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Manual de prácticas
Institucionales de la Escuela
de Ciencias de la Salud
— 2016 —
Copyright © UVM México, 2015. Todos los Derechos Reservados. 1
UVM México Escuela de Ciencias de la Salud
Presentación
Observaciones: HORAS DE 2
APRENDIZAJE
INDEPENDIENTE
Aspectos Curriculares
1.- OBJETIVO GENERAL DE LA ASIGNATURA:
El estudiante aplicará las diversas técnicas del estudio de procesos bioquímicos mediante el uso de
las principales rutas metabólicas y las bases para describir los mecanismos fundamentales.
Competencias específicas
Saber:
1. Véase contenidos de la asignatura
2. Fundamentos de las principales rutas metabólicas.
3. Conocimiento de los métodos de extracción e identificación de macromoléculas.
Saber hacer:
1. Aplicación de procedimientos experimentales enfocados a la extracción e identificación de
macromoléculas.
2. Habilidad en la preparación de soluciones.
3. Capacidad de realizar modificaciones en los procedimientos experimentales, de manera que,
ante la carencia de algún reactivo, material o equipo, el estudiante pueda proponer alternativas
viables que aseguren el desarrollo de la práctica, cumpliendo los objetivos propuestos.
Ser:
1. Capacidad de utilización y reconocimiento del método científico
2. Capacidad y habilidad para resolver problemas
3.- CONTENIDOS:
Materiales
Equipo:
NO REQUERIDO
Sustancias:
NO REQUERIDAS
Actividades
EJECUCIÓN DE LA PRÁCTICA
1. Lleva los tiempos y ayuda a los alumnos a
llevar la cronología.
2. Provee Feedback descriptivo durante la
práctica.
3. Resuelve dudas durante la ejecución.
4. Promueve el buen Comportamiento del equipo
durante la ejecución de la práctica
5. Verifica la Entrega de material limpio y
completo.
6. Utiliza un Modelo de FACILITADOR NO
INSTRUCCIONAL.
Antes de la práctica:
a) Lectura de la práctica.
b) Investigar: reglamento para uso de los laboratorios de Ciencias de la Salud (disponible en el portal de UVM).
c) Investigar: Manual de Bioseguridad en el laboratorio (OMS)
Después de la práctica:
a) Conocer detalladamente el reglamento de trabajo en el laboratorio, medidas de protección generales, ubicar
salidas de emergencia, extintores, regaderas de emergencia, lavaojos y botiquín de primeros auxilios.
b) Conocer las indicaciones básicas respecto al manejo de RPBI y para el manejo de sustancias químicas
peligrosas.
c) Conocer la programación de prácticas a realizar durante el semestre, las formas de evaluación y reglas
internas de trabajo en el laboratorio.
Método de Evaluación
Participación en discusión y análisis grupal 20% Examen rápido sobre la investigación previa (40%)
Reporte de práctica 40% (Resumen del manual de
Bioseguridad de la OMS enfocado a medidas de
seguridad en un laboratorio tipo II y manejo de sustancias
químicas peligrosas).
Materiales
Equipo:
Placa calefactora
Balanza analítica
Balanza digital o granataria
Baño María
Sustancias:
Glucosa (0.5 g)
Fructosa (0.5 g)
Manosa (0.5 g)
Sacarosa (0.5g)
Sulfato de cobre (5.23 g)
Tartrato de sodio y potasio (17.5 g)
Hidróxido de sodio (5 g)
Citrato de potasio (17.3 g)
Carbonato de sodio anhidro (10 g)
Agua destilada
Actividades
Tubos 1 2 3 4 5 6 7 8 9
Sol. Benedict mL 1 1 1 1 1 1 1 1 1
Glucosa 5 - - - - - - - -
Fructosa 5 - - - - - - -
Manosa 5 - - - - - -
Sacarosa 5 - - - - -
Jugo Manzana 10 - - - -
RF N 10 - - -
RF dieta 10 - -
Canderel 10 -
Azúcar 10
Antes de la práctica:
a) Lectura de la práctica
b) ¿Qué es un azúcar reductor?
c) Describe las dos pruebas más comunes para determinar azucares reductores.
d) Describe las reacciones de las dos pruebas descritas en el inciso anterior (c).
e) Dibuja las estructuras de los principales monosacáridos con actividad bioquímica en el ser humano.
f) Describe las reacciones de oxidación de los monosacáridos.
Después de la práctica:
a) Elabora un cuadro con cada una de las características observadas en cada una de las reacciones: color,
formación del precipitado etc.
Compara los resultados e indica que tipo de azucares son la glucosa, la fructosa, la manosa y
sacarosa
Los alimentos probados contenían azucares reductores, explica.
Las determinaciones de esta práctica son cuantitativas o cualitativas ¿por qué?
Mencione la similitud en su composición que presentan el reactivo de Fehling y el reactivo de
Benedict
¿Qué efecto tiene en el organismo la presencia de azucares reductores en los alimentos?
b) Describe las rutas metabólicas activadas después del consumo de los diferentes tipos de alimentos.
Método de Evaluación
Materiales
Equipo:
Parrilla con agitación
Centrífuga
Agitador Vortex
Baño maría
Balanza digital
Sustancias:
10 ml NaOH 0.1 N
10 ml Acido tricloroacético al 10%
10 ml Nitroprusiato de Sodio al 0.5%
0.5 gr Sulfato de amonio sólido.
10 ml 2,4-dinitrofenil-hidracina al 0.1% en HCl 2N
5 ml Hidróxido de amonio concentrado.
10 ml Soluciones de glucosa al 0.5, 1.0 y 2.0%
10 ml Suspensión de levadura al 5% en Na2HPO4 (213 mg/100 ml)
y KH2PO4 (90 mg/100 ml) (18 hrs de fermentación antes de
su utilización).
Agua destilada.
Actividades
Antes de la práctica:
a) Lectura de la práctica.
b) Investigar: Glucólisis, destinos del piruvato.
c) Investigar: fundamento de las pruebas de identificación del piruvato.
Después de la práctica:
a) Comparar la coloración e intensidad obtenida en ambas pruebas de identificación de piruvato.
Discutir las diferencias en función de las concentraciones de glucosa y la solución de fosfatos
utilizada para la suspensión de levadura.
Método de Evaluación
Materiales
Equipo:
Centrífuga
Agitador Vortex
Baño maría
Balanza digital
Sustancias:
5 ml KOH al 30%
1 ml Na2SO4 al 15%
10 ml Etanol al 96%
2 ml H2SO4 5 N.
5 ml NaOH 5 N
0.5 ml Fenolftaleína
1 ml Reactivo de Benedict.
Agua destilada.
Hielo.
Actividades
BRIEFING INICIAL (20 MINUTOS) I. Extracción del glucógeno de una muestra hepática
1. Presentación e ingreso al laboratorio de hígado de res.
2. Diagrama de bloques 1. Pesar aproximadamente 1.5 g de hígado de res.
3. Socialización del propósito de Aprendizaje y/o Realizar la extracción por duplicado.
examen rápido 2. Introducir los fragmentos de hígado en dos tubos de
ensayo. Añadir a cada tubo 2 ml de KOH al 30%.
PREPARACIÓN INICIAL (15 MINUTOS) Incubar los tubos en un baño de agua hirviendo
1. El docente solicita a los auxiliares de laboratorio durante 15 minutos con agitación ocasional, hasta la
con 1 semana de anticipación sus materiales completa digestión del tejido (que no queden partículas
2. El docente verifica que el alumno ingresó su en suspensión).
solicitud de materiales con los auxiliares de laboratorio 3. Centrifugar 5 minutos a 3000 rpm para eliminar los
con mínimo 24 h de anticipación restos de tejido no digerido.
3. El docente verifica que los auxiliares de laboratorio 4. Pasar cuidadosamente los sobrenadantes (con una
entreguen el material a los alumnos contra vale de pipeta o por decantación) a dos tubos previamente
solicitud y credencial del responsable del equipo, pesados, a los que se les añaden 0.2 ml de Na2SO4 al
posterior al briefing 15%, y 4 ml de alcohol etílico. Agitar cuidadosamente
4. El docente verifica que el alumno revise que cuenta la mezcla para poner en contacto a todos los
con el 100% de los materiales solicitados componentes. Dejar reposar en hielo 15-20 minutos,
5. El docente verifica que el alumno tenga el área de para provocar la precipitación del glucógeno extraído.
trabajo limpia y despejada 5. Centrifugar 5 minutos a 3000 r.p.m. para sedimentar el
glucógeno. Desechar con sumo cuidado el
EJECUCIÓN DE LA PRÁCTICA sobrenadante y retener el precipitado o sedimento de
1. Lleva los tiempos y ayuda a los alumnos a llevar la color marrón-blanco, puesto que esto es el glucógeno.
cronología. Nota. La purificación completa del glucógeno
2. Provee Feedback descriptivo durante la práctica. implicaría tres o cuatro precipitaciones alcohólicas y
3. Resuelve dudas durante la ejecución. una precipitación ácida, pero en esta práctica haremos
4. Promueve el buen Comportamiento del equipo sólo una precipitación alcohólica.
durante la ejecución de la práctica 6. Secar cuidadosamente con papel de filtro y pesar el
5. Verifica la Entrega de material limpio y completo. precipitado de glucógeno de cada tubo. Anotar el
6. Utiliza un Modelo de FACILITADOR NO resultado.
INSTRUCCIONAL.
7. Llenado de bitácora electrónica: II. Hidrólisis ácida del sedimento de glucógeno
https://goo.gl/forms/Ep16K5pZtsuutiRE3 1. Al sedimento de glucógeno obtenido en el tubo, se le
añade 1 ml de H2SO4 5N para proceder a su hidrólisis
DEBRIEFING (10 MINUTOS) ácida y para ello se calienta la disolución
1. Recapitula con los alumnos los hechos ocurridos. cuidadosamente a 100°C durante 45 minutos.
2. Promueve la reflexión, discusión y resolución de Nota. Como el ácido puede saltar en la ebullición, es
dudas. conveniente poner en la parte superior del tubo papel
3. Verifica si se cumplió el propósito de aprendizaje. filtro enrollado, para que absorba el ácido y evitar
riesgos. Tener en cuenta que en este tratamiento es
donde se está obteniendo la glucosa que después se
puede valorar, por lo cual no conviene perder muestra.
2. Completar a 2 ml con agua destilada y añadir 2-3 gotas
de fenolftaleína para que actúe de indicador en la
posterior neutralización.
3. Añadir gota a gota NaOH 5N y agitar bien hasta que se
obtenga un pH 8 o superior. Se debe comprobar el pH
de la muestra con papel indicador.
4. Anotar el volumen de la disolución, hidrolizado de
glucógeno, puesto que es la disolución problema
donde se va a comprobar la presencia de glucosa
proveniente del glucógeno extraído.
Antes de la práctica:
a) Lectura de la práctica
Después de la práctica:
a) Reportar la eficiencia de la extracción de glucógeno a través de la identificación de la glucosa.
Método de Evaluación
Materiales
Equipo:
Potenciómetro
Balanza digital
Sustancias:
Actividades
4. El docente verifica que el alumno revise que cuenta 2. Añadir por decantación (no pipetear) 0.2 ml de la
con el 100% de los materiales solicitados solución de dinitrofenol 40 mmol/l, concentración final
5. El docente verifica que el alumno tenga el área de de 200 μmol/l.
trabajo limpia y despejada
3. Determinar el pH de la solución y repetir la medición
EJECUCIÓN DE LA PRÁCTICA dos veces más con intervalos de 3 minutos para
1. Lleva los tiempos y ayuda a los alumnos a llevar la obtener la línea basal.
cronología. 4. Esperar 5 minutos.
2. Provee Feedback descriptivo durante la práctica. 5. Repetir los pasos 3 y 4 del experimento control.
3. Resuelve dudas durante la ejecución.
4. Promueve el buen Comportamiento del equipo EXPERIMENTO 3 (AZIDA).
durante la ejecución de la práctica 1. Diluír 5 ml. de la levadura con 40 ml de agua
5. Verifica la Entrega de material limpio y completo. destilada.
6. Utiliza un Modelo de FACILITADOR NO
2. Añadir por decantación (no pipetear) 0.5 ml de la
INSTRUCCIONAL.
7. Llenado de bitácora electrónica: solución de azida de sodio 400 mmol/l, concentración
https://goo.gl/forms/Ep16K5pZtsuutiRE3 final de 5 mmol/l.
3. Determinar el pH de la solución y repetir la medición
DEBRIEFING (10 MINUTOS) dos veces más con intervalos de 3 minutos para
1. Recapitula con los alumnos los hechos ocurridos. obtener la línea basal.
2. Promueve la reflexión, discusión y resolución de 4. Esperar 5 minutos.
dudas.
5. Repetir los pasos 3 y 4 del experimento control.
3. Verifica si se cumplió el propósito de aprendizaje.
6. Limpieza y entrega de materiales.
7. Limpieza y orden del laboratorio.
Antes de la práctica:
a) Lectura de la práctica.
b) Investigar: Fuentes de carbono de las levaduras. Vías metabólicas para el catabolismo de
carbohidratos. Glucólisis. Fosforilación oxidativa.
c) Investigar: Productos finales del catabolismo de carbohidratos en levaduras. Inhibidores de la
cadena respiratoria de los sitios I, II y III.Mecanismo de protonóforos para desacoplar la
fosforilación oxidativa.
Después de la práctica:
a) Hacer una gráfica de cada uno de los experimentos; utilizar los valores de las lecturas de pH
contra tiempo.
b) Analizar el significado de los cambios de pH en el experimento control, con dinitrofenol como
desacoplante y con azida de sodio
c) Hacer una relación de las vías que producen estos cambios, considerando que las
levadurasposeen una ATPasa de protones en la membrana mitocondrial que se encarga de
sintetizar ATP y que tienen otra ATPasa de protones en la membrana plasmática cuya función es
similar a la bomba de Na/K en las células de mamíferos.
Método de Evaluación
Materiales
Equipo:
Agitador vortex
Potenciómetro
Baño maría.
Sustancias:
20 ml Pancreatina al 1%
1 ml Na2CO3 al 10%.
25 ml NaOH 0.1 N.
Agua destilada.
Actividades
2. El docente verifica que el alumno ingresó su vigorosamente. Limpiar el exterior de los tubos para no
solicitud de materiales con los auxiliares de laboratorio introducir leche al baño maría. Colocar los tubos en baño
con mínimo 24 h de anticipación maría a 40 °C. Mezclar los tubos cada 20 minutos y
3. El docente verifica que los auxiliares de laboratorio anotar cualquier cambio de color y olor.
entreguen el material a los alumnos contra vale de
solicitud y credencial del responsable del equipo, 2. Efecto de las sales biliares en la acción de la lipasa.
posterior al briefing
4. El docente verifica que el alumno revise que cuenta Preparar un juego de cuatro digestiones (tubos 1 a 4) y
con el 100% de los materiales solicitados dos controles (tubos 5 y 6) en tubos de ensayo de la
5. El docente verifica que el alumno tenga el área de siguiente manera, añadiendo la solución de pancreatina
trabajo limpia y despejada. hasta el final:
Antes de la práctica:
1. Lectura de la práctica.
2. Investigar: : hidrólisis de triglicéridos, lipasa, sales biliares.
3. Investigar: solución, suspensión, emulsión.
4. Investigar la relación previamente establecida para la actividad lipásica en función de los ml de
NaOH 0.1 N gastados en la segunda parte de la práctica..
Después de la práctica:
a) Compara la eficiencia de digestión de lípidos de la leche con pancreatina normal y sometida a
calentamiento.
b) Calcular la cantidad de ácidos grasos producidos con y sin sales biliares, utilizando la relación
arriba mencionada.
Método de Evaluación
Materiales
Equipo:
Parrilla con agitación
Bomba de vacío
Agitador Vortex
Sustancias:
25 ml Acetona
2 ml Anhídrido acético
8 ml Cloroformo
80 ml Etanol al 96
100 ml Éter etílico.
3.5 ml H2SO4 concentrado.
30 ml Solución alcohólica de KOH al 5.6 %.
Agua destilada.
Actividades
Antes de la práctica:
a) Lectura de la práctica.
Después de la práctica:
a) Registrar el rendimiento de las fracciones lipídicas obtenidas en la siguiente tabla:
Método de Evaluación
Materiales
Investigación previa
2 Huevos (yema)
Equipo:
Espectofotómetro
Sustancias:
5 Soluciones patrón de colesterol
Ácido sulfúrico concentrado
6 mL FeCl3
Actividades
Tubo N° 1 2
Absorbancia
540 (nm)
Antes de la práctica:
a) Investigar: : Propiedades y funciones de colesterol, triglicéridos y lipoproteínas
b) Investigar: Valores de referencia para los diferentes parámetros analizados.
c) Investigar: asociaciones de alteraciones en los niveles de lípidos plasmáticos y riesgos a la salud.
d) Investigar las vías por las cuales los mamíferos obteienen el colesterol
e) ¿Cuáles son y cuáles son sus diferencias de los dos tipos de lipoproteínas que contienen
colesterol?
f) ¿Por qué el valor definido clínicamente sobre los niveles de colesterol total deben ser
plasmáticos?
Después de la práctica:
a) Reportar los resultados de colesterol, triglicéridos y lipoproteínas e interpretar estos resultados en
función de estimación de riesgo.
Método de Evaluación
https://profesoramaribelarnes.files.wordpress.com/2009/11/lab-5
Materiales
Equipo:
Baño termostatizado a 30ºC.
Colorímetro ajustado a 405 nm (celda par lectura).
Sustancias:
Tampón de ensayo (para ajustar a pH alcalino) pH 10.4
Solución sustrato (éster de fosfato artificial, el p-nitrofenilfosfato)
Enzima: fosfatasa alcalina de mucosa intestinal bovina, comercial (reactivo).
Actividades
BRIEFING INICIAL (20 MINUTOS) Efecto del tiempo de reacción en la aparición de producto.
1. Presentación e ingreso al laboratorio 1.- A 5 tubos de ensayo y se añaden los reactivos que se detallan en la Tabla 1.
2. Diagrama de bloques Se agitan suavemente e incuban en baño termostatizado a 30 ºC los tiempos
indicados.
3. Socialización del propósito de Aprendizaje y/o
examen rápido
Tabla 1: Efecto del tiempo de reacción en la aparición de producto
PREPARACIÓN INICIAL (15 MINUTOS) Tubo No 1 2 3 4 5
1. El docente solicita a los auxiliares de Tampon mL 2 1 1 1 1
laboratorio con 1 semana de anticipación sus
materiales Sustrato mL 1 1 1 1 1
2. El docente verifica que el alumno ingresó su Enzima mL …. 1 1 1 1
solicitud de materiales con los auxiliares de
Agitar suavemente e incubar a 30°C
laboratorio con mínimo 24 h de anticipación
3. El docente verifica que los auxiliares de Tiempo min 5 5 10 15 20
laboratorio entreguen el material a los alumnos
contra vale de solicitud y credencial del responsable
2.- A medida que se cumplen estos tiempos, se retira el tubo correspondiente del
del equipo, posterior al briefing
baño a 30 ºC y se le añade inmediatamente 1 ml de fosfato mezclando las
4. El docente verifica que el alumno revise que soluciones para detener la reacción.
cuenta con el 100% de los materiales solicitados
5. El docente verifica que el alumno tenga el 3.- A continuación, se mide la absorbancia a los distintos tubos a 405 nm
área de trabajo limpia y despejada usando el nº 1 como blanco.
EJECUCIÓN DE LA PRÁCTICA 2.1. A una serie de 5 tubos de ensayo se les añade los distintos reactivos según
1. Lleva los tiempos y ayuda a los alumnos a se indica en la Tabla 2, obteniéndose así concentraciones crecientes de enzima
llevar la cronología. en los mismos. Tras agitar suavemente se incuban en baño termostatizado el
tiempo indicado:
2. Provee Feedback descriptivo durante la
práctica.
Tabla 2. Efecto de la concentración de enzima sobre la velocidad de la
3. Resuelve dudas durante la ejecución. reacción.
4. Promueve el buen Comportamiento del
equipo durante la ejecución de la práctica Tubo No 1 2 3 4 5
5. Verifica la Entrega de material limpio y Tampon mL 2.5 2.3 2.1 1.9 1.7
completo.
6. Utiliza un Modelo de FACILITADOR NO Sustrato mL 1 1 1 1 1
INSTRUCCIONAL. Enzima mL …. 0.2 0.4 0.6 0.8
7. Llenado de bitácora
electrónica:https://goo.gl/forms/Ep16K5pZtsuutiRE3 Agitar suavemente e incubar a 30°C 10 minutos
Antes de la práctica:
a) Lectura de la práctica.
b) Investigar: Función biológica de la fosfatasa alcalina.
c) Investigar: valores de referencia para la actividad enzimática de la fosfatasa alcalina.
d) Investigar: principales patologías que se presentan cuando existen alteraciones en la actividad de la
fosfatasa alcalina.
Después de la práctica:
a) Reportar los resultados de actividad de la fosfatasa alcalina, en este caso representaremos la aparición
de producto frente al tiempo (Figura 2), obteniendo la curva de progreso de la reacción.
b) El cálculo de la concentración de producto (p-nitrofenol) se basa en la ley de Lambert-Beer (Caso 1)
c) Aplicando esta ecuación a las absorbancias obtenidas para cada uno de los tubos, teniendo en cuenta
que I = 1 cm y ε = 18,5 mM-1 cm-1, se obtiene la concentración producto formado en cada uno de ellos
(caso 2)
Método de Evaluación
Materiales
Equipo:
Agitador Vortex
Baño maría
Balanza digital
Sustancias:
70 ml Peróxido de Hidrógeno (agua oxigenada 3%, 0.5 y 2.0%).
1 ml Solución alcohólica de bencidina al 0.15%
5 ml Pirogalol al 1%
1 ml Tirosina al 1%
Agua destilada.
Hielo.
Actividades
Antes de la práctica:
a) Lectura de la práctica.
b) Investigar: Importancia de las enzimas en el metabolismo celular. Reacciones que catalizan las
enzimas analizadas.
c) Investigar: fundamento de las pruebas realizadas. Factores que alteran la actividad enzimática.
Después de la práctica:
a) Reportar la actividad enzimática de la catalasa en los diferentes tejidos analizados. Listar en orden
de mayor a menor actividad.
b) Interpretar y discutir los resultados en función de la eficiencia de reacción de acuerdo a las
condiciones de los ensayos.
Método de Evaluación
Materiales
Equipo:
Parrilla con agitación
Potenciómetro
Bomba de vacío
Sustancias:
30 ml Ácido acético 2M
20 ml Etanol al 96º
20 ml Éter etílico
10 ml NaOH 0.1 %
2 ml Reactivo de Biuret.
Agua destilada.
Actividades
2. El docente verifica que el alumno ingresó su acético 2 M, hasta que el pH de la solución sea de 4.8,
solicitud de materiales con los auxiliares de laboratorio donde ocurrirá la precipitación de la caseína.
con mínimo 24 h de anticipación 5.- Una vez obtenido el precipitado se detiene la
3. El docente verifica que los auxiliares de laboratorio agitación, se retira el electrodo y se deja reposar la
entreguen el material a los alumnos contra vale de solución durante 10 minutos.
solicitud y credencial del responsable del equipo, 6.-Eliminar por decantación la mayor parte del
posterior al briefing sobrenadante. Filtrar la porción restante a través de un
4. El docente verifica que el alumno revise que cuenta embudo de vidrio cubierto con papel filtro, recogiendo el
con el 100% de los materiales solicitados filtrado en un vaso de precipitados para su posterior
5. El docente verifica que el alumno tenga el área de eliminación.
trabajo limpia y despejada 7 – Lavar el residuo que quedó en el embudo con 20 ml.
de etanol, agitando con una varilla de vidrio, teniendo
cuidado de no romper el papel.
EJECUCIÓN DE LA PRÁCTICA 8.-Colocar el cono de papel que contiene el residuo entre
1. Lleva los tiempos y ayuda a los alumnos a llevar la varias hojas de papel secante, presionar para eliminar los
cronología. restos de etanol.
2. Provee Feedback descriptivo durante la práctica. 9.- Colocar el precipitado seco en un vaso de precipitados
3. Resuelve dudas durante la ejecución. y agregar 20 ml de éter etílico, agitar bien la suspensión
4. Promueve el buen Comportamiento del equipo para deslipidizar la proteína.
durante la ejecución de la práctica 10.- Filtrar nuevamente la suspensión a través de un
5. Verifica la Entrega de material limpio y completo. embudo de filtración rápida cubierto con papel filtro. El
6. Utiliza un Modelo de FACILITADOR NO filtrado se descarta. El residuo de color blanco es la
INSTRUCCIONAL. CASEÍNA.
7. Llenado de bitácora electrónica: 11.- Transferir la caseína a un mortero y pulverizarla.
https://goo.gl/forms/Ep16K5pZtsuutiRE3 Pesar y guardar en una bolsa de papel celofán.
12.- Colocar una pequeña porción de la caseína obtenida
DEBRIEFING (10 MINUTOS) en un tubo de ensaye de 18x150. Disolverla en 5 ml de
1. Recapitula con los alumnos los hechos ocurridos. NaOH al 0.1 % y realizar la prueba de Biuret.
2. Promueve la reflexión, discusión y resolución de PRUEBA DE BIURET: Agregar 1 ml del Reactivo de
dudas. Biuret a la solución proteica, agitar y observar el color
3. Verifica si se cumplió el propósito de aprendizaje. desarrollado. Correr un control positivo usando albúmina
de huevo.
13.- Limpieza y entrega de materiales.
14.- Limpieza y orden del laboratorio.
Antes de la práctica:
a) Lectura de la práctica.
b) Investigar: composición de la leche. Punto isoeléctrico. Precipitación isoeléctrica-
c) Investigar: fundamento de la prueba de BIURET.
Después de la práctica:
a) Reportar el peso en gramos de la caseína obtenida. % de caseína en gramos/100 ml. de leche.
b) Mostrar los resultados de la prueba de Biuret para la caseína y el control positivo.
Método de Evaluación
Materiales
Equipo:
Centrífuga
Agitador Vortex
Baño maría
Balanza digital
Sustancias:
Soluciones de aminoácidos al 0.1%. (3 de diferentes
características: polar, apolar, con carga (+), con carga (-),
aromáticos, alifáticos).
Soluciones de proteína al 0.1%. (2 diferentes, por ejemplo
albúmina y caseína).
5 ml HNO3 concentrado
5 ml NaOH 10 M
2 ml HgCl2 0.2 M
5 ml H2SO4 concentrado
2 ml PbOAc 0.2 M
3 ml Ninhidrina 0.1% (en n-butanol)
5 ml Reactivo de Biuret
10 ml Reactivo de Hopkins-cole
2 ml Reactivo de Millon
Agua destilada.
Hielo.
Actividades
6. PRUEBA DE LA NINHIDRINA.
Antes de la práctica:
a) Lectura de la práctica.
b) Investigar: Características y propiedades de aminoácidos.
Después de la práctica:
a) Reportar en una tabla los resultados de cada una de las pruebas para los aminoácidos probados.
Método de Evaluación
Materiales
Equipo:
Parrilla de calentamiento.
Agitador Vortex
Sustancias:
Actividades
BRIEFING INICIAL (20 MINUTOS) 1) Colocar la placa cromatográfica sobre una parrilla de
1. Presentación e ingreso al laboratorio
calentamiento durante 15 minutos.
2. Diagrama de bloques
3. Socialización del propósito de Aprendizaje y/o 2) Trazar una línea horizontal a 1.5 cm. de la base de
examen rápido
la placa con regla y lápiz. Distribuír 4 marcas (M1,
PREPARACIÓN INICIAL (15 MINUTOS) M2, M3 y X) sobre la línea con una separación de 2
1. El docente solicita a los auxiliares de laboratorio
cm. INDISPENSABLE USAR GUANTES. (Fig. 2).
con 1 semana de anticipación sus materiales
2. El docente verifica que el alumno ingresó su 3) Con una micropipeta aplicar 1 gota de cada una de
solicitud de materiales con los auxiliares de laboratorio
las soluciones de aminoácidos y la muestra
con mínimo 24 h de anticipación
3. El docente verifica que los auxiliares de laboratorio problema. Dejar secar completamente.
entreguen el material a los alumnos contra vale de
solicitud y credencial del responsable del equipo, 4) Colocar la placa en forma vertical en la cámara
posterior al briefing
cromatográfica conteniendo el disolvente y cubrirla
4. El docente verifica que el alumno revise que cuenta
con el 100% de los materiales solicitados con papel aluminio.
5. El docente verifica que el alumno tenga el área de
5) Dejar que el disolvente fluya libremente hasta un cm
trabajo limpia y despejada.
antes de llegar al borde superior.
EJECUCIÓN DE LA PRÁCTICA
6) Sacar la placa y marcar con un lápiz la línea donde
1. Lleva los tiempos y ayuda a los alumnos a llevar la
cronología. llegó el disolvente, la distancia entre esta línea y el
2. Provee Feedback descriptivo durante la práctica.
borde inferior se llama FRENTE DE DISOLVENTE.
3. Resuelve dudas durante la ejecución.
4. Promueve el buen Comportamiento del equipo 7) Secar la placa al aire y rociarla con ninhidrina con un
durante la ejecución de la práctica
aspersor ó atomizador.
5. Verifica la Entrega de material limpio y completo.
6. Utiliza un Modelo de FACILITADOR NO 8) Colocar la placa en una parrilla de calentamiento
INSTRUCCIONAL.
hasta que aparezcan las manchas correspondientes.
7. Llenado de bitácora electrónica:
https://goo.gl/forms/Ep16K5pZtsuutiRE3 9) Con un lápiz delinear las manchas reveladas por la
ninhidrina.
DEBRIEFING (10 MINUTOS)
1. Recapitula con los alumnos los hechos ocurridos. 10) Medir la distancia del centro de la mancha al punto
2. Promueve la reflexión, discusión y resolución de
de aplicación. Esta distancia es el FRENTE DE
dudas.
3. Verifica si se cumplió el propósito de aprendizaje. SOLUTO.
11) Calcular el Rf para cada mancha e intentar identificar
la identidad de la muestra problema.
Antes de la práctica:
a) Lectura de la práctica.
b) Investigar: tipos de cromatografía, cálculo de Rf
c) Investigar la clasificación de aminoácidos, reacción entre aminoácidos y ninhidrina, aminoácidos
cuya ausencia o disminución se asocie con alguna patología.
Después de la práctica:
a) Calcular el Rf de las diferentes muestras utilizadas.
Método de Evaluación
Materiales
Equipo:
Parrilla con agitación
Bomba de vacío
Agitador Vortex
Baño maría
Sustancias:
30 ml NaOH al 30%
10 ml FeCl3 al 10%
8 ml Cloroformo
50 ml Etanol al 95%
5 ml HCl concentrado.
5 ml NaOH 1 N
5 ml HCl 0.1 N
3 ml Reactivo de Bial (Orcinol al 0.3% en HCl)
2 ml H2SO4 3 N
5 ml H2SO4 10 N
1 ml (NH4)6Mo7O24.4H2O al 2.5% (con 30% de H2SO4 10 N, aforar
con agua)
Actividades
III.-IDENTIFICACIÓN DE FOSFATOS
1.-En un tubo de ensaye de 18 x 150 colocar una porción
del ácido nucleico obtenido. Añadir 2 ml de H2SO4 3N.
Hervir lentamente durante 5 min para hidrolizar los ácidos
nucleicos. Enfriar.
2.-Transferir 1 ml del hidrolizado a un tubo de 18 x 150.
Añadir 0.5 ml de H2S04 10N, 1 ml de solución de
molibdato de amonio al 2.5% y 5 gotas de cloruro
estannoso. Dejar reposar durante 10 minutos. Observar el
color desarrollado.
Correr como controles una solución de KH2PO4 0.1M y
agua destilada en lugar de muestra.
3.- Limpieza y entrega de materiales.
4.- Limpieza y orden del laboratorio.
Antes de la práctica:
a) Lectura de la práctica.
b) Investigar: : composición de ácidos nucleicos, diferentes métodos de extracción de ácidos
nucleicos,
c) Investigar: fundamento de la prueba de Bial y el método del cloruro estannoso.
Después de la práctica:
Reportar la eficiencia de la extracción mediante los resultados de identificación de azúcares y
fosfatos.
Método de Evaluación
Materiales
Equipo:
Balanza digital.
Baño maría.
Centrífuga
Sustancias:
2 ml suero de leche
2 ml Oxalato de amonio al 10%.
2 ml H2SO4 concentrado.
2 ml Solución stock de KMnO4 10%
2 ml Solución de trabajo de KMnO4 1 N
Agua destilada.
Actividades
2. El docente verifica que el alumno ingresó su pastoso, que contiene el resto de los constituyentes de la
solicitud de materiales con los auxiliares de laboratorio leche (básicamente proteínas y grasas).
con mínimo 24 h de anticipación
3. El docente verifica que los auxiliares de Se separan ambas fases empleando un embudo de vidrio y
laboratorio entreguen el material a los alumnos contra filtro de pliegues. El precipitado obtenido se lava con agua
vale de solicitud y credencial del responsable del destilada, recogiéndose las aguas de lavado junto con el
equipo, posterior al briefing filtrado, que contendrá el calcio originalmente presente
4. El docente verifica que el alumno revise que
cuenta con el 100% de los materiales solicitados Procedimiento:
5. El docente verifica que el alumno tenga el área
de trabajo limpia y despejada. 1.- Colocar en un tubo de ensayo 2 ml de suero de leche
2.- Agregar 3 ml de Oxalato de amonio al 10%
EJECUCIÓN DE LA PRÁCTICA 3.- Agitar y mezclar
1. Lleva los tiempos y ayuda a los alumnos a llevar 4.- Recoger el precipitado con un papel filtro y colocarlo en
la cronología. un vaso de precipitado
2. Provee Feedback descriptivo durante la práctica. 5.- Una vez obtenido un precipitado, agregar 2 gotas de
3. Resuelve dudas durante la ejecución. H2SO4 concentrado.
4. Promueve el buen Comportamiento del equipo 6. Agitar lentamente con movimientos circulares
durante la ejecución de la práctica 7.- Agregar una gota de KMnO4 para obtener un color rosado
5. Verifica la Entrega de material limpio y completo. (se pueden agregar hasta 15 gotas para cambio de color
6. Utiliza un Modelo de FACILITADOR NO rosado)
INSTRUCCIONAL. 8.- El resultado es el mismo en la solución blanca con 2ml de
7. Llenado de bitácora suero y 2 gotas de ácido sulfúrico agregando KMnO4
electrónica:https://goo.gl/forms/Ep16K5pZtsuutiRE3 (1gota).7mg de ca/100 ml leche al gastar 15 gotas de KMnO4
de la muestra problema equivalente a 0.75 ml y 1 gota de
DEBRIEFING (10 MINUTOS) KMnO4 en la muestra blanca equivalente a 0.05 ml.
1. Recapitula con los alumnos los hechos ocurridos. 9.- Realizar por duplicado con Solución de trabajo de
2. Promueve la reflexión, discusión y resolución de KMnO4 1 N y al 10%
dudas. 10.- Limpieza y orden del laboratorio
3. Verifica si se cumplió el propósito de aprendizaje.
Antes de la práctica:
a) Lectura de la práctica.
b) Investigar: niveles normales de calcio en suero y en orina, procedimiento para la prueba de calcio
en orina, función del retículo endoplásmico en el almacenamiento del calcio, papel del calcio en la
función muscular, enfermedades relacionadas al calcio (por lo menos una).
c) Determinar cuál es la ingesta recomendada de calcio diariamente
d) Para que se utiliza el ácido tricloroacetico
Después de la práctica:
a) Calcular cuánto fue el valor de calcio obtenido por cada 1 ml y cada 100 ml de muestra.
b) Comparar los valores obtenidos con los valores de referencia reportados en la literatura.
c) Descrbir como ocurren las reacciones en cada paso del procedimiento
Método de Evaluación
Materiales
DETERMINACIÓN DE UREA
2 micropipetas (10 y 1000 μl).
Puntas para micropipetas.
Celdas para espectrofotómetro.
1 pipeta serológica de 5 ml.
DETERMINACIÓN DE CREATININA.
2 micropipetas (50 y 1000 μl).
Puntas para micropipetas.
Celdas para espectrofotómetro.
Equipo:
2 Glucómetros One Touch® Ultra®
2 Acutrend Roche para determinación de colesterol y triglicéridos
Espectrofotómetro
Sustancias:
Actividades
BRIEFING INICIAL (20 MINUTOS) Una persona experta en la toma de muestras sanguíneas
1. Presentación e ingreso al laboratorio extrae entre 8 y 10 ml de sangre de dos voluntarios en
2. Diagrama de bloques ayuno, quien ya aceptó y firmó una carta de consentimiento
3. Socialización del propósito de Aprendizaje y/o informado.
examen rápido Nota: Posteriormente es recomendable que los
voluntarios tomen un refrigerio.
PREPARACIÓN INICIAL (15 MINUTOS)
1. El docente solicita a los auxiliares de laboratorio I.- DETERMINACIÓN DE GLUCOSA.
con 1 semana de anticipación sus materiales 1.- Dos voluntarios llegarán con un ayuno de por lo
2. El docente verifica que el alumno ingresó su menos 4 horas. Uno deberá traer una dieta rica en
solicitud de materiales con los auxiliares de laboratorio carbohidratos y el otro una dieta rica en proteínas.
con mínimo 24 h de anticipación 2.- A cada uno de los voluntarios se les determinará la
3. El docente verifica que los auxiliares de laboratorio concentración de glucosa en sangre por medio de un
entreguen el material a los alumnos contra vale de glucómetro en los siguientes tiempos: 0 minutos (antes de
solicitud y credencial del responsable del equipo, ingerir los alimentos). 30, 60 y 120 minutos, después de
posterior al briefing ingerir los alimentos.
4. El docente verifica que el alumno revise que cuenta 3.- Graficar los resultados (tiempo vs concentración de
con el 100% de los materiales solicitados glucosa).
5. El docente verifica que el alumno tenga el área de
trabajo limpia y despejada II.- DETERMINACIÓN DE COLESTEROL Y
TRIGLICÉRIDOS
1.- De la misma forma que para la determinación de
EJECUCIÓN DE LA PRÁCTICA glucosa, a cada uno de los voluntarios se les determinará
1. Lleva los tiempos y ayuda a los alumnos a llevar la la concentración de colesterol y triglicéridos en sangre por
cronología. medio de un Acutrend en los siguientes tiempos: 0
2. Provee Feedback descriptivo durante la práctica. minutos (antes de ingerir los alimentos). 120 minutos,
3. Resuelve dudas durante la ejecución. después de ingerir los alimentos.
4. Promueve el buen Comportamiento del equipo 3.- Graficar los resultados (tiempo vs concentración de
durante la ejecución de la práctica colesterol y/o triglicéridos).
5. Verifica la Entrega de material limpio y completo.
6. Utiliza un Modelo de FACILITADOR NO III.-DETERMINACIÓN DE UREA (Método Berthelot
INSTRUCCIONAL. modificado)
7. Llenado de bitácora electrónica: 1.- Preparar el reactivo o reactivos de trabajo con la
https://goo.gl/forms/Ep16K5pZtsuutiRE3 mezcla que indiquen las instrucciones del kit de
determinación de urea.
DEBRIEFING (10 MINUTOS) 2.- Encender el espectrofotómetro y calibrarlo (con agua
1. Recapitula con los alumnos los hechos ocurridos. destilada) a la longitud de onda que indique el kit de
2. Promueve la reflexión, discusión y resolución de determinación de urea (600 nm).
dudas. 3.- Identifica con una marca o un número, tres celdas para
3. Verifica si se cumplió el propósito de aprendizaje. espectrofotómetro de la siguiente manera: B (reactivo
blanco), M (muestra), P (patrón).
4.- Agrega 5 μl de orina en la celda M y 5 μl de solución
patrón en la celda P.
5.- Vierte 500 μl del reactivo de trabajo R1 en las 3 celdas
B, M y P.
6.- Mezcla las celdas B, M y S. Incuba 5 minutos a
44emperature ambiente.
7.- Agrega 90 l del reactivo R2 (Hipoclorito) en cada una
de las celdas. Mezcla, incuba 10 min a temperatura
ambiente.
8.- Lee las celdas B, M y P a una longitud de onda de 600
nm.
9.- Determina la concentración de urea en la celda M de
acuerdo a la siguiente fórmula:
Antes de la práctica:
a) Lectura de la práctica.
b) Investigar: metabolismo de carbohidratos, lípidos y proteínas. Regulación hormonal del
metabolismo.
c) Investigar: fundamento de las pruebas para determinación de urea, ácido úrico y creatinina.
d) Investigar: el motivo por el cuál es necesario realizar dos mediciones para calcular las
concentraciones de creatinina.
Después de la práctica:
a) Reportar la respuesta de los dos sujetos en las concentraciones de los diferentes metabolitos
analizados.
b) Interpretar los resultados de las diferentes pruebas y asociar los cambios que ocurren en un
paciente diabético.
Método de Evaluación
ANEXOS
2. Ortografía
5% Excelente Bueno Regular Deficiente
-No presenta Presenta entre 1 y 3 Presenta entre 3 y 6 El reporte incluye
errores de errores ortográficos errores ortográficos más de 6 errores
ortografía ortográficos
3. Resumen y
palabras clave Excelente Bueno Regular Deficiente
5% Hubo
-En el resumen incumplimiento en Hubo Hubo
describe con sus uno de los tres incumplimiento en incumplimiento en
propias palabras en requisitos: dos de los tres los tres requisitos:
máximo 1 cuartilla -En el resumen requisitos: -En el resumen
los objetivos del describe con sus -En el resumen describe con sus
trabajo, la propias palabras en describe con sus propias palabras en
metodología general máximo 1 cuartilla propias palabras en máximo 1 cuartilla
con los resultados los objetivos del máximo 1 cuartilla los objetivos del
más relevantes. trabajo, la los objetivos del trabajo, la
-Redacta los verbos metodología general trabajo, la metodología general
en pasado con los resultados metodología general con los resultados
-Incluye las más relevantes. con los resultados más relevantes.
palabras claves -Redacta los verbos más relevantes. -Redacta los verbos
relacionadas a la en pasado -Redacta los verbos en pasado
práctica -Incluye las en pasado -Incluye las
palabras claves -Incluye las palabras claves
relacionadas a la palabras claves relacionadas a la
práctica relacionadas a la práctica
práctica
4. Introducción
15% Excelente Bueno Regular Deficiente
-Realiza una -Realiza una -Realiza una - La revisión
revisión bibliográfica revisión bibliográfica revisión bibliográfica bibliográfica es
donde plantea completa donde incompleta incongruente al
ordenadamente el plantea - o no incluye las tema y no se
tema de desordenadamente referencia incluyen las
investigación, su el tema de bibliográficas o referencias
importancia e investigación (no se hemerográficas en bibliográficas o
implicaciones cumple la regla de el texto hemerográficas en
partiendo de lo lo general a lo el texto
general a lo particular),
particular. - o no incluye las
-Incluye las referencia
referencia bibliográficas o
bibliográficas o hemerográficas en
hemerográficas en el texto
el texto
10.Resultados
15% Excelente Bueno Regular Deficiente
-Recopila y ordena -Recopila y ordena -Recopila y ordena -No presenta los
los datos obtenidos los datos obtenidos los datos obtenidos resultados
presentándolos en presentándolos en presentándolos en obtenidos
párrafos, cuadros o párrafos, cuadros o párrafos, cuadros o
gráficos claramente gráficos pero no los gráficos pero no los
identificados. identifica identifica
-Incluye las claramente claramente
fórmulas y -O no incluye las -No incluye las
sustituciones fórmulas y fórmulas y
empleadas sustituciones sustituciones
empleadas empleadas
11. Análisis de
resultados Excelente Bueno Regular Deficiente
20%
-Interpreta y analiza -Interpreta y analiza - Interpreta y -No Interpreta y no
los resultados los resultados analiza los analiza los
obtenidos obtenidos pero no resultados resultados
comparativamente comparativamente obtenidos pero no obtenidos
con la bibliografía con la bibliografía comparativamente -Ni tampoco indica
consultada -Indica consultada con la bibliografía las aplicaciones
las aplicaciones -O no indica las consultada teóricas
teóricas aplicaciones teóricas -No indica las
aplicaciones teóricas
12.Conclusiones
20% Excelente Bueno Regular Deficiente
-Redacta con sus -Redacta con sus -No redacta con sus -No redacta las
propias palabras si propias palabras si propias palabras si conclusiones o las
se cumplen o no los se cumplen o no los se cumplen o no los copia de textos
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UVM México Escuela de Ciencias de la Salud