión y resolución de 15.-Enfriar, y añadir 50 ml de éter agitando continuamente.
dudas. Todo el material saponificado, sedimenta, es un JABON.
3. Verifica si se cumplió el propósito de aprendizaje. 16.-Filtrar a través de un embudo de filtración
acondicionado con papel filtro humedecido con alcohol.
Pese el jabón. El filtrado contiene el material no
saponificable, principalmente colesterol.
17.-Evaporar a sequedad el filtrado. Con una varilla de
vidrio raspar el residuo formado de manera que obtenga un
polvo fino, recuperar y pesar. Realizar las siguientes
pruebas cualitativas.

PRUEBA DE SALKOWSKI PARA COLESTEROL: En un


tubo de 18 x 150 disuelva una pequeña porción del
colesterol obtenido en 3 ml de cloroformo. En otro tubo
coloque 3 ml de cloroformo. Añadir a ambos tubos 3 ml de
ácido sulfúrico concentrado, agitar cuidadosamente, dejar
reposar 15 minutos. Observar la separación de dos capas,
la clorofórmica adquiere una coloración roja cereza en
caso de existir colesterol. la capa sulfúrica toma una
coloración amarilla con fluorescencia verde. La presencia
de humedad dificulta la reacción.

PRUEBA DE LIEBERMAN BURCHARD: Disolver una


pequeña porción de colesterol en 1 mL de cloroformo, en
un tubo de ensaye de 18 x 150. Transferir 1 ml de
cloroformo en otro tubo. Agregar a los dos tubos 2 ml de
anhídrido acético y 4 gotas de ácido sulfúrico concentrado.
Mezclar bien y dejar reposar 15 minutos. Si existe
colesterol aparecerá una coloración azul verdosa que pasa
a verde.

Aprendizaje Auto-dirigido (Independiente):

Antes de la práctica:
a) Lectura de la práctica.

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b) Investigar: estructura, propiedades y funciones biológicas de la lecitina, colesterol, ceras,


fosfolípidos.
c) Investigar: reacción de saponificación, lípidos saponificables, lípidos no saponificables.
d) Investigar la composición de lípidos de la yema de huevo reportada en la literatura.

Después de la práctica:
a) Registrar el rendimiento de las fracciones lipídicas obtenidas en la siguiente tabla:

MATERIAL PESO (gr) RENDIMIENTO (%)


Yemas de huevo
Lecitinas
Jabón
Colesterol

b) Compara el rendimiento obtenido en las diferentes fracciones con el reportado en la literatura.

Método de Evaluación

De la Práctica Del Aprendizaje Independiente

Investigación previa 20% Examen rápido sobre la investigación previa (40%)


Reporte de práctica 40% (véase anexo 1)

Referencias y Bibliografía Recomendada


Nelson DL, Cox MM. (2005) Lehninger Principles of Biochemistry. Fourth edition. WH Freeman.
Strong FM, Koch GH. (1981). Biochemistry Laboratory Manual. Third Edition. McGraw-Hill

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UVM México Escuela de Ciencias de la Salud

Práctica Número: 8 Duración (mins/horas): 1 sesión de 3 h

Nombre de la Asignatura Procesos metabólicos

Unidad de Contenido 5. Metabolismo de lípidos

Nombre de la Práctica DETERMINACIÓN DE COLESTEROL

Competencia asociada a Que el alumno sea capaz de:


la práctica. a) Conocer un método efectivo de extracción de lípidos con solventes orgánicos.
b) Desarrollar una curva de calibración que permita relacionar la cantidad de
sustrato (colesterol) con la Absorbancia.
c) Determinación de colesterol presente en la yema de huevo.

Materiales

De la Institución/Docente: Para el Alumno(s):

Material: Bitácora de trabajo


2 Huevo (Yema)
5 Tubos para espectrofotómetro Equipo de seguridad (Guantes desechables,
1 Tubo de parafilm cubrebocas, lentes de seguridad)

Investigación previa

2 Huevos (yema)

Equipo:
 Espectofotómetro

Sustancias:
5 Soluciones patrón de colesterol
Ácido sulfúrico concentrado
6 mL FeCl3

Actividades

Para el Docente/Facilitador: Para el Alumno(s):

1) Presentación e ingreso al laboratorio a) Desarrolle el siguiente protocolo:


- A partir de distintas soluciones patrón de
2) Organización del trabajo en equipo. colesterol de concentraciones conocidas realice las
diluciones indicadas en la siguiente tabla:
3) .Revisión rápida de los conceptos investigados.

4) Supervisión de ejecución adecuada del


procedimiento indicado en la práctica.

5) Revisión rápida de los resultados obtenidos.

6) Supervisión de mesas de trabajo limpias y bancos


ordenados.
b) Tape los tubos con tapa y parafilm.
c) Homogenice las soluciones por inversión suave.
d) Desarrolle el color durante 25 minutos a temperatura
ambiente.
e) Determine la Absorbancia de cada tubo, leyendo en
espectrofotómetro a 540 nm de longitud de onda (utilice el
tubo Nº 1 (blanco) para calibrar el equipo a cero.
f) Anote las lecturas en la siguiente tabla:

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g) Con los datos anteriores complete la siguiente tabla:

h) Realice un gráfico (curva de calibración) de


Absorbancia versus concentración de colesterol.

2. Extracción de colesterol con solventes orgánicos

a. Mase aproximadamente entre 0,1 – 0,15 g de


yema de huevo en un vaso precipitado de 100
mL.
b. Agregue 10 mL de una mezcla acetona/éter (1:1)
y agite con la varilla de vidrio por 10 minutos.
c. Trasvasije el contenido a un tubo de centrífuga y
centrifugue por 5 minutos a 3000 rpm.

3. Determinación de colesterol total

a. Prepare un tubo blanco adicionando 6 mL de


FeCl3 .
b. Rotule otros dos tubos de ensayo (1 y 2) y
adicione a cada uno de ellos 0,5 mL del
sobrenadante proveniente de la extracción de la
yema de huevo.
c. Evapore a sequedad en un baño de agua
termorregulado a 60º C.
d. Agregue 6 mL de solución de FeCl3 a cada tubo
(1 y 2) y caliente en baño de agua a ebullición por
5 minutos, incluya el tubo blanco.
e. Enfríe y agregue 2 mL de H2SO4 concentrado
por la pared de cada tubo.
f. Tapar los tubos con tapa y parafilm.
g. Homogenice las soluciones por inversión suave.
h. Desarrolle el color durante 25 minutos a
temperatura ambiente.

i. Determine la Absorbancia de cada tubo, leyendo


en espectrofotómetro a 540 nm de longitud de
onda, utilice el tubo blanco para calibrar el equipo
a cero.

Tubo N° 1 2
Absorbancia
540 (nm)

j. Con los datos anteriores, interpole los valores de


Absorbancia en la curva de calibración para
obtener la concentración de colesterol y complete
la siguiente tabla:

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k. A continuación desarrolle los siguientes cálculos:

K1. Sabiendo que el volumen de sobrenadante en total es


de aproximadamente 10 mL, determine los mg de
colesterol en el volumen total de muestra.
K2. Considerando la masa promedio de una yema de
huevo, determine los mg de colesterol por 100 mg de yema
de huevo.
K3. Determine el % de colesterol presente en el huevo,
tomando en cuenta una masa total promedio de huevo.

Aprendizaje Auto-dirigido (Independiente):

Antes de la práctica:
a) Investigar: : Propiedades y funciones de colesterol, triglicéridos y lipoproteínas
b) Investigar: Valores de referencia para los diferentes parámetros analizados.
c) Investigar: asociaciones de alteraciones en los niveles de lípidos plasmáticos y riesgos a la salud.
d) Investigar las vías por las cuales los mamíferos obteienen el colesterol
e) ¿Cuáles son y cuáles son sus diferencias de los dos tipos de lipoproteínas que contienen
colesterol?
f) ¿Por qué el valor definido clínicamente sobre los niveles de colesterol total deben ser
plasmáticos?
Después de la práctica:
a) Reportar los resultados de colesterol, triglicéridos y lipoproteínas e interpretar estos resultados en
función de estimación de riesgo.
Método de Evaluación

De la Práctica Del Aprendizaje Independiente

Investigación previa 20% Examen rápido sobre la investigación previa (40%)


Reporte de práctica 40% (véase anexo 1)

Referencias y Bibliografía Recomendada


Nelson DL, Cox MM. (2005) Lehninger Principles of Biochemistry. Fourth edition. WH Freeman.
Kaplan LA, Pesce AJ. (2002). Química clínica. Teoría, análisis y correlación. 3ª ed. Ed. Pesce Kaplan publicaciones.

https://profesoramaribelarnes.files.wordpress.com/2009/11/lab-5

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Práctica Número: 9 Duración (mins/horas): 1 sesión de 3 h

Nombre de la Asignatura Procesos metabólicos

Unidad de Contenido 4 Metabolismo de proteínas

Nombre de la Práctica DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD DE FOSFATASA ALCALINA.

Competencia asociada a El estudiante:


la práctica. a) Analiza las funciones biológicas de la fosfatasa alcalina.
b) Determina la actividad enzimática de la fosfatasa alcalina y el efecto de la
concentración de enzima sobre la velocidad de reacción
c) Establece asociaciones con las diferentes patologías que se presentan cuando la
actividad de la fosfatasa alcalina se encuentra alterada.

Materiales

De la Institución/Docente: Para el Alumno(s):

Material: Bitácora de trabajo


2 tubos de ensayo de 13x100
1 gradilla. Equipo de seguridad (Guantes desechables,
Pipetas de vidrio (5,0 ml). cubrebocas, lentes de seguridad)
Pipeta automática P-1000 (puntas).
Propipeta. Investigación previa
Rotulador para vidrio.
Solicitar material en tiempo y forma
16 tubos de ensayo de vidrio (1,5x 16 cm)
Cronómetro.
Tubos especiales para medir en el colorímetro (celdas)
4 pisetas con agua destilada, extrán, benzal, alcohol.

Equipo:
Baño termostatizado a 30ºC.
Colorímetro ajustado a 405 nm (celda par lectura).

Sustancias:
Tampón de ensayo (para ajustar a pH alcalino) pH 10.4
Solución sustrato (éster de fosfato artificial, el p-nitrofenilfosfato)
Enzima: fosfatasa alcalina de mucosa intestinal bovina, comercial (reactivo).

Actividades

Para el Docente/Facilitador: Para el Alumno(s):

BRIEFING INICIAL (20 MINUTOS) Efecto del tiempo de reacción en la aparición de producto.
1. Presentación e ingreso al laboratorio 1.- A 5 tubos de ensayo y se añaden los reactivos que se detallan en la Tabla 1.
2. Diagrama de bloques Se agitan suavemente e incuban en baño termostatizado a 30 ºC los tiempos
indicados.
3. Socialización del propósito de Aprendizaje y/o
examen rápido
Tabla 1: Efecto del tiempo de reacción en la aparición de producto
PREPARACIÓN INICIAL (15 MINUTOS) Tubo No 1 2 3 4 5
1. El docente solicita a los auxiliares de Tampon mL 2 1 1 1 1
laboratorio con 1 semana de anticipación sus
materiales Sustrato mL 1 1 1 1 1
2. El docente verifica que el alumno ingresó su Enzima mL …. 1 1 1 1
solicitud de materiales con los auxiliares de
Agitar suavemente e incubar a 30°C
laboratorio con mínimo 24 h de anticipación
3. El docente verifica que los auxiliares de Tiempo min 5 5 10 15 20
laboratorio entreguen el material a los alumnos
contra vale de solicitud y credencial del responsable
2.- A medida que se cumplen estos tiempos, se retira el tubo correspondiente del
del equipo, posterior al briefing
baño a 30 ºC y se le añade inmediatamente 1 ml de fosfato mezclando las
4. El docente verifica que el alumno revise que soluciones para detener la reacción.
cuenta con el 100% de los materiales solicitados
5. El docente verifica que el alumno tenga el 3.- A continuación, se mide la absorbancia a los distintos tubos a 405 nm
área de trabajo limpia y despejada usando el nº 1 como blanco.

Efecto de la concentración de enzima sobre la velocidad de reacción

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EJECUCIÓN DE LA PRÁCTICA 2.1. A una serie de 5 tubos de ensayo se les añade los distintos reactivos según
1. Lleva los tiempos y ayuda a los alumnos a se indica en la Tabla 2, obteniéndose así concentraciones crecientes de enzima
llevar la cronología. en los mismos. Tras agitar suavemente se incuban en baño termostatizado el
tiempo indicado:
2. Provee Feedback descriptivo durante la
práctica.
Tabla 2. Efecto de la concentración de enzima sobre la velocidad de la
3. Resuelve dudas durante la ejecución. reacción.
4. Promueve el buen Comportamiento del
equipo durante la ejecución de la práctica Tubo No 1 2 3 4 5
5. Verifica la Entrega de material limpio y Tampon mL 2.5 2.3 2.1 1.9 1.7
completo.
6. Utiliza un Modelo de FACILITADOR NO Sustrato mL 1 1 1 1 1
INSTRUCCIONAL. Enzima mL …. 0.2 0.4 0.6 0.8
7. Llenado de bitácora
electrónica:https://goo.gl/forms/Ep16K5pZtsuutiRE3 Agitar suavemente e incubar a 30°C 10 minutos

DEBRIEFING (10 MINUTOS)


1. Recapitula con los alumnos los hechos
ocurridos.
2. Promueve la reflexión, discusión y resolución
de dudas.
3. Verifica si se cumplió el propósito de
aprendizaje.

Aprendizaje Auto-dirigido (Independiente):

Antes de la práctica:
a) Lectura de la práctica.
b) Investigar: Función biológica de la fosfatasa alcalina.
c) Investigar: valores de referencia para la actividad enzimática de la fosfatasa alcalina.
d) Investigar: principales patologías que se presentan cuando existen alteraciones en la actividad de la
fosfatasa alcalina.
Después de la práctica:
a) Reportar los resultados de actividad de la fosfatasa alcalina, en este caso representaremos la aparición
de producto frente al tiempo (Figura 2), obteniendo la curva de progreso de la reacción.
b) El cálculo de la concentración de producto (p-nitrofenol) se basa en la ley de Lambert-Beer (Caso 1)
c) Aplicando esta ecuación a las absorbancias obtenidas para cada uno de los tubos, teniendo en cuenta
que I = 1 cm y ε = 18,5 mM-1 cm-1, se obtiene la concentración producto formado en cada uno de ellos
(caso 2)
Método de Evaluación

De la Práctica Del Aprendizaje Independiente

Investigación previa 20% Examen rápido sobre la investigación previa (40%)


Reporte de práctica 40% (véase anexo 1)

Referencias y Bibliografía Recomendada


Nelson DL, Cox MM. (2005) Lehninger Principles of Biochemistry. Fourth edition. WH Freeman.
Kaplan LA, Pesce AJ. (2002). Química clínica. Teoría, análisis y correlación. 3ª ed. Ed. Pesce Kaplan publicaciones.

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Práctica Número: 10 Duración (mins/horas): 1 sesión de 3 h

Nombre de la Asignatura Procesos metabólicos

Unidad de Contenido 4 Metabolismo de proteínas

Nombre de la Práctica ANÁLISIS CUANTITATIVO DE ENZIMAS

Competencia asociada a El estudiante:


la práctica. a) Determina la presencia de enzimas en productos de origen animal o vegetal
mediante reacciones químicas específicas.
b) Identifica la acción de la catalasa, peroxidasa y tirosidasa.

Materiales

De la Institución/Docente: Para el Alumno(s):

Material: Bitácora de trabajo


16 tubos de ensayo de 13x100
1 gradilla. Equipo de seguridad (Guantes desechables,
1 pinzas para tubo de ensayo. cubrebocas, lentes de seguridad)
1 agitador de vidrio.
2 pipetas serológicas de 5 ml. Investigación previa
2 pipetas serológica de 2 ml.
2 propipetas. MATERIAL POR EQUIPO:
1 espátula. Papa cruda .
1 mortero Trocitos de tomate.
1 embudo de vidrio Jugo de limón.
1 vaso de precipitado de 100 ml Zanahoria.
4 pisetas con agua destilada, extrán, benzal, alcohol. Rábano.
Jabón para manos. Carne cruda.
Papel filtro. Rallador.
Pipeta pasteur desechable.
Charola para pesar.
Cronómetro
Gasa

Equipo:
Agitador Vortex
Baño maría
Balanza digital

Sustancias:
70 ml Peróxido de Hidrógeno (agua oxigenada 3%, 0.5 y 2.0%).
1 ml Solución alcohólica de bencidina al 0.15%
5 ml Pirogalol al 1%
1 ml Tirosina al 1%
Agua destilada.
Hielo.

Actividades

Para el Docente/Facilitador: Para el Alumno(s):

BRIEFING INICIAL (20 MINUTOS) I. RECONOCIMIENTO DE LA CATALASA.


1. Presentación e ingreso al laboratorio 1) Pesar aproximadamente 1 g de cada uno de los
2. Diagrama de bloques tejidos a analizar.
3. Socialización del propósito de Aprendizaje y/o 2) Introducir los fragmentos de tejido en tubos de
examen rápido ensayo. Añadir a cada tubo 5 ml de H2O2.
3) Registrar las observaciones de mayor o menor
PREPARACIÓN INICIAL (15 MINUTOS) actividad en cada uno de los tejidos.
1. El docente solicita a los auxiliares de laboratorio 4) Identificar el tejido más reactivo.
con 1 semana de anticipación sus materiales 5) Realizar esquema de las observaciones.
2. El docente verifica que el alumno ingresó su
solicitud de materiales con los auxiliares de laboratorio II. DESNATURALIZACIÓN DE LA CATALASA.
con mínimo 24 h de anticipación 1) Pesar aproximadamente 1 g de cada uno de los

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3. El docente verifica que los auxiliares de laboratorio tejidos a analizar.


entreguen el material a los alumnos contra vale de 2) Introducir los fragmentos de tejido en tubos de
solicitud y credencial del responsable del equipo, ensayo.
posterior al briefing 3) Introducir los tubos con los tejidos en un baño de agua
4. El docente verifica que el alumno revise que cuenta hirviendo durante 10 minutos.
con el 100% de los materiales solicitados 4) Añadir a cada tubo 5 ml de H2O2.
5. El docente verifica que el alumno tenga el área de 5) Registrar las observaciones de mayor o menor
trabajo limpia y despejada. actividad en cada uno de los tejidos.
6) Comparar resultados con el experimento anterior,
EJECUCIÓN DE LA PRÁCTICA anotar observaciones.
1. Lleva los tiempos y ayuda a los alumnos a llevar la
cronología. III. DETERMINACIÓN DE LA PEROXIDASA.
2. Provee Feedback descriptivo durante la práctica. 1) PRUEBA DE LA BENCIDINA:
3. Resuelve dudas durante la ejecución. Pesar aproximadamente 2 g de rábano. Con ayuda
4. Promueve el buen Comportamiento del equipo de un mortero, triturar el tejido agregando 3 ml de
durante la ejecución de la práctica agua destilada. Filtrar a través de una gasa y agregar
5. Verifica la Entrega de material limpio y completo. 1 mi del extracto acuoso a un tubo de ensayo.
6. Utiliza un Modelo de FACILITADOR NO Añadir 5 gotas de la solución alcohólica de bencidina.
INSTRUCCIONAL. Agregar dos gotas de peróxido de hidrógeno al 0.5%
7. Llenado de bitácora electrónica: y agitar suavemente.
https://goo.gl/forms/Ep16K5pZtsuutiRE3 Anotar los resultados.
2) PRUEBA DEL PIROGALOL:
DEBRIEFING (10 MINUTOS) Con ayuda de un rallador, rallar una papa fresca.
1. Recapitula con los alumnos los hechos ocurridos. Tomar una pequeña cantidad de la papa rallada sin
2. Promueve la reflexión, discusión y resolución de
exprimir y colocarla en un tubo de ensayo.
dudas.
3. Verifica si se cumplió el propósito de aprendizaje. Añadir 1 ml. de pirogalol al 1% y 2 gotas de peróxido
de hidrógeno al 2%.
Observar la aparición de un precipitado.
Anotar los resultados.

IV. DETERMINACIÓN DE TIROSINASA.


1) Con ayuda de un rallador, rallar una papa fresca,
exprimirla a través de una gasa doble e
inmediatamente filtrar el extracto en un embudo.
2) Vaciar a un tubo de ensayo 1 ml del extracto y añadir
3 gotas de solución de tirosina.
3) Mezclar y colocar el tubo en un baño de agua a 40ºC.
4) Cada 2 min agitar el tubo para que el líquido tenga
mejor contacto con el oxígeno del aire.
5) Observar y anotar los cambios de coloración de la
mezcla reaccionante.
6) Limpieza y entrega de materiales.
7) Limpieza y orden del laboratorio.

Aprendizaje Auto-dirigido (Independiente):

Antes de la práctica:
a) Lectura de la práctica.
b) Investigar: Importancia de las enzimas en el metabolismo celular. Reacciones que catalizan las
enzimas analizadas.

c) Investigar: fundamento de las pruebas realizadas. Factores que alteran la actividad enzimática.

Después de la práctica:
a) Reportar la actividad enzimática de la catalasa en los diferentes tejidos analizados. Listar en orden
de mayor a menor actividad.
b) Interpretar y discutir los resultados en función de la eficiencia de reacción de acuerdo a las
condiciones de los ensayos.
Método de Evaluación

De la Práctica Del Aprendizaje Independiente

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Investigación previa 20% Examen rápido sobre la investigación previa (40%)


Reporte de práctica 40% (véase anexo 1)

Referencias y Bibliografía Recomendada


Nelson DL, Cox MM. Lehninger Principles of Biochemistry. Fourth edition. WH Freeman.
Manzoul, SM, Mohammed, H. (2010). Bioquímica. Editorial El Manual Moderno. México.

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Práctica Número: 11 Duración (mins/horas): 1 sesión de 3 h

Nombre de la Asignatura Procesos metabólicos

Unidad de Contenido 4 Metabolismo de proteínas

Nombre de la Práctica OBTENCIÓN DE CASEÍNA A PARTIR DE LECHE

Competencia asociada a El estudiante:


la práctica. a) Describe las características estructurales y funcionales de las proteínas.
b) Aísla la caseína de la leche mediante la técnica de precipitación
isoeléctrica.

Materiales

De la Institución/Docente: Para el Alumno(s):

Material: Bitácora de trabajo


2 tubos de ensayo de 18x150
1 gradilla. Equipo de seguridad (Guantes desechables,
1 pinzas para tubo de ensayo. cubrebocas, lentes de seguridad)
1 embudo de filtración rápida
1 matraz kitasato de 500 ml. Investigación previa
1 embudo de vidrio.
1 agitador de vidrio. Leche entera de vaca.(100 ml/equipo)
2 vasos de precipitados de 400 ml.
2 pipetas serológicas de 10 ml.
1 termómetro
1 mortero
1 probeta de 50 ml.
2 probetas de 25 ml.
2 propipetas.
1 barra magnética.
1 espátula.
4 pisetas con agua destilada, extrán, benzal, alcohol.
Jabón para manos.
Papel filtro.
Charola para pesar.

Equipo:
Parrilla con agitación
Potenciómetro
Bomba de vacío

Sustancias:

30 ml Ácido acético 2M
20 ml Etanol al 96º
20 ml Éter etílico
10 ml NaOH 0.1 %
2 ml Reactivo de Biuret.
Agua destilada.

Actividades

Para el Docente/Facilitador: Para el Alumno(s):

BRIEFING INICIAL (20 MINUTOS) 1.- En un vaso de precipitados de 400 ml colocar 50 ml de


1. Presentación e ingreso al laboratorio agua destilada, calentar hasta alcanzar una temperatura
2. Diagrama de bloques de 38 ºC.
3. Socialización del propósito de Aprendizaje y/o 2.- Adicionar 100 ml de leche y colocar cuidadosamente
examen rápido una barra magnética.
3.- Colocar el vaso en una base magnética. Introducir el
PREPARACIÓN INICIAL (15 MINUTOS) electrodo de un potenciómetro en la solución y encender
1. El docente solicita a los auxiliares de laboratorio cuidadosamente la agitación. Determinar el pH inicial y
con 1 semana de anticipación sus materiales mantener el electrodo en modo de lectura dentro de la
solución.
4.- Con ayuda de una pipeta, agregar gota a gota Ácido

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2. El docente verifica que el alumno ingresó su acético 2 M, hasta que el pH de la solución sea de 4.8,
solicitud de materiales con los auxiliares de laboratorio donde ocurrirá la precipitación de la caseína.
con mínimo 24 h de anticipación 5.- Una vez obtenido el precipitado se detiene la
3. El docente verifica que los auxiliares de laboratorio agitación, se retira el electrodo y se deja reposar la
entreguen el material a los alumnos contra vale de solución durante 10 minutos.
solicitud y credencial del responsable del equipo, 6.-Eliminar por decantación la mayor parte del
posterior al briefing sobrenadante. Filtrar la porción restante a través de un
4. El docente verifica que el alumno revise que cuenta embudo de vidrio cubierto con papel filtro, recogiendo el
con el 100% de los materiales solicitados filtrado en un vaso de precipitados para su posterior
5. El docente verifica que el alumno tenga el área de eliminación.
trabajo limpia y despejada 7 – Lavar el residuo que quedó en el embudo con 20 ml.
de etanol, agitando con una varilla de vidrio, teniendo
cuidado de no romper el papel.
EJECUCIÓN DE LA PRÁCTICA 8.-Colocar el cono de papel que contiene el residuo entre
1. Lleva los tiempos y ayuda a los alumnos a llevar la varias hojas de papel secante, presionar para eliminar los
cronología. restos de etanol.
2. Provee Feedback descriptivo durante la práctica. 9.- Colocar el precipitado seco en un vaso de precipitados
3. Resuelve dudas durante la ejecución. y agregar 20 ml de éter etílico, agitar bien la suspensión
4. Promueve el buen Comportamiento del equipo para deslipidizar la proteína.
durante la ejecución de la práctica 10.- Filtrar nuevamente la suspensión a través de un
5. Verifica la Entrega de material limpio y completo. embudo de filtración rápida cubierto con papel filtro. El
6. Utiliza un Modelo de FACILITADOR NO filtrado se descarta. El residuo de color blanco es la
INSTRUCCIONAL. CASEÍNA.
7. Llenado de bitácora electrónica: 11.- Transferir la caseína a un mortero y pulverizarla.
https://goo.gl/forms/Ep16K5pZtsuutiRE3 Pesar y guardar en una bolsa de papel celofán.
12.- Colocar una pequeña porción de la caseína obtenida
DEBRIEFING (10 MINUTOS) en un tubo de ensaye de 18x150. Disolverla en 5 ml de
1. Recapitula con los alumnos los hechos ocurridos. NaOH al 0.1 % y realizar la prueba de Biuret.
2. Promueve la reflexión, discusión y resolución de PRUEBA DE BIURET: Agregar 1 ml del Reactivo de
dudas. Biuret a la solución proteica, agitar y observar el color
3. Verifica si se cumplió el propósito de aprendizaje. desarrollado. Correr un control positivo usando albúmina
de huevo.
13.- Limpieza y entrega de materiales.
14.- Limpieza y orden del laboratorio.

Aprendizaje Auto-dirigido (Independiente):

Antes de la práctica:
a) Lectura de la práctica.
b) Investigar: composición de la leche. Punto isoeléctrico. Precipitación isoeléctrica-
c) Investigar: fundamento de la prueba de BIURET.

Después de la práctica:
a) Reportar el peso en gramos de la caseína obtenida. % de caseína en gramos/100 ml. de leche.
b) Mostrar los resultados de la prueba de Biuret para la caseína y el control positivo.
Método de Evaluación

De la Práctica Del Aprendizaje Independiente

Investigación previa 20% Examen rápido sobre la investigación previa (40%)


Reporte de práctica 40% (véase anexo 1)

Referencias y Bibliografía Recomendada


Nelson DL, Cox MM. (2005) Lehninger Principles of Biochemistry. Fourth edition. WH Freeman.
Strong FM, Koch GH. (1981). Biochemistry Laboratory Manual. Third Edition. McGraw-Hill

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UVM México Escuela de Ciencias de la Salud

Práctica Número: 12 Duración (mins/horas): 1 sesión de 3 h

Nombre de la Asignatura Procesos metabólicos

Unidad de Contenido 4 Metabolismo de proteínas

Nombre de la Práctica REACCIONES DE IDENTIFICACIÓN DE AMINOÁCIDOS Y PROTEÍNAS

Competencia asociada a El estudiante:


la práctica. Identifica químicamente la presencia de algunos aminoácidos y determinar su
presencia en las proteínas utilizadas.

Materiales

De la Institución/Docente: Para el Alumno(s):

Material: Bitácora de trabajo


20 tubos de ensayo de 18x150
2 gradillas. Equipo de seguridad (Guantes desechables,
1 pinzas para tubo de ensayo. cubrebocas, lentes de seguridad)
1 mechero
2 matraces erlenmeyer de 25 ml. Investigación previa
2 matraces volumétricos de 25 ml.
3 vasos de precipitados de 50 ml.
2 pipetas serológicas de 10 ml.
6 pipetas serológicas de 5 ml.
2 propipetas.
1 espátula.
4 pisetas con agua destilada, extrán, benzal, alcohol.
Jabón para manos.
Papel indicador.
Pipetas pasteur desechables.
Charola para pesar.

Equipo:
Centrífuga
Agitador Vortex
Baño maría
Balanza digital

Sustancias:
Soluciones de aminoácidos al 0.1%. (3 de diferentes
características: polar, apolar, con carga (+), con carga (-),
aromáticos, alifáticos).
Soluciones de proteína al 0.1%. (2 diferentes, por ejemplo
albúmina y caseína).
5 ml HNO3 concentrado
5 ml NaOH 10 M
2 ml HgCl2 0.2 M
5 ml H2SO4 concentrado
2 ml PbOAc 0.2 M
3 ml Ninhidrina 0.1% (en n-butanol)
5 ml Reactivo de Biuret
10 ml Reactivo de Hopkins-cole
2 ml Reactivo de Millon

Agua destilada.
Hielo.

Actividades

Para el Docente/Facilitador: Para el Alumno(s):

Copyright © UVM México, 2015. Todos los Derechos Reservados. 33


UVM México Escuela de Ciencias de la Salud

BRIEFING INICIAL (20 MINUTOS) 1. PRUEBA DE MILLON.


1. Presentación e ingreso al laboratorio En una serie de tubos transferir 2 ml de las soluciones de
2. Diagrama de bloques aminoácidos preparadas. Añadir 5 gotas del reactive de
3. Socialización del propósito de Aprendizaje y/o Millon, mezclar y calendar cuidadosamente la mezcla
examen rápido durante 10 minutos en un baño de agua hirviendo. Anotar
observaciones.
PREPARACIÓN INICIAL (15 MINUTOS)
1. El docente solicita a los auxiliares de laboratorio 2. REACCIÓN XANTOPROTEICA.
con 1 semana de anticipación sus materiales En una serie de tubos transferir 1 ml de las soluciones de
2. El docente verifica que el alumno ingresó su
aminoácidos preparadas. Añadir cuidadosamente 1 ml. de
solicitud de materiales con los auxiliares de laboratorio
con mínimo 24 h de anticipación ácido nítrico concentrado, mezclar bien y calentar
3. El docente verifica que los auxiliares de laboratorio ligeramente a la llama del mechero. Enfriar y observar el
entreguen el material a los alumnos contra vale de color desarrollado. Los tubos pueden ser enfriados al
solicitud y credencial del responsable del equipo, chorro del agua.
posterior al briefing Posteriormente adicionar gota a gota y con agitación
4. El docente verifica que el alumno revise que cuenta NaOH 10 M (ó NH4OH concentrado) hasta que la mezcla
con el 100% de los materiales solicitados
sea fuertemente alcalina. Observar el cambio de color.
5. El docente verifica que el alumno tenga el área de
trabajo limpia y despejada
3. PRUEBA DE BIURET.
EJECUCIÓN DE LA PRÁCTICA
1. Lleva los tiempos y ayuda a los alumnos a llevar la En una serie de tubos transferir 1 ml de las soluciones de
cronología. aminoácidos preparadas. Agregar 2 ml. del Reactivo de
2. Provee Feedback descriptivo durante la práctica. Biuret y mezclar. Observar el color desarrollado.
3. Resuelve dudas durante la ejecución.
4. Promueve el buen Comportamiento del equipo 4. REACCIÓN DE HOPKINS-COLE.
durante la ejecución de la práctica
5. Verifica la Entrega de material limpio y completo. En una serie de tubos transferir 2 ml de las soluciones de
6. Utiliza un Modelo de FACILITADOR NO aminoácidos preparadas. Agregar 2 ml. de reactivo de
INSTRUCCIONAL. Hopkins-cole y mezclar. Agregar lentamente por las
7. Llenado de bitácora electrónica: paredes del tubo 1 ml. de H2SO4 concentrado, de manera
https://goo.gl/forms/Ep16K5pZtsuutiRE3 que llegue al fondo y se estratifique. NO MEZCLAR. Dejar
reposar.
DEBRIEFING (10 MINUTOS) Observar el color producido entre la zona de contacto de
1. Recapitula con los alumnos los hechos ocurridos. las dos fases, y solo en caso necesario agitar muy
2. Promueve la reflexión, discusión y resolución de suavemente el tubo para conseguir que se produzca la
dudas. reacción generadora de color.
3. Verifica si se cumplió el propósito de aprendizaje.
5. PRECIPITACIÓN CON SALES METÁLICAS.

1. En una serie de tubos transferir 3 ml de las soluciones


de proteínas preparadas. Alcalinizar con NaOH diluído
hasta un pH entre 7 y 8.
2. Agregar 5 gotas de Acetato de Plomo 0.2 M. Describir
los resultados obtenidos.
3. Repetir el paso 1 en otra serie de tubos.
4. Agregar 5 gotas de Cloruro mercúrico y anotar las
observaciones.

6. PRUEBA DE LA NINHIDRINA.

En una serie de tubos transferir 2 ml de las soluciones de


aminoácidos preparadas. Agregar 0.5 ml. de Ninhidrina al
0.1%, mezclar y calentar a ebullición directamente a la
flama del mechero. Anotar el color desarrollado.

Limpieza y entrega de materiales.

Limpieza y orden del laboratorio.

Aprendizaje Auto-dirigido (Independiente):

Antes de la práctica:
a) Lectura de la práctica.
b) Investigar: Características y propiedades de aminoácidos.

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UVM México Escuela de Ciencias de la Salud

c) Investigar: fundamento de las pruebas de Biuret, de Hopkins-cole, de Millon, de ninhidrina, de la


reacción xantoproteica y la precipitación con sales metálicas.

Después de la práctica:
a) Reportar en una tabla los resultados de cada una de las pruebas para los aminoácidos probados.
Método de Evaluación

De la Práctica Del Aprendizaje Independiente

Investigación previa 20% Examen rápido sobre la investigación previa (40%)


Reporte de práctica 40% (véase anexo 1)

Referencias y Bibliografía Recomendada


Nelson DL, Cox MM. Lehninger Principles of Biochemistry. Fourth edition. WH Freeman.
Strong FM, Koch GH. (1981). Biochemistry Laboratory Manual. Third Edition. McGraw-Hill

Copyright © UVM México, 2015. Todos los Derechos Reservados. 35


UVM México Escuela de Ciencias de la Salud

Práctica Número: 13 Duración (mins/horas): 1 sesión de 3 h

Nombre de la Asignatura Procesos metabólicos

Unidad de Contenido 4 Metabolismo de proteínas

Nombre de la Práctica CROMATOGRAFÍA DE AMINOÁCIDOS.

Competencia asociada a El estudiante:


la práctica. a) Analiza las características estructurales y funcionales de los aminoácidos.
a) Aplica los fundamentos de la cromatografía en capa fina como una herramienta
para la separación e identificación de aminoácidos.

Materiales

De la Institución/Docente: Para el Alumno(s):

Material: Bitácora de trabajo


1 placa cromatográfica de sílica gel en soporte de aluminio. (10x10
cm). Equipo de seguridad (Guantes desechables,
1 cámara de elusión. cubrebocas, lentes de seguridad)
1 micropipeta de 1000 μl
1 micropipeta de 50 μl Investigación previa
Puntas para micropipeta de 1000 y 50 μl.
1 matraz volumétrico de 50 ml. Regla, tijeras, lapis.
4 tubos eppendorf.
1 vasos de precipitados de 50 ml. Un trozo de papel aluminio, un frasco con
1 probeta de 500 ml. atomizador.
2 probetas de 50 ml.
1 espátula.
1 charola para pesar.
4 pisetas con agua destilada, extrán, benzal, alcohol.
Jabón para manos.

Equipo:
Parrilla de calentamiento.
Agitador Vortex

Sustancias:

1 ml Soluciones de aminoácidos al 1% en H2O


(Alanina, Aspartato e Histidina)
300 ml Butanol:Ácido acético:Agua (8:2:2)
5 ml Ninhidrina al 0.3%.
Agua destilada.

Actividades

Para el Docente/Facilitador: Para el Alumno(s):

BRIEFING INICIAL (20 MINUTOS) 1) Colocar la placa cromatográfica sobre una parrilla de
1. Presentación e ingreso al laboratorio
calentamiento durante 15 minutos.
2. Diagrama de bloques
3. Socialización del propósito de Aprendizaje y/o 2) Trazar una línea horizontal a 1.5 cm. de la base de
examen rápido
la placa con regla y lápiz. Distribuír 4 marcas (M1,
PREPARACIÓN INICIAL (15 MINUTOS) M2, M3 y X) sobre la línea con una separación de 2
1. El docente solicita a los auxiliares de laboratorio
cm. INDISPENSABLE USAR GUANTES. (Fig. 2).
con 1 semana de anticipación sus materiales
2. El docente verifica que el alumno ingresó su 3) Con una micropipeta aplicar 1 gota de cada una de
solicitud de materiales con los auxiliares de laboratorio
las soluciones de aminoácidos y la muestra
con mínimo 24 h de anticipación
3. El docente verifica que los auxiliares de laboratorio problema. Dejar secar completamente.
entreguen el material a los alumnos contra vale de

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solicitud y credencial del responsable del equipo, 4) Colocar la placa en forma vertical en la cámara
posterior al briefing
cromatográfica conteniendo el disolvente y cubrirla
4. El docente verifica que el alumno revise que cuenta
con el 100% de los materiales solicitados con papel aluminio.
5. El docente verifica que el alumno tenga el área de
5) Dejar que el disolvente fluya libremente hasta un cm
trabajo limpia y despejada.
antes de llegar al borde superior.
EJECUCIÓN DE LA PRÁCTICA
6) Sacar la placa y marcar con un lápiz la línea donde
1. Lleva los tiempos y ayuda a los alumnos a llevar la
cronología. llegó el disolvente, la distancia entre esta línea y el
2. Provee Feedback descriptivo durante la práctica.
borde inferior se llama FRENTE DE DISOLVENTE.
3. Resuelve dudas durante la ejecución.
4. Promueve el buen Comportamiento del equipo 7) Secar la placa al aire y rociarla con ninhidrina con un
durante la ejecución de la práctica
aspersor ó atomizador.
5. Verifica la Entrega de material limpio y completo.
6. Utiliza un Modelo de FACILITADOR NO 8) Colocar la placa en una parrilla de calentamiento
INSTRUCCIONAL.
hasta que aparezcan las manchas correspondientes.
7. Llenado de bitácora electrónica:
https://goo.gl/forms/Ep16K5pZtsuutiRE3 9) Con un lápiz delinear las manchas reveladas por la
ninhidrina.
DEBRIEFING (10 MINUTOS)
1. Recapitula con los alumnos los hechos ocurridos. 10) Medir la distancia del centro de la mancha al punto
2. Promueve la reflexión, discusión y resolución de
de aplicación. Esta distancia es el FRENTE DE
dudas.
3. Verifica si se cumplió el propósito de aprendizaje. SOLUTO.
11) Calcular el Rf para cada mancha e intentar identificar
la identidad de la muestra problema.

Aprendizaje Auto-dirigido (Independiente):

Antes de la práctica:
a) Lectura de la práctica.
b) Investigar: tipos de cromatografía, cálculo de Rf
c) Investigar la clasificación de aminoácidos, reacción entre aminoácidos y ninhidrina, aminoácidos
cuya ausencia o disminución se asocie con alguna patología.

Después de la práctica:
a) Calcular el Rf de las diferentes muestras utilizadas.

b) En base a la comparación de los patrones de separación identificar la muestra problema (X)


proporcionada por el profesor.

Método de Evaluación

De la Práctica Del Aprendizaje Independiente

Investigación previa 20% Examen rápido sobre la investigación previa (40%)


Reporte de práctica 40% (véase anexo 1)

Referencias y Bibliografía Recomendada


Feduchi E, Blasco I, Romero CS, Yáñez E. (2011) Bioquímica. Conceptos esenciales. Primera edición. Editorial
Médica Panamericana. Madrid.
Manzoul, SM, Mohammed, H. (2010). Bioquímica. Editorial El Manual Moderno. México.

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Práctica Número: 14 Duración (mins/horas): 1 sesión de 3 h

Nombre de la Asignatura Procesos metabólicos

Unidad de Contenido 8. Metabolismo de nucleótidos y de otras sustancias nitrogenadas

Nombre de la Práctica EXTRACCIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS A PARTIR DE LEVADURA

Competencia asociada a El estudiante:


la práctica. a) Analiza las características estructurales y funcionales de los Ácidos nucleicos.
b) Aísla, fraccionar e identificar mediante pruebas colorimétricas el azúcar y el
grupo fosfato contenidos en la molécula de acidos nucleicos.

Materiales

De la Institución/Docente: Para el Alumno(s):

Material: Bitácora de trabajo


5 tubos de ensayo de 18x150
1 gradilla. Equipo de seguridad (Guantes desechables,
1 pinzas para tubo de ensayo. cubrebocas, lentes de seguridad)
1 mechero
1 embudo Buchner. Investigación previa
1 matraz kitasato de 500 ml.
1 matraz kitasato de 250 ml. Levadura de panadería.(20 gr/equipo)
1 agitador de vidrio.
3 vasos de precipitados de 250 ml.
1 vasos de precipitados de 50 ml.
2 pipetas serológicas de 10 ml.
2 pipetas serológicas de 5 ml.
1 pipeta serológica de 1 ml.
1 probeta de 100 ml.
2 probetas de 50 ml.
2 propipetas.
1 barra magnética.
1 espátula.
4 pisetas con agua destilada, extrán, benzal, alcohol.
Jabón para manos.
Papel filtro.
Papel indicador.
Pipeta pasteur desechable.
Gasa
Charola para pesar.

Equipo:
Parrilla con agitación
Bomba de vacío
Agitador Vortex
Baño maría

Sustancias:

30 ml NaOH al 30%
10 ml FeCl3 al 10%
8 ml Cloroformo
50 ml Etanol al 95%
5 ml HCl concentrado.
5 ml NaOH 1 N
5 ml HCl 0.1 N
3 ml Reactivo de Bial (Orcinol al 0.3% en HCl)
2 ml H2SO4 3 N
5 ml H2SO4 10 N
1 ml (NH4)6Mo7O24.4H2O al 2.5% (con 30% de H2SO4 10 N, aforar
con agua)

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0.1 ml SnCl2.2H2O al 2.5% (en glicerol)


1 ml KH2PO4 0.1 M
1 ml Glicerol.
Agua destilada.
Hielo.

Actividades

Para el Docente/Facilitador: Para el Alumno(s):

BRIEFING INICIAL (20 MINUTOS) I.- EXTRACCIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS


1. Presentación e ingreso al laboratorio 1.- Colocar 20 gramos de levadura de panadería en un
2. Diagrama de bloques vaso de precipitados de 250 ml, agregar 30 ml de NaOH
3. Socialización del propósito de Aprendizaje y/o al 30%. Agitar con una varilla de vidrio durante 20 minutos
examen rápido hasta formar una suspensión.
2.- Adicionar 20 ml de agua destilada y mezclar. Añadir
PREPARACIÓN INICIAL (15 MINUTOS) 10 ml de FeCl3 al 10% y mezclar nuevamente.
1. El docente solicita a los auxiliares de laboratorio 3.- Filtrar la suspensión a través de un embudo de
con 1 semana de anticipación sus materiales filtración implementado con una capa de gasa. Exprimir la
2. El docente verifica que el alumno ingresó su pasta usando guantes. Recoger el filtrado en un vaso de
solicitud de materiales con los auxiliares de laboratorio precipitados de 250 ml.
con mínimo 24 h de anticipación 4.- Lavar la pasta adicionando 15 m de agua destilada
3. El docente verifica que los auxiliares de laboratorio recuperando el lavado en el vaso de precipitados donde
entreguen el material a los alumnos contra vale de recuperó el filtrado anterior.
solicitud y credencial del responsable del equipo, 5.- Si la mezcla de los dos filtrados está turbia filtre
posterior al briefing nuevamente utilizando papel filtro.
4. El docente verifica que el alumno revise que cuenta 6.-El residuo de la gasa se elimina.
con el 100% de los materiales solicitados 7 – A la mezcla de filtrados de les adiciona 50 ml de
5. El docente verifica que el alumno tenga el área de etanol al 95% con agitación constante.
trabajo limpia y despejada 8.-Añadir con agitación HCl concentrado hasta acidificar
la solución, utilice papel indicador para verificar el pH.
Con esto se precipitan los ácidos nucleicos.
EJECUCIÓN DE LA PRÁCTICA 9.- Filtrar la suspensión obtenida a través de papel filtro,
1. Lleva los tiempos y ayuda a los alumnos a llevar la lavar el residuo con agua destilada recuperando ambos
cronología. filtrados en un vaso, este filtrado se desecha.
2. Provee Feedback descriptivo durante la práctica. 10.- El residuo retenido en el papel filtro son los ACIDOS
3. Resuelve dudas durante la ejecución. NUCLEICOS, serán utilizados para realizar los siguientes
4. Promueve el buen Comportamiento del equipo ensayos:
durante la ejecución de la práctica
5. Verifica la Entrega de material limpio y completo. II.- HIDRÓLISIS DE LOS ÁCIDOS NUCLEICOS
6. Utiliza un Modelo de FACILITADOR NO 1.-Disolver una pequeña porción del ácido nucleico
INSTRUCCIONAL. obtenido en 5 ml de NaOH 1N. Calentar en baño de agua
7. Llenado de bitácora electrónica: hirviendo durante 15 minutos. Dejar enfriar.
https://goo.gl/forms/Ep16K5pZtsuutiRE3 2.-Acidificar la solución hasta un pH 3.5 con HC1 0.1N
manteniendo de tubo de ensayo en un baño de hielo. Con
DEBRIEFING (10 MINUTOS) este hidrolizado se lleva a cabo la PRUEBA DE BIAL:
1. Recapitula con los alumnos los hechos ocurridos. a) En un tubo de ensaye de 18 x 150 se colocan 3 ml
2. Promueve la reflexión, discusión y resolución de del Reactivo de Bial, añadir 1 ml del hidrolizado
dudas. anterior. Calentar al mechero con agitación, hasta que
3. Verifica si se cumplió el propósito de aprendizaje. las primeras burbujas alcancen la superficie.
Observar el color desarrollado por la solución.

III.-IDENTIFICACIÓN DE FOSFATOS
1.-En un tubo de ensaye de 18 x 150 colocar una porción
del ácido nucleico obtenido. Añadir 2 ml de H2SO4 3N.
Hervir lentamente durante 5 min para hidrolizar los ácidos
nucleicos. Enfriar.
2.-Transferir 1 ml del hidrolizado a un tubo de 18 x 150.
Añadir 0.5 ml de H2S04 10N, 1 ml de solución de
molibdato de amonio al 2.5% y 5 gotas de cloruro
estannoso. Dejar reposar durante 10 minutos. Observar el
color desarrollado.
Correr como controles una solución de KH2PO4 0.1M y
agua destilada en lugar de muestra.
3.- Limpieza y entrega de materiales.
4.- Limpieza y orden del laboratorio.

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Aprendizaje Auto-dirigido (Independiente):

Antes de la práctica:
a) Lectura de la práctica.
b) Investigar: : composición de ácidos nucleicos, diferentes métodos de extracción de ácidos
nucleicos,
c) Investigar: fundamento de la prueba de Bial y el método del cloruro estannoso.

Después de la práctica:
Reportar la eficiencia de la extracción mediante los resultados de identificación de azúcares y
fosfatos.
Método de Evaluación

De la Práctica Del Aprendizaje Independiente

Investigación previa 20% Examen rápido sobre la investigación previa (40%)


Reporte de práctica 40% (véase anexo 1)

Referencias y Bibliografía Recomendada


Nelson DL, Cox MM. (2005) Lehninger Principles of Biochemistry. Fourth edition. WH Freeman.
Manzoul, SM, Mohammed, H. (2010). Bioquímica. Editorial El Manual Moderno. México.

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Práctica Número: 15 Duración (mins/horas): 1 sesión de 3 h

Nombre de la Asignatura Procesos metabólicos

Unidad de Contenido 9 Adaptaciones metabólicas

Nombre de la Práctica DETERMINACIÓN DE CALCIO EN LECHE

Competencia asociada a El estudiante:


la práctica. a) Analiza las funciones biológicas del calcio.
a) Cuantifica los niveles de calcio a partir de leche de vaca

Materiales

De la Institución/Docente: Para el Alumno(s):

Material: Bitácora de trabajo


3 tubos de ensayo de 13x100
1 gradilla Equipo de seguridad (Guantes desechables,
1 pinzas para tubo de ensayo. cubrebocas, lentes de seguridad)
4 matraces volumétricos de 10 ml.
2 matraces volumétricos de 25 ml. Investigación previa
2 vasos de precipitados de 50 ml.
2 vasos de precipitados de 25 ml. Traer suero de leche o leche para la extracción
1 probeta de 25 ml. del suero.
1 propipeta.
1 agitador de vidrio.
1 pipeta de 5 ml
1 pipeta de 10 ml
4 pipetas Pasteur
4 pisetas con agua destilada, extrán, benzal, alcohol.
Jabón para manos.
Papel filtro.
Papel aluminio
Espátula.

Equipo:
Balanza digital.
Baño maría.
Centrífuga

Sustancias:
2 ml suero de leche
2 ml Oxalato de amonio al 10%.
2 ml H2SO4 concentrado.
2 ml Solución stock de KMnO4 10%
2 ml Solución de trabajo de KMnO4 1 N
Agua destilada.

Actividades

Para el Docente/Facilitador: Para el Alumno(s):

BRIEFING INICIAL (20 MINUTOS) DETERMINACIÓN DE CALCIO (mediante el método Clark


1. Presentación e ingreso al laboratorio Collip)
2. Diagrama de bloques
3. Socialización del propósito de Aprendizaje y/o En el caso de la determinación de calcio en leche, en primer
examen rápido lugar, debemos de separar el calcio presente del resto de
componentes de la muestra. Para ello se trata una muestra
PREPARACIÓN INICIAL (15 MINUTOS) de la misma con ácido tricloroacético y se agita la disolución.
1. El docente solicita a los auxiliares de laboratorio Se observa la aparición de 2 fases, una fase líquida, el suero,
con 1 semana de anticipación sus materiales que contiene el calcio, y otra fase, con aspecto de sólido

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2. El docente verifica que el alumno ingresó su pastoso, que contiene el resto de los constituyentes de la
solicitud de materiales con los auxiliares de laboratorio leche (básicamente proteínas y grasas).
con mínimo 24 h de anticipación
3. El docente verifica que los auxiliares de Se separan ambas fases empleando un embudo de vidrio y
laboratorio entreguen el material a los alumnos contra filtro de pliegues. El precipitado obtenido se lava con agua
vale de solicitud y credencial del responsable del destilada, recogiéndose las aguas de lavado junto con el
equipo, posterior al briefing filtrado, que contendrá el calcio originalmente presente
4. El docente verifica que el alumno revise que
cuenta con el 100% de los materiales solicitados Procedimiento:
5. El docente verifica que el alumno tenga el área
de trabajo limpia y despejada. 1.- Colocar en un tubo de ensayo 2 ml de suero de leche
2.- Agregar 3 ml de Oxalato de amonio al 10%
EJECUCIÓN DE LA PRÁCTICA 3.- Agitar y mezclar
1. Lleva los tiempos y ayuda a los alumnos a llevar 4.- Recoger el precipitado con un papel filtro y colocarlo en
la cronología. un vaso de precipitado
2. Provee Feedback descriptivo durante la práctica. 5.- Una vez obtenido un precipitado, agregar 2 gotas de
3. Resuelve dudas durante la ejecución. H2SO4 concentrado.
4. Promueve el buen Comportamiento del equipo 6. Agitar lentamente con movimientos circulares
durante la ejecución de la práctica 7.- Agregar una gota de KMnO4 para obtener un color rosado
5. Verifica la Entrega de material limpio y completo. (se pueden agregar hasta 15 gotas para cambio de color
6. Utiliza un Modelo de FACILITADOR NO rosado)
INSTRUCCIONAL. 8.- El resultado es el mismo en la solución blanca con 2ml de
7. Llenado de bitácora suero y 2 gotas de ácido sulfúrico agregando KMnO4
electrónica:https://goo.gl/forms/Ep16K5pZtsuutiRE3 (1gota).7mg de ca/100 ml leche al gastar 15 gotas de KMnO4
de la muestra problema equivalente a 0.75 ml y 1 gota de
DEBRIEFING (10 MINUTOS) KMnO4 en la muestra blanca equivalente a 0.05 ml.
1. Recapitula con los alumnos los hechos ocurridos. 9.- Realizar por duplicado con Solución de trabajo de
2. Promueve la reflexión, discusión y resolución de KMnO4 1 N y al 10%
dudas. 10.- Limpieza y orden del laboratorio
3. Verifica si se cumplió el propósito de aprendizaje.

Aprendizaje Auto-dirigido (Independiente):

Antes de la práctica:
a) Lectura de la práctica.
b) Investigar: niveles normales de calcio en suero y en orina, procedimiento para la prueba de calcio
en orina, función del retículo endoplásmico en el almacenamiento del calcio, papel del calcio en la
función muscular, enfermedades relacionadas al calcio (por lo menos una).
c) Determinar cuál es la ingesta recomendada de calcio diariamente
d) Para que se utiliza el ácido tricloroacetico

Después de la práctica:
a) Calcular cuánto fue el valor de calcio obtenido por cada 1 ml y cada 100 ml de muestra.
b) Comparar los valores obtenidos con los valores de referencia reportados en la literatura.
c) Descrbir como ocurren las reacciones en cada paso del procedimiento
Método de Evaluación

De la Práctica Del Aprendizaje Independiente

Investigación previa 20% Examen rápido sobre la investigación previa (40%)


Reporte de práctica 40% (véase anexo 1)

Referencias y Bibliografía Recomendada


Nelson DL, Cox MM. Lehninger Principles of Biochemistry. Fourth edition. WH Freeman.
Clark EP y Collip JB. A study of the Tisdall method for the determination of blood serum calcium with a suggested
modification. J Biol Chem. 1925, 63:461-464.

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Práctica Número: 16 Duración (mins/horas): 1 sesión de 3 h

Nombre de la Asignatura Procesos metabólicos

Unidad de Contenido 9 Adaptaciones metabólicas

Nombre de la Práctica INTEGRACIÓN METABÓLICA

Competencia asociada a El estudiante:


la práctica. a) Integra las vías metabólicas de los carbohidratos, lípidos y proteínas en un
paciente sano.
b) Correlaciona el papel de las hormonas en la regulación de las vías.
c) Analiza los resultados de pruebas clínicas en un sujeto normal.
d) Relaciona las vías que se encuentran alteradas en un paciente diabético.

Materiales

De la Institución/Docente: Para el Alumno(s):

Material: Bitácora de trabajo

DETERMINACIÓN DE GLUCOSA: Equipo de seguridad (Guantes desechables,


1 caja de Tiras reactivas One Touch® Ultra®. cubrebocas, lentes de seguridad)
1 caja de Lancetas estériles One Touch® Ultra®.
1 recipiente para material punzocortante. Investigación previa
1 recipiente para material biológico infeccioso.
4 pisetas con agua destilada, extrán, benzal, alcohol. Dos voluntarios sanos en ayuno de 4 horas
Torudas de algodón con alcohol. por lo menos.
Jabón para manos. Una dieta rica en carbohidratos y una dieta
rica en proteínas.
DETERMINACIÓN DE COLESTEROL Y TRIGLICÉRIDOS:
1 caja de tiras reactivas para determinación de colesterol.
1 caja de tiras reactivas para determinación de triglicéridos.
1 caja de lancetas estériles.

DETERMINACIÓN DE UREA
2 micropipetas (10 y 1000 μl).
Puntas para micropipetas.
Celdas para espectrofotómetro.
1 pipeta serológica de 5 ml.

DETERMINACIÓN DE ÁCIDO ÚRICO.


2 micropipetas (50 y 1000 μl).
Puntas para micropipetas.
Celdas para espectrofotómetro.

DETERMINACIÓN DE CREATININA.
2 micropipetas (50 y 1000 μl).
Puntas para micropipetas.
Celdas para espectrofotómetro.

Equipo:
2 Glucómetros One Touch® Ultra®
2 Acutrend Roche para determinación de colesterol y triglicéridos
Espectrofotómetro

Sustancias:

Kit para determinación de urea.


Kit para determinación de creatinina.
Kit para determinación de ácido úrico.

Actividades

Para el Docente/Facilitador: Para el Alumno(s):

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BRIEFING INICIAL (20 MINUTOS) Una persona experta en la toma de muestras sanguíneas
1. Presentación e ingreso al laboratorio extrae entre 8 y 10 ml de sangre de dos voluntarios en
2. Diagrama de bloques ayuno, quien ya aceptó y firmó una carta de consentimiento
3. Socialización del propósito de Aprendizaje y/o informado.
examen rápido Nota: Posteriormente es recomendable que los
voluntarios tomen un refrigerio.
PREPARACIÓN INICIAL (15 MINUTOS)
1. El docente solicita a los auxiliares de laboratorio I.- DETERMINACIÓN DE GLUCOSA.
con 1 semana de anticipación sus materiales 1.- Dos voluntarios llegarán con un ayuno de por lo
2. El docente verifica que el alumno ingresó su menos 4 horas. Uno deberá traer una dieta rica en
solicitud de materiales con los auxiliares de laboratorio carbohidratos y el otro una dieta rica en proteínas.
con mínimo 24 h de anticipación 2.- A cada uno de los voluntarios se les determinará la
3. El docente verifica que los auxiliares de laboratorio concentración de glucosa en sangre por medio de un
entreguen el material a los alumnos contra vale de glucómetro en los siguientes tiempos: 0 minutos (antes de
solicitud y credencial del responsable del equipo, ingerir los alimentos). 30, 60 y 120 minutos, después de
posterior al briefing ingerir los alimentos.
4. El docente verifica que el alumno revise que cuenta 3.- Graficar los resultados (tiempo vs concentración de
con el 100% de los materiales solicitados glucosa).
5. El docente verifica que el alumno tenga el área de
trabajo limpia y despejada II.- DETERMINACIÓN DE COLESTEROL Y
TRIGLICÉRIDOS
1.- De la misma forma que para la determinación de
EJECUCIÓN DE LA PRÁCTICA glucosa, a cada uno de los voluntarios se les determinará
1. Lleva los tiempos y ayuda a los alumnos a llevar la la concentración de colesterol y triglicéridos en sangre por
cronología. medio de un Acutrend en los siguientes tiempos: 0
2. Provee Feedback descriptivo durante la práctica. minutos (antes de ingerir los alimentos). 120 minutos,
3. Resuelve dudas durante la ejecución. después de ingerir los alimentos.
4. Promueve el buen Comportamiento del equipo 3.- Graficar los resultados (tiempo vs concentración de
durante la ejecución de la práctica colesterol y/o triglicéridos).
5. Verifica la Entrega de material limpio y completo.
6. Utiliza un Modelo de FACILITADOR NO III.-DETERMINACIÓN DE UREA (Método Berthelot
INSTRUCCIONAL. modificado)
7. Llenado de bitácora electrónica: 1.- Preparar el reactivo o reactivos de trabajo con la
https://goo.gl/forms/Ep16K5pZtsuutiRE3 mezcla que indiquen las instrucciones del kit de
determinación de urea.
DEBRIEFING (10 MINUTOS) 2.- Encender el espectrofotómetro y calibrarlo (con agua
1. Recapitula con los alumnos los hechos ocurridos. destilada) a la longitud de onda que indique el kit de
2. Promueve la reflexión, discusión y resolución de determinación de urea (600 nm).
dudas. 3.- Identifica con una marca o un número, tres celdas para
3. Verifica si se cumplió el propósito de aprendizaje. espectrofotómetro de la siguiente manera: B (reactivo
blanco), M (muestra), P (patrón).
4.- Agrega 5 μl de orina en la celda M y 5 μl de solución
patrón en la celda P.
5.- Vierte 500 μl del reactivo de trabajo R1 en las 3 celdas
B, M y P.
6.- Mezcla las celdas B, M y S. Incuba 5 minutos a
44emperature ambiente.
7.- Agrega 90 l del reactivo R2 (Hipoclorito) en cada una
de las celdas. Mezcla, incuba 10 min a temperatura
ambiente.
8.- Lee las celdas B, M y P a una longitud de onda de 600
nm.
9.- Determina la concentración de urea en la celda M de
acuerdo a la siguiente fórmula:

Conc. de Urea = Amuestra x Conc. del patrón mg/dl


Apatrón

Conc. Patrón = 50 mg/dl

IV. DETERMINACIÓN DE ÁCIDO ÚRICO (Método


Uricasa-PAP).

1.- En caso de ser necesario, preparar el reactivo o


reactivos de trabajo con la mezcla que indiquen las
instrucciones del kit de determinación de ácido úrico.

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2.- Encender el espectrofotómetro y calibrarlo (con agua


destilada) a la longitud de onda que indique el kit de
determinación de ácido úrico (520 nm).
3.- Identifica con una marca o un número, tres celdas para
espectrofotómetro de la siguiente manera: B (reactivo
blanco), M (muestra), P (patrón).
4.- Agrega 50 μl de orina en la celda M y 50 μl de solución
patrón en la celda P.
5.- Vierte 500 μl del reactivo de trabajo en las 3 celdas B,
M y P.
6.- Mezcla las celdas B, M y S. Incuba 15 minutos a
temperatura ambiente.
7 - Lee las celdas B, M y P a una longitud de onda de 520
nm.
8.- Determina la concentración de ácido úrico en la celda
M de acuerdo a la siguiente fórmula:

Conc. de Ácido úrico = Amuestra x Conc. del patrón mg/dl


Apatrón

Conc. Patrón = 8.5 mg/dl

V. DETERMINACIÓN DE CREATININA (Método de


Jaffé)

1.- En caso de ser necesario, preparar el reactivo o


reactivos de trabajo con la mezcla que indiquen las
instrucciones del kit de determinación de creatinina.
2.- Encender el espectrofotómetro y calibrarlo (con agua
destilada) a la longitud de onda que indique el kit de
determinación de creatinina (510 nm).
3.- Identifica con una marca o un número, tres celdas para
espectrofotómetro de la siguiente manera: B (reactivo
blanco), M (muestra), P (patrón).
4.- Agrega 50 μl de orina en la celda M y 50 μl de solución
patrón en la celda P.
5.- Vierte 500 μl del reactivo de trabajo en las 3 celdas B,
M y P.
6.- Mezcla las celdas B, M y S. Pon en marcha el
cronómetro.
7 - Leer las celdas B, M y P a una longitud de onda de
510 nm al cabo de 30 segundos (A1) y al cabo de 90
segundos (A2) de la adición de la muestra.
8.- Calcular la diferencia en la absorbancia 2 respecto a la
1: ΔA=A2-A1
9.- Determina la concentración de creatinina en la celda M
de acuerdo a la siguiente fórmula:

Conc. de Creatinina = ΔAmuestra x Conc. del patrón mg/dl


ΔApatrón

Conc. Patrón = 2 mg/dl

10.- Limpieza y entrega de materiales.


11.- Limpieza y orden del laboratorio.

Aprendizaje Auto-dirigido (Independiente):

Antes de la práctica:
a) Lectura de la práctica.
b) Investigar: metabolismo de carbohidratos, lípidos y proteínas. Regulación hormonal del
metabolismo.

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c) Investigar: fundamento de las pruebas para determinación de urea, ácido úrico y creatinina.
d) Investigar: el motivo por el cuál es necesario realizar dos mediciones para calcular las
concentraciones de creatinina.

Después de la práctica:
a) Reportar la respuesta de los dos sujetos en las concentraciones de los diferentes metabolitos
analizados.
b) Interpretar los resultados de las diferentes pruebas y asociar los cambios que ocurren en un
paciente diabético.
Método de Evaluación

De la Práctica Del Aprendizaje Independiente

Investigación previa 20% Examen rápido sobre la investigación previa (40%)


Reporte de práctica 40% (véase anexo 1)

Referencias y Bibliografía Recomendada


Nelson DL, Cox MM. (2005) Lehninger Principles of Biochemistry. Fourth edition. WH Freeman.
Feduchi E, Blasco I, Romero CS, Yáñez E. (2011) Bioquímica. Conceptos esenciales. Primera edición. Editorial
Médica Panamericana. Madrid.
Manzoul, SM, Mohammed, H. (2010). Bioquímica. Editorial El Manual Moderno. México.
Kaplan LA, Pesce AJ. (2002). Química clínica. Teoría, análisis y correlación. 3ª ed. Ed. Pesce Kaplan publicaciones.

Elaboró Dra. Martha Estela Salcido Contacto: Ext. 11454


Neyoy.

Cargo/Grado: Docente de asignatura Campus: Querétaro

Revisó (validó): Comité Nacional de Fecha: 20 de Julio de 2017


Validación de QFBT

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ANEXOS

ANEXO 1: RÚBRICA DE EVALUACIÓN

Parámetro Excelente Bueno Regular Deficiente


10 pts 8 pts 6 pts 0 pts
1.Formato tipo
artículo en Excelente Bueno Regular Deficiente
formato
electrónico -Cumple con el Hubo Hubo Hubo
5% formato que se incumplimiento en incumplimiento en incumplimiento en
anexa al final de uno de los tres dos de los tres los tres requisitos:
este manual requisitos: requisitos: -Cumple con el
-Se entregó en -Cumple con el -Cumple con el formato que se
tiempo formato que se formato que se anexa al final de
- Se entregó en anexa al final de anexa al final de este manual
formato electrónico este manual este manual -Se entregó en
-Se entregó en -Se entregó en tiempo
tiempo tiempo - Se entregó en
- Se entregó en - Se entregó en formato electrónico
formato electrónico formato electrónico

2. Ortografía
5% Excelente Bueno Regular Deficiente
-No presenta Presenta entre 1 y 3 Presenta entre 3 y 6 El reporte incluye
errores de errores ortográficos errores ortográficos más de 6 errores
ortografía ortográficos
3. Resumen y
palabras clave Excelente Bueno Regular Deficiente
5% Hubo
-En el resumen incumplimiento en Hubo Hubo
describe con sus uno de los tres incumplimiento en incumplimiento en
propias palabras en requisitos: dos de los tres los tres requisitos:
máximo 1 cuartilla -En el resumen requisitos: -En el resumen
los objetivos del describe con sus -En el resumen describe con sus
trabajo, la propias palabras en describe con sus propias palabras en
metodología general máximo 1 cuartilla propias palabras en máximo 1 cuartilla
con los resultados los objetivos del máximo 1 cuartilla los objetivos del
más relevantes. trabajo, la los objetivos del trabajo, la
-Redacta los verbos metodología general trabajo, la metodología general
en pasado con los resultados metodología general con los resultados
-Incluye las más relevantes. con los resultados más relevantes.
palabras claves -Redacta los verbos más relevantes. -Redacta los verbos
relacionadas a la en pasado -Redacta los verbos en pasado
práctica -Incluye las en pasado -Incluye las
palabras claves -Incluye las palabras claves
relacionadas a la palabras claves relacionadas a la
práctica relacionadas a la práctica
práctica
4. Introducción
15% Excelente Bueno Regular Deficiente
-Realiza una -Realiza una -Realiza una - La revisión
revisión bibliográfica revisión bibliográfica revisión bibliográfica bibliográfica es
donde plantea completa donde incompleta incongruente al
ordenadamente el plantea - o no incluye las tema y no se
tema de desordenadamente referencia incluyen las
investigación, su el tema de bibliográficas o referencias
importancia e investigación (no se hemerográficas en bibliográficas o
implicaciones cumple la regla de el texto hemerográficas en
partiendo de lo lo general a lo el texto
general a lo particular),
particular. - o no incluye las
-Incluye las referencia
referencia bibliográficas o
bibliográficas o hemerográficas en
hemerográficas en el texto

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el texto

5. Planteamiento del El planteamiento El planteamiento El planteamiento No responde a la


problema responde a la responde responde pregunta ¿qué voy
pregunta ¿qué voy a parcialmente a la deficientemente a la a investigar?
investigar? pregunta ¿qué voy a pregunta ¿qué voy a
investigar? investigar?
6. Justificación El planteamiento El planteamiento El planteamiento No responde a la
responde a la responde responde pregunta ¿por qué
pregunta ¿por qué parcialmente a la deficientemente a la voy a investigar?
voy a investigar? pregunta ¿por qué pregunta ¿por qué
voy a investigar? voy a investigar?
7. Objetivos El planteamiento El planteamiento El planteamiento No responde a la
5% responde a la responde responde pregunta ¿para qué
pregunta ¿para qué parcialmente a la deficientemente a la voy a investigar?
voy a investigar? pregunta ¿para qué pregunta ¿para qué
voy a investigar? voy a investigar?
8. Hipótesis La hipótesis La hipótesis La hipótesis La hipótesis no
constituye un juicio constituye un juicio constituye un juicio constituye un juicio
de posibilidad que de posibilidad que de posibilidad que de posibilidad que
expresa la relación expresa la relación expresa la relación exprese la relación
causa efecto (si vs causa efecto (si vs causa efecto (si vs causa efecto (si vs
entonces) que se entonces) que se entonces) que se entonces) que se
pretende verificar. pretende verificar pretende verificar pretende verificar.
parcialmente de manera
correcto. deficiente.
9. Método
5% Excelente Bueno Regular Deficiente
-Describe el -Describe el -No describe el
procedimiento -Describe el procedimiento procedimiento
experimental de procedimiento experimental de experimental
forma que responde experimental de forma que responde
a la pregunta forma que responde de forma deficiente
¿Cómo lo voy a parcialmente a la pregunta
investigar? correcto a la ¿Cómo lo voy a
pregunta ¿Cómo lo investigar?
voy a investigar?

10.Resultados
15% Excelente Bueno Regular Deficiente
-Recopila y ordena -Recopila y ordena -Recopila y ordena -No presenta los
los datos obtenidos los datos obtenidos los datos obtenidos resultados
presentándolos en presentándolos en presentándolos en obtenidos
párrafos, cuadros o párrafos, cuadros o párrafos, cuadros o
gráficos claramente gráficos pero no los gráficos pero no los
identificados. identifica identifica
-Incluye las claramente claramente
fórmulas y -O no incluye las -No incluye las
sustituciones fórmulas y fórmulas y
empleadas sustituciones sustituciones
empleadas empleadas
11. Análisis de
resultados Excelente Bueno Regular Deficiente
20%
-Interpreta y analiza -Interpreta y analiza - Interpreta y -No Interpreta y no
los resultados los resultados analiza los analiza los
obtenidos obtenidos pero no resultados resultados
comparativamente comparativamente obtenidos pero no obtenidos
con la bibliografía con la bibliografía comparativamente -Ni tampoco indica
consultada -Indica consultada con la bibliografía las aplicaciones
las aplicaciones -O no indica las consultada teóricas
teóricas aplicaciones teóricas -No indica las
aplicaciones teóricas
12.Conclusiones
20% Excelente Bueno Regular Deficiente
-Redacta con sus -Redacta con sus -No redacta con sus -No redacta las
propias palabras si propias palabras si propias palabras si conclusiones o las
se cumplen o no los se cumplen o no los se cumplen o no los copia de textos
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objetivos en base al objetivos pero no objetivos


análisis de los considera -o No considera el
resultados completamente el análisis de los
análisis de los resultados
resultados
13.Referencias
5% Excelente Bueno Regular Deficiente
-Presenta por lo -Presenta menos de -Presenta menos de -No presenta
menos 3 3 bibliografías 3 bibliografía bibliografía
bibliografías consultadas consultada, sin
consultadas, en - o no las presenta orden alfabético ,
orden alfabético , en orden alfabético - o no sigue el
siguiendo el formato - o no sigue el formato APA
APA formato APA

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ANEXO 2: REPORTE DE PRÁCTICA

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ANEXO 3: SOLICTUD DE REACTIVOS Y MATERIALES

UNIVERSIDAD DEL VALLE DE MEXICO


Región Ciudad de México
Campus:
Hoja de solicitud de reactivos y materiales de laboratorio
Titulo de la práctica
Fecha de la práctica
Fecha de entrega de solicitud
Numero de equipos Materia
Semestre Carrera
Horario Laboratorio
Profesor
REACTIVOS
Cantidad
Descripción del Reactivo Observaciones
por grupo

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